CN110777082A - 一种提高棒束孢真菌产孢量的固体培养基及培养方法 - Google Patents

一种提高棒束孢真菌产孢量的固体培养基及培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种提高棒束孢真菌产孢量的固体培养基，由以下重量份的原料组成：2‑8份水，2‑8份黄豆粉，2‑8份绿豆粉,2‑8份玉米粉，2‑8份麦麸。培养方法：取棒束孢真菌在萨氏培养基上培养15天，然后将分生孢子用0.6～1％的吐温80洗脱下来制成孢子悬浮液，将孢子悬浮液浓度调整成1×106个/ml，然后接种于无琼脂的萨氏培养基内，于27℃，200r/min的摇床内震荡培养48h，得到种子液；将种子液接种到固体培养基内，搅拌均匀，然后置于27℃的培养箱内恒温培养15天，得到固体培养物。本发明的固体培养基原料简单，成本低，采用其培养棒束孢真菌后，产孢量高达4.493×1010个孢子/g。

Description

一种提高棒束孢真菌产孢量的固体培养基及培养方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种提高棒束孢真菌产孢量的固体培养基及培养方法。
背景技术
目前，在我国，已有记录的棒束孢属真菌约16种，其中较为常见、研究最多的为玫烟色棒束孢(Isariafumosorosea)、蝉棒束孢(Isaria cicadae)、粉棒束孢(Isariafarinosa)等(ZimmermannG，2008)。其中，玫烟色棒束孢在北美和欧洲已被用于温室害虫的生物防治，现有技术中已有相关真菌杀虫剂产品登记注册用于温室粉虱(Aleyrodidae)、蚜虫(Aphidoidea)、蓟马和蚧壳虫(Coccoidea)的防治(孟祥云，2011)。棒束孢真菌BS-1属于棒束孢属(Isaria sp.)隶属盘菌亚门(Pezizomycotina)粪菌纲(Sondariomycetes)肉座菌目(Hypocrellales)虫草科(Conlycipitaceae),棒束孢属真菌BS-1与枚烟色棒束孢属于同一个属，BS-1对于普通大蓟马具有很高的致病力。
目前用于培养棒束孢真菌的培养基产孢量都不太理想，有报道称玫烟色棒束孢的最佳培养基为PDA培养基，菌丝生长的最佳温度为30℃，最佳的产孢温度为25℃(田晶等，2014)；也有报道采用固液两相的培养方法，将玫烟色棒束孢接种到萨式液体培养基中培养后作为母液接种到由11％麦麸和76％的棉籽壳组成的固体培养基中，其产孢量最高可达2.15×109个孢子/g(曹娜，2018)，等等。这些用于培养棒束孢真菌的培养基产孢量都不太理想，因此急需一种利于提高棒束孢真菌产孢量的培养基。
发明内容
本发明的目的是提供解决现有技术中存在的不足，提供一种提高棒束孢真菌产孢量的固体培养基及培养方法。
技术方案
一种提高棒束孢真菌产孢量的固体培养基，由以下重量份的原料组成：2-8份水，2-8份黄豆粉，2-8份绿豆粉,2-8份玉米粉，2-8份麦麸。
进一步，所述固体培养基由以下重量份的原料组成：4-8份水，2-6份黄豆粉，2-8份绿豆粉,4-8份玉米粉，2-8份麦麸。更优选为：6份水，2份黄豆粉，4份绿豆粉,8份玉米粉，6份麦麸。
所述固体培养基的制备方法：按配方将各原料混合均匀，然后放入湿热灭菌锅内121℃灭菌30min，冷却后备用。
一种提高棒束孢真菌产孢量的培养方法，包括如下步骤：
(1)液体培养阶段：
取棒束孢真菌在萨氏培养基上培养15天，然后将分生孢子用0.6～1％的吐温80洗脱下来制成孢子悬浮液，将孢子悬浮液浓度调整成1×106个/ml，然后接种于无琼脂的萨氏培养基内，于27℃，200r/min的摇床内震荡培养48h，得到种子液；
(2)固体培养阶段：
取5mL种子液接种到固体培养基内，充分搅拌均匀，然后置于27℃的培养箱内恒温培养15天，得到棒束孢真菌固体培养物，测试棒束孢真菌固体培养物中的孢子含量，即可。
本发明的有益效果：本发明提供了一种提高棒束孢真菌产孢量的固体培养基，原料简单，成本低，采用本发明的固液两相的培养方法培养棒束孢真菌后，产孢量高达4.493×1010个孢子/g，同等条件下，比11％麦麸和76％棉籽壳组成的培养基产孢量提高了20.89倍，比大麦培养基的产孢量提高了23.66％，比糙米培养基的产孢量提高了32.12％。
附图说明
图1为实施例1-16中固体培养基重量减退率的测试结果。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。
下述实施例中，所用的棒束孢真菌为棒束孢真菌BS-1，其于2018年4月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO：M2018241。
实施例1
一种提高棒束孢真菌产孢量的固体培养基，由以下重量份的原料组成：4份水，4份黄豆粉，4份绿豆粉,4份玉米粉，2份麦麸。
一种提高棒束孢真菌产孢量的培养法方法，包括如下步骤：
(1)液体培养阶段：
取棒束孢真菌在萨氏培养基上培养15天，然后将分生孢子用0.6～1％的吐温80洗脱下来制成孢子悬浮液，将孢子悬浮液浓度调整成1×106个/ml，然后接种于无琼脂的萨氏培养基内，于27℃，200r/min的摇床内震荡培养48h，得到种子液；
(2)固体培养阶段：
取5mL种子液接种到固体培养基(25g)内，充分搅拌均匀，然后置于27℃的培养箱内恒温培养15天，得到棒束孢真菌固体培养物。
实施例2
固体培养基由以下重量份的原料组成：4份水，8份黄豆粉，6份绿豆粉,2份玉米粉，6份麦麸。
培养方法与实施例1相同。
实施例3
固体培养基由以下重量份的原料组成：6份水，6份黄豆粉，6份绿豆粉,6份玉米粉，2份麦麸。
培养方法与实施例1相同。
实施例4
固体培养基由以下重量份的原料组成：6份水，2份黄豆粉，4份绿豆粉,8份玉米粉，6份麦麸。
培养方法与实施例1相同。
实施例5
固体培养基由以下重量份的原料组成：4份水，6份黄豆粉，2份绿豆粉,8份玉米粉，8份麦麸。
培养方法与实施例1相同。
实施例6
固体培养基由以下重量份的原料组成：6份水，8份黄豆粉，2份绿豆粉,4份玉米粉，4份麦麸。
培养方法与实施例1相同。
实施例7
固体培养基由以下重量份的原料组成：4份水，2份黄豆粉，8份绿豆粉,6份玉米粉，4份麦麸。
培养方法与实施例1相同。
实施例8
固体培养基由以下重量份的原料组成：8份水，2份黄豆粉，6份绿豆粉,4份玉米粉，8份麦麸。
培养方法与实施例1相同。
实施例9
固体培养基由以下重量份的原料组成：6份水，4份黄豆粉，8份绿豆粉,2份玉米粉，8份麦麸。
培养方法与实施例1相同。
实施例10
固体培养基由以下重量份的原料组成：8份水，8份黄豆粉，8份绿豆粉,8份玉米粉，2份麦麸。
培养方法与实施例1相同。
实施例11
固体培养基由以下重量份的原料组成：8份水，4份黄豆粉，2份绿豆粉,6份玉米粉，6份麦麸。
培养方法与实施例1相同。
性能测试：
1.固体培养基重量减退率测试
真菌的生长需要消耗水分和营养物质，生长越旺盛，消耗的水分跟营养物质就多，培养基整体重量就减轻，因此对实施例1-11的固体培养基进行重量减退率测试。测试方法：在实施例1-11中固体培养第3天、6天、9天、12天、15天的时候称重，培养基重量减退率的计算公式：
Figure BDA0002306567380000041
实施例1-11中固体培养基重量减退率的测试结果见图1。可以看出，本发明实施例1-11的固体培养基均具有较好的重量减退率。
2.产孢量测试
将实施例1-16得到的棒束孢真菌固体培养物各取1g，分别放入250ml的锥形瓶内，然后加入100ml的0.6～1％的吐温80，磁力搅拌20min，逐步稀释后，用血球计数板测定孢子数量。测试结果见表1：
Figure BDA0002306567380000042
Figure BDA0002306567380000051
由表1的产孢量测试结果可以看出，采用本发明的固体培养基和培养方法后，棒束孢真菌的产孢量得到了提高，尤其以实施例4的固体培养基效果最佳。

Claims (4)

1.一种提高棒束孢真菌产孢量的固体培养基，其特征在于，由以下重量份的原料组成：2-8份水，2-8份黄豆粉，2-8份绿豆粉,2-8份玉米粉，2-8份麦麸。
2.如权利要求1所述提高棒束孢真菌产孢量的固体培养基，其特征在于，所述固体培养基由以下重量份的原料组成：4-8份水，2-6份黄豆粉，2-8份绿豆粉,4-8份玉米粉，2-8份麦麸。
3.如权利要求2所述提高棒束孢真菌产孢量的固体培养基，其特征在于，所述固体培养基由以下重量份的原料组成：6份水，2份黄豆粉，4份绿豆粉,8份玉米粉，6份麦麸。
4.一种提高棒束孢真菌产孢量的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)液体培养阶段：
取棒束孢真菌在萨氏培养基上培养15天，然后将分生孢子用0.6～1％的吐温80洗脱下来制成孢子悬浮液，将孢子悬浮液浓度调整成1×106个/ml，然后接种于无琼脂的萨氏培养基内，于27℃，200r/min的摇床内震荡培养48h，得到种子液；
(2)固体培养阶段：
取5mL种子液接种到权利要求1或2或3所述固体培养基内，充分搅拌均匀，然后置于27℃的培养箱内恒温培养15天，得到棒束孢真菌固体培养物，测试棒束孢真菌固体培养物中的孢子含量，即可。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113652466A (zh) * 2021-08-30 2021-11-16 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 一种多主棒孢菌分生孢子质量的测定方法

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101843196A (zh) * 2010-04-19 2010-09-29 杨毅 冬虫夏草菌丝体和子实体的栽培方法
CN104171387A (zh) * 2014-07-16 2014-12-03 淮北嘉吉农牧科技有限公司 一种防病治病母猪饲料及其制作方法
CN105985150A (zh) * 2015-01-28 2016-10-05 浙江泛亚生物医药股份有限公司 一种蝉花孢梗束液体培养基
CN106434521A (zh) * 2016-12-23 2017-02-22 河北省农林科学院植物保护研究所 一种诱导禾谷镰刀菌大量产生分生孢子的培养基及方法
CN106591146A (zh) * 2016-12-02 2017-04-26 华中农业大学 一种玫烟色棒束孢的发酵培养方法
CN107475130A (zh) * 2017-09-19 2017-12-15 广东省微生物研究所 细柄棒束孢新菌种及其栽培方法和用途
US20180177168A1 (en) * 2016-08-21 2018-06-28 Insectergy, Llc Alimentary composition comprised of insects and tetrahydrocannabinol
CN108865900A (zh) * 2018-07-16 2018-11-23 海南大学 一种爪哇棒束孢菌株及其应用
CN109370913A (zh) * 2018-11-15 2019-02-22 云南农业大学 一种玫烟色棒束孢wswl21837菌株孢子粉生产方法

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101843196A (zh) * 2010-04-19 2010-09-29 杨毅 冬虫夏草菌丝体和子实体的栽培方法
CN104171387A (zh) * 2014-07-16 2014-12-03 淮北嘉吉农牧科技有限公司 一种防病治病母猪饲料及其制作方法
CN105985150A (zh) * 2015-01-28 2016-10-05 浙江泛亚生物医药股份有限公司 一种蝉花孢梗束液体培养基
US20180177168A1 (en) * 2016-08-21 2018-06-28 Insectergy, Llc Alimentary composition comprised of insects and tetrahydrocannabinol
CN106591146A (zh) * 2016-12-02 2017-04-26 华中农业大学 一种玫烟色棒束孢的发酵培养方法
CN106434521A (zh) * 2016-12-23 2017-02-22 河北省农林科学院植物保护研究所 一种诱导禾谷镰刀菌大量产生分生孢子的培养基及方法
CN107475130A (zh) * 2017-09-19 2017-12-15 广东省微生物研究所 细柄棒束孢新菌种及其栽培方法和用途
CN108865900A (zh) * 2018-07-16 2018-11-23 海南大学 一种爪哇棒束孢菌株及其应用
CN109370913A (zh) * 2018-11-15 2019-02-22 云南农业大学 一种玫烟色棒束孢wswl21837菌株孢子粉生产方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MASCARIN等: "Culture media selection for mass production of Isaria fumosorosea and Isaria farinosa", 《BRAZILIAN ARCHIVES OF BIOLOGY AND TECHNOLOGY》 *
RUNGCHAROEN等: "The utilization of mung bean bran in broiler diets", 《PROCEEDINGS OF THE 48TH KASETSART UNIVERSITY ANNUAL CONFERENCE》 *
张安宁等: "4种虫草真菌生长适宜碳、氮源的研究", 《江苏农业科学》 *
郑永标等: "真姬菇生物学效率的影响因素试验简报", 《全国第6届食用菌学术研讨会论文集》 *
郭永霞: "猫棒束孢菌抗真菌多肽和巨大口蘑抗真菌蛋白的分离纯化及特性的研究", 《中国博士学位论文全文数据库》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113652466A (zh) * 2021-08-30 2021-11-16 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 一种多主棒孢菌分生孢子质量的测定方法
CN113652466B (zh) * 2021-08-30 2024-01-23 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 一种多主棒孢菌分生孢子质量的测定方法

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