CN110790846A - 具有生物活性的紫花苜蓿茎叶多糖及其硒化改性多糖的制备 - Google Patents
具有生物活性的紫花苜蓿茎叶多糖及其硒化改性多糖的制备 Download PDFInfo
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- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
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Abstract
具有生物活性的紫花苜蓿茎叶多糖及其硒化改性多糖的制备，涉及一种天然药物改性多糖的制备，首先从干燥的紫花苜蓿干草中得到水提浸膏，去蛋白，去色素后，经过阴离子交换柱层析分离，用去离子水和一系列梯度的NaCl溶液洗脱，收集得到3个新的紫花苜蓿多糖组分APS1﹑APS2和APS3，它们的分子量范围为8～20 KDa。对其中量大的APS2和APS3进行硒化修饰后得到新的硒化多糖Se‑APS2和Se‑APS3，它们的分子量范围为6～12 KDa。其中Se‑APS3的抗氧化活性最强。与APS2，APS3相比，硒化后得到的硒多糖具有明显的神经细胞保护活性。以上研究内容为多糖及其硒化产物的活性分析和抗衰老功能食品及阿尔茨海默等疾病的药品开发奠定了理论基础。
Description
技术领域
本发明涉及一种天然药物改性多糖的制备，特别是涉及一种具有生物活性的紫花苜蓿茎叶多糖及其硒化改性多糖的制备。
背景技术
紫花苜蓿（Medicago sativa L.）是豆科苜蓿属，一种多年生的牧草，品质较好，牧草的质量优良，适应性强，无草本气味，可以在各种土壤和地形上生长，原产于伊朗、小亚细亚、外高加索等一带，现在全世界范围内都有非常广泛和丰富的栽培,有着“牧草之王”的称号。在民间，紫花苜蓿全草及根用于治疗菌痢、肠炎、肺热咳嗽、消化不良、黄疸、尿路结石等症状的疾病。
苜蓿多糖是一种从苜蓿的茎和叶中提取得到的天然多糖，已经被证明具有免疫调节、抗氧化、抗肿瘤、保肝脏、抗炎的作用，还能提高生产畜产品的能力，而且对机体的不良反应非常小。因此，深度开发紫花苜蓿中多糖资源，并深入研究其药理活性和结构，对于紫花苜蓿的深加工及其在食品、工业、医药等领域的广泛应用，具有重大的经济和社会效益。
研究表明，对植物多糖进行硒化修饰后，会提高其生物活性或者增加新的活性，本研究采用硝酸-亚硒酸钠法对分离得到的苜蓿多糖进行硒化修饰，并对多糖硒化前后的抗氧化活性进行研究，结果表明紫花苜蓿茎叶多糖及其硒化改性多糖均有抗氧化活性，进一步对其神经细胞保护活性进行研究，结果表明硒化后的多糖具有一定的神经细胞保护活性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有生物活性的紫花苜蓿茎叶多糖及其硒化改性多糖的制备，本发明制备的多糖化和硒化多糖具有一定的抗氧化活性，而且硒多糖在天然多糖的基础上增加了神经细胞保护活性。为多糖的结构修饰，多糖的活性分析以及多糖抗衰老功能食品，神经细胞保护疾病有关的药物的开发奠定了理论基础。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
具有生物活性的紫花苜蓿茎叶多糖及其硒化改性多糖的制备，其制备过程包括取干燥的紫花苜蓿茎叶，依次用石油醚，乙醇回流提取去除脂和小分子后，加入蒸馏水加热回流2～6次，过滤，合并滤液，去蛋白，去色素后得到紫花苜蓿粗多糖；将得到的粗多糖经过阴离子交换柱层析分离，依次用蒸馏水﹑0.1～0.5 mol/L的NaCl溶液进行洗脱，用凝胶纯化后得到3个新的紫花苜蓿多糖APS1﹑APS2﹑APS3；
将上述得到的两个产量较大的多糖APS2和APS3用硝酸-亚硒酸钠(NA-SS)法进行硒化修饰得到2个新的硒多糖Se-APS2和Se-APS3。
所述的具有生物活性的紫花苜蓿茎叶多糖及其硒化改性多糖的制备，所述3个新的紫花苜蓿多糖，其结构片段分别为：APS1：2-O-acetyl-β-D-Manp-(1→3)-α-L-Araf-1(1→4)- α-L-Rhap-(1→，→3)- α-L-Rhap-(1→4)- α-L-Rhap-(1→；APS2：→3)-α-L-Rhap-(1→4)-α-L-Rhap-(1→，→3)-α-D-Galp-(1→4)-α-D-Galp-(1→，β-D-Manp-(1→2)-O-acetyl-β-D-Manp-(1→，β-D-Manp-(1→3)-α-L-Rhap-(1→；APS3：→3)-β-D-Fruf-(1→2)-α-D-Galp-(1→，α-D-Galp-(1→2)- α-L-Rhap-(1→，→3)-α-L-Araf-(1→3)- α-L-Rhap-(1→。
所述的具有生物活性的紫花苜蓿茎叶多糖及其硒化改性多糖的制备，紫花苜蓿多糖和硒多糖对DPPH和ABTS自由基均有清除作用，样品的浓度达到5 mg/mL时，清除DPPH自由基的强弱顺序为APS1＜APS2＜APS3＜Se-APS3＜Se-APS2；清除ABTS自由基的强弱顺序为APS3＜APS1＜APS2＜Se-APS2＜Se-APS3，多糖硒化后的抗氧化活性明显强于天然多糖。
具有生物活性的紫花苜蓿茎叶多糖及其硒化改性多糖的制备，其紫花苜蓿硒多糖具有神经细胞保护作用，当Se-APS2和Se-APS3的浓度达到100 μmol/L时，SH-SY5Y细胞的存活率分别为79%和86%。
本发明提供的是紫花苜蓿茎叶多糖及其硒化改性多糖。上述多糖具有一定的抗氧化活性及神经细胞保护活性。
本发明是通过以下步骤得到的：
紫花苜蓿茎叶多糖的制备：
紫花苜蓿茎叶干草用石油醚、乙醇回流处理，去除脂质和小分子化合物，再用蒸馏水回流冷凝提取2～6次，过滤，减压浓缩，合并浸膏。将中性蛋白酶与浸膏混合，40～60 oC培养1～3 h, 80～100 oC灭活10～20 min，离心得到上清液。在上清液中加入由正丁醇和氯仿制备的Sevage试剂(1:2～1：4, v/v)，搅拌一定时间后去除蛋白，离心，收集上清液，用Sevage试剂法去除蛋白2～5次。将上述得到的上清液浓缩，AB-8树脂柱脱色，用蒸馏水洗脱，减压浓缩，得到粗多糖。采用DEAE-52纤维素柱对粗多糖进行分离，用蒸馏水和不同浓度的NaCl溶液进行洗脱。苯酚-硫酸法测定其糖含量。采用Sephadex G-200柱对所得的馏分进行纯化，收集糖含量较多的3个组分，减压浓缩干燥得到3个新的多糖（APS1，APS2，APS3）。
硒化多糖的制备：
对上述得到的量大的2个新多糖进行硒化反应，在硝酸条件下，亚硒酸钠与多糖在60～80 oC下反应4～8 h，反应液经过透析，得到2个新的硒多糖(Se-APS2，Se-APS3)。
上述得到的3个新的紫花苜蓿茎叶多糖，其分子量范围为8.0 KDa至20.0 KDa，主要是由鼠李糖，阿拉伯糖，果糖，甘露糖和半乳糖组成，其摩尔比的范围为（0.20～0.65）:（0.09～0.3）:（0～0.30）:（0～0.20）:（0～0.50）。2种硒化多糖的分子量范围为6.0 KDa至12.0 KDa,硒含量的范围为1.00～3.00 µg/mg。
本发明提供的3个新的紫花苜蓿多糖和2个硒多糖，通过测定对DPPH和ABTS自由基的清除作用，评价其抗氧化活性表明多糖和硒多糖均有明显的抗氧化活性。使用H2O2诱导的SH-SY5Y细胞作为生物活性测定的模型，并使用CCK8测定方法有效评估了多糖和硒多糖的神经细胞保护活性。
抗氧化活性结果表明紫花苜蓿多糖和硒多糖具有优良的抗氧化活性，样品的浓度达到5 mg/mL时，清除DPPH自由基的强弱顺序为APS1＜APS2＜APS3＜Se-APS3＜Se-APS2。清除ABTS自由基的强弱顺序为APS3＜APS1＜APS2＜Se-APS2＜Se-APS3。因此，多糖硒化后的抗氧化活性明显强于天然多糖。
神经细胞保护活性比较表明，硒多糖的抗氧化活性强于天然多糖。与天然多糖APS2和APS3相比，硒多糖Se-APS2，Se-APS3具有一定的神经细胞保护活性。
综上所述，本发明制备的多糖化和硒化多糖具有一定的抗氧化活性，而且硒多糖在天然多糖的基础上增加了神经细胞保护活性。为多糖的结构修饰，多糖的活性分析以及多糖抗衰老功能食品，神经细胞保护疾病有关的药物的开发奠定了理论基础。
附图说明
图1是APS1的1H-NMR图谱；
图2是APS1的13C-NMR图谱；
图3是APS1的1H-1H-COSY图谱；
图4是APS1的HSQC图谱；
图5是APS2的1H-NMR图谱；
图6是APS2的13C-NMR图谱；
图7是APS2的HSQC图谱；
图8是APS2的HMBC图谱；
图9是APS3的1H-NMR图谱；
图10是APS3的13C-NMR图谱；
图11是APS3的1H-1H-COSY图谱；
图12是APS3的HSQC图谱；
图13是Se-APS2的1H-NMR图谱；
图14是Se-APS2的13C-NMR图谱；
图15是Se-APS3的1H-NMR图谱；
图16是Se-APS3的13C-NMR图谱；
图17是紫花苜蓿多糖的单糖组成谱图；
图18是紫花苜蓿多糖和硒化多糖（APS1，APS2，APS3，Se-APS2，Se-APS3）清除DPPH自由基的能力；
图19是紫花苜蓿多糖和硒化多糖（APS1，APS2，APS3，Se-APS2，Se-APS3）清除ABTS自由基的能力；
图20是紫花苜蓿茎叶多糖和硒化多糖（APS1，APS2，APS3，Se-APS2，Se-APS3）对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞神经保护活性。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1 紫花苜蓿茎叶多糖的提取
紫花苜蓿茎叶干草(2.0 kg)依次用石油醚，乙醇回流处理，过滤，取滤渣用蒸馏水回流冷凝提取2～6次，过滤，减压浓缩，合并浸膏。将中性蛋白酶与浸膏混合，40～60 oC培养1～3 h，在80～100 oC条件下灭活10～20 min，离心得到上清液。在上清液中加入由正丁醇和氯仿制备的Sevage试剂(1:2～1:4, v/v)，强力搅拌去除蛋白，离心，收集上清液。用Sevage法去除蛋白2～5次。将上述得到的上清液浓缩，AB-8树脂柱脱色，得到粗多糖。采用DEAE-52纤维素柱对粗多糖进行分离，用蒸馏水和不同浓度的NaCl溶液进行洗脱。苯酚-硫酸法测定其糖含量。采用Sephadex G-200柱对所得的5个馏分进行纯化收集糖含量较多的3个组分，减压浓缩干燥得到多糖（APS1,APS2,APS3）。核磁谱图(600 MHz, D2O)如图1，由1H-NMR可知，APS1:1.16-1.19 ppm 是鼠李糖的甲基氢信号，δ 3.31-4.30 ppm 表示糖苷环的H-2到H-5或H-6，δ5.19 ppm，5.02 ppm，4.95 ppm，4.34 ppm 分别是阿拉伯糖, 鼠李糖半乳糖和甘露糖的端基氢信号，结合13C-NMR和HSQC可知，δ 5.19/109.5,5.02/107.5,4.95/97.7,4.34/107.4 ppm分别是阿拉伯糖,鼠李糖,半乳糖和甘露糖的端基的C-H相关信号。通过1H-1H-COSY谱可知，δ 5.58/3.69 ppm是2-O-acetyl-β-D-Manp-(1→的H-2/H-3的相关信号，δ4.95/3.50 ppm是α-D-Galp的H-1/H-2的相关信号，δ 5.18/3.70 ppm是α-L-Araf的相关信号，δ 5.02/4.00 ppm是α-L-Rhap的H-1/H-2的相关信号，δ 4.35/3.64 ppm是β-D-Manp的相关信号，综上所述，APS1主要由2-O-acetyl-β-D-Manp-(1→3)-α-L-Araf-1(1→4)- α-L-Rhap-(1→和→3)- α-L-Rhap-(1→4)- α-L-Rhap-(1→这两个片段组成。APS2：δ 1.16-1.19 ppm 是鼠李糖的甲基氢信号，δ 3.31-4.30 ppm 表示糖苷环的H-2到H-5或H-6δ5.18,5.03,4.94,4.35 ppm分别是是阿拉伯糖,鼠李糖,半乳糖和甘露糖的端基氢信号。结合13C-NMR和HSQC可知，δ 5.18/107.2, 4.94/101.3,5.03/108.9,4.35/103.2 ppm分别是阿拉伯糖，鼠李糖，半乳糖和甘露糖的端基氢与端基碳的C-H相关信号。由HMBC可知，δ 5.03/71.5 ppm是α-D-Galp的H-1/H-4的相关信号，δ 4.41/100.1 ppm是β-D-Manp的H-1和α-L-Rhap的C-1的相关信号。δ 3.36/103.5 ppm是O-acetyl-β-D-Manp的H-2和β-D-Manp的C-1的相关信号。δ 1.18/79.1 ppm是α-L-Rhap的甲基质子与C-4的相关信号。δ 5.18/79.1 ppm是α-L-Rhap的H-1和C-4的相关信号。综上所述，APS2主要由→3)-α-L-Rhap-(1→4)-α-L-Rhap-(1→，→3)-α-D-Galp-(1→4)-α-D-Galp-(1→，β-D-Manp-(1→2)-O-acetyl-β-D-Manp-(1→和β-D-Manp-(1→3)-α-L-Rhap-(1→组成。APS3：δ 4.52/103.8,5.13/109.8,4.98/107.6,5.15/98.8,4.39/103.3 ppm分别是甘露糖，半乳糖，鼠李糖，阿拉伯糖和果糖的端基氢与端基碳的相关信号。δ 3.90/84.5 ppm是→3)- α-D-Galp-(1→的H-3/C-3相关信号，δ 5.13/2.23 ppm是α-D-Galp的H-1/H-2的相关信号，δ 5.15/3.08 ppm是α-L-Araf的H-1/H-2相关信号，δ 4.98/2.14 pp是α-L-Rhap的H-1/H-2相关信号，δ 4.35/3.74 ppm是β-D-Manp的H-1/H-2相关信号，δ 4.39/1.35 ppm是β-D-Fruf为H-1/H-2的相关信号。综上所述，APS3主要由→3)-β-D-Fruf-(1→2)-α-D-Galp-(1→，α-D-Galp-(1→2)- α-L-Rhap-(1→和→3)-α-L-Araf-(1→3)- α-L-Rhap-(1→组成。
实施例2 硒化多糖的合成
取亚硒酸钠与多糖的以1：0.8～1：1.5的比例加入圆底烧瓶中，加稀HNO3溶液，70～90oC下反应8～12 h反应完成后，冷却至室温，用NaOH溶液调节溶液pH至6～8，用透析膜透析出亚硒酸钠等小分子化合物后，停止透析，冻干,得硒化多糖（Se-APS2，Se-APS3）。
Se-APS2的结构与APS2相似，由13C-NMR可知，δ 62.1 ppm处的信号丢失表明β-D-Man的C-6被硒原子取代，同上，Se-APS3的C-6被硒原子取代。
实施例3 紫花苜蓿多糖单糖组成的测定
取APS1,APS2和APS3样品适量，用一定浓度的三氟乙酸溶解，在80～120 oC油浴反应4～10 h。反应完成后用无水甲醇用旋转蒸发仪，重复数次带走残留的三氟乙酸。最后用少量乙腈：水= 70～90:10～30溶解样品，过0.22 μm有机滤头。
色谱条件：LC-20AR高效液相色谱仪；
色谱柱：HP-Amino (4.6×250 mm,5 μm)；
检测器：RID-20A示差折光检测器；
流动相：A为乙腈，B为水，A：B= 70～80:20～30；
柱温：20～40 oC；
流速：0.2～0.8 mL/min；
进样量：30～60 μL；
后用600μL乙腈：水= 70～90:10～30溶解样品，过0.22 μm有机滤头。
色谱图见图1，由图可知APS1的是由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖和半乳糖组成，摩尔比为0.44:0.13:0.11:0.32。APS2是由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖和半乳糖组成，摩尔比为0.50:0.22:0.07:0.21。APS3是由鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖和半乳糖组成，摩尔比为0.56:0.19:0.18:0.05:0.02。
实施例4 紫花苜蓿多糖和硒化多糖分子量的测定
称取一定量的分子量为 T4（4000 Da）、T10（10000 Da）、T20（20000 Da）、T40（40000Da）、T200（200000 Da）、T500（500000 Da）的葡聚糖标准品和APS1，APS2，APS3和Se-APS2，Se-APS3，加0.5～2 mL娃哈哈纯净水溶解，充分混匀，得标准品溶液，过0.22 μm滤膜备用。
色谱条件：LC-20AR 高效液相色谱仪；
检测器：RID-20A示差折光检测器；
色谱柱：sugar column (I.D.=4.6 mm, L=250 mm)；
流动相：0.02～0.05 mol/L KH2PO4；
柱温：20～40 oC；
流速：0.2～0.8 mL/min；
进样量：30～60 μL；
根据标准葡聚糖的分子量对数和出峰时间得出标准曲线，由多糖及硒化多糖的出峰时间可知，APS1，APS2，APS3和Se-APS2,Se-APS3的分子量分别为13.4 KDa，11.2 KDa，18.6KDa，9.0 KDa，10.2 KDa。
实施例5 硒化多糖硒含量的测定
称取一定量样品于三角瓶中，加6～12 mL硝酸和2～6 mL高氯酸，常温下避光放置12～20 h以上，然后在加热套上160～220 oC加热消化，待溶液呈无色或微黄色时，再加入6～12mL盐酸(0.5～1.0 mol/mL)，继续加热至溶液为1 mL左右，冷却，同时做空白试验。将浓盐酸用蒸馏水稀释到6 mol/L，将消化后的溶液加到比色管中，然后加入2～8 mol/L 的盐酸，放置在70～100 oC的恒温槽中加热1～3 h后取出冷却，用蒸馏水稀释，即可用原子荧光光谱仪检测。结果表明Se-APS2,Se-APS3的硒含量分别是1.05和2.57 µg/mg。
实施例6 DPPH自由基清除能力
将样品配置成一系列不同浓度的水溶液，取100 μL不同浓度的样品，再加100 μL的0.2mmol/L的DPPH储备液，避光反应30 min，在517 nm下测其吸光度值。用Vc作为阳性对照。清除能力的计算公式为R%=[A0-(A1－A2)]/A0×100%。A2为100 μL的样品和100 μL的无水乙醇，为样品本底组。A0为100 μL的0.2 mmol/L 的DPPH和100 μL的50%乙醇，为空白对照组。由图3可知，紫花苜蓿多糖和硒化多糖清除DPPH自由基的能力与浓度呈剂量依赖性。当浓度达到5 mg/mL时，清除DPPH自由基的强弱顺序为APS1＜APS2＜APS3＜Se-APS3＜Se-APS2。
实施例7 ABTS自由基清除能力
将样品配置成一系列不同浓度的水溶液，取10 μL不同浓度的样品，加入190 μL ABTS+储备液，避光反应10 min，放入酶标仪检测，在734 nm波长处检测吸光度（A1）。用Vc作为阳性对照。清除能力的计算公式为R%=[A0-(A1-A2)]/A0×100%。10 μL无水乙醇和190 μLABTS，为样品本底组（A2）。空白对照（A0）为 190 μL的ABTS和10 μL的50%乙醇。由图4可知，紫花苜蓿多糖和硒化多糖清除ABTS自由基的能力与浓度呈剂量依赖性。当浓度达到5 mg/mL时，APS3＜APS1＜APS2＜Se-APS2＜Se-APS3。
实施例8 苜蓿多糖及硒化多糖对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞神经保护活性
SH-SY5Y细胞传代的常规培养以后，96孔板上接种，在37 oC下、用5% CO2在培养箱中静置培养24 h，直至细胞贴到壁上。将浓度为25，50，100 μmol/L 的样品分别加入96孔板，放置在培养箱中培养4 h，再加入100 μmol/L的H2O2作用4 h，最后用CCK8方法来检测细胞的活性。阴性对照组：细胞在传代进行常规培养，在96孔板接种之后，不用H2O2及药物处理，其它的实验步骤和给药组是完全相同的。阳性对照组：用Trolox为阳性对照药来替换给药组中的药物，其它的实验步骤和给药组完全相同。空白对照组：96孔内不接种细胞，不用H2O2及药物处理，其它的实验步骤和给药组完全相同。
存活率(%)=[A450(给药组)-A450(空白对照)]/[A450(阴性对照)-A450(空白对照)]×100%
由图5可知，H2O2诱导SH-SY5Y细胞的存活率为61%。而APS2和APS3无明显的神经细胞保护活性，经过硒化后，有了明显的神经细胞保护活性。当Se-APS2和Se-APS3的浓度达到100μmol/L时，SH-SY5Y细胞的存活率分别为79%和86%。
Claims (4)
1.具有生物活性的紫花苜蓿茎叶多糖及其硒化改性多糖的制备，其特征在于，所述制备过程包括取干燥的紫花苜蓿茎叶，依次用石油醚，乙醇回流提取去除脂和小分子后，加入蒸馏水加热回流2～6次，过滤，合并滤液，去蛋白，去色素后得到紫花苜蓿粗多糖；将得到的粗多糖经过阴离子交换柱层析分离，依次用蒸馏水﹑0.1～0.5 mol/L的NaCl溶液进行洗脱，用凝胶纯化后得到3个新的紫花苜蓿多糖APS1﹑APS2﹑APS3；
将上述得到的两个产量较大的多糖APS2和APS3用硝酸-亚硒酸钠(NA-SS)法进行硒化修饰得到2个新的硒多糖Se-APS2和Se-APS3。
2.根据权利要求1所述的具有生物活性的紫花苜蓿茎叶多糖及其硒化改性多糖的制备，其特征在于，所述3个新的紫花苜蓿多糖，其结构片段分别为：APS1：2-O-acetyl-β-D-Manp-(1→3)-α-L-Araf-1(1→4)- α-L-Rhap-(1→，→3)- α-L-Rhap-(1→4)- α-L-Rhap-(1→；APS2：→3)-α-L-Rhap-(1→4)-α-L-Rhap-(1→，→3)-α-D-Galp-(1→4)-α-D-Galp-(1→，β-D-Manp-(1→2)-O-acetyl-β-D-Manp-(1→，β-D-Manp-(1→3)-α-L-Rhap-(1→；APS3：→3)-β-D-Fruf-(1→2)-α-D-Galp-(1→，α-D-Galp-(1→2)- α-L-Rhap-(1→，→3)-α-L-Araf-(1→3)- α-L-Rhap-(1→。
3.根据权利要求1所述的具有生物活性的紫花苜蓿茎叶多糖及其硒化改性多糖的制备，其特征在于，紫花苜蓿多糖和硒多糖对DPPH和ABTS自由基均有清除作用，样品的浓度达到5 mg/mL时，清除DPPH自由基的强弱顺序为APS1＜APS2＜APS3＜Se-APS3＜Se-APS2；清除ABTS自由基的强弱顺序为APS3＜APS1＜APS2＜Se-APS2＜Se-APS3，多糖硒化后的抗氧化活性明显强于天然多糖。
4.根据权利要求1所述的具有生物活性的紫花苜蓿茎叶多糖及其硒化改性多糖的制备，其特征在于，紫花苜蓿硒多糖具有神经细胞保护作用，当Se-APS2和Se-APS3的浓度达到100 μmol/L时，SH-SY5Y细胞的存活率分别为79%和86%。
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|---|---|---|---|---|
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| Title |
|---|
| 郑文杰 等: "《植物有机硒的化学及其医学应用》", 31 July 2001, 暨南大学出版社 * |
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