CN106749951A - 具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物及其合成和作为药物载体的应用 - Google Patents

具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物及其合成和作为药物载体的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物，是由含二硫键的疏水性聚己内酯以及亲水性聚羧酸甜菜碱甲基丙烯酸酯形成的两亲性聚合物，该两亲性聚合物在水中自组装形成核壳结构的胶束载体，通过物理包埋作用将抗癌药物载入纳米胶束的疏水内核，提高药物溶解度，延长循环时间，血管渗透性增强效应，并在高还原的环境下二硫键发生断裂，使得胶束结构被破坏，从而释放出阿霉素，进一步杀死癌细胞；羧酸甜菜碱酯甲基丙烯酸酯单体使共聚物体现出良好的生物相容性，进一步降低了抗癌药物的毒性，减少对正常组织的伤害。体外模拟释放实验表明，该两性离子聚合物胶束作为药物载体具有很好的释放效果，是一种具有应用前景的抗肿瘤活性物质。

Description

具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物及其合成和作为 药物载体的应用
技术领域
本发明涉及一种具有抗肿瘤活性的两性离子聚合物，尤其涉及一种具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物；本发明还涉及该两性离子聚合物的制备方法和作为药物载体在制备抗肿瘤药中的应用，属于纳米材料制备和生物医学领域。
背景技术
纳米载体已经被广泛应用于治疗癌症，所有的纳米药物载体的表面都需要一层亲水层作为物理屏障来抵御载体在到达肿瘤组织前和其它组织以及血液中各种组成的相互作用，特别是与血液中的蛋白的相互作用，这也就是需要抗蛋白非特性吸附的材料来对纳米药物载体的表面进行修饰。
抗非特异性蛋白质吸附(nonfouling)材料是指一大类能够通过形成表面物理和能量屏障，有效抵抗蛋白质分子不可逆物理吸附的材料。其中非离子型亲水聚合物中PEG最为常用，常修饰在药物载体表面增加载体的血液循环时间。然而研究发现PEG在使用过程中存在缺陷。两性离子聚合物是一类在溶液中既具有路易斯碱又有路易斯酸性质的聚合物，该类聚合物不仅具有水化性能强、抗细菌黏附能力显著、可电荷翻转及易化学修饰等优异性能，而且在体内应用过程中具有长循环和抗非特异性蛋白吸附的特点。因此，两性离子聚合物可作为潜在的生物医学诊断敏感材料、纳米药物载体、水凝胶控制释放体系或基因载体在肿瘤治疗中得到应用。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物；
本发明的另一目的是提供一种上述具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物的合成方法；
本发明还有一个目的，就是提供一种上述具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物作为抗肿瘤药物载体的应用。
一、具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物
本发明的两性离子聚合物是由含二硫键的疏水性聚己内酯以及亲水性聚羧酸甜菜碱甲基丙烯酸酯通过一定的方式形成共聚物的两亲性嵌段聚合物，具有特殊的球型结构，以含二硫键的聚己内酯为主链，侧链链接大量的聚羧酸甜菜碱甲基丙烯酸酯；标记为PCB-SS-PCL。其结构式如下：
由于上述嵌段共聚物中存在二硫键，使得其负载药物到达肿瘤部位之后释放出抗肿瘤药物，不仅降低了药物毒性，还能在肿瘤细胞内智能释放抗癌药物；高分子载体羧酸甜菜碱甲基丙烯酸酯的存在，使聚合物体现出良好的生物相容性，从而减少了对正常组织的伤害，所以在制备抗肿瘤药物方面具有很好的应用前景。
（二）具有还原响应性抗肿瘤活性的两性离子聚合物的制备
本发明具有还原响应性抗肿瘤活性的两性离子聚合物的制备，是含二硫键的大分子RAFT试剂通过RAFT聚合将亲水单体CBB-tBu聚合后，用三氟乙酸除去叔丁酯而得。由以下工艺步骤完成。
（1）亲水单体CBB-tBu的制备：以丙酮为溶剂，氮气保护下，使甲基丙烯酸二甲氨乙酯与溴乙酸叔丁酯，于-5~0℃（冰浴）反应6~8h，过滤，无水丙酮洗涤，25℃真空干燥24h，得到白色固体，即为亲水单体化合物，记为化合物；其结构式为：
甲基丙烯酸二甲氨乙酯与溴乙酸叔丁酯的摩尔比为1:1.5~1:2.0。
（2）中间化合物的制备：二氯甲烷为溶剂，N,N-二环己基碳二亚胺为交联剂，4-二甲氨基吡啶为催化剂，使RAFT试剂与双(2-羟基乙基)二硫醚于室温反应20~24小时；过滤除去生成的盐，减压蒸馏除溶剂后，用乙酸乙酯与石油醚的混合溶剂进行柱色谱分离，得到黄色固体即为中间体化合物，记为化合物；其结构式为：
RAFT试剂为2-(十二烷基三硫代碳酸酯基)-2-甲基丙酸，其结构式为：
RAFT试剂与双（2-羟基乙基）二硫醚的摩尔比为1:1.9~1:2.0；
双（2-羟基乙基）二硫醚的用量为RAFT试剂总摩尔量的2~2.5倍;
脱水剂N,N-二环己基碳二亚胺的用量为催化剂4-二甲氨基吡啶总摩尔量的2~2.5倍。
乙酸乙酯与石油醚的混合溶剂中，乙酸乙酯与石油醚的体积比为1:6~1:8。
（3）大分子链转移剂（RAFT试剂）的制备：以甲苯为溶剂，锌酸亚锡为催化剂，在氮气保护下，使中间体化合物 与ε-己内酯于100~110℃聚合23~24 h，反应结束后加入二氯甲烷稀释，在搅拌下用冷甲醇中沉淀，洗涤，干燥，得到淡黄色固体即为大分子RAFT试剂，记为化合物；其结构式为：
中间体化合物 与ε-己内酯的摩尔比为1:40~1:60；化合物 与催化剂锌酸亚锡的摩尔比为20:1~25:1。
（4）目标化合物的制备：在氮气保护下，以DMF为溶剂，偶氮二异丁腈为引发剂，使得大分子RAFT试剂（化合物）与亲水单体CBB-tBu（），于60~70℃反应23~24h；乙醚沉淀，得到白色固体溶于二氯甲烷后，并滴加三氟乙酸水解1~2h；再用乙醚沉淀，得到白色固体即为目标化合物，记为化合物；
亲水单体CBB-tBu（化合物）与大分子RAFT试剂（化合物）的摩尔比为14:1~22:1；引发剂偶氮二异丁腈的用量为化合物与化合物总摩尔量的5%~20%。
化合物的结构式如下：
式中，m=40~60，n=14~22；数均分子量Mn=0.89×104~1.28×104。
图1为上述步骤（1）制备的亲水单体CBB-tBu的核磁共振氢谱。通过核磁共振氢谱分析可以得出，化学位移在6.15 ppm和5.80 ppm为甲基丙烯酸酯双键上氢的出峰，3.41ppm处为季氨盐上氢的特征出峰，4.47ppm为介于N和C=O之间的亚甲基上氢的出峰，1.3ppm处分别为羧酸甜菜碱酯末端酯键上中氢的出峰。核磁共振氢谱表明成功合成了可水解型羧酸甜菜碱酯甲基丙烯酸酯单体CBB-tBu。
图2为上述步骤（3）制备的P(CB-tBu)-S-S-PCL的核磁共振氢谱；通过核磁共振氢谱分析可以得出，化学位移在1.36 ppm，1.62 ppm，2.28 ppm，4.04 ppm，为聚己内酯CH2的特征峰，化学位移在4.12~4.92 ppm和3.73 ppm左右会出现CBB上的特征峰-CH2-和-CH3，化学位移在1.48 ppm出现CBB上的特征峰-(CH3)3,说明P(CB-tBu)-S-S-PCL成功合成。
图3为上述制备的还原响应性抗肿瘤活性的两亲性聚合物的核磁共振氢谱。通过核磁共振氢谱分析可以得出，化学位移在1.36 ppm，1.62 ppm，2.28 ppm，4.04 ppm，为聚己内酯CH2的特征峰，化学位移在4.12~4.92 ppm和3.73 ppm左右会出现CBB上的特征峰-CH2-和-CH3，与图2对比化学位移在1.48 ppm处的特征峰消失，说明制备的聚合物产物与设计的聚合物结构一致，表明成功合成了该两性离子聚合物。
二、还原响应实验
1、胶束的制备以及表征
（1）载药聚合物胶束的制备
将上述两亲性聚合物和阿霉素溶解于N,N′-二甲基甲酰胺中，搅拌2~3小时，然后在室温缓慢滴加到快速搅拌的去离子水中，继续搅拌10~12小时；然后装入透析袋（MWCO=3000），置于去离子水中透析20~24小时，得到载药胶束溶液。两亲性聚合物和阿霉素质量比为2.5:1~3.0:1；两亲性聚合物与去离子的质量体积比为0.8~1.2mg/mL。
（2）胶束的表征
首先，用荧光探针技术测定临界胶束浓度CMC，当胶束浓度高于CMC时，溶液中开始形成胶束，疏水性芘荧光探针就会进入胶束疏水内核而且分散于其中，此时荧光光谱就会发生突变，通过这个突变点就可以确定CMC值为0.62 mg/L（聚合物）符合变化范围。此外，用纳米粒径仪对上述制备的聚合物载药胶束的粒径及粒径分布进行检测，粒径大约108 nm左右（见图4）；采用透射电镜TEM（见图5）观察了胶束的形貌为纳米球。
2、体外模拟的水解、释放实验
阿霉素是一种抗肿瘤抗生素，可抑制RNA 和DNA的合成，对RNA的抑制作用最强，抗瘤谱较广，对多种肿瘤均有作用，属周期非特异性药物，对各种生长周期的肿瘤细胞都有杀灭作用，主要适用于急性白血病，对急性淋巴细胞白血病及粒细胞白血病均有效。本实验选用了阿霉素作为抗肿瘤药物。
为了研究该聚合物胶束的还原响应性，采用动态光散射仪（DLS）测定聚合物胶束在不同介质中胶束粒径大小变化。在pH 7.4的缓冲溶液中，粒径大小变化不明显，大约为100nm，与透射电镜（TEM）测得的粒径一致，而pH 7.4 10 mmol DTT 的作用下，粒径逐渐增大并有一些小分子出现（见图6），证明该聚合物胶束的结构发生改变。
通过紫外分光光度计测定阿霉素在480 nm处的吸光强度计算载药胶束的药物释放率。取两份5 mL载药聚合物胶束，分别置于100 mL的pH 7.4（100 mM） 与含有10 mmolDTT的 pH 7.4（100 mM）的缓冲溶液中，透析48小时，按照一定的时间间隔取样，测紫外吸收，并与聚合物中包载的阿霉素进行比较，最终释放率分别为19.5% 和 80.1%（见图7），说明了在10 mmolDTT的还原环境下会更好的释放出阿霉素。
综上所述，本发明的两性离子聚合物可在水中自组装球型结构的胶束载体，并在高还原的环境下二硫键发生断裂，使得胶束结构被破坏，从而释放出阿霉素（DOX），进一步杀死癌细胞；羧酸甜菜碱酯甲基丙烯酸酯单体使共聚物体现出良好的生物相容性，进一步降低了抗癌药物的毒性，减少对正常组织的伤害。体外模拟释放实验表明，该两性离子聚合物胶束作为药物载体具有很好的释放效果，是一种具有应用前景的抗肿瘤活性物质。
附图说明
图1为本发明制备的羧酸甜菜碱酯甲基丙烯酸酯单体的核磁共振氢谱。
图2为本发明制备的具有还原响应性抗肿瘤活性的P(CB-tBu)-S-S-PCL的核磁共振氢谱。
图3为本发明制备的具有还原响应性抗肿瘤活性的两性离子聚合物PCB-S-S-PCL的核磁共振氢谱。
图4为本发明胶束载体的粒径分布图。
图5为本发明胶束载体的的透射电镜图。
图6为本发明载药胶束在pH=7.4和pH=7.4、10 mmol DTT时随透析时间的粒径变化图（从左到右与依次为pH=7.4、0h，pH=7.4、72h，pH=7.4DTT、3h，5h，8h，12h，24h，48h）。
图7为本发明载药胶束在pH=7.4和pH=7.4，10 mmol DTT时阿霉素释放的体外模拟曲线。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明两亲性共聚物的合成及结构表征作进一步的说明。
实施例1
（1）亲水单体CBB-tBu的制备：称取1.57（10 mmol）甲基丙烯酸二甲氨乙酯溶于10mL丙酮中，在氮气保护下，在冰浴下用恒压漏斗缓慢的滴入含2.93（15 mmol）溴乙酸叔丁酯的5mL丙酮溶液，反应6小时，随后将反应后的滤液过滤，并用无水丙酮洗涤数次，在25℃真空干燥24小时得到白色固体即为亲水单体CBB-tBu，标记为化合物，产率为92.5%。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ6.13(s,1H,=CHH),5.67(s,1H,=CHH),1.95(s,3H,-CH 3),4.74(t,2H,-OCH 2CH2-),4.38(t,2H-OCH2CH 2-),3.73(s,6H,-N(CH 3)2),4.63(s,2H,-CH 2-OOC),1.48(s,9H,-(CH 3)3)。
（2）中间体化合物的制备：将0.42 g（2.7 mmol）双(2-羟基乙基)二硫醚、0.5 g（1.35 mmol） RAFT试剂（2-(十二烷基三硫代碳酸酯基)-2-甲基丙酸、0.33g（2.7 mmol）4-二甲氨基吡啶，溶解在盛有二氯甲烷的圆底烧瓶中并置于冰水浴；再向圆底烧瓶中加入0.28 g（1.35 mmol）N,N-二环己基碳二亚胺，将圆底烧瓶置于室温反应24 h，反应液过滤除去生成的盐，减压蒸馏除溶剂，过硅胶柱层析（洗脱液为石油醚油醚与乙酸乙酯的混合溶剂，且石油醚:乙酸乙酯=6:1v/v），分离提纯得0.36g中间体化合物，记为化合物 ，产率为52.9%。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 0.837(t,3H,CH 3 (CH2)10CH2-S-(C=S)-S-),1.212(m,20H,
CH3(CH 2 )10CH2-S-(C=S)-S-),1.656( s, 6H, -CS(CH 3 )2), 2.878 (t, 2H, CH3(CH2)10CH 2 -S-(C=
S)-S-),4.341(t,2H,-(C=O)OCH 2 CH2-),2.837(t,2H,-(C=O)OCH2CH 2 -),3.229(t,2H,-S-S-CH 2 CH2-OH),3.844(t,2H,-S-S-CH2 CH 2 -OH)。
（3）大分子链转移剂RAFT试剂的制备：在氮气保护下，依次将0.5g化合物 （1mmol）、0.002g（0.05 mmol）辛酸亚锡、4.56 g（40 mmol）ε-己内酯溶解于10 mL甲苯中，110℃聚合24 h，反应结束后加入10 mL二氯甲烷稀释，然后在剧烈搅拌下滴加到 200 mL 冷甲醇中沉淀，并用 200 mL 冷甲醇洗涤数次，过滤，干燥，得到白色固体4.42g，即为化合物 ，产率87%。
1H NMR (600 MHz, CDCl3) (ppm):δ0.859(t,CH 3 (CH2)10CH2-S-(C=S)-S-),1.237(m, 20H, CH3(CH 2 )10CH2-S-(C=S)-S-),4.346(t,2H,-(C=O)OCH 2 CH2-),2.908(t,2H,-COOCH2CH 2 -),3.251(t,2H,-S-S-CH 2 CH2-OH),4.309(t,2H,-S-S-CH2 CH 2 -OH)1.365(-OCH2CH2 CH 2 CH2CH2COO-),1.623(-OCH2 CH 2 CH2CH2CH2COO-),2.286(-OCH2CH2CH2CH2 CH 2 COO-),4.041(-OCH 2 CH2CH2CH2CH2COO-)。
（4）目标化合物的制备：称取0.2g（0.04 mmol）化合物 、0.15g（0.56 mmol）化合物，加入到 Shlenck 瓶中，加入2 mL DMF加热搅拌溶解，待冷却至室温时加入0.025g（0.15 mmol）偶氮二异丁腈，抽真空充氮气循环3 次，密封后60℃反应24 h，用乙醚沉淀得到白色粉末固体。将白色固体溶于5mL二氯甲烷，向其中缓慢滴入三氟乙酸水解2h，用乙醚沉淀3次，得到目标化合物——具有还原响应性抗肿瘤活性的两性离子聚合物，标记为化合物。产率为74.5%。
1H NMR (600 MHz, CDCl3)(ppm):δ4.309(t,2H,-S-S-CH2 CH 2 -OH)，1.365(-OCH2CH2 CH 2 CH2CH2COO-),1.623(-OCH2 CH 2 CH2CH2CH2COO-),2.286(-OCH2CH2CH2CH2 CH 2 COO-),4.041(-OCH 2 CH2CH2CH2CH2COO-),3.73(s,6H,-N(CH 3)2),4.12~4.92（-CH 2- of CBB）。
该两性离子聚合物的结构中，m=40，n=14，数均分子量Mn=0.83×104。
实施例2
（1）化合物，化合物 ，化合物 的制备，同实施例1；
（2）化合物的制备：称取0.2g化合物 (0.2g,0.04mmol)，0.18g（0.65mmol）化合物，加入到 Shlenck 瓶中，加入2 mL DMF加热搅拌溶解，待冷却至室温时加入0.025g（0.15mmol）偶氮二异丁腈，抽真空充氮气循环3 次，密封后60℃反应24 h，用乙醚沉淀得到白色粉末固体。将上述白色固体溶于5mL二氯甲烷，向其中缓慢滴入三氟乙酸水解2h，用乙醚沉淀3次得到化合物。产率为76.8%。
1H NMR (600 MHz, CDCl3)(ppm):δ4.309(t,2H,-S-S-CH2 CH 2 -OH)，1.365(-OCH2CH2 CH 2 CH2CH2COO-),1.623(-OCH2 CH 2 CH2CH2CH2COO-),2.286(-OCH2CH2CH2CH2 CH 2 COO-),4.041(-OCH 2 CH2CH2CH2CH2COO-),3.73(s,6H,-N(CH 3)2),4.12~4.92（-CH2- of CBB）。
该两性离子聚合物的结构中，m=40，n=17，数均分子量Mn=0.92×104。
实施例3
（1）化合物，化合物 的制备，同实施例2；
（2）化合物 的制备：在氮气保护下，依次将0.5g（1 mmol）化合物 、0.002g（0.05mmol）辛酸亚锡、6.8 g（60 mmol） ε-己内酯，溶解于10 mL甲苯中，110℃聚合24 h，反应结束后加入10 mL二氯甲烷稀释，然后在剧烈搅拌下滴加到 200 mL 冷甲醇中沉淀，并用 200mL 冷甲醇洗涤数次，过滤，干燥，得到6.5g白色固体即为化合物 ，产率为89%。
1H NMR (600 MHz, CDCl3) (ppm):δ0.859(t,CH 3 (CH2)10CH2-S-(C=S)-S-),1.237(m, 20H,
CH3(CH 2 )10CH2-S-(C=S)-S-),4.346(t,2H,-(C=O)OCH 2 CH2-),2.908(t,2H,-COOCH2CH 2 -),3.251(t,2H,-S-S-CH 2 CH2-OH),4.309(t,2H,-S-S-CH2 CH 2 -OH)1.365(-OCH2CH2 CH 2 CH2CH2COO-),1.623(-OCH2 CH 2 CH2CH2CH2COO-),2.286(-OCH2CH2CH2CH2 CH 2 COO-),4.041(-OCH 2 CH2CH2CH2CH2COO-)。
（3）化合物的制备：称取0.2g化合物 (0.03 mmol)，0.15 g（0.54 mmol）化合物，加入到 Shlenck 瓶中，加入2 mL DMF加热搅拌溶解，待冷却至室温时加入0.025g（0.15mmol）偶氮二异丁腈，抽真空充氮气循环3 次，密封后60°C反应24 h，用乙醚沉淀得到白色粉末固体。将白色固体溶于5mL二氯甲烷，向其中缓慢滴入三氟乙酸水解2h，用乙醚沉淀3次，得到化合物。产率为74.2%。
1H NMR (600 MHz, CDCl3)(ppm):δ4.309(t,2H,-S-S-CH2 CH 2 -OH)，1.365(-OCH2CH2 CH 2 CH2CH2COO-),1.623(-OCH2 CH 2 CH2CH2CH2COO-),2.286(-OCH2CH2CH2CH2 CH 2 COO-),4.041(-OCH 2 CH2CH2CH2CH2COO-),3.73(s,6H,-N(CH 3)2)。
该两性离子聚合物的结构中，m=60，n=18，数均分子量Mn=1.17×104。
实施例4
（1）化合物，化合物 ，化合物 的制备，同实施例3；
（2）化合物的制备：称取0.2g ( 0.03 mmol)化合物 ，0.18 g(0.66)化合物，加入到 Shlenck 瓶中，加入2 mL DMF加热搅拌溶解，待冷却至室温时加入0.025g（0.15 mmol）偶氮二异丁腈，抽真空充氮气循环3 次，密封后60℃反应24 h，用乙醚沉淀得到白色粉末固体。将白色固体溶于5mL二氯甲烷，向其中缓慢滴入三氟乙酸水解2h，用乙醚沉淀3次，得到化合物。产率为73.4%。
1H NMR (600 MHz, CDCl3)(ppm):δ4.309(t,2H,-S-S-CH2 CH 2 -OH)，1.365(-OCH2CH2 CH 2 CH2CH2COO-),1.623(-OCH2 CH 2 CH2CH2CH2COO-),2.286(-OCH2CH2CH2CH2 CH 2 COO-),4.041(-OCH 2 CH2CH2CH2CH2COO-),3.73(-N(CH 3)2)，4.12~4.92（-CH2- of CBB）
该两性离子聚合物的结构中，m=60，n=22，数均分子量Mn=1.28×104。

Claims (10)

1.具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物，其结构式为：
式中，m=40~60，n=14~22；数均分子量Mn=0.89×104~1.28×104。
2.如权利要求1所述具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物的制备方法，包括以下工艺步骤：
（1）亲水单体CBB-tBu的制备：丙酮为溶剂，氮气保护下，使甲基丙烯酸二甲氨乙酯与溴乙酸叔丁酯于-5~0℃反应6~8 h，过滤，无水丙酮洗涤，真空干燥，得到的白色固体即为亲水单体化合物，记为化合物；
（2）中间化合物的制备：二氯甲烷为溶剂，N,N-二环己基碳二亚胺为脱水剂，4-二甲氨基吡啶为催化剂，使RAFT试剂与双(2-羟基乙基)二硫醚于室温反应20~24小时；过滤除去生成的盐，减压蒸馏除溶剂后，用乙酸乙酯与石油醚的混合溶剂进行柱色谱分离，得到黄色固体即为中间体化合物，记为化合物；
（3）大分子RAFT试剂的制备：以甲苯为溶剂，锌酸亚锡为催化剂，在氮气保护下，使中间体化合物与ε-己内酯于100~110℃聚合23~24 h，反应结束后用二氯甲烷稀释，在搅拌下用冷甲醇沉淀，洗涤，干燥，得到淡黄色固体即为大分子RAFT试剂，记为化合物；
（4）目标化合物的制备：在氮气保护下，以DMF为溶剂，偶氮二异丁腈为引发剂，使得大分子RAFT试剂与亲水单体CBB-tBu于60~70℃反应23~24h；乙醚沉淀，得到白色固体溶于二氯甲烷后，并滴加三氟乙酸水解1~2h；再用乙醚沉淀，得到白色固体即为目标化合物，记为化合物。
3.如权利要求2所述具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，甲基丙烯酸二甲氨乙酯与溴乙酸叔丁酯的摩尔比为1:1.5~1:2.0。
4.如权利要求2所述具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，RAFT试剂为2-(十二烷基三硫代碳酸酯基)-2-甲基丙酸，RAFT试剂与双（2-羟基乙基）二硫醚的摩尔比为1:1.9~1:2.0。
5.如权利要求2所述具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，双（2-羟基乙基）二硫醚的用量为RAFT试剂总摩尔量的2~2.5倍。
6.如权利要求2所述具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，脱水剂N,N-二环己基碳二亚胺的用量为催化剂4-二甲氨基吡啶总摩尔量的2~2.5倍。
7.如权利要求2所述具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，中间体化合物与ε-己内酯的摩尔比为1:40~1:60；化合物 与催化剂锌酸亚锡的摩尔比为20:1~25:1。
8.如权利要求2所述具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，亲水单体CBB-tBu与大分子RAFT试剂的摩尔比为14:1~22:1。
9.如权利要求2所述具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，引发剂偶氮二异丁腈的用量为化合物与化合物总摩尔量的5%~20%。
10.如权利要求1所述具有还原响应抗肿瘤活性的两性离子聚合物作为抗肿瘤药物载体的应用。
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