CN110776440A - 通过pisa法制备偶氮还原酶响应性聚合物荧光探针及其应用 - Google Patents

通过pisa法制备偶氮还原酶响应性聚合物荧光探针及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110776440A
CN110776440A CN201911144146.2A CN201911144146A CN110776440A CN 110776440 A CN110776440 A CN 110776440A CN 201911144146 A CN201911144146 A CN 201911144146A CN 110776440 A CN110776440 A CN 110776440A
Authority
CN
China
Prior art keywords
azo
tpe
formula
responsive
under
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201911144146.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110776440B (zh
Inventor
周年琛
周叶春
王雨晴
张伟
张正彪
朱秀林
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suzhou University
Original Assignee
Suzhou University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suzhou University filed Critical Suzhou University
Priority to CN201911144146.2A priority Critical patent/CN110776440B/zh
Publication of CN110776440A publication Critical patent/CN110776440A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110776440B publication Critical patent/CN110776440B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C245/00—Compounds containing chains of at least two nitrogen atoms with at least one nitrogen-to-nitrogen multiple bond
    • C07C245/02—Azo compounds, i.e. compounds having the free valencies of —N=N— groups attached to different atoms, e.g. diazohydroxides
    • C07C245/06—Azo compounds, i.e. compounds having the free valencies of —N=N— groups attached to different atoms, e.g. diazohydroxides with nitrogen atoms of azo groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings
    • C07C245/08—Azo compounds, i.e. compounds having the free valencies of —N=N— groups attached to different atoms, e.g. diazohydroxides with nitrogen atoms of azo groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings with the two nitrogen atoms of azo groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings, e.g. azobenzene
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C213/00—Preparation of compounds containing amino and hydroxy, amino and etherified hydroxy or amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C213/06—Preparation of compounds containing amino and hydroxy, amino and etherified hydroxy or amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton from hydroxy amines by reactions involving the etherification or esterification of hydroxy groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F220/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and only one being terminated by only one carboxyl radical or a salt, anhydride ester, amide, imide or nitrile thereof
    • C08F220/02—Monocarboxylic acids having less than ten carbon atoms; Derivatives thereof
    • C08F220/10—Esters
    • C08F220/12—Esters of monohydric alcohols or phenols
    • C08F220/16—Esters of monohydric alcohols or phenols of phenols or of alcohols containing two or more carbon atoms
    • C08F220/18—Esters of monohydric alcohols or phenols of phenols or of alcohols containing two or more carbon atoms with acrylic or methacrylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F220/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and only one being terminated by only one carboxyl radical or a salt, anhydride ester, amide, imide or nitrile thereof
    • C08F220/02—Monocarboxylic acids having less than ten carbon atoms; Derivatives thereof
    • C08F220/10—Esters
    • C08F220/34—Esters containing nitrogen, e.g. N,N-dimethylaminoethyl (meth)acrylate
    • C08F220/36—Esters containing nitrogen, e.g. N,N-dimethylaminoethyl (meth)acrylate containing oxygen in addition to the carboxy oxygen, e.g. 2-N-morpholinoethyl (meth)acrylate or 2-isocyanatoethyl (meth)acrylate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F293/00—Macromolecular compounds obtained by polymerisation on to a macromolecule having groups capable of inducing the formation of new polymer chains bound exclusively at one or both ends of the starting macromolecule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K11/00—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
    • C09K11/06—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing organic luminescent materials
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6486—Measuring fluorescence of biological material, e.g. DNA, RNA, cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F2438/00—Living radical polymerisation
    • C08F2438/01—Atom Transfer Radical Polymerization [ATRP] or reverse ATRP
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
    • C09K2211/14—Macromolecular compounds

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明公开了通过聚合诱导自组装(PISA)制备偶氮还原酶响应的聚合物荧光探针的方法及其应用。首先制备水溶性大分子链转移剂PEG‑CTA，同时制备含有偶氮苯的功能单体TPE‑AZO‑MA。用此功能单体和甲基丙烯酸丁酯(BMA)与PEG‑CTA进行RAFT聚合诱导自组装，得到基于偶氮还原酶响应的两亲性嵌段聚合物组装体，其具有良好的生物相容性。本发明还公开了通过聚合诱导自组装(PISA)在制备偶氮还原酶响应的药物载体或生物成像制剂中的应用。

Description

通过PISA法制备偶氮还原酶响应性聚合物荧光探针及其应用
技术领域
本发明涉及材料制备技术领域，尤其涉及一种通过PISA法制备偶氮还原酶响应性聚合物荧光探针及其应用。
背景技术
偶氮苯除了具有独特的光响应性外，还具有特别的还原响应性，其N＝N双键可在化学还原剂(如Na2S2O4)以及生物内特定酶(偶氮还原酶)的作用下被还原打断。此外，将偶氮苯基团与有机荧光基团引入到一个分子系统中，可产生荧光共振能量转移(FRET)，导致荧光猝灭。然而，一旦偶氮键被打断，FRET效应将消除，导致荧光恢复并逐渐增强。因此，此类偶氮苯衍生物具有荧光探针的功能。由于偶氮还原酶主要存在于人体的结肠中，而偶氮苯对偶氮还原酶具有特异性响应，因此，偶氮苯荧光探针可应用于结肠疾病治疗中的药物监控和生物成像(参见：Yuan,X.J.,Wang,Z.,Li,L.S.,Yu,J.W.,Wang,Y.Q.,Li,H.K.,Zhang,J.,Zhang,Z.D.,Zhou,N.C.,Zhu,X.L.,Materials Chemistry Frontiers 2019,3,1097-1104.)。
聚集诱导发光(AIE)是指在溶液状态下物质不发光或发光十分微弱，而在固体状态或者聚集状态下其荧光发射明显增强的现象。AIE荧光分子可有效弥补传统荧光分子因聚集而导致荧光猝灭的缺陷，因而受到广泛关注。四苯基乙烯(TPE)是一种合成简单，易功能化的典型的AIE分子，基于TPE的荧光探针已得到广泛应用(参见：Hu,R.R.,Leung,N.L.C.,Tang,B.Z.,Chemical Society Reviews 2014,43,4494-4562.)。
近年来，人们提出了一种通过活性/可控自由基聚合和自组装在一锅中同时发生制备聚合物纳米粒子的方法，即聚合诱导自组装(Polymerization-induced self-assembly,PISA)方法。PISA的主要原理是使用合适单体对可溶性大分子链转移剂进行扩链形成不溶性第二嵌段，在反应体系中自发原位自组装得到两亲性嵌段聚合物。与传统的溶液自组装相比，PISA可以在更高浓度(10-50％)下进行，而传统的自组装在非常稀的浓度(<1％)下进行，难以大规模制备；同时PISA避免了传统自组装中多个处理和纯化步骤。由于PISA制备纳米粒子的高效和操作方便，它一经提出很快引起极大关注(参见：Tan,M.T.,Shi,Y.,Fu,Z.F.,Yang,W.T.,Polymer Chemistry 2018,9,1082-1094.)。
近年来随着生物技术的快速发展，基于偶氮还原酶响应的两亲性嵌段聚合物荧光探针应运而生，在药物释放，生物传感和检测等诸多方面展示出重要的应用前景(参见：Eom,T.,Yoo,W.,Kim,S.,Khan,A.,Biomaterials 2018,185,333-347.)。然而，目前报道的基于偶氮还原酶响应的两亲性嵌段聚合物载药胶束几乎都是采用传统的自组装方法获得的，如CN 108752594A公开了一种基于偶氮还原酶响应的两亲性嵌段聚合物及其制备方法与应用，CN 110372829A公开了一种基于偶氮还原响应的聚合物凝胶荧光探针的制备及应用，而基于PISA的制备方法鲜有报道。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种通过PISA法制备偶氮还原酶响应性聚合物荧光探针及其应用，本发明提供了一种偶氮还原酶响应性单体，并进一步通过PISA法高效合成偶氮还原酶响应性AIE型聚合物，该聚合物在偶氮还原酶作用下可发出荧光，利用上述性质可将其作为荧光探针和药物载体。
本发明的技术方案如下：
本发明的一种偶氮还原酶响应性单体，其结构式如式(I)所示：
Figure BDA0002281713520000021
本发明的偶氮还原酶响应性单体中含有偶氮苯基团，由于偶氮苯基团对荧光的淬灭作用，因此其中TPE基团的AIE荧光处于休眠状态。
本发明还提供了一种上述偶氮还原酶响应性单体的制备方法，包括以下步骤：
(1)将式(1)的化合物TPE-OH与N-乙基-N-羟乙基苯胺在三苯基膦和DIAD(偶氮二甲酸二异丙酯)的作用下，在有机溶剂中于30～60℃下回流反应35～40h，反应完全后得到式(2)的化合物TPE-ANI；
(2)在惰性气氛保护下，将TPE-ANI与对氨基苯甲醇重氮盐在pH＝5～6条件下，在有机溶剂中于冰盐浴条件下偶联反应15～20h，反应完全后调节反应液pH至6.5-7.5，得到式(3)的化合物TPE-ANI-AZO；
(3)在惰性气氛保护下，将TPE-ANI-AZO与甲基丙烯酰氯在有机胺和DMAP(4-二甲氨基吡啶)的作用下，在有机溶剂中于20～25℃下搅拌反应15～18h，反应完全后得到式(I)的化合物TPE-AZO-MA；其中，式(1)-(3)的结构式依次如下：
Figure BDA0002281713520000031
进一步地，在步骤(1)中，所述TPE-OH、N-乙基-N-羟乙基苯胺、三苯基膦和DIAD的摩尔比为1:2:3:(2～4)。
进一步地，在步骤(1)中，式(1)的化合物TPE-OH的制备方法包括以下步骤：
将二苯甲酮和4-羟基二苯甲酮在锌(Zn)和四氯化钛(TiCl4)的作用下，在有机溶剂中于68～72℃下回流反应10～16h，反应完全后得到TPE-OH。其中，二苯甲酮、4-羟基二苯甲酮、锌和四氯化钛的摩尔比为1:1.2:4.4:(1～3)。
进一步地，在步骤(2)中，所述对氨基苯甲醇重氮盐的制备方法包括以下步骤：
将对氨基苯甲醇和亚硝酸盐在浓盐酸的水溶液中于0～5℃下反应，反应完全后得到所述对氨基苯甲醇重氮盐。
进一步地，在步骤(2)中，制备对氨基苯甲醇重氮盐的对氨基苯甲醇、浓盐酸、亚硝酸钠与后续反应的TPE-ANI的摩尔比为3:(6～8):3:1。
进一步地，在步骤(3)中，所述TPE-ANI-AZO、三乙胺、DMAP和甲基丙烯酰氯的摩尔比为1:(1～3):0.07:2.24。
优选地，偶氮还原酶响应性单体的制备路线如下：
Figure BDA0002281713520000041
本发明还提供了一种通过聚合诱导自组装(PISA)法制备偶氮还原酶响应性聚合物的方法，包括以下步骤：
在惰性气氛保护下，将本发明式(I)所示的偶氮还原酶响应性单体TPE-AZO-MA、式(4)的化合物PEG-CTA和甲基丙烯酸丁酯(BMA)在引发剂的作用下，在有机溶剂和水的混合溶液中于68～72℃下反应22～27h，反应完全后，得到式(II)所示的偶氮还原酶响应性聚合物，其中，式(4)和式(II)的结构式依次如下：
Figure BDA0002281713520000051
其中，57≤m≤235，2≤x≤11，5≤y≤24；式(II)中的TPE代表四苯乙烯基。
进一步地，BMA、TPE-AZO-MA、PEG-CTA和引发剂的摩尔比为10:5:1:(0.2～0.5)。
进一步地，引发剂为ACVA(4,4'-偶氮(4-氰基戊酸))，其结构式如下：
Figure BDA0002281713520000052
进一步地，本发明的PEG-CTA为水溶性大分子链转移剂，其制备方法包括以下步骤：
在惰性气氛保护下，将聚乙二醇单甲醚PEGm-OH和4-氰基-4-[[(十二烷硫基)硫酮甲基]硫基]戊酸在DMAP和DCC的作用下，在有机溶剂中于20～25℃下搅拌反应25～30h，反应完全后得到所述PEG-CTA；所述聚乙二醇单甲醚PEGm-OH的分子量为2500～15000g/mol。
优选地，聚乙二醇单甲醚PEGm-OH的数均分子量(Mn,NMR)为4800-5000g/mol(通过核磁测试测得)；或数均分子量(Mn,SEC)为4900～5100g/mol(通过凝胶色谱仪(SEC)测得)。
优选地，聚乙二醇单甲醚PEGm-OH、4-氰基-4-[[(十二烷硫基)硫酮甲基]硫基]戊酸、DMAP和DCC的摩尔比为1:(3～5):1:(5～7)。以上反应路线如下：
Figure BDA0002281713520000053
到目前为止，通过聚合诱导自组装(PISA)制备偶氮还原酶响应的具有AIE型荧光特性的聚合物组装体鲜有报道。本发明公开了通过PISA制备偶氮还原酶响应的AIE型聚合物荧光探针的方法。
本发明进一步要求保护一种上述通过PISA法所制备的式(II)所示的偶氮还原酶响应性聚合物。
本发明所制备的式(II)所示的偶氮还原酶响应性聚合物为两亲性嵌段聚合物，由于其制备过程是在有机溶剂和水的混合溶液中进行的，因此，所形成的聚合物以胶束的形式存在。
本发明上述聚合诱导自组装所得偶氮还原酶响应性聚合物胶束经透析制得相应的胶束PBS溶液，其在Na2S2O4作用下可发生解离，并实现从无到有的荧光响应。
本发明还要求保护上述通过PISA法所制备的偶氮还原酶响应性聚合物在制备偶氮还原酶响应的AIE型荧光探针中的应用。
本发明还要求保护上述通过PISA法所制备的偶氮还原酶响应性聚合物在制备偶氮还原酶响应的药物载体或生物成像制剂中的应用。
进一步地，采用原位载药方式制备偶氮还原酶响应的药物载体，包括以下步骤：
将本发明式(I)所示的TPE-AZO-MA、PEG-CTA、引发剂、BMA以及疏水性药物在有机溶剂和水的混合溶液中于68～72℃下反应22～27h，通过聚合诱导自组装(PISA)法得到偶氮还原酶响应的两亲性嵌段聚合物载药胶束。
优选地，疏水性药物为阿霉素(DOX)，也可选用其他类型性能的疏水性药物，使其包载于偶氮还原酶响应性聚合物胶束的内部。
细胞毒性测试结果表明，本发明所制备的偶氮还原酶响应的药物载体具有良好的生物相容性。并且所制备的载药胶束在偶氮还原酶作用下既能释放药物又能实现AIE型荧光探针功能。在模拟人体结肠环境下通过偶氮还原酶对载药胶束进行还原，随着药物的释放，来自于TPE特征发射峰的荧光强度逐渐增强。由于偶氮还原酶主要存在人体的结肠中，所以本发明采用PISA法制备的载药胶束在制备治疗结肠疾病的制剂领域、药物监控和生物成像制剂领域具有潜在的应用。
借由上述方案，本发明至少具有以下优点：
本发明首先合成AIE休眠型的功能单体TPE-AZO-MA，由于偶氮苯基团对荧光的淬灭作用，TPE的AIE荧光处于休眠状态。将其与亲水性大分子链转移剂PEG-CTA和BMA通过高效的PISA方法高效制备了基于偶氮还原酶响应的PEG-b-P(BMA-co-TPE-AZO-MA)的AIE型两亲性聚合物。该聚合物在Na2S2O4或偶氮还原酶的作用下，偶氮苯的N＝N双键被还原打断。偶氮键被打断后，FRET效应消失，并TPE-ANI基团分散到溶液中聚集后发出荧光。
利用上述功能单体TPE-AZO-MA，还可通过高效的PISA方法进行原位载药，成功获得负载药物的胶束，该胶束具有偶氮还原酶响应的药物释放和荧光探针双重功能。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。
附图说明
图1是本发明中TPE-OH在DMSO-d6中的核磁氢谱1H NMR图；
图2是本发明中TPE-ANI在DMSO-d6中的核磁氢谱1H NMR图；
图3是本发明中TPE-ANI-AZO在CDCl3的核磁氢谱1H NMR图；
图4是本发明中TPE-AZO-MA在DMSO-d6中的核磁氢谱1H NMR图；
图5是本发明中PEG-CTA在CDCl3的核磁氢谱1H NMR图；
图6是本发明中PEG101-b-P(BMA9.8-co-TPE-AZO-MA4.6)在CDCl3中的核磁氢谱1H NMR图；
图7是本发明中PEG-CTA与聚合诱导自组装所得聚合物PEG101-b-P(BMA9.8-co-TPE-AZO-MA4.6)的GPC流出曲线；
图8是本发明中通过PISA制备的空白胶束PBS溶液(0.1mg/mL)Na2S2O4还原前后的紫外可见图谱；
图9是本发明中通过PISA制备的空白胶束PBS溶液(0.1mg/mL)Na2S2O4还原前后荧光光谱(激发波长360nm)；
图10是本发明中通过PISA制备的空白胶束PBS溶液(0.1mg/mL)Na2S2O4还原前后(a)还原前；(b)还原后的透射电镜TEM图；
图11是本发明中通过PISA制备的空白胶束PBS溶液(0.1mg/mL)Na2S2O4还原前后相应的动态粒径散射(DLS)图；
图12是PISA原位载药所得两亲性嵌段聚合物PEG101-b-P(BMA9.7-co-TPE-AZO-MA4.7)在CDCl3中的核磁氢谱1H NMR图；
图13是PISA原位载药所得两亲性嵌段聚合物PEG101-b-P(BMA9.7-co-TPE-AZO-MA4.7)的GPC流出曲线；
图14是包载DOX的胶束溶液在偶氮还原酶作用下随时间变化的荧光谱图(0.12mg/mL)(激发波长360nm)；
图15是包载DOX的胶束溶液酶解前与酶解24h后的紫外可见图谱(0.12mg/mL)；
图16是载药胶束PBS溶液(a)酶解前(b)酶解24h后的透射电镜(TEM)图像(0.12mg/mL)；
图17是载药胶束PBS溶液酶解前与酶解24h后的动态粒径散射(DLS)图(0.12mg/mL)；
图18是包载DOX的胶束溶液在偶氮还原酶作用下随时间变化的药物释放结果(0.12mg/mL)；
图19是不同浓度的聚合物胶束对L929细胞与Hela细胞存活率的影响；
图20是偶氮还原酶响应的载药胶束的合成及药物释放的过程示意图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
本发明公开了一种通过PISA制备偶氮还原酶响应的两亲性嵌段聚合物胶束的策略，其具体方法如下：
(1)选用带酚羟基四苯基乙烯TPE-OH与N-乙基-N-羟乙基苯胺通过光延反应，制得具有AIE型荧光特性的苯胺衍生物TPE-ANI：
Figure BDA0002281713520000081
TPE-ANI通过重氮偶合反应，得到AIE休眠的荧光小分子TPE-ANI-AZO：
Figure BDA0002281713520000082
TPE-ANI-AZO再与甲基丙烯酰氯发生取代反应，制得基于偶氮还原酶响应的功能性单体TPE-AZO-MA：
Figure BDA0002281713520000083
(2)选用聚乙二醇单甲醚4000与4-氰基-4-[[(十二烷硫基)硫酮甲基]硫基]戊酸通过酯化反应，制得大分子链转移剂PEG-CTA：
Figure BDA0002281713520000091
(3)以PEG-CTA为大分子链转移剂，选用BMA与TPE-AZO-MA进行聚合诱导自组装，制得偶氮还原酶响应的两亲性嵌段聚合物胶束，相应的聚合物为PEG-b-P(BMA-co-TPE-AZO-MA)(本发明结构式中的co代表共聚)：
具体实施例中性能测试方法如下：
1、核磁氢谱(1H NMR)是通过Bruker 300MHz核磁仪，四甲基硅烷(TMS)为内标，将测试样品以CDCl3为溶剂溶解后进行测试；
2、聚合物数均分子量(Mn)、重均分子量(Mw)和分子量分布指数(Mw/Mn)使用装配有示差折光检测器和紫外检测器TOSOH HLC-8320凝胶色谱仪(SEC)上测定，采用两根TSKgelSuper Mutipore HZ-N(3μm beads size)柱子串联，分子量范围为500至190,000g/mol，选用色谱纯THF作为流动相，流速为0.35mL/min，40℃下进行测试，以聚甲基丙烯酸甲酯(窄分布)为标样对聚合物分子量进行校正；
3、荧光发射光谱采用Hitachi F-4600型荧光光度计测试得到；
4、紫外-可见吸收光谱在UV-2600紫外可见光谱仪(Shimadzu,Nakagyo-ku,Kyoto,Japan)25℃下进行测定；
5、透射电子显微镜(TEM)采用HITACHI HT7700TEM，工作加速电压为120kV；
6、动态光散射(DLS)用Malvern Zetasizer Nano-ZS90，测试角度90°，测试温度25℃。
实施例一
通过PISA制备偶氮还原酶响应的两亲性嵌段聚合物胶束，包括以下步骤：
1、合成TPE-OH
将10.00g(54.88mmol)二苯甲酮，13.06g(65.86mmol)4-羟基二苯甲酮，15.78g(241.46mmol)锌粉和130mL THF加入250mL三颈烧瓶中，经导气管通氩气，在0℃下边搅拌边用恒压滴液漏斗滴加22.9g(13.26mL，120.74mmol)TiCl4。70℃回流13.3h反应完全。反应混合物用100mL盐酸溶液(50mL浓盐酸稀释至100mL)，搅拌，乙酸乙酯萃取(200mL×4)，水洗，NaCl溶液洗，无水Na2SO4干燥，过滤，旋蒸，柱层析(淋洗剂：V石油醚/V乙酸乙酯＝8/1)。接着旋蒸至干，30℃真空干燥，得白色固体。产率为59.8％。附图1是TPE-OH的1H NMR图谱。
2、合成TPE-ANI
将10.00g(28.70mmol)TPE-OH，9.48g(9.30mL，57.40mmol)N-乙基-N-羟乙基苯胺，22.58g(86.10mmol)三苯基膦和100mL THF加入250mL三颈烧瓶中，经导气管通氩气，在0℃下搅拌，同时用恒压滴液漏斗滴加17.41g(16.95mL，86.10mmol)DIAD与25mLTHF的混合溶液。滴加完毕后继续搅拌15min，升温50℃回流搅拌35h。反应混合物用乙酸乙酯萃取三次，水洗两次，得有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，旋蒸，柱层析(淋洗剂：V石油醚/V乙酸乙酯＝20/1)。接着旋蒸至干，30℃真空干燥，得淡黄色油状液体。产率为33.4％。附图2是TPE-ANI的1HNMR图谱。
3、合成TPE-ANI-AZO
将3.96g(32.14mmol)对氨基苯甲醇，10mL H2O，6.70mL(80.35mmol)浓盐酸加入至50mL烧杯，搅拌至澄清，冷却至0℃。将2.22g(32.14mmol)NaNO2溶于20mL H2O，在冰浴条件下搅拌45min，得到对氨基苯甲醇重氮盐。将5.31g(10.71mmol)TPE-ANI，16mL NaOAc/HOAc缓冲溶液(pH＝5)，150mL THF和150mL EtOH置于500mL圆底烧瓶中，冷却至0℃，边搅拌边滴入对氨基苯甲醇重氮盐。继续在0℃下搅拌18.5h。用NaOAc溶液调pH至6.5～7.5，用二氯甲烷萃取(250mL×3)，得有机相，NaCl溶液洗(300mL×2)，用无水Na2SO4干燥，过滤，旋蒸，柱层析(淋洗剂：V石油醚/V乙酸乙酯＝4/1)。接着旋蒸至干，30℃真空干燥，得橙红色油状液体。产率为52.1％。附图3是TPE-ANI-AZO的1H NMR图谱。
4、合成TPE-AZO-MA
将3.73g(5.92mmol)TPE-ANI-AZO，1.46g(2.00mL，14.39mmol)三乙胺，57.88mg(437.80μmol)DMAP和90mL THF加入250mL三颈烧瓶中。然后经导气管通氩气，冷却至0℃。接着滴加1.39g(1.28mL，13.27mmol)甲基丙烯酰氯和10mL THF的混合溶液。撤去冰浴，恢复室温，在25℃下搅拌16.5h反应完全。旋蒸，柱层析(淋洗剂：V石油醚/V乙酸乙酯＝10/1)。接着旋蒸至干，30℃真空干燥，得橙红色固体。产率为43.0％。附图4是TPE-AZO-MA的1H NMR图谱。
5、亲水大分子RAFT试剂PEG-CTA的合成
将1.00g(0.25mmol)聚乙二醇单甲醚4000(分子量为4000g/mol)，403.65mg(1.00mmol)4-氰基-4-[[(十二烷硫基)硫酮甲基]硫基]戊酸，30.55mg(0.25mmol)DMAP置于50mL三颈烧瓶中，309.25mg(1.50mmol)DCC置于恒压滴液漏斗，组装起来，密封，针筒分别注射20mL二氯甲烷，10mL二氯甲烷。将三颈烧瓶置于冰浴中滴加DCC溶液，25℃搅拌27h。反应混合物过滤两次，沉降三次(冰乙醚)，抽滤，30℃真空干燥。产物为淡黄色固体。产率为75.7％。附图5是PEG-CTA的1H NMR图谱。
其中亲水链段的重复单元个数m可通过PEGm-CTA的1H NMR(图5)采用下列公式(1)计算得到：
m＝(I3.47-3.85/4)/(I4.20-4.31/2)+1/2 公式(1)
I3.47-3.85:谱图中3.47-3.85ppm处对应聚乙二醇单甲醚上重复单元-OCH2CH2O-片段的质子峰；
I4.20-4.31:谱图中4.20-4.31ppm处对应PEGm-CTA中-COOCH2CH2O-片段的质子峰(h)。
根据3.47-3.85ppm和4.20-4.31ppm处质子信号峰的积分面积比值通过公式(1)计算得到PEG-CTA的-OCH2CH2O-片段重复单元数为101。利用GPC对PEG-CTA的分子量与分子量分布进行表征，结果如图7曲线a所示，分子量(Mn)为5400g/mol，分子量分布(Mw/Mn)为1.02。
6、聚合诱导自组装
将34.89mg(0.05mmol)TPE-AZO-MA,43.16mg(0.01mmol)PEG4k-CTA,0.56mg(0.002mmol)ACVA和14.22mg BMA(15.89μL)加入安培瓶中，其摩尔比为[BMA]0/[TPE-AZO-MA]0/[PEG4k-CTA]0/[ACVA]0＝10:5:1:0.2。用751.92mg(727.37μL)1,4-二氧六环和83.55mg(83.55μL)H2O溶解，固含量为10％。反应物料混合均匀后，液氮冷冻-抽真空-通氮气重复3次去除体系中的氧气,于70℃油浴中反应。24h取样进行1H NMR分析。先用45mL石油醚和5mL乙醇混合溶剂沉降一次，然后用25mL石油醚和25mL冰乙醚混合溶剂沉降两次，接着过滤，真空干燥(30℃)，得橙红色固体。(产率：52％，Mn,GPC＝12200g/mol，Mw/Mn＝1.13)。附图6是PEG101-b-P(BMAy-co-TPE-AZO-MAx)的1H NMR谱图，其中疏水链段的重复单元个数(y,x)可通过下列公式(2)-(3)计算得到：
x＝(I4.65-5.30/2)/(I3.36-3.39/3) 公式(2)
y＝(I1.68-2.30/4)/(I3.36-3.39/3)-(I4.65-5.30/4)/(I3.36-3.39/3)-0.5 公式(3)
I4.65-5.30:谱图中4.65-5.30ppm处对应单体TPE-AZO-MA的重复单元苄基上Ar-CH2-O-片段的质子峰(l)；
I3.36-3.39:谱图中3.36-3.39ppm处对应聚乙二醇单甲醚上端基CH3O-片段的质子峰(α)；
I1.68-2.30:谱图中1.68-2.30ppm处对应PEG101-b-P(BMAy-co-TPE-AZO-MAx)中BMA重复单元-COO-CH2-，亲水链段-CH 2CH2COO-,-CS-S-CH2CH 2-,除与S相连的重复单元外的疏水主链的质子峰(f,x,β,k,e)。
根据特征信号峰1.68-2.30和3.36-3.39以及4.65-5.30ppm的积分面积通过公式(2)与公式(3)计算得出BMA重复单元的平均聚合度为9.8，TPE-AZO-MA重复单元的平均聚合度为4.6。PEG101-b-P(BMA9.8-co-TPE-AZO-MA4.6)的GPC曲线如图7曲线b所示，分子量(Mn)为11500g/mol，分子量分布(Mw/Mn)为1.21。其中亲疏水的聚合物链段分子量比约为9/10。
7、胶束溶液的制备及表征
取80μL反应液稀释至2mg/mL，取1.25mL此胶束溶液将其移入透析袋(MWCO 7000)中，用超纯水透析24h。透析结束后，用PBS溶液(pH＝7.4)将其定容至0.5mg/mL。
取15μL胶束溶液滴加在纯碳膜上，停留半分钟后，用滤纸吸干。后在其上滴加15μL浓度为1wt％的磷钨酸溶液，停留半分钟后，用滤纸吸干。待其干燥后通过透射电镜(TEM)进行测试。同时，通过动态光散射(DLS)对其尺寸进行表征，以佐证TEM测试的结果。
8、胶束溶液的还原相应与荧光的活化
模拟结肠环境，选用连二亚硫酸钠Na2S2O4作为还原剂模拟偶氮还原酶，对所得胶束的还原释放行为进行研究。首先，移取4.00mL的0.5mg/mL胶束溶液于比色皿中，向其中通氩气30分钟，加入28mg的Na2S2O4，将其置于37℃水浴中密闭搅拌。4.5h后反应完全，进行荧光测试，激发波长在360nm。
同时，通过TEM、DLS、UV-Vis对其还原前后的形貌、尺寸以及特征吸收峰变化进行表征。
通过观察UV-Vis紫外可见光谱(图8)，发现该胶束溶液在经过Na2S2O4处理后，位于420nm处归属于偶氮苯的特征吸收峰逐渐减弱，直至消失。可直接通过肉眼观察到其溶液状态的变化，该胶束溶液由刚开始的黄色澄清溶液逐步褪色至无色，且逐步有白色聚集体产生，后溶液又逐渐变得澄清。说明偶氮键被打断，即TPE-ANI基团分散到溶液中，发出荧光(图9)，剩下的聚合物链又重新自组装因此溶液逐渐变得澄清。
通过TEM和DLS对胶束的形貌和粒径变化进行了测定。图10和图11表明，由于偶氮键的断裂，球形胶束被解离，形成了不规则的聚集体，同时该胶束的平均粒径也变化极大，同时DLS图谱的变化也同样表明了这一结果。
实施例二
通过PISA制备偶氮还原酶响应的两亲性嵌段聚合物载药胶束，包括以下步骤：
1、通过聚合诱导自组装进行阿霉素(DOX)的包载
将34.89mg(0.05mmol)TPE-AZO-MA，43.16mg(0.01mmol)PEG4k-CTA，0.56mg(0.002mmol)ACVA和14.22mg BMA(15.89μL)(0.1mmol)以及4.64mg DOX加入安培瓶中，其反应物料摩尔比为[BMA]0/[TPE-AZO-MA]0/[PEG4k-CTA]0/[ACVA]0＝10:5:1:0.2。用747.75mg(723.33μL)1,4-二氧六环和83.08mg(83.08μL)H2O溶解，固含量为10％。反应物料混合均匀后。液氮冷冻-抽真空-通氮气重复3次去除体系中的氧气，于70℃油浴中反应。24h取样进行1H NMR分析。先用45mL石油醚和5mL乙醇混合溶剂沉降一次，然后用25mL石油醚和25mL冰乙醚混合溶剂沉降两次，接着过滤，真空干燥(30℃)，测核磁，测GPC。
图12是原位载药后两亲性嵌段聚合物PEG101-b-P(BMAy-co-TPE-AZO-MAx)在CDCl3中的核磁氢谱1H NMR图。其中疏水链段的重复单元个数(y,x)可采用下列公式(4)-(5)计算得到：
x＝(I4.65-5.30/2)/(I3.36-3.39/3) 公式(4)
y＝(I1.68-2.30/4)/(I3.36-3.39/3)-(I4.65-5.30/4)/(I3.36-3.39/3)-0.5 公式(5)
I4.65-5.30:谱图中4.65-5.30ppm处对应单体TPE-AZO-MA的重复单元苄基上Ar-CH2-O-片段的质子峰(l)；
I3.36-3.39:谱图中3.36-3.39ppm处对应聚乙二醇单甲醚上端基CH3O-片段的质子峰(α)；
I1.68-2.30:谱图中1.68-2.30ppm处对应PEG101-b-P(BMAy-co-TPE-AZO-MAx)中BMA重复单元-COO-CH2-，亲水链段-CH 2CH2COO-,-CS-S-CH2CH 2-,除与S相连的重复单元外的疏水主链的质子峰(f,x,β,k,e)。
根据特征信号峰1.68-2.30和3.36-3.39以及4.65-5.30ppm的积分面积通过公式(4)与公式(5)计算得出BMA重复单元的平均聚合度为9.7，TPE-AZO-MA重复单元的平均聚合度为4.7。原位载药后聚合物PEG101-b-P(BMA9.7-co-TPE-AZO-MA4.7)的GPC曲线如图13所示，其分子量(Mn)为12600g/mol，分子量分布(Mw/Mn)为1.18。其中亲疏水的聚合物链段分子量比约为8/9。所得结构与实施例一中通过PISA所制备的空白胶束PEG101-b-P(BMA9.8-co-TPE-AZO-MA4.6)结构差别很小。
2、包载阿霉素(DOX)胶束PBS溶液的制备
取80μL PISA的反应液稀释至2mg/mL，取1.25mL此胶束溶液将其移入透析袋(MWCO7000)中，用超纯水透析24h。透析结束后，用PBS溶液(pH＝7.4)将其定容至0.5mg/mL。
为了测定DOX的含量，将100μL包载DOX的胶束溶液经过冷冻干燥后加入3mL DMSO溶解，破坏胶束释放DOX。通过荧光光谱(Hitachi F-4600)在480nm激发波长下，测定590nm处的荧光发射强度。通过测定不同浓度DOX/DMSO溶液的DOX的荧光强度得到DOX浓度与荧光的标准曲线。根据标准曲线确定DOX从纳米粒子中释放到溶液中的含量。
载药量(DLC)和包封率(DLE)根据以下的公式得到：
载药量(wt％)＝(装载药物重量/胶束与装载药物总重量)×100％
包封率(％)＝(装载药物重量/药物总投入量)×100％
如图16a所示,PEG101-b-P(BMA9.7-co-TPE-AZO-MA4.7)聚合物载药胶束的形貌与两亲性聚合物PEG101-b-P(BMA9.8-co-TPE-AZO-MA4.6)组成的胶束一样，也是球形胶束，且粒径相近。根据上述载药量(DLC)和包封率(DLE)的公式，聚合物胶束溶液浓度是0.5mg/mL，其理论载药量为4.76wt％，实际载药量为0.82～0.94wt％，包封率17.83％。
3、在偶氮还原酶作用下，包载DOX胶束的药物释放及表征
首先，将包药胶束溶液在真空线上冷冻-换气-融化循环4次以除去氧气，在2.5mL反应管中分别加入0.6mL的除氧后的0.5mg/mL包药胶束溶液，以及0.20mg偶氮还原酶(DT-diaphorase,Human)和1.0mg辅酶(NADPH)，加入通氩气除氧后的PBS(PH 7.4)缓冲液稀释至2.5mL，密闭反应管。37℃恒温振荡器中避光振荡反应24h，室温避光静置三天。通过荧光光谱分别在360nm和480nm激发波长下测试荧光变化以查看酶解前后的荧光活化情况及药物释放效果。通过紫外吸收光谱测试酶解前后420nm左右偶氮苯特征吸收的强度变化，以观测偶氮苯的断裂情况。同时通过TEM及DLS表征还原前后胶束形貌、尺寸以及粒径分布的变化。
如图14和图18所示，在还原释放过程中，在检测DOX的药物释放情况的同时也对于TPE的荧光发射进行检测。随着模拟药物DOX的释放，来自于TPE特征发射峰的荧光强度逐渐增强，在24h时荧光强度达到最大值，24h药物释放基本达到最大值，释放量为58.5％。因而可以通过监测TPE基团特征发射峰的荧光强度变化来跟踪药物DOX的释放情况。
通过UV-Vis对还原前后胶束中偶氮苯的断裂情况进行表征，观察图15，可以发现酶解24h后在420nm处属于偶氮苯特征吸收峰吸收强度大幅度降低。表明PEG101-b-P(BMA9.7-co-TPE-AZO-MA4.7)聚合物胶束在偶氮还原酶作用下成功实现了偶氮苯的断裂。
通过TEM和DLS对包载DOX的胶束的形貌和粒径变化进行了测定。此载药胶束依旧呈球形结构，其尺寸相较上述空白胶束变化不大。观察图16可以发现，在经过偶氮还原酶作用后，球形胶束大幅减少，同时有较大尺寸的不规则聚集体产生。这是由于偶氮键断裂，球形胶束被解离的缘故。载药胶束酶解前与酶解24h后的动态粒径散射(DLS)图(图17)很好印证这一点。
4、细胞毒性实验
为了验证PEG-b-P(BMA-co-TPE-AZO-MA)胶束是否有毒性，采用噻唑蓝比色法(MTT)进行细胞毒性实验：将不同浓度的胶束溶液(0，50，100，150，200μg/mL)分别与正常细胞L929以及癌细胞Hela共存培养72h。
如图19所示，不同浓度的PEG-b-P(BMA-co-TPE-AZO-MA)聚合物胶束在两种细胞中均显示出较低的细胞毒性，细胞存活率都在90％以上，因此本发明的聚合物胶束具有良好的生物相容性。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种偶氮还原酶响应性单体，其特征在于，其结构式如式(I)所示：
Figure FDA0002281713510000011
2.一种权利要求1所述的偶氮还原酶响应性单体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将式(1)的化合物TPE-OH与N-乙基-N-羟乙基苯胺在三苯基膦和DIAD的作用下，在有机溶剂中于30～60℃下反应，反应完全后得到式(2)的化合物TPE-ANI；
(2)在惰性气氛保护下，将TPE-ANI与对氨基苯甲醇重氮盐在pH＝5～6条件下，在有机溶剂中于0～5℃下反应，反应完全后调节反应液pH至6.5-7.5，得到式(3)的化合物TPE-ANI-AZO；
(3)在惰性气氛保护下，将TPE-ANI-AZO与甲基丙烯酰氯在有机胺和DMAP的作用下，在有机溶剂中于20～25℃下反应，反应完全后得到式(I)的化合物TPE-AZO-MA；其中，式(1)-(3)的结构式依次如下：
Figure FDA0002281713510000012
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述TPE-OH、N-乙基-N-羟乙基苯胺、三苯基膦和DIAD的摩尔比为1:2:3:(2～4)。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述对氨基苯甲醇重氮盐的制备方法包括以下步骤：
将对氨基苯甲醇和亚硝酸盐在酸性水溶液中于0～5℃下反应，反应完全后得到所述对氨基苯甲醇重氮盐。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述TPE-ANI-AZO、三乙胺、DMAP和甲基丙烯酰氯的摩尔比为1:(1～3):0.07:2.24。
6.一种通过PISA法制备偶氮还原酶响应性聚合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
在惰性气氛保护下，将权利要求1所述的偶氮还原酶响应性单体、式(4)的化合物PEG-CTA和甲基丙烯酸丁酯在引发剂的作用下，在有机溶剂和水的混合溶液中于68～72℃下反应，反应完全后，得到式(II)所示的偶氮还原酶响应性聚合物，其中，式(4)和式(II)的结构式依次如下：
其中，57≤m≤235，2≤x≤11，5≤y≤24；式(II)中的TPE代表四苯乙烯基。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述PEG-CTA的制备方法包括以下步骤：
在惰性气氛保护下，将聚乙二醇单甲醚和4-氰基-4-[[(十二烷硫基)硫酮甲基]硫基]戊酸在DMAP的作用下，在有机溶剂中于-5～0℃下反应，反应完全后得到所述PEG-CTA；所述聚乙二醇单甲醚的数均分子量为2500～15000g/mol。
8.一种权利要求6或7所述的制备方法所制备的式(II)所示的偶氮还原酶响应性聚合物。
9.权利要求8所述的偶氮还原酶响应性聚合物在制备偶氮还原酶响应的AIE型荧光探针中的应用。
10.权利要求8所述的偶氮还原酶响应性聚合物在制备偶氮还原酶响应的药物载体或生物成像制剂中的应用。
CN201911144146.2A 2019-11-20 2019-11-20 通过pisa法制备偶氮还原酶响应性聚合物荧光探针及其应用 Active CN110776440B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911144146.2A CN110776440B (zh) 2019-11-20 2019-11-20 通过pisa法制备偶氮还原酶响应性聚合物荧光探针及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911144146.2A CN110776440B (zh) 2019-11-20 2019-11-20 通过pisa法制备偶氮还原酶响应性聚合物荧光探针及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110776440A true CN110776440A (zh) 2020-02-11
CN110776440B CN110776440B (zh) 2022-07-19

Family

ID=69391959

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911144146.2A Active CN110776440B (zh) 2019-11-20 2019-11-20 通过pisa法制备偶氮还原酶响应性聚合物荧光探针及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110776440B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111690032A (zh) * 2020-05-28 2020-09-22 华南理工大学 一种aie分子标记的生物表面活性剂及其载药胶束制备方法与应用
CN113121488A (zh) * 2021-04-21 2021-07-16 云南大学 一种基于香豆素衍生物检测偶氮还原酶的荧光探针分子及其制备方法和应用
CN113788964A (zh) * 2021-09-06 2021-12-14 北京化工大学 一类耐迁移荧光有机硅弹性体的制备方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101555216A (zh) * 2009-05-18 2009-10-14 华东师范大学 含偶氮类电光生色团的螺旋聚乙炔单体及其制备方法
CN107823184A (zh) * 2017-11-14 2018-03-23 中国医学科学院生物医学工程研究所 氧化还原敏感诱导pH响应纳米药物载体的制备方法与应用
CN108752594A (zh) * 2018-05-03 2018-11-06 苏州大学张家港工业技术研究院 基于偶氮还原酶响应的两亲性嵌段聚合物及其制备方法与应用
CN110128665A (zh) * 2019-05-13 2019-08-16 苏州大学 基于偶氮还原酶响应的两亲性嵌段聚合物近红外荧光探针及应用
CN110372829A (zh) * 2019-07-19 2019-10-25 苏州大学 基于偶氮还原响应的聚合物凝胶荧光探针的制备及应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101555216A (zh) * 2009-05-18 2009-10-14 华东师范大学 含偶氮类电光生色团的螺旋聚乙炔单体及其制备方法
CN107823184A (zh) * 2017-11-14 2018-03-23 中国医学科学院生物医学工程研究所 氧化还原敏感诱导pH响应纳米药物载体的制备方法与应用
CN108752594A (zh) * 2018-05-03 2018-11-06 苏州大学张家港工业技术研究院 基于偶氮还原酶响应的两亲性嵌段聚合物及其制备方法与应用
CN110128665A (zh) * 2019-05-13 2019-08-16 苏州大学 基于偶氮还原酶响应的两亲性嵌段聚合物近红外荧光探针及应用
CN110372829A (zh) * 2019-07-19 2019-10-25 苏州大学 基于偶氮还原响应的聚合物凝胶荧光探针的制备及应用

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111690032A (zh) * 2020-05-28 2020-09-22 华南理工大学 一种aie分子标记的生物表面活性剂及其载药胶束制备方法与应用
CN111690032B (zh) * 2020-05-28 2022-01-18 华南理工大学 一种aie分子标记的生物表面活性剂及其载药胶束制备方法与应用
CN113121488A (zh) * 2021-04-21 2021-07-16 云南大学 一种基于香豆素衍生物检测偶氮还原酶的荧光探针分子及其制备方法和应用
CN113121488B (zh) * 2021-04-21 2022-05-17 云南大学 一种基于香豆素衍生物的检测偶氮还原酶的荧光探针分子及其制备方法和应用
CN113788964A (zh) * 2021-09-06 2021-12-14 北京化工大学 一类耐迁移荧光有机硅弹性体的制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN110776440B (zh) 2022-07-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110776440B (zh) 通过pisa法制备偶氮还原酶响应性聚合物荧光探针及其应用
CN110128665B (zh) 基于偶氮还原酶响应的两亲性嵌段聚合物近红外荧光探针及应用
CN101260219B (zh) 一种用于实现可逆荧光调控的三嵌段共聚物胶束体系的制备方法
CN108752594B (zh) 基于偶氮还原酶响应的两亲性嵌段聚合物及其制备方法与应用
Zhou et al. Azoreductase-triggered fluorescent nanoprobe synthesized by RAFT-mediated polymerization-induced self-assembly for drug release
CN110194822B (zh) 一种基于单臂TPE分子的温敏型双荧光Pdots的制备及应用
CN110372829B (zh) 基于偶氮还原响应的聚合物凝胶荧光探针的制备及应用
Yuan et al. Novel fluorescent amphiphilic copolymer probes containing azo-tetraphenylethylene bridges for azoreductase-triggered release
CN110041475B (zh) 一种两亲性嵌段共聚物、其壳交联胶束及制备方法和应用
CN106362162B (zh) ZnO@PMAA-b-PHPMA量子点纳米材料及其制备和作为药物载体的应用
CN106749951A (zh) 具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物及其合成和作为药物载体的应用
Jiang et al. Fabrication of multifunctional fluorescent organic nanoparticles with AIE feature through photo-initiated RAFT polymerization
CN110664751A (zh) 一种pH响应性聚合物纳米胶束及其制备和应用
CN101838344B (zh) 具有荧光标记性质的壳聚糖纳米粒子及其制备方法
Li et al. Water-soluble chitosan-g-PMAm (PMAA)-Bodipy probes prepared by RAFT methods for the detection of Fe3+ ion
Guo et al. Rapid synthesis of amphiphilic europium complexes via ultrasonic treatment-assisted crosslinking reaction
Tian et al. The combination of controlled living polymerization and multicomponent reactions to prepare tetraphenylethylene-containing fluorescent block copolymers
CN110483709B (zh) 基于多重氢键相互作用的响应性交联聚合物胶束及其制备方法和应用
CN115671297A (zh) 一种具有pH敏感和活性氧敏感的智能药物载体及其制备方法和应用
Chen et al. A novel AIE-active dye for fluorescent nanoparticles by one-pot combination of Hantzsch reaction and RAFT polymerization: synthesis, molecular structure and application in cell imaging
CN114621159B (zh) 基于苯并噻二唑的荧光材料、荧光聚合物、荧光纳米粒子以及制备方法和应用
CN111675778B (zh) 基于pisa方法制备的偶氮还原酶响应性的近红外聚合物荧光探针及其应用
CN103254371A (zh) 一种有近红外荧光特性的两亲性嵌段聚合物的合成方法
Cui et al. A water-soluble polymer fluorescent probe via RAFT polymerization for dynamic monitoring of cellular lipid droplet levels and zebrafish imaging
CN110105508A (zh) 一种水性光响应纳米凝胶的制备方法、制得的纳米凝胶及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant