CN110769848A - C1-酯酶抑制剂制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及稳定的C1‑酯酶抑制剂(C1‑Inh)制剂，其是液体或冻干的，其特征在于组氨酸含量为5‑400mM，但不含柠檬酸盐或磷酸盐。它还涉及包含C1‑Inh制剂的试剂盒。

Description

C1-酯酶抑制剂制剂
发明技术领域
本发明涉及高纯度C1-Inh制剂配方以及从含C1-Inh的原料获得高纯度C1-酯酶抑制剂(C1-Inh或C1I)的纯化方法。
发明背景
C1-酯酶抑制剂是一种单链糖蛋白，具有478个氨基酸残基，通过SDS电泳测得的单分子表观分子量约为106kDa。它主要在肝脏中产生，并以大约0.14-0.38mg/ml的浓度存在于正常的人血浆中，相当于1单位/ml血浆[Production of Plasma Proteins forTherapeutic Use,First Edition,241-258，由Joseph Bertolini、Neil Goss和JohnCurling编辑，2013John Wiley&Sons]。
已知C1-Inh的定性或定量缺陷是遗传性或先天性血管性水肿(HAE)的根本原因，这是一种遗传性罕见疾病，表现为真皮、皮下组织、粘膜和粘膜下组织的肿胀。血管性水肿是一种潜在的威胁生命的疾病，因为可能会发生气管或导管阻塞，最终可能会导致窒息。
一种可能的治疗途径是在急性发作期间或作为终生预防性治疗采用功能性C1-酯酶抑制剂替代功能障碍或缺失的蛋白质。在这两种情况下，都建议使用尽可能高纯度的C1-Inh浓缩物，以免产生不良作用，例如出现抗C1-Inh的抗体。因此，所选产品应实际上不含任何其他蛋白质以及C1-Inh聚集体或者降解的或功能异常的C1-Inh，以特别促进终生预防性治疗，而不会产生抗体或发展出其他不良事件。在急性发作气管阻塞的情况下，医学上建议尽早使用C1-Inh制剂以避免可能的窒息。
可以通过静脉内或皮下注射血浆或重组来源的C1-Inh制剂的替代疗法来治疗上述缺陷症。然而，该种治疗的问题在于存在将病原体(例如病毒)引入患者体内并因此引起其他疾病的风险。因此，建议仅使用C1-Inh组合物来恢复生理水平的C1-Inh，其在制造过程中包括减活和灭活步骤使组合物经历病原体减活步骤。
尽管已知了高纯度和低聚集体含量的C1-Inh浓缩物，但是这些制剂以液体形式时尤其不稳定。因此，已知稳定的C1-Inh制剂仅有冻干产品，其缺点是在用于治疗影响气管的急性发作而重建的过程中浪费了宝贵的时间，从而会在急性HAE发作期间危及患者的生命。
在过去的几十年中，已经报道了各种纯化C1-Inh的方法，其中大多数方法至少包含一个沉淀步骤和若干色谱分析步骤。
Sim和Reboul描述过一种方法。对血浆进行聚乙二醇(PEG)沉淀，然后使用DEAE树脂进行阴离子交换色谱分析(AEX)并使用伴刀豆球蛋白A树脂进行色谱分析。所获得的产物在SDS-page凝胶上显示出超过95％的纯度，含有至少2种60kDa和30kDa的杂质。
Prograis等描述了一种C1-Inh的纯化方法，其首先是人血浆的PEG分馏，接着在DEAE树脂上进行AEX色谱分析和金属螯合物色谱分析。最后，该方法包括免疫吸附色谱分析。将C1-Inh保存在磷酸盐缓冲的氯化钠(PBS)中，在非还原条件下，其在SDS-PAGE上显示含有少量约93kDa的杂质。
Teh和Froger公开了纯化C1-Inh的方法，采用DEAE树脂分批吸附冷冻上清液，随后在CM树脂上进行PEG沉淀和阳离子交换色谱分析。冻干和热处理的产物在SDS-PAGE凝胶上显示出超过95％的纯度，仅有一个可见带。
US-4,915,945涉及一种纯化C1灭活剂的方法，该方法包括用DEAE树脂分批吸附冷冻上清液，然后用QAE树脂分批吸附DEAE吸附步骤中的上清液。从QAE树脂洗脱C1-Inh并通过硫酸铵沉淀，将重新溶解的沉淀物在
Figure BDA0002319404430000021
上进行疏水相互作用色谱分析(HIC)。
US 5,030,578所述的纯化过程包括血浆的PEG分馏、jacalin-agarose色谱分析和
Figure BDA0002319404430000022
HIC分析。根据SDS-PAGE以及用PBS配制，该产品据称没有任何痕量污染物。
WO-A2-01/46219涉及一种制备含C1-Inh的组合物的方法，该方法包括将C1-Inh结合在第一阴离子交换树脂上，洗脱结合的C1-Inh并进行PEG沉淀，其中C1-Inh保留在上清液中。用S/D试剂处理PEG沉淀的上清液以灭活病毒，然后将C1-Inh结合到第二种阴离子交换树脂上。随后对第二阴离子交换树脂的含C1-Inh的洗脱液进行纳滤，之后将其交换至冻干的柠檬酸钠-海藻糖-氯化钠中。获得的产物显示出约6单位/mg蛋白质的比活性和约1.1/1的抗原/活性比。
Kumar等描述了由3个色谱分析步骤组成的纯化方法，以获得高纯度的C1-Inh。第一步是用DEAE树脂从人血浆中捕获C1-Inh，然后是在苯基树脂上进行的HIC步骤以及包括在TMAE树脂上进行阳离子交换色谱分析(CEX)的抛光步骤。最后，将缓冲液置换成pH＝6.8的10mM的柠檬酸钠，0.13M的甘氨酸和0.14M的钠。通过SDS-PAGE、SEC和RP-HPLC测定纯度为98-99％。
Feussner等公开了四种市售的C1-Inh浓缩物的生化比较结果。所述浓缩物是
Figure BDA0002319404430000023
其中
Figure BDA0002319404430000025
是转基因来源的，而其余3种浓缩物是血浆衍生的产品。所有制剂仅以冻干产品形式提供。
WO-A2-2014/145519涉及在各种pH值下用柠檬酸盐、磷酸盐、组氨酸或Tris配制的C1-Inh组合物。组氨酸配制的组合物在25℃下储存2周内单体含量减少了约30％。
迄今为止，还不能满足对所述高纯度产品的需求，其纯度能满足长期治疗的需求、与人糖基化相容的需求并且能满足对能避免抗体发展、与人的相容性最高的液体稳定产品的需求以及对(必要时)能即时使用的液体产品的需求。
发明内容
本发明基于一个令人惊讶的发现，即组氨酸能足够稳定液体和冻干组合物中的C1-Inh。
因此，根据第一方面，本发明提供了C1-酯酶抑制剂(C1-Inh)制剂，其中所述C1-Inh制剂含有浓度范围为5-400mM的组氨酸成分，但不包含柠檬酸盐或磷酸盐。
根据本发明的C1-Inh，特别是来自天然来源的C1-Inh，例如来自血液并且是通过纯化而获得的，所述纯化包括在季氨基-乙基(QAE)树脂上分批吸附低温血浆，采用溶剂/清洁剂(S/D)处理QAE洗脱液以灭活病毒，在二乙基氨基-乙基(DEAE)树脂上进行阴离子交换色谱分析，然后通过聚乙二醇(PEG)沉淀，在羧基甲基(CM)树脂上进行阳离子交换色谱分析并进行抛光疏水相互作用色谱分析(HIC)。将所得的中间溶液进行纳滤以除去病原体，并将其与组氨酸和最终选自精氨酸和甘氨酸的至少一种其他氨基酸一起配制。最终产品在1℃至8℃以液体形式或者在冻干状态下至室温都是稳定的。
通过尺寸排阻高压液相色谱法(SE-HPLC或SEC)测定出所述工艺步骤的这种组合使人血浆衍生的C1-Inh组合物具有足够高的纯度。本发明的C1-Inh组合物对于长期储存是足够稳定的。这意味着C1-Inh片段的产生达到最小化并且C1-Inh单体分子形成聚合物的可能性非常小。
根据第二方面，本发明提供了试剂盒，其由以下组成：第一容器，其包含根据第一方面所述的C1-Inh制剂；第二容器，其包含用于注射的水；以及转移套件，其能够以无菌方式重构冻干物，其中所述C1-Inh制剂是冻干的。
根据第三方面，本发明提供了试剂盒，其由预填充了根据第一方面所述的C1-Inh制剂的注射器组成，其中所述C1-Inh制剂是液体，并且其中所述制剂在1-8℃储存时至少稳定12个月，优选地在1-8℃至少稳定24个月。
根据第四方面，本发明提供了试剂盒，其由预填充了根据第一方面所述的C1-Inh制剂的注射器组成，其中所述C1-Inh制剂是液体，并且其中所述制剂在1-8℃储存时至少稳定12个月，优选地在1-8℃至少稳定24个月。
根据第五方面，本发明涉及组氨酸在稳定C1-Inh中的用途，其中将组氨酸加入到C1-Inh的制剂缓冲剂(formulation buffer)中，并且其中组氨酸的浓度范围为5-400mM。
根据第六方面，本发明涉及组氨酸在增加皮下施用的C1-Inh的生物利用度中的用途，其中在施用前将组氨酸加入到C1-Inh的制剂缓冲剂中，并且其中组氨酸的浓度范围为5至400mM。
附图说明
图1描绘了通过下述方法获得并用作稳定性研究的起始材料的C1-Inh组合物的典型SEC色谱图。单分子信号在9.069分钟处达到最大值，并且在7.565和11.625分钟处还有两个非单分子重量级分。单分子信号的曲线下面积(AUC)占总AUC的99.38％。
图2描绘了包含更大量非单分子重量级分的C1-Inh组合物的典型SEC色谱图。单分子信号仍占主导地位，但其AUC仅为75.38％。在7.735和10.937分钟处能清楚看到两个非单分子重量级分。这类制剂没有采用下文描述的方法获得，也没有用于稳定性研究。图2的目的仅仅是用于说明典型的非单分子重量级分。在大约15至16分钟看见的信号是由SEC方法中产生的溶剂前沿引起的，因此定量时对其不考虑。
具体实施方式
根据第一方面，本发明提供了一种稳定的制剂，其包含在制剂中的高纯度C1-Inh和氨基酸组氨酸。发明人惊奇地发现，已经很低浓度的组氨酸仍能够为C1-Inh制剂提供稳定性，特别是储存稳定性。具体来说，低至5mM的组氨酸浓度能够稳定制剂中的C1-Inh。因此，组氨酸的浓度为至少5mM。
如本文所用的，术语“组氨酸”是指蛋白质L-组氨酸。该组氨酸可以以纯物质形式、以一盐酸盐形式、以一水合物形式或者以不同于一盐酸盐形式的盐形式添加至C1-Inh制剂中。所述组氨酸浓度的下限可以是6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、11mM、12mM、13mM、14mM或15mM。
如实施例中所示的，15mM和30mM的组氨酸浓度对于稳定C1-Inh制剂具有很强的作用。因此，根据优选的实施方式，组氨酸浓度的下限为8mM。更优选地，组氨酸浓度的下限为10mM。最优选地，组氨酸浓度的下限为15mM。
原则上，关于稳定性，不应有上限。出于实际原因，特别是考虑到制剂的渗透压摩尔浓度，400mM的浓度看起来会是合理的上限。因此，根据一个实施方案，C1-Inh制剂的组氨酸浓度为400mM或更小。
因此，组氨酸浓度可以是例如5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、11mM、12mM、13mM、14mM、15mM、16mM、17mM、18mM、19mM或20mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM、100mM、110mM、120mM、130mM、140mM、150mM、160mM、170mM、180mM、190mM、200mM、210mM、220mM、230mM、240mM、250mM、260mM、270mM、280mM、290mM、300mM、310mM、320mM、330mM、340mM、350mM、360mM、370mM、380mM、390mM或400mM。
如实施例中所示，200mM的组氨酸能够稳定C1-Inh浓度为500IU/ml的C1-Inh制剂。根据另一个实施方案，组氨酸浓度为300mM或更小。根据另一个实施方案，该浓度为250mM或更小。组氨酸浓度也可以为200mM或更小。
根据一个实施方案，组氨酸浓度范围为5-400mM。根据另一个实施方案，组氨酸浓度范围为8-300mM。根据另一个实施方案，组氨酸浓度范围为10-250mM。根据另一个实施方案，组氨酸浓度范围为12-200mM。根据另一个实施方案，组氨酸浓度范围为14-150mM。
在本发明的意义上，术语“高纯度”定义了一种蛋白质组合物，其主要成分为天然来源的C1-Inh，尤其来自人类血液或其一部分，其中其他蛋白质成分的百分比低于2wt％。此外，在高纯度C1-Inh组合物中，C1-Inh几乎全部为单体状态，即NMF低于2wt％。
由于组氨酸的稳定作用，本发明的C1-Inh制剂不需要通常用于C1-Inh的组分，例如柠檬酸盐缓冲剂或磷酸盐缓冲剂。柠檬酸盐缓冲剂的缺点在于当施用于患者时它们可能引起局部刺激。
因此，在本发明的C1-Inh制剂中，优选地不含磷酸盐或柠檬酸盐缓冲剂。更优选地，既不含磷酸盐缓冲剂也不含柠檬酸盐缓冲剂。
C1-Inh制剂可以为液体状态或冻干的。第一个方面的优选实施方案是稳定的C1-Inh制剂，其在1℃-30℃，特别是在1℃-25℃稳定至少24个月。
根据一个实施方案，所述制剂包含浓度为50至2500IU/ml的高纯度C1-Inh，例如浓度为50IU/ml、60IU/ml、70IU/ml、80IU/ml、90IU/ml、100IU/ml、150IU/ml、200IU/ml、250IU/ml、300IU/ml、350IU/ml、400IU/ml、450IU/ml、500IU/ml、550IU/ml、600IU/ml、650IU/ml、700IU/ml、750IU/ml、800IU/ml、850IU/ml、900IU/ml、950IU/ml、10000IU/ml、1100IU/ml、1200IU/ml、1300IU/ml、1400IU/ml、1500IU/ml、1600IU/ml、1700IU/ml、1800IU/ml、1900IU/ml、2000IU/ml 2100IU/ml、2200IU/ml、2300IU/ml、2400IU/ml或2500IU/ml。优选地，C1-Inh浓度在100至1500IU/ml的范围内，更优选地，在150至1000IU/ml的范围内。在冻干的C1-Inh制剂的情况下，在本申请的上下文中，将C1-Inh的浓度定义为重构后的浓度。
可通过以下方法获得具有所需纯度的C1-Inh产品。为了获得足够高纯度的人血浆来源的C1-Inh组合物，可以采用以下纯化方法。
将肝素加入冷却的低温血浆中。在被QAE树脂捕获后，随后进行洗脱，再使用溶剂和去污剂的组合进行病毒灭活步骤(S/D处理)。经过S/D处理的溶液随后用水稀释。
随后将该稀释的溶液进行阴离子交换色谱分析，其中C1-Inh与树脂结合，然后在缓冲溶液中用NaCl洗脱。在开始PEG沉淀之前，将获得的洗脱液冷却至5℃±4℃。
将约60％的PEG-4000溶液与洗脱液混合以沉淀不需要的蛋白质。在例如通过深层过滤法(depth filtration)除去沉淀物之后，将获得的C1-Inh滤液与固体PEG混合以沉淀C1-Inh。例如通过深层过滤法将固体颗粒与液体分离，所得糊状物由于包含C1-Inh可以保留以进行进一步处理，该糊状物可以冷冻保存。
将C1-Inh糊状物溶解在pH＝6.0±0.2的缓冲剂中，然后使所得溶液澄清。将澄清的溶液进行阳离子交换色谱分析。从负载的树脂上洗去杂质，然后洗脱C1-Inh，纯度>90％。
用阳离子交换洗脱液进行HIC色谱分析，可得到纯度>99％的C1-Inh。C1-Inh结合到树脂上，通过降低离子强度，可以以纯形式洗脱C1-Inh，不含聚合物和杂质，这一点通过与单体峰相差小于1％的SEC AUC得到证明。通过用10kDa的膜进行超滤/渗滤(UDF)，将缓冲剂置换成含有组氨酸、氯化钠和氨基酸的缓冲剂。预过滤获得的交换的C1-Inh洗脱液，然后纳滤以去除病原体。之后，用10kDa的膜对获得的纳米滤液进行另一次UDF，将其浓缩至所需的C1-Inh浓度并与所需的赋形剂一起配制。
或者，可通过现有技术已知的方法，例如Kumar等，获得C1-Inh产品。
令人惊讶地发现，本发明的冻干制剂不必添加填充剂以获得能实现快速重构的冻干饼。
根据第一方面的C1-Inh制剂除组氨酸外还可包含其他天然存在的氨基酸。
例如，C1-Inh制剂可以包含1种、2种、3种、4种、5种或6种其他天然存在的氨基酸。根据第一方面的一个实施方案，C1-Inh制剂包含选自精氨酸和甘氨酸的一种或两种其他氨基酸。
如本文所用的，术语“精氨酸”是指蛋白质L-精氨酸。该精氨酸可以以纯物质形式、以单盐酸盐形式、以一水合物形式或者以不同于单盐酸盐形式的盐形式添加至C1-Inh制剂中。该甘氨酸可以以纯物质形式、以单盐酸盐形式、以一水合物形式或者以盐形式添加至C1-Inh制剂中。精氨酸可以以5-400mM范围的浓度存在。精氨酸浓度可以是5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM、100mM、110mM、120mM、130mM、140mM、150mM、160mM、170mM、180mM、190mM、200mM、210mM、220mM、230mM、240mM、250mM、260mM、270mM、280mM、290mM、300mM、310mM、320mM、330mM、340mM、350mM、360mM、370mM、380mM、390mM或400mM。
根据第一方面的一个实施方案，精氨酸浓度范围为10-300mM。根据另一个实施方案，精氨酸浓度范围为20-250mM。根据另一个实施方案，精氨酸浓度范围为30-150mM。根据另一个实施方案，精氨酸浓度范围为50-100mM。
甘氨酸可以以2-200mM范围的浓度存在。C1-Inh制剂中的甘氨酸浓度可以是2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM、100mM、110mM、120mM、130mM、140mM、150mM、160mM、170mM、180mM、190mM或200mM。
根据第一方面的一个实施方案，甘氨酸浓度范围为5-200mM。根据另一个实施方案，甘氨酸浓度范围为7-150mM。根据另一个实施方案，甘氨酸浓度范围为8-80mM。根据另一个实施方案，甘氨酸浓度范围为9-60mM。
根据一个实施方案，C1-Inh制剂同时包含精氨酸和甘氨酸。根据另一个实施方案，精氨酸浓度范围为50-100mM，甘氨酸浓度范围为9-60mM。
从实验看来，不希望受到理论的束缚，除了组氨酸的存在之外，渗透压摩尔浓度对于C1-Inh的稳定性也很重要。根据第一方面的一个实施方案，C1-Inh制剂的渗透压摩尔浓度范围为200-800mOsmol/kg。根据另一个实施方案，渗透压摩尔浓度范围为200-600mOsmol/kg。根据另一个实施方案，渗透压摩尔浓度范围为250-500mOsmol/kg。
为了达到所述渗透压摩尔浓度，氨基酸的总浓度范围优选为50-600mM。根据另一个实施方案，氨基酸的总浓度范围为80-400mM。根据另一个实施方案，氨基酸的总浓度范围为90-350mM。根据另一个实施方案，氨基酸的总浓度范围为100-280mM。
根据本发明的C1-Inh制剂还可以包含盐。该盐优选选自NaCl、NaSO4、MgSO4、MgCl2、CaCl2和KCl或它们的混合物。
该盐的浓度范围可以为5-200mM。C1-Inh制剂中的所述盐的浓度可以是5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM、100mM、110mM、120mM、130mM、140mM、150mM、160mM、170mM、180mM、190mM或200mM。
根据一个实施方案，盐浓度范围为8-150mM。根据另一个实施方案，盐浓度范围为10-100mM。根据另一个实施方案，盐浓度范围为15-80mM。根据另一个实施方案，盐浓度范围为20-60mM。
根据第一方面的一个实施方案，所述盐是氯化钠(NaCl)。因此，所述C1-Inh制剂可以包含甘氨酸和氯化钠。或者，所述C1-Inh制剂可以包含精氨酸和氯化钠。根据一个实施方案，所述C1-Inh制剂包含精氨酸和氯化钠。
在冻干状态下，根据第一方面的C1-Inh制剂在1℃至30℃，特别是在1℃至25℃下，稳定至少18个月，其中所述制剂不含柠檬酸盐或磷酸盐。通过联合本发明的制剂与可通过上述方法或通过现有技术已知的其他方法(例如Kumar等)获得的C1-Inh纯度能获得所需的性能。
所述第一方面的另一优选实施方案是冻干状态的C1-Inh制剂，其包含高纯度C1-Inh，重构后的浓度为50-2500IU/ml，特别是100-1500IU/ml，优选为150-1000IU/ml，适合皮下或静脉内施用，所述高纯度的C1-Inh与组氨酸和选自精氨酸和甘氨酸的一种或两种其他氨基酸一起配制。
所述第一方面的另一优选实施方案是冻干制剂，其包含在制剂中的高纯度C1-Inh，所述制剂缓冲剂含有组氨酸、氯化钠和选自甘氨酸和精氨酸中的一种或二种其他氨基酸，其中所述制剂的渗透压摩尔浓度为200-800mOsmol/kg，pH值为6.0至8.0，优选地pH值在7.0至7.8的范围内，优选地pH值为7.1至7.5。
所述第一方面的另一优选实施方案是冻干制剂，其包含在制剂缓冲剂中的高纯度C1-Inh，所述制剂缓冲剂含有组氨酸、氯化钠和精氨酸，其中所述制剂的渗透压摩尔浓度为200-800mOsmol/kg，尤其是250-500mOsmol/kg，pH值为6.0至8.0，优选地pH值在7.0至7.8的范围内，优选地pH值为7.1至7.5。
所述第一方面的另一优选实施方案是冻干C1-Inh制剂，其包含由10-100mM氯化钠、5-400mM组氨酸和5-400mM精氨酸组成的制剂缓冲剂，其特征在于所述制剂的渗透压摩尔浓度为200-800mOsmol/kg，尤其是250-500mOsmol/kg，pH值为6.0至8.0，优选地pH值在7.0至7.8的范围内，优选地pH值为7.1至7.5。
所述第一方面的另一优选实施方案是冻干C1-Inh制剂，其包含200±50IU/ml C1-Inh、25-35mM氯化钠、10-20mM组氨酸和70-90mM精氨酸，特别是约16mM组氨酸、约80mM的精氨酸、约40mM的甘氨酸和约31mM的NaCl，将所述制剂调节至7.1至7.5的pH。
所述第一方面的另一优选实施方案是冻干C1-Inh制剂，其包含500±125IU/mlC1-Inh、25-35mM氯化钠、10-20mM组氨酸和70-90mM精氨酸，特别是约16mM组氨酸、约80mM的精氨酸、约40mM的甘氨酸和约31mM的NaCl，将所述制剂调节至7.1至7.5的pH。
所述第一方面的另一优选实施方案是冻干C1-Inh制剂，其包含1000±250IU/mlC1-Inh、25-35mM氯化钠、10-20mM组氨酸和70-90mM精氨酸，特别是约16mM组氨酸、约80mM的精氨酸、约40mM的甘氨酸和约31mM的NaCl，将所述制剂调节至7.1至7.5的pH。
根据所述第一方面的一个实施方案，包含高纯度C1-Inh的制剂是液体制剂，并且在1℃至8℃下稳定至少12个月，特别是在1℃至8℃下稳定至少24个月，其中所述制剂不含柠檬酸盐或磷酸盐。通过联合本发明的制剂与可通过上述方法或通过现有技术已知的其他方法(例如Kumar等)获得的C1-Inh纯度能获得所需的性能。
本发明的第一方面的优选实施方案是液体C1-Inh制剂，其在室温下，特别是在高达25℃的温度下，稳定至少一个月。这样的制剂可以方便地在短途中服用或者可以由患者每天24小时携带在身上，作为可能的紧急治疗。
本发明的第一方面的另一优选实施方案是液体C1-Inh，其在1-8℃储存长达13个月后，在室温下，特别是在高达25℃的温度下，稳定至少一个月。
所述第一方面的另一优选实施方案是液体C1-Inh制剂，其包含高纯度C1-Inh，浓度为50-2500IU/ml，特别是100-1500IU/ml，优选为150-1000IU/ml，适合皮下或静脉内施用，所述高纯度的C1-Inh与组氨酸和选自精氨酸和甘氨酸的一种或两种其他氨基酸一起配制。
所述第一方面的另一优选实施方案是在制剂缓冲剂中的液体制剂，所述制剂缓冲剂含有组氨酸、氯化钠和选自甘氨酸和精氨酸中的一种或二种其他氨基酸，其中所述制剂的渗透压摩尔浓度为200-800mOsmol/kg，特别是250-500mOsmol/kg，pH值为6.0至8.0，优选地pH值在7.0至7.8的范围内，优选地pH值为7.1至7.5。
所述第一方面的另一优选实施方案是在制剂缓冲剂中的液体制剂，所述制剂缓冲剂包含组氨酸、氯化钠和精氨酸，其中所述制剂的渗透压摩尔浓度为200-800mOsmol/kg，特别是250-500mOsmol/kg，pH值为6.0至8.0，优选地pH值在7.0至7.8的范围内，优选地pH值为7.1至7.5。
所述第一方面的另一优选实施方案是液体制剂，其包含在制剂缓冲剂中的高纯度C1-Inh，所述制剂缓冲剂由10-100mM氯化钠、5-400mM组氨酸和5-400mM精氨酸组成，其特征在于所述制剂的渗透压摩尔浓度为200-800mOsmol/kg，尤其是250-500mOsmol/kg，pH值为6.0至8.0，优选地pH值在7.0至7.8的范围内，优选地pH值为7.1至7.5。
所述第二方面的另一优选实施方案是在制剂缓冲剂中的液体C1-Inh制剂，所述制剂缓冲剂由10-100mM氯化钠、10-100mM组氨酸和30-200mM精氨酸组成，其特征在于所述制剂的渗透压摩尔浓度为200-800mOsmol/kg，尤其是250-500mOsmol/kg，pH值为6.0至8.0，优选地pH值在7.0至7.8的范围内，优选地pH值为7.1至7.5。
所述第二方面的另一优选实施方案是在制剂缓冲剂中的液体C1-Inh制剂，所述制剂缓冲剂由20-50mM氯化钠、10-50mM组氨酸和50-150mM精氨酸组成，其特征在于所述制剂的渗透压摩尔浓度为200-800mOsmol/kg，尤其是250-500mOsmol/kg，pH值为6.0至8.0，优选地pH值在7.0至7.8的范围内，优选地pH值为7.1至7.5。
所述第一方面的另一优选实施方案是液体C1-Inh制剂，其包含25-40mM氯化钠、100-140mM组氨酸、90-130mM精氨酸和5-30mM甘氨酸，其特征在于所述制剂的渗透压摩尔浓度为380-500mOsmol/kg，pH值为6.0至8.0，优选地pH值在7.0至7.8的范围内，优选地pH值为7.1至7.5。
所述第一方面的另一优选实施方案是液体C1-Inh制剂，其包含200±50IU/ml C1-Inh、25-50mM氯化钠、10-20mM组氨酸和70-90mM精氨酸，特别是约16mM组氨酸、约80mM的精氨酸、约40mM的甘氨酸和约31mM的NaCl，将所述制剂调节至7.1至7.5的pH。
所述第一方面的另一优选实施方案是液体C1-Inh制剂，其包含200±50IU/ml C1-Inh、25-35mM氯化钠、10-20mM组氨酸、70-90mM精氨酸和35-65mM甘氨酸，特别是约15mM组氨酸、约80mM的精氨酸、约55mM的甘氨酸和约31mM的NaCl，将所述制剂调节至7.1至7.5的pH。
所述第一方面的另一优选实施方案是液体C1-Inh制剂，其包含500±125IU/mlC1-Inh、25-35mM氯化钠、25-35mM组氨酸和100-110mM精氨酸，特别是约30mM组氨酸、约105mM的精氨酸和约30mM的NaCl，将所述制剂调节至7.1至7.5的pH。
所述第一方面的另一优选实施方案是包含高纯度C1-Inh的液体制剂，其被配制成含有500±125IU/ml C1-Inh、25-35mM氯化钠、115-125mM组氨酸、105-115mM精氨酸和15-25mM甘氨酸，特别是约120mM组氨酸、约110mM的精氨酸、约20mM的甘氨酸和约33mM的NaCl，将所述制剂调节至7.1至7.5的pH。
所述第一方面的另一优选实施方案是液体C1-Inh制剂，其包含1000±250IU/mlC1-Inh、25-35mM氯化钠、10-20mM组氨酸和70-90mM精氨酸，特别是约16mM组氨酸、约80mM的精氨酸、约40mM的甘氨酸和约31mM的NaCl，将所述制剂调节至7.1至7.5的pH。
根据所述第一方面的C1-Inh制剂特别地可用于治疗遗传性或先天性血管性水肿(HAE)。
因此，根据第二方面，本发明提供了用于治疗遗传性或先天性血管性水肿(HAE)的C1-Inh制剂，其中所述C1-Inh制剂是根据所述第一方面定义的。
所述C1-Inh制剂可以特别地肠胃外施用，例如通过静脉内、肌肉内或皮下施用。根据所述第二方面的一个实施方案，所述用途的特征在于皮下施用C1-Inh制剂。
发明人还表示，当通过皮下施用时，用组氨酸配制的C1-Inh组合物具有较高生物利用度。根据一个实施方案，当以相同剂量静脉内施用的C1-Inh作为参比时，在皮下施用时，根据本发明的C1-Inh制剂的生物利用度大于60％，优选地大于70％，更优选地大于80％，最优选地大于90％。表8示出了皮下施用时C1-Inh制剂的高生物利用度。
具体地，如表8所示的实验结果所证实的，在根据本发明的C1-Inh制剂的皮下施用中，特别是在约500IU/ml的高浓度C1-Inh下，高组氨酸浓度导致C1-Inh的生物利用度特别高。因此，C1-Inh浓度大于300IU/ml，特别是300IU/ml至1000IU/ml的C1-Inh制剂中，组氨酸浓度优选在50mM至400mM的范围内，更优选地在70至300mM的范围内。根据另一个实施方案，组氨酸浓度范围为80-200mM。根据另一个实施方案，组氨酸浓度范围为100-150mM。根据另一个实施方案，组氨酸浓度范围为110-130mM。
根据第三方面，本发明提供了试剂盒，其由以下组成：第一容器，其包含根据第一方面所述的C1-Inh制剂；第二容器，其包含用于注射的水；以及转移套件，其能够以无菌方式重构冻干物。重构的C1-Inh制剂可在施用之前在高达20-25℃的室温下储存长达一个月。
根据第四方面，本发明提供了试剂盒，其由预填充了根据第一方面所述的C1-Inh制剂的注射器组成，其中所述C1-Inh制剂是液体，并且其中所述制剂在1-8℃储存时至少稳定12个月，优选地在1-8℃至少稳定24个月。
根据第四方面的一个实施方案，所述C1-Inh制剂在1-8℃下储存时稳定至少23个月，并且在温度升温至室温后可再稳定另一个月，前提条件是在所述另一个月中室温未超过20-25℃。根据第四方面的试剂盒的特别积极的作用是能够随身携带该试剂盒而无需冷藏，这样在急性发作的情况下，可以在途中立即使用。另外，由于所述的稳定性，例如在室温下2-3周后仍可以安全地使用该试剂盒进行预防性治疗。预防性治疗通常每周进行两次。
根据所述第四方面的另一实施方案，所述试剂盒由适合于s.c.(皮下)施用的装置组成，例如“On-Body Injector”(“体内注射器”)，其预先填充有所述第一方面的C1-Inh制剂，其中所述C1-Inh制剂是液体，其中所述制剂在1-8℃下储存时稳定至少23个月，并且在温度升温至室温后可再稳定另一个月，前提条件是在所述另一个月中室温未超过20-25℃。
根据第五方面，本发明涉及组氨酸在稳定C1-Inh中的用途，其中将组氨酸加入到C1-Inh的制剂中，并且其中组氨酸的浓度范围为5-400mM。
在根据第五方面的用途中，可以使用如用于定义所述第一方面的C1-Inh制剂所使用的组氨酸浓度。此外，可以使用如用于定义所述第一方面的C1-Inh制剂所使用的C1-Inh浓度。所述C1-Inh的制剂缓冲剂可以另外含有用于定义所述第一方面的C1-Inh制剂的任何组分。由组氨酸稳定的C1-Inh制剂可以是液体或冻干的。
此外，组氨酸的摩尔浓度与C1-Inh的含量(单位为IU/ml)之比的范围可为1(mM)：500(IU/ml)至8：1。优选地，组氨酸的摩尔浓度与C1-Inh的含量(单位为IU/ml)之比的范围可为1:50至4:1。更优选地，组氨酸的摩尔浓度与C1-Inh的含量(单位为IU/ml)之比的范围可为1:20至1:1。
根据第六方面，本发明涉及组氨酸在增加皮下施用的C1-Inh的生物利用度中的用途，其中在施用前将组氨酸加入到C1-Inh的制剂中，并且其中组氨酸的浓度范围为5至400mM。
在根据第六方面的用途中，可以使用如用于定义所述第一方面的C1-Inh制剂所使用的组氨酸浓度。此外，可以使用如用于定义所述第一方面的C1-Inh制剂所使用的C1-Inh浓度。所述C1-Inh的制剂缓冲剂可以另外含有用于定义所述第一方面的C1-Inh制剂的任何组分。由组氨酸稳定的C1-Inh制剂可以是液体或冻干的。
为了获得皮下施用的C1-Inh的高生物利用度，组氨酸的摩尔浓度与C1-Inh的含量(单位为IU/ml)之比的范围可为1(mM)：500(IU/ml)至8：1。优选地，组氨酸的摩尔浓度与C1-Inh的含量(单位为IU/ml)之比的范围可为1:50至4:1。更优选地，组氨酸的摩尔浓度与C1-Inh的含量(单位为IU/ml)之比的范围可为1:10至1:1。
通过尺寸排阻色谱法(SEC)测定纯度
使用SEC确定C1-抑制剂溶液的纯度。可以使用配有Tosoh
Figure BDA0002319404430000091
的标准HPLC系统-超级SW3000 SEC柱和在280nm的UV检测器。使用pH＝6.95的含有40mM磷酸钠和300mM氯化钠的电泳液以及色谱柱制造商建议的0.3ml/min的流速。
为了评估色谱图，对产品样品曲线下的面积进行积分、求和，然后将各个峰面积计算为总峰面积的％。单分子C1-Inh洗脱时间约为9.2分钟，比该优势信号(dominantsignal)早或晚的信号代表非单体部分。通过采用上述设置以及约5mg/ml的蛋白质浓度、10μl的进样量和2至13分钟的积分值可获得良好的结果。单分子C1-Inh的信号占主导地位，其从约8.6至10.3分钟的积分值为足够纯的制剂提供了良好的结果。
测定生物利用度
为了确定以静脉内施用的C1-Inh为参比的皮下施用的C1-Inh的生物利用度，进行了动物研究。由于人和猪皮肤的相似性，因此选择猪作为动物。确定s.c.和i.v.施用的C1-Inh的药代动力学，并且将s.c.施用的C1-Inh的生物利用度计算为相同剂量(IU/kg)的i.v.施用的C1-Inh的曲线下面积(AUC)的百分数(％)。单次注射后监测C1-Inh血液水平168小时。
稳定性的定义
根据本发明的稳定性涉及储存稳定性，即特别是在限定的时间段内(特别是超过6个月)的储存期间，制剂团聚的趋势低。因此，被认为是“稳定的”制剂，它通常不易形成聚集体。特定制剂的稳定性还取决于预定的时间、储存温度和聚集状态。
因此，当在限定时间段在25℃或更低温度下储存后非单体级分的量小于4％时，所述冻干C1-Inh制剂被认为在限定时间段内是稳定的。例如，如果在25℃或更低的温度下在12个月的存储期内NMF保持低于4％，则该制剂被认为稳定至少12个月。
当在限定时间段在5℃或更低温度下储存后非单体级分的量小于4％时，所述液体C1-Inh制剂被认为在限定时间段内是稳定的。例如，如果在5℃的温度下在12个月的存储期内NMF保持低于4％，则该液体制剂被认为稳定至少12个月。
当在限定时间段在15℃或更低温度下储存后非单体级分的量小于15％时，所述液体C1-Inh制剂被认为在限定时间段内是稳定的。例如，如果在15℃的温度下在10个月的存储期内NMF保持低于15％，则该液体制剂被认为稳定至少10个月。
“非单体级分”、“非单分子重量级分”或“NMF”是指分子量不同于单体C1-Inh的任何组分，例如聚集的C1-Inh、C1-Inh片段或杂蛋白。在SEC中，NMF比主导C1-Inh信号早或晚洗脱时出来。
示例
除非另有说明，否则精氨酸和组氨酸通常用作一盐酸盐。
根据本发明的冻干制剂
制剂lyo 1(Plyo 1)由200IU/ml C1-Inh、15mM组氨酸、80mM精氨酸、40mM甘氨酸和30mM NaCl组成，pH调节至7.3。Plyo 1计算得到的渗透压摩尔浓度为290mOsmol/kg。
制剂lyo 2(Plyo 2)由200IU/ml C1-Inh、50mM组氨酸、67mM精氨酸和28mM NaCl组成，pH调节至7.4。Plyo 2的渗透压摩尔浓度为约290mOsmol/kg。
制剂lyo 3(Plyo 3)由200IU/ml C1-Inh、25mM组氨酸、66mM精氨酸、9mM甘氨酸和49mM NaCl组成，pH调节至7.3。Plyo 3计算得到的渗透压摩尔浓度为约290mOsmol/kg。
制剂lyo 4(Plyo 4)由200IU/ml C1-Inh、25mM组氨酸、100mM精氨酸和21mM NaCl组成，pH调节至7.3。Plyo 4计算得到的渗透压摩尔浓度为约290mOsmol/kg。
制剂lyo 6(Plyo 6)由200IU/ml C1-Inh、10mM组氨酸、50mM精氨酸、80mM甘氨酸和50mM NaCl组成，pH调节至7.3。Plyo 6计算得到的渗透压摩尔浓度为约300mOsmol/kg。
制剂lyo 5(Plyo 5)由200IU/ml C1-Inh、10mM组氨酸、74mM精氨酸、9mM甘氨酸和57mM NaCl组成，pH调节至7.3。Plyo 5计算得到的渗透压摩尔浓度为约290mOsmol/kg。
根据本发明的液体制剂
制剂1(P1)由200IU/ml C1-Inh、15mM组氨酸、80mM精氨酸、55mM甘氨酸和30mMNaCl组成，pH调节至7.4。P1计算得到的渗透压摩尔浓度为约290mOsmol/kg。
制剂2(P2)由500IU/ml C1-Inh、30mM组氨酸、105mM精氨酸和30mM NaCl组成，pH调节至7.3。P2计算得到的渗透压摩尔浓度为约300mOsmol/kg。
制剂3(P3)由520IU/ml C1-Inh、120mM组氨酸、110mM精氨酸、20mM甘氨酸和33mMNaCl组成，pH调节至7.3。P3的渗透压摩尔浓度为约430mOsmol/kg。
包含相同量的高纯度C1-Inh但不是根据本发明方法配制的对比制剂
未按本发明方法配制的冻干制剂
对比制剂lyo 1(CPlyo 1)由200IU/ml C1-Inh、0mM组氨酸(无组氨酸)、80mM精氨酸、40mM甘氨酸和45mM NaCl组成，pH调节至7.3。CPlyo 1计算得到的渗透压摩尔浓度为约290mOsmol/kg。对比制剂lyo 2(CPlyo 2)由200IU/ml C1-Inh、0mM组氨酸(无组氨酸)、50mM精氨酸、80mM甘氨酸和50mM NaCl组成，pH调节至7.3。CPlyo 2计算得到的渗透压摩尔浓度为约280mOsmol/kg。
未按本发明方法配制的液体制剂
对比制剂1(CP 1)由200IU/ml C1-Inh、137mM氯化钠、2.7mM氯化钾、10mM磷酸氢二钠和1.8mM磷酸二氢钾组成，pH调节至7.3。CP 1计算得到的渗透压摩尔浓度为约315mOsmol/kg。
对比制剂2(CP 2)由200IU/ml C1-Inh、70.2mM氯化钠、61.3mM蔗糖、10.1mM柠檬酸钠、17.1mM L-缬氨酸、13.5mM L-丙氨酸和37.8mM L-苏氨酸组成，pH调节至7.0。CP 2计算得到的渗透压摩尔浓度为约380mOsmol/kg。
结果
非单体级分(NMF)的SEC数据在表中表示为NMF。
表1包含在配制后即时(to)确定的以及在25℃下储存数月之后确定的以根据本发明的冻干制剂的总面积的百分数(％)表示的SEC数据。
表2包含不是根据本发明的以冻干制剂的总面积的百分数(％)表示的SEC数据。SEC数据是在配制后即时(to)确定的以及在25℃下储存数月之后确定的。
表3包含在配制后即时(to)确定的以及在5℃下储存数月之后确定的以根据本发明的液体制剂的总面积的百分数(％)表示的SEC数据。
表4包含不是根据本发明的以液体制剂的总面积的百分数(％)表示的SEC数据。SEC数据是在配制后即时(to)确定的以及在5℃下储存数月之后确定的。
表5包含在配制后即时(to)确定的以及在15℃下储存数月之后确定的以根据本发明的液体制剂的总面积的百分数(％)表示的SEC数据。
表6包含不是根据本发明的以液体制剂的总面积的百分数(％)表示的SEC数据。SEC数据是在配制后即时(to)确定的以及在15℃下储存数月之后确定的。
表7包含在配制后即时(to)确定的以及在25℃下储存一个月之后确定的以根据本发明的液体制剂的总面积的百分数(％)表示的SEC数据。
表8包含与皮下VS静脉内施用的制剂的C1-抑制剂动力学有关的数据。数据以相同给药方案的静脉内施用的C1抑制剂的曲线下面积(AUC)的百分数(％)表示，即生物利用度。
表1(冻干的，25℃)–数值以[％]表示
表2(冻干的，25℃)–数值以[％]表示
Figure BDA0002319404430000132
表3(液体，5℃)–数值以[％]给出
Figure BDA0002319404430000133
表4(液体，5℃)–数值以[％]给出；n.d.-未确定
表5(液体，15℃)–数值以[％]给出
Figure BDA0002319404430000141
表6(液体，15℃)–数值以[％]给出；n.d.-未确定
Figure BDA0002319404430000142
表7(液体，25℃)–数值以[％]给出
施用剂量[IU/kg] i.v.的％AUC
P2 i.v. 40 100
P2 s.c. 40 72
P2 i.v. 70 100
P2 s.c. 70 75
P3 i.v. 40 100
P3 s.c. 40 95
表8以相同剂量下的静脉内给药的制剂为参比的皮下给药的制剂的C1-抑制剂的生物利用度。
参考文献
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Claims (35)

1.C1-酯酶抑制剂(C1-Inh)制剂，其中所述C1-Inh制剂含有浓度范围为5-400mM的组氨酸，但不包含柠檬酸盐或磷酸盐。
2.根据权利要求1所述的C1-Inh制剂，其中所述组氨酸浓度范围为8-300mM，优选地该范围为10-250mM，更优选地该范围为12-200mM，最优选地该范围为14-150mM。
3.根据权利要求1或2所述的C1-Inh制剂，其中所述C1-Inh的浓度范围为50-2500IU/ml，优选地该范围为100-1500IU/ml，更优选地该范围为150-1000IU/ml。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的C1-Inh制剂，其中所述C1-Inh制剂适合于皮下或静脉内施用。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的C1-Inh制剂，还包含一种或多种其他天然氨基酸，优选地选自精氨酸和甘氨酸的一种或两种其他氨基酸。
6.根据权利要求5所述的C1-Inh制剂，其中所述精氨酸浓度范围为10-300mM，优选地该范围为20-250mM，更优选地该范围为30-150mM，最优选地该范围为50-120mM。
7.根据权利要求6所述的C1-Inh制剂，其中所述甘氨酸浓度范围为5-200mM，优选地该范围为7-150mM，更优选地该范围为8-120mM，最优选地该甘氨酸浓度范围为9-60mM。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的C1-Inh制剂，还包含盐，优选地该盐为氯化钠，其中所述盐的浓度范围优选为8-150mM，更优选地该范围为10-100mM，最优选地该范围为15-80mM。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的C1-Inh制剂，其中所述制剂的pH范围为6.0-8.0，优选地该范围为7.0-7.8，更优选地该范围为7.1-7.5。
10.根据权利要求1至8中任一项所述的C1-Inh制剂，其中所述C1-Inh制剂的渗透压摩尔浓度范围为200-800mOsmol/kg，优选地该范围为200-600mOsmol/kg，更优选地该范围为250-500mOsmol/kg。
11.根据权利要求1至9中任一项所述的C1-Inh制剂，其中所述C1-Inh制剂的氨基酸的总浓度范围为50-600mM，优选地该范围为80-400mM，更优选地该范围为90-350mM，最优选地该范围为100-350mM。
12.根据权利要求1至9中任一项所述的C1-Inh制剂，其中所述C1-Inh制剂是冻干的。
13.根据权利要求12所述的C1-Inh制剂，其包含氯化钠和精氨酸，其特征在于渗透压摩尔浓度为200-800mOsmol/kg，pH值为6.0-8.0，特别是7.0-7.8，优选地pH值为7.1-7.5。
14.根据权利要求12所述的C1-Inh制剂，其包含10-100mM的氯化钠、5-400mM的组氨酸和5-400mM的精氨酸。
15.根据权利要求12所述的C1-Inh制剂，其包含25-35mM的氯化钠、10-20mM的组氨酸和70-90mM的精氨酸，其特征在于渗透压摩尔浓度为200-800mOsmol/kg，pH值为7.1-7.5。
16.根据权利要求12所述的C1-Inh制剂，其包含25-35mM的氯化钠、20-40mM的组氨酸和90-115mM的精氨酸，其特征在于渗透压摩尔浓度为200-800mOsmol/kg，pH值为7.1-7.5。
17.根据权利要求12所述的C1-Inh制剂，其包含25-40mM的氯化钠、100-140mM的组氨酸、90-130mM的精氨酸和5-30mM的甘氨酸，其特征在于渗透压摩尔浓度为380-500mOsmol/kg，pH值为7.1-7.5。
18.根据权利要求12至17所述的C1-Inh制剂，其特征在于，通过确定168小时中曲线下面积(AUC)，皮下施用的C1-Inh的生物利用度大于以相同剂量施用的静脉内施用的C1-Inh的生物利用度的60％。
19.根据权利要求13至18中任一项所述的C1-Inh制剂，其特征在于，当在1℃至35℃，特别是1℃至30℃，甚至更特别地在1℃至25℃下储存时，具有至少24个月的稳定性。
20.根据权利要求1至11中任一项所述的C1-Inh制剂，其中所述制剂是液体。
21.根据权利要求20所述的C1-Inh制剂，其包含氯化钠和精氨酸，其特征在于，渗透压摩尔浓度为200-800mOsmol/kg，pH值为6.0-8.0，特别是7.0-7.8，甚至更优选地pH值为7.1-7.5。
22.根据权利要求20所述的C1-Inh制剂，其包含10-100mM的氯化钠、5-400mM的组氨酸和5-400mM的精氨酸，其特征在于渗透压摩尔浓度为200-800mOsmol/kg，pH值为7.1-7.5。
23.根据权利要求20所述的C1-Inh制剂，其包含10-100mM的氯化钠、10-100mM的组氨酸和30-200mM的精氨酸，其特征在于渗透压摩尔浓度为200-800mOsmol/kg，pH值为6.0-8.0。
24.根据权利要求20所述的C1-Inh制剂，其包含25-35mM的氯化钠、100-140mM的组氨酸、90-130mM的精氨酸和5-30mM的甘氨酸，其特征在于渗透压摩尔浓度为380-500mOsmol/kg，pH值为7.1-7.5。
25.根据权利要求20所述的C1-Inh制剂，其包含25-35mM的氯化钠、20-40mM的组氨酸和90-115mM的精氨酸，其特征在于渗透压摩尔浓度为200-350mOsmol/kg，pH值为7.1-7.5。
26.根据权利要求20所述的C1-Inh制剂，其包含25-35mM的氯化钠、10-20mM的组氨酸、70-90mM的精氨酸和35-65mM的甘氨酸，其特征在于渗透压摩尔浓度为200-350mOsmol/kg，pH值为7.1-7.5。
27.根据权利要求20至26所述的C1-Inh制剂，其特征在于，在1℃至8℃下具有至少12个月的稳定性，特别是在1℃至8℃下具有至少24个月的稳定性。
28.根据权利要求20至27所述的C1-Inh制剂，其特征在于，通过确定168小时中的AUC，皮下施用的C1-Inh的生物利用度大于以相同剂量施用的静脉内施用的C1-Inh的生物利用度的60％。
29.用于在治疗遗传性或先天性血管性水肿(HAE)中使用的C1-Inh制剂，其中所述C1-Inh制剂是根据权利要求1至28中任一项定义的制剂。
30.试剂盒，其由以下组成：第一容器，其包含根据权利要求12至19中任一项所述的C1-Inh制剂；第二容器，其包含用于注射的水；转移套件，其能够以无菌方式重构冻干物，其中所述重构的C1-Inh制剂在施用前可以在室温下储存长达一个月。
31.试剂盒，其由预填充了根据权利要求20至29中任一项所述的C1-Inh制剂的注射器组成，其中所述制剂在1-8℃储存时至少稳定12个月，优选地在1-8℃至少稳定24个月。
32.试剂盒，其由预填充了根据权利要求20至29所述的C1-Inh制剂的注射器组成，其中所述制剂在1-8℃下储存时稳定至少12个月，并且在温度升温至室温后可再稳定另一个月，前提条件是在所述另一个月中室温未超过20-25℃。
33.试剂盒，其由适合于皮下施用的装置组成，例如“体内注射器”，所述装置预填充了根据权利要求20至29所述的C1-Inh制剂，其中所述制剂在1-8℃下储存时稳定至少12个月，并且在温度升温至室温后可再稳定另一个月，前提条件是在所述另一个月中室温未超过20-25℃。
34.组氨酸在稳定C1-Inh中的用途，其中将组氨酸加入到C1-Inh的制剂缓冲剂中，并且其中组氨酸的浓度范围为5-400mM。
35.组氨酸在增加皮下施用的C1-Inh的生物利用度中的用途，其中在施用前将组氨酸加入到C1-Inh的制剂缓冲剂中，并且其中组氨酸的浓度范围为5-400mM。
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