CN110839532A - 一种红雨伞的无性繁殖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种红雨伞的无性繁殖方法,包括:(1)外植体预处理;(2)将预处理后的外植体切割成若干个小外植体,每个小外植体带有1‑3个茎节,将小外植体接种到诱导培养基上培养至丛生芽形成;(3)分离诱导培养基中的丛生芽,使丛生芽长度控制在2‑3cm;将分离后的丛生芽接种至增殖培养基中培养,待新生芽生长至2‑3cm,分离新生芽并将其插于增殖培养基中重复继代培养3‑4次,获得大量扩繁后的丛生芽;(4)将扩繁后的丛生芽中长度3‑5cm的丛生芽从基部自芽块上拆分下来,扦插并定植。该方法不受季节、温度、地域影响就能获得大量的新植株,从而快速建立红雨伞无菌繁殖体系,为保持红雨伞优良的种性提供技术支持,为广大的爱好者提供源源不断地无菌种苗。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域,更具体地,涉及一种红雨伞的无性繁殖方法。
背景技术
红雨伞,双子叶植物,小二仙草科,挺水性水草。水上草与水中草不同型。水上草具有披针形互生叶,叶色翠绿,叶缘有锯齿。在水中栽培,会出现多种不同的变化。包括叶型可以从披针形转为卵形、不规则裂叶,以至羽状叶等。颜色可由绿色转为橙红,以至深红色。依栽培条件不同而异,其有变化多端的形态。喜好强光和较低水温,在水中生长较慢。物以稀为贵,因此红雨伞常被水草玩家视为红草中的经典,而且红雨伞随着栽培条件的不同,能够变换出不同的颜色,故更加吸引人。红雨伞属有茎类水草,在国内红雨伞组织培养领域还属于空白。
发明内容
针对现有技术存在的技术问题,本发明提出了一种红雨伞的无性繁殖方法,该方法是在无菌条件下,采取适宜培养环境、给予固定光照,诱导红雨伞新的幼苗,逐步形成无菌苗体系,后期可常年提供大量无菌幼苗。该方法易行,操作方便,产量高,克服了水族缸中不易繁殖、繁殖速度较慢的问题.
为实现上述目的,本发明是通过以下技术方案实现的:
一种红雨伞的无性繁殖方法,包括以下步骤:
(1)预处理:选择健壮、无伤残的红雨伞植株经灭菌处理、清洗,得到消毒灭菌后的外植体;
(2)诱导培养:在无菌培养皿中将消毒灭菌后的外植体切割成若干个小外植体,每个小外植体带有1-3个茎节,将小外植体接种到诱导培养基上进行诱导培养7-15天至丛生芽形成;
(3)继代培养:分离诱导培养基中的丛生芽,使丛生芽长度控制在2-3cm;将分离后的丛生芽接种至增殖培养基中进行继代培养,待新生芽生长至2-3cm,分离新生芽并将其斜插或者横置于增殖培养基中重复继代培养3-4次,获得大量扩繁后的丛生芽;
(4)生根定植:分离步骤(3)中扩繁后的丛生芽,将其扦插至水族缸中生根并定植。
进一步地,步骤(1)中外植体灭菌处理、清洗的具体方法为:在自来水快速冲洗20分钟,剔除红雨伞的针形叶片,保护茎段表皮;然后将水流调成刚好成线继续冲洗40分钟;冲洗完成后将外植体置于双氧水中下消毒15-20分钟,再用无菌水漂洗3-5次。
进一步地,所述诱导培养基为:MS培养基+1-2mg/L 6-BA+6-8g/L琼脂+30g/L蔗糖+4-8g/L活性炭+1ml/L植物组织抗菌剂。
进一步地,所述增殖培养基为:MS培养基+1-5mg/L 6-BA+0.5-1mg/L吲哚乙酸+6-8g/L琼脂+30g/L蔗糖。
进一步地,所述诱导培养条件为:光照周期为14h/d,温度25℃,光照3000-5000lx。
进一步地,所述继代培养条件为:光照周期为14h/d,温度25℃,光照3000-5000lx。
进一步地,所述步骤(4)中扩繁后的丛生芽分离方法为:将扩繁后的丛生芽中长度3-5cm的丛生芽从基部自芽块上拆分下来,清洗后移栽。
因此,与现有技术相比,本发明具有以下有益的技术效果:
(1)本发明提出的一种红雨伞的无性繁殖方法,是在无菌条件下,采取适宜培养环境,给予固定光照,直接诱导红雨伞幼芽的生长,可不受季节、温度、地域影响,获得大量的新植株,从而快速建立红雨伞无菌繁殖体系,为保持红雨伞优良的种性提供技术支持,为广大的爱好者提供源源不断地无菌种苗。经实验验证,经过一个月的培养,本发明的组织培养方法可使一个外植体快速获得20±5个新的子代植株。
(2)本发明的组织培养方法中所采用的各组培配方协同配合,组织繁殖周期短,繁殖率高,且通过本发明的组织培养方法无菌培养的红雨伞苗,在自然水体中生根率达90%,植物成活率高达95%以上,实现了红雨伞有效快速的无性繁殖,对于促进观赏水草的生产和新品种的培育、加快水族观赏水草产业的快速发展具有重要作用。
(3)本发明的红雨伞苗无菌苗的组织培养方法简单易行,操作方便,产量高,克服了水族缸中不易繁殖、繁殖速度较慢的问题。
具体实施方式
展示一下实例来具体说明本发明的某些实施例,且不应解释为限制本发明的范围。对本发明公开的内容可以同时从材料、方法和反应条件进行改进,所有这些改进,均应落入本发明的的精神和范围之内。若未特别指明,实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。所述试剂和生物材料,如无特殊说明,均可从商业途径获得。
实施例1
步骤1:配制诱导培养基、增殖培养基
1、本实施例中使用的诱导培养基、增殖培养基均是采用的MS培养基作为基础培养基,MS培养基配方如下:mg/L
表1MS培养基配方
序号 | 组分 | 含量(mg/L) | 序号 | 组分 | 含量(mg/L) |
1 | KNO<sub>3</sub>: | 1900 | 11 | CuSO<sub>4</sub>.5H<sub>2</sub>O | 0.025 |
2 | NH<sub>4</sub>NO<sub>3</sub> | 1650 | 12 | CoCL<sub>2</sub>.6H<sub>2</sub>O | 0.025 |
3 | MgSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O | 370 | 13 | Na<sub>2</sub>-EDTA | 37.3 |
4 | KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> | 170 | 14 | FeSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O | 27.8 |
5 | CaCl<sub>2</sub>·2H<sub>2</sub>O | 440 | 15 | 甘氨酸 | 2.0 |
6 | MnSO<sub>4</sub>·4H<sub>2</sub>O | 22.3 | 16 | 盐酸吡哆醇 | 0.5 |
7 | ZnSO4·7H<sub>2</sub>O | 8.6 | 17 | 盐酸硫铵素 | 0.1 |
8 | H<sub>3</sub>BO<sub>3</sub> | 6.2 | 18 | 烟酸 | 0.5 |
9 | KI | 0.83 | 19 | 肌酸 | 100 |
10 | Na<sub>2</sub>MoO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O | 0.25 |
2、诱导培养基配制
诱导培养基是以MS为基础培养基,并添加6-氨基嘌呤(6-BA)、琼脂粉和蔗糖、活性炭和植物组织抗菌剂(PPM);诱导培养基的成分浓度为:MS基础培养基11.74g/L、1mg/L的6-BA、7.5g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、4g/L活性炭、1ml/LPPM。
3、增殖培养基配制
增殖培养基是以MS为基础培养基,并添加6-BA、吲哚乙酸(IBA)、琼脂粉和蔗糖;增殖培养基的成分浓度为:MS基础培养基11.74g/L、1mg/L的6-BA、0.5mg/LIBA、7.5g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖。
步骤2:外植体的清洗与消毒
将红雨伞采购回来后,在实验室水族缸培养3-5天,然后取其中健壮、无伤残的植株作为对象,在自来水下冲洗1个小时,前20分钟快速冲洗,剔除红雨伞的针形叶片,保护茎段表皮;然后将水流调成刚好成线继续冲洗40分钟,待用。再将外植体置于双氧水中消毒15分钟,然后用无菌水漂洗3-5次。
步骤3:诱导培养
无菌环境下,将外植体两端各切去0.2cm,再将外植体切成带有1-3个茎节的外植体,生理下端切口向下斜插接种到诱导培养基上;接种后置于恒温光照培养箱中,培养7-15天至丛生芽形成。诱导培养条件为:光照周期为14h/d,温度25℃,光照3000l x。
步骤4:继代培养
将形成的丛生芽沿基部2-3mm处切除,并接种到增殖培养基上,待新生芽生长至2-3cm,斜插或者横置于增殖培养基中重复继代培养3-4次,获得大量扩繁后的丛生芽。增殖培养条件为:光照周期为14h/d,温度25℃,光照3000lx。
步骤5:
在不损害生长点的情况下,将3-5cm的丛生芽从基部自芽块上拆分下来,经清水冲洗掉培养基后,将新的无根植株直接扦插到水族缸中,培养10天后,植物会自行长出根,同时实现定植。成活率大于98%。
本实施例可以由一个红雨伞外植体直接诱导出新植株,通过不断的分离增殖培养供应源源不断的红雨伞种苗,一棵红雨伞经过30天继代培养可以培育出20棵新的子代植株,转入水族箱后存活率大于98%。
实施例2
步骤1:配制诱导培养基和增殖培养基
1、本实施例中配制的诱导、增殖培养基是采用的MS培养基作为基础培养基,MS培养基配方同实施例1所示。
2、诱导培养基配制
诱导培养基是以MS为基础培养基,并添加6-氨基嘌呤(6-BA)、琼脂粉和蔗糖、活性炭和植物组织抗菌剂(PPM);诱导培养基的成分浓度为:MS基础培养基11.74g/L,1.5mg/L的6-BA、6g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、4g/L活性炭、1ml/LPPM。
3、增殖培养基配制
增殖培养基是以MS为基础培养基,并添加6-BA、吲哚乙酸(IBA)、琼脂粉和蔗糖;增殖培养基的成分浓度为:MS基础培养基11.74g/L,5mg/L的6-BA、0.75mg/LIBA,6g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖。
步骤2:外植体的清洗与消毒
将红雨伞采购回来后,在实验室水族缸培养3-5天,然后取其中健壮、无伤残的植株作为对象,在自来水下冲洗1个小时,前20分钟快速冲洗,剔除红雨伞的针形叶片,保护茎段表皮;然后将水流调成刚好成线继续冲洗40分钟,待用。再将外植体置于双氧水中消毒15分钟,然后用无菌水漂洗3-5次。
步骤3:诱导培养
无菌环境下,将外植体两端各切去0.2cm,再将外植体切成带有1-3个茎节的外植体,生理下端切口向下斜插接种到诱导培养基上;接种后置于恒温光照培养箱中,培养7-15天至丛生芽形成。诱导培养条件为:光照周期为14h/d,温度25℃,光照5000l x。
步骤4:继代培养
将形成的丛生芽沿基部2-3mm处切除,并接种到增殖培养基上,待新生芽生长至2-3cm,斜插或者横置于增殖培养基中重复继代培养3-4次,获得大量扩繁后的丛生芽。增殖培养条件为:光照周期为14h/d,温度25℃,光照5000lx。
步骤5:
在不损害生长点的情况下,将3-5cm的丛生芽从基部自芽块上拆分下来,经清水冲洗掉培养基后,将新的无根植株直接扦插到水族缸中,培养15天后,植物会自行长出根,同时实现定植。成活率大于95%。
本实施例可以由一个红雨伞外植体直接诱导出新植株,通过不断的分离增殖培养供应源源不断的红雨伞种苗,一棵红雨伞经过30天继代培养可以培育出30棵新的子代植株,转入水族箱后存活率大于95%。
实施例3
步骤1:配制诱导培养基和增殖培养基
2、本实施例中配制的诱导、增殖培养基是采用的MS培养基作为基础培养基,MS培养基配方同实施例1所示。
2、诱导培养基配制
诱导培养基是以MS为基础培养基,并添加6-氨基嘌呤(6-BA)、琼脂粉和蔗糖、活性炭和植物组织抗菌剂(PPM);诱导培养基的成分浓度为:MS基础培养基11.74g/L,2mg/L的6-BA、8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、8g/L活性炭、1ml/LPPM。
3、增殖培养基配制
增殖培养基是以MS为基础培养基,并添加6-BA、吲哚乙酸(IBA)、琼脂粉和蔗糖;增殖培养基的成分浓度为:MS基础培养基11.74g/L,2.5mg/L的6-BA、1mg/LIBA,8g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖。
步骤2:外植体的清洗与消毒
将红雨伞采购回来后,在实验室水族缸培养3-5天,然后取其中健壮、无伤残的植株作为对象,在自来水下冲洗1个小时,前20分钟快速冲洗,剔除红雨伞的针形叶片,保护茎段表皮;然后将水流调成刚好成线继续冲洗40分钟,待用。再将外植体置于双氧水中消毒15分钟,然后用无菌水漂洗3-5次。
步骤3:诱导培养
无菌环境下,将外植体两端各切去0.2cm,再将外植体切成带有1-3个茎节的外植体,生理下端切口向下斜插接种到诱导培养基上;接种后置于恒温光照培养箱中,培养7-15天至丛生芽形成。诱导培养条件为:光照周期为14h/d,温度25℃,光照4000l x。
步骤4:增殖培养
将形成的丛生芽沿基部2-3mm处切除,并接种到增殖培养基上,待新生芽生长至2-3cm,斜插或者横置于增殖培养基中重复继代培养3-4次,获得大量扩繁后的丛生芽。增殖培养条件为:光照周期为14h/d,温度25℃,光照4000lx。
步骤5:
在不损害生长点的情况下,将3-5cm的丛生芽从基部自芽块上拆分下来,经清水冲洗掉培养基后,将新的无根植株直接扦插到水族缸中,培养12天后,植物会自行长出根,同时实现定植。成活率大于97%。
本实施例可以由一个红雨伞外植体直接诱导出新植株,通过不断的分离增殖培养供应源源不断的红雨伞种苗,一棵红雨伞经过30天继代培养可以培育出25棵新的子代植株,转入水族箱后存活率大于97%。
对比例
目前红雨伞的培育主要集中在观赏植物培育基地或者商店,主要方法为:在透明玻璃水缸中扦插入一定长度的植株,加水淹没植物至少5厘米,给予一定光照,通过循环水泵保持缸内水体的流动性,待植物长到一定长度后,通过打顶、截短、分枝的方式获得新的无性枝条,进行下一轮繁殖,经过一轮生长的时间在30-40天左右,植物约生长出5-8个新的侧芽,在扦插10天后开始生根,生根数5根左右,根长度不一,经过30天生长,根平均长度可以达到4厘米左右。该方法培育的红雨伞苗移栽到生态缸中后的成活率是90%。
实施例1-3的试验结果详见表2。
表2实施例1-3和对比例的试验结果
由表2可知,本发明的组织培养方法中所采用的各组培配方协同配合,组织繁殖周期短,繁殖率高,且通过本发明的组织培养方法无菌培养的红雨伞苗,在自然水体中生根率达90%,植物成活率高达95%以上,实现了红雨伞有效快速的无性繁殖。
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种红雨伞的无性繁殖方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)预处理:选择健壮、无伤残的红雨伞植株经灭菌处理、清洗,得到消毒灭菌后的外植体;
(2)诱导培养:在无菌培养皿中将消毒灭菌后的外植体切割成若干个小外植体,每个小外植体带有1-3个茎节,将小外植体接种到诱导培养基上进行诱导培养7-15天至丛生芽形成;
(3)继代培养:分离诱导培养基中的丛生芽,使丛生芽长度控制在2-3cm;将分离后的丛生芽接种至增殖培养基中进行继代培养,待新生芽生长至2-3cm,分离新生芽并将其斜插或者横置于增殖培养基中重复继代培养3-4次,获得大量扩繁后的丛生芽;
(4)生根定植:分离步骤(3)中扩繁后的丛生芽,将其扦插至水族缸中生根并定植。
2.根据权利要求1所述的一种红雨伞的无性繁殖方法,其特征在于,步骤(1)中外植体灭菌处理、清洗的具体方法为:在自来水快速冲洗20分钟,剔除红雨伞的针形叶片,保护茎段表皮;然后将水流调成刚好成线继续冲洗40分钟;冲洗完成后将外植体置于双氧水中下消毒15-20分钟,再用无菌水漂洗3-5次。
3.根据权利要求1所述的一种红雨伞的无性繁殖方法,其特征在于,所述诱导培养基为:MS培养基+1-2mg/L 6-BA+6-8g/L琼脂+30g/L蔗糖+4-8g/L活性炭+1ml/L植物组织抗菌剂。
4.根据权利要求1所述的一种红雨伞的无性繁殖方法,其特征在于,所述增殖培养基为:MS培养基+1-5mg/L 6-BA+0.5-1mg/L吲哚乙酸+6-8g/L琼脂+30g/L蔗糖。
5.根据权利要求1所述的一种红雨伞的无性繁殖方法,其特征在于,所述诱导培养条件为:光照周期为14h/d,温度25℃,光照3000-5000lx。
6.根据权利要求1所述的一种红雨伞的无性繁殖方法,其特征在于,所述继代培养条件为:光照周期为14h/d,温度25℃,光照3000-5000lx。
7.根据权利要求1所述的一种红雨伞的无性繁殖方法,其特征在于,所述步骤(4)中扩繁后的丛生芽分离方法为:将扩繁后的丛生芽中长度3-5cm的丛生芽从基部自芽块上拆分下来,清洗后移栽。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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