RU2785431C2 - Препарат ингибитора c1-эстеразы - Google Patents
Препарат ингибитора c1-эстеразы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2785431C2 RU2785431C2 RU2019141288A RU2019141288A RU2785431C2 RU 2785431 C2 RU2785431 C2 RU 2785431C2 RU 2019141288 A RU2019141288 A RU 2019141288A RU 2019141288 A RU2019141288 A RU 2019141288A RU 2785431 C2 RU2785431 C2 RU 2785431C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- inh
- range
- histidine
- arginine
- preparation
- Prior art date
Links
- 229940009550 C1 esterase inhibitor Drugs 0.000 title claims abstract description 261
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 133
- 101710022981 SERPING1 Proteins 0.000 claims abstract description 251
- 102100009270 SERPING1 Human genes 0.000 claims abstract description 251
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 113
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 45
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 2qpq Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K [O-]P([O-])([O-])=O Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 6
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims abstract description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 121
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 84
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 75
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 67
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 63
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 42
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 39
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 22
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 claims description 22
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 22
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 15
- 230000036912 Bioavailability Effects 0.000 claims description 14
- 230000035514 bioavailability Effects 0.000 claims description 14
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 14
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 9
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 7
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 206010002425 Angioedemas Diseases 0.000 claims description 5
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 claims description 4
- 238000010792 warming Methods 0.000 claims description 4
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 claims description 3
- 102000016917 Complement C1s Human genes 0.000 claims description 2
- 108010028774 Complement C1s Proteins 0.000 claims description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L MgCl2 Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 241001274216 Naso Species 0.000 claims description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L cacl2 Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 229960002885 Histidine Drugs 0.000 description 100
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 53
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 22
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 18
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 18
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 16
- 210000002381 Plasma Anatomy 0.000 description 15
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 10
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 8
- 239000012537 formulation buffer Substances 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 7
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 7
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 6
- 102000005911 Complement C1 Inhibitor Protein Human genes 0.000 description 5
- 108010005563 Complement C1 Inhibitor Protein Proteins 0.000 description 5
- 230000001154 acute Effects 0.000 description 5
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 5
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 5
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 4
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 4
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 3
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 3
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 230000000087 stabilizing Effects 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 206010003497 Asphyxia Diseases 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 229940009560 Ruconest Drugs 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 206010044291 Tracheal obstruction Diseases 0.000 description 2
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K Trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 2
- 238000011118 depth filtration Methods 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 2
- 239000011778 trisodium citrate Substances 0.000 description 2
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 208000000884 Airway Obstruction Diseases 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N Ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940075791 Berinert Drugs 0.000 description 1
- 229940088949 Cinryze Drugs 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 210000004207 Dermis Anatomy 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229960002897 Heparin Drugs 0.000 description 1
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N Heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 1
- 206010019860 Hereditary angioedema Diseases 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 210000004185 Liver Anatomy 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M Monopotassium phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 1
- 101000353906 SERPING1 Proteins 0.000 description 1
- 210000003491 Skin Anatomy 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000004304 Subcutaneous Tissue Anatomy 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 230000035736 Total AUC Effects 0.000 description 1
- 210000003437 Trachea Anatomy 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Tris Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 231100000494 adverse effect Toxicity 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- -1 diethylaminoethyl Chemical group 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003899 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 102000035452 human SERPING1 protein Human genes 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000012263 liquid product Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000036231 pharmacokinetics Effects 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000007981 phosphate-citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive Effects 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 1
- 231100000486 side effect Toxicity 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Abstract
Настоящее изобретение относится к стабильному препарату ингибитора C1–эстеразы (C1–Inh), который является жидким или лиофилизированным, отличается содержанием гистидина 5–400 мМ, но не содержит цитрат или фосфат. Также изобретение относится к набору, включающему препарат C1–Inh. 6 н. и 25 з.п. ф-лы, 2 ил., 8 табл.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к лекарственной форме препарата C1–Inh высокой чистоты и способу очистки для получения ингибитора C1–эстеразы высокой чистоты (C1–Inh или C1I) из источника, содержащего C1–Inh.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Ингибитор C1–эстеразы представляет собой одиноцепочечный гликопротеин из 478 аминокислотных остатков и с кажущейся мономолекулярной массой приблизительно 106 кДа при измерении с помощью ДСН электрофореза. Главным образом, он продуцируется в печени и присутствует в нормальной человеческой плазме в концентрациях приблизительно 0,14–0,38 мг/мл, что эквивалентно 1 ед/мл плазмы [Production of Plasma Proteins for Therapeutic Use, First Edition, 241–258, Edited by Joseph Bertolini, Neil Goss and John Curling, 2013 John Wiley & Sons].
Известно, что качественный или количественный дефицит C1–Inh является фундаментальной причиной наследственного или врожденного ангионевротического отека (НАО), который является наследственным и редким заболеванием, проявляющимся в виде отека дермы, подкожной ткани, слизистой оболочки и подслизистых тканей. Ангионевротический отек представляет собой потенциально опасное для жизни заболевание, поскольку может возникать обструкция трахеи или дыхательных путей и, в конечном счете, асфиксия.
Одним из возможных путей лечения является замещение дефектного или отсутствующего белка функциональным ингибитором С1–эстеразы либо во время острого приступа, либо в качестве пожизненного профилактического лечения. В любом случае рекомендуется вводить концентрат C1–Inh по возможности с наибольшей чистотой, чтобы исключить развитие побочных эффектов, таких как выработка антител, направленных против C1–Inh. Таким образом, выбранный продукт должен практически не содержать каких–либо других белков, а также агрегатов C1–Inh или разложившегося или нефункционального C1–Inh, чтобы облегчить, в частности, пожизненное профилактическое лечение без развития антител или других нежелательных явлений. В случаях острых приступов с обструкцией трахеи препараты C1–Inh назначают на самой ранней стадии, чтобы избежать возможной асфиксии.
Указанные дефициты можно скорректировать заместительной терапией с внутривенным или подкожным введением препаратов C1–Inh из плазмы крови или рекомбинантного происхождения. Тем не менее, лечение связано с риском введения патогенов, например вирусов, пациенту и тем самым вызывает дополнительные нарушения. Таким образом, для восстановления C1–Inh на физиологических уровнях целесообразно применять только такие композиции C1–Inh, которые подвергали этапам снижения содержания патогенов в процессе производства, включающего этапы снижения и инактивации.
Хотя известны концентраты C1–Inh высокой чистоты и с низким содержанием агрегатов, такие препараты, в частности, нестабильны в жидкой форме. Следовательно, стабильные препараты C1–Inh были известны только в виде лиофилизированных продуктов, имеющих недостаток, связанный с потерей ценного времени на восстановление при лечении острых приступов, поражающих трахею, что ставит под угрозу жизнь пациента во время острого приступа НАО.
За последние несколько десятилетий были описаны различные способы очистки C1–Inh, включающие в большинстве случаев по меньшей мере одну стадию осаждения и несколько стадий хроматографической очистки.
Такой процесс описывают Sim и Reboul. Осаждение полиэтиленгликолем (ПЭГ) проводят на плазме крови с последующей анионообменной хроматографией (AEX) со смолой DEAE и хроматографией со смолой с Конканавалином–A. Полученный продукт показал чистоту больше 95% в геле ДСН–ПААГЭ, по меньшей мере с 2 примесями массой 60 кДа и 30 кДа.
Prograis et al. описывают способ очистки C1–Inh, начинающийся с ПЭГ–фракционирования человеческой плазмы с последующей AEX–хроматографией на смоле DEAE и металлохелатной хроматографией. В конечной стадии способ включал иммуноадсорбционную хроматографию. C1–Inh хранили в фосфатно–солевом буфере (PBS), при этом он показал небольшую примесь приблизительно 93 кДа при ДСН–ПААГЭ в невосстанавливающих условиях.
Teh и Froger раскрывают очистку C1–Inh с помощью периодической адсорбции криосупернатанта с использованием смолы DEAE с последующим осаждением ПЭГ и катионообменной хроматографией на смоле CM. Лиофилизированный и термически обработанный продукт показал чистоту больше 95% при ДСН–ПААГЭ только с одной видимой полосой.
US 4,915,945 относится к способу очистки C1 инактиватора, который включает периодическую адсорбцию криосупернатанта с использованием смолы DEAE с последующей периодической адсорбцией супернатанта после этапа адсорбции на DEAE с использованием смолы QAE. C1–Inh элюировали со смолы QAE, осаждали сульфатом аммония и повторно растворенный осадок подвергали хроматографии гидрофобных взаимодействий (HIC) на Phenyl–Sepharose®.
Способ очистки US 5,030,578 состоит из ПЭГ–фракционирования плазмы крови, хроматографии на джакалин–агарозе и HIC на Phenyl–Sepharose®. Продукт, как указано, не содержал каких–либо следов примесей согласно ДСН–ПААГЭ и был приготовлен в PBS.
WO–A2–01/46219 относится к способу получения содержащей C1–Inh композиции, который включает связывание C1–Inh на первой анионообменной смоле, элюирование связанного C1–Inh и осаждение ПЭГ, где C1–Inh остается в супернатанте. Супернатант после осаждения ПЭГ обрабатывали S/D реагентами для инактивации вирусов, после чего C1–Inh связывали со второй анионообменной смолой. Содержащий C1–Inh элюат после второй анионообменной смолы затем подвергали нанофильтрации и после замены буфера на буфер, содержащий цитрат натрия–трегалозу–хлорид натрия, лиофилизировали. Полученный продукт показал удельную активность приблизительно 6 единиц/мг белка и отношение антигенов/активности приблизительно 1,1/1.
Kumar et al. описали способ очистки, состоящий из 3 стадий хроматографической очистки с получением C1–Inh высокой чистоты. В первой стадии проводили захват C1–Inh из человеческой плазмы при использовании смолы DEAE с последующей HIC на фенильной смоле и стадией конечной очистки, включающей катионообменную хроматографию (CEX) на смоле TMAE. В конечной стадии буфер меняли на буфер, содержащий 10 мМ цитрата натрия, 0,13 М глицина и 0,14 М натрия, pH=6,8. Чистота согласно ДСН–ПААГЭ, SEC и ОФ–ВЭЖХ составила 98–99%.
Feussner et al. опубликовали биохимическое сравнение четырех доступных в продаже концентратов C1–Inh. Концентраты – Berinert®, Ruconest®, Cinryze® и Cetor®, из которых Ruconest® имеет трансгенное происхождение, тогда как остальные 3 концентрата являются продуктами, полученными из плазмы. Все препараты доступны только в виде лиофилизированных продуктов.
WO–A2–2014/145519 относится к композиции C1–Inh, изготовленной с цитратом, фосфатом, гистидином или Трис при различных значениях pH. Содержащие гистидин композиции демонстрировали приблизительно 30% снижение содержания мономера при хранении в течение 2 недель при 25°C.
До настоящего времени не было возможности удовлетворить потребность в высокой чистоте для длительного лечения, совместимости с гликозилированием человека и необходимости получения жидкого и стабильного продукта, чтобы избежать выработки антител, обеспечить наибольшую совместимость с организмом человека и предоставить жидкий продукт для немедленного применения в случае необходимости.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение основано на неожиданном открытии, что гистидин в достаточной степени стабилизирует C1–Inh в жидких и лиофилизированных композициях.
Таким образом, согласно первому аспекту, изобретение относится к препарату ингибитора C1–эстеразы (C1–Inh), где препарат C1–Inh содержит гистидин в концентрации 5–400 мМ, но не содержит цитрат или фосфат.
C1–Inh согласно изобретению представляет собой, в частности, C1–Inh из природного источника, такого как кровь, и получен путем очистки, включающей периодическую адсорбцию обедненной криопреципитатом плазмы на смоле с четвертичными аминоэтильными группами (QAE), обработку QAE элюата растворителем/детергентом (S/D) для инактивации вирусов, анионообменную хроматографию на диэтиламиноэтильной смоле (DEAE) с последующим осаждением полиэтиленгликолем (ПЭГ), катионообменную хроматографию на карбоксиметильной смоле (CM) и конечную очистку с помощью хроматографии гидрофобных взаимодействий (HIC). Полученный промежуточный раствор подвергают нанофильтрации для удаления патогенов и добавляют гистидин, а в конце добавляют по меньшей мере одну дополнительную аминокислоту, выбранную из аргинина и глицина. Конечный продукт устойчив либо в виде жидкости при 1–8°C, либо в лиофилизированной форме до комнатной температуры.
Эта комбинация стадий процесса приводит к композициям полученного из человеческой плазмы C1–Inh достаточно высокой чистоты, определяемой с помощью эксклюзионной жидкостной хроматографии высокого давления (ЭВЭЖХ или SEC). Композиции C1–Inh настоящего изобретения достаточно стабильны для длительного хранения. Это означает, что образование фрагментов C1–Inh сведено к минимуму, и молекулы мономера C1–Inh имеют низкую тенденцию к образованию полимеров.
Согласно второму аспекту, изобретение относится к набору, состоящему из первой емкости, содержащей препарат C1–Inh согласно первому аспекту, второй емкости, содержащей воду для инъекций, и системы для переноса, которая позволяет выполнять восстановление лиофилизата в стерильных условиях, где препарат C1–Inh лиофилизирован.
Согласно третьему аспекту, изобретение относится к набору, состоящему из шприца, предварительно наполненного препаратом C1–Inh согласно первому аспекту, где препарат C1–Inh является жидкостью, и где препарат стабилен в течение по меньшей мере 12 месяцев в условиях хранения при 1–8°C, в частности в течение по меньшей мере 24 месяцев при 1–8°C.
Согласно четвертому аспекту, изобретение относится к набору, состоящему из шприца, предварительно наполненного препаратом C1–Inh согласно первому аспекту, где препарат C1–Inh является жидкостью, и где препарат стабилен в течение по меньшей мере 12 месяцев в условиях хранения при 1–8°C, в частности в течение по меньшей мере 24 месяцев при 1–8°C.
Согласно пятому аспекту, изобретение относится к применению гистидина для стабилизации C1–Inh, где гистидин добавляют в буфер лекарственной формы C1–Inh, и где концентрация гистидина находится в пределах от 5 до 400 мМ.
Согласно шестому аспекту, изобретение относится к применению гистидина для повышения биодоступности вводимого подкожно C1–Inh, где гистидин добавляют в буфер лекарственной формы C1–Inh перед введением, и где концентрация гистидина находится в пределах от 5 до 400 мМ.
ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На Фигуре 1 показана типичная SEC–хроматограмма композиции C1–Inh, полученной способом, описанным ниже, и применяемой в качестве исходного материала для исследований стабильности. Максимум мономолекулярного сигнала соответствует 9,069 минуты, при этом также интегрированы две немономолекулярных весовых фракции со значениями 7,565 и 11,625 минуты. Площадь под кривой (AUC) мономолекулярного сигнала составляет 99,38% от общей AUC.
На Фигуре 2 показана типичная SEC–хроматограмма композиции C1–Inh, содержащей большие количества немономолекулярной весовой фракции. Мономолекулярный сигнал также преобладает, но его AUC составляет всего 75,38%. Четко видны две немономолекулярных весовых фракции со значениями 7,735 и 10,937 минуты. Такие препараты не были получены процессом, описанным ниже, и не применялись в исследовании стабильности. Целью Фигуры 2 является лишь иллюстрация типичных немономолекулярных весовых фракций. Сигналы, видимые со значениями приблизительно 15–16 минут, вызваны фронтом растворителя, полученным в способе SEC, и, таким образом, не предусмотрены для количественного определения.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
Согласно первому аспекту, настоящее изобретение относится к стабильному препарату, включающему C1–Inh высокой чистоты в лекарственной форме с аминокислотой гистидином. Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что гистидин уже в низких концентрациях способен обеспечить стабильность, в частности стабильность при хранении, препаратов C1–Inh. В частности, концентрации гистидина до 5 мМ позволяют стабилизировать C1–Inh в препаратах. Таким образом, концентрация гистидина составляет по меньшей мере 5 мМ.
При использовании в настоящем изобретении термин "гистидин" относится к протеиногенному L–гистидину. Гистидин может быть добавлен в препарат C1–Inh в чистой форме, в форме моногидрохлорида, моногидрата или в форме другой соли кроме моногидрохлорида. Нижний предел концентрации гистидина может составлять 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 11 мМ, 12 мМ, 13 мМ, 14 мМ или 15 мМ.
Как показано в Примерах, концентрации гистидина 15 мМ и 30 мМ оказывают сильное влияние на стабилизацию препарата C1–Inh. Таким образом, согласно предпочтительному варианту осуществления нижний предел концентрации гистидина составляет 8 мМ. Более предпочтительно нижний предел концентрации гистидина составляет 10 мМ. Наиболее предпочтительно нижний предел концентрации гистидина составляет 15 мМ.
В принципе, в отношении стабилизирующего свойства не должно быть верхнего предела. По практическим причинам и, в частности, с учетом осмоляльности препарата концентрация 400 мМ представляется разумным верхним пределом. Таким образом, согласно одному варианту осуществления концентрация гистидина в препарате C1–Inh составляет 400 мМ или меньше.
Соответственно, концентрация гистидина может составлять, например, 5 мМ, 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 11 мМ, 12 мМ, 13 мМ, 14 мМ, 15 мМ, 16 мМ, 17 мМ, 18 мМ, 19 мМ, или 20 мМ 15 мМ, 20 мМ, 25 мМ, 30 мМ, 35 мМ, 40 мМ, 45 мМ, 50 мМ, 60 мМ, 70 мМ, 80 мМ, 90 мМ, 100 мМ, 110 мМ, 120 мМ, 130 мМ, 140 мМ, 150 мМ, 160 мМ, 170 мМ, 180 мМ, 190 мМ, 200 мМ, 210 мМ, 220 мМ, 230 мМ, 240 мМ, 250 мМ, 260 мМ, 270 мМ, 280 мМ, 290 мМ, 300 мМ, 310 мМ, 320 мМ, 330 мМ, 340 мМ, 350 мМ, 360 мМ, 370 мМ, 380 мМ, 390 мМ или 400 мМ.
Как показано в примерах 200 мМ гистидина позволяет стабилизировать препараты C1–Inh с концентрациями C1–Inh 500 МЕ/мл. Согласно другому варианту осуществления концентрация гистидина составляет 300 мМ или меньше. Согласно другому варианту осуществления концентрация составляет 250 мМ или меньше. Концентрация гистидина также может составлять 200 мМ или меньше.
Согласно одному варианту осуществления концентрация гистидина находится в пределах 5–400 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация гистидина находится в пределах 8–300 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация гистидина находится в пределах 10–250 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация гистидина находится в пределах 12–200 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация гистидина находится в пределах 14–150 мМ.
Термин "высокая чистота" в рамках изобретения определяет белковую композицию с C1–Inh из природного источника, в частности человеческой крови или ее фракции, в качестве основного компонента, где процент других белковых компонентов составляет ниже 2 вес. %. Кроме того, в композиции C1–Inh высокой чистоты C1–Inh находится практически исключительно в мономерном состоянии, т.е. NMF составляет ниже 2 вес. %.
Из–за стабилизирующего эффекта гистидина препарат C1–Inh настоящего изобретения не требует буферных компонентов, обычно используемых для C1–Inh, таких как фосфатный буфер или цитратный буфер. Цитратные буферы имеют недостаток, связанный с тем, что они могут вызывать местные раздражения при введении пациенту.
Таким образом, в препарате C1–Inh согласно изобретению предпочтительно отсутствует фосфатный или цитратный буфер. Более предпочтительно отсутствуют и фосфатный, и цитратный буферы.
Препарат C1–Inh может быть в жидком состоянии или может быть лиофилизированным. Предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является стабильный препарат C1–Inh, который является стабильным в течение по меньшей мере 24 месяцев при 1–30°C, в частности при 1–25°C.
Согласно одному варианту осуществления препарат включает C1–Inh высокой чистоты в концентрации 50–2500 МЕ/мл, такой как в концентрации 50 МЕ/мл, 60 МЕ/мл, 70 МЕ/мл, 80 МЕ/мл, 90 МЕ/мл, 100 МЕ/мл, 150 МЕ/мл, 200 МЕ/мл, 250 МЕ/мл, 300 МЕ/мл, 350 МЕ/мл, 400 МЕ/мл, 450 МЕ/мл, 500 IU/, 550 МЕ/мл, 600 МЕ/мл, 650 МЕ/мл, 700 МЕ/мл, 750 МЕ/мл, 800 МЕ/мл, 850 МЕ/мл, 900 МЕ/мл, 950 МЕ/мл, 10000 МЕ/мл, 1100 МЕ/мл, 1200 МЕ/мл, 1300 МЕ/мл, 1400 МЕ/мл, 1500 МЕ/мл, 1600 МЕ/мл, 1700 МЕ/мл, 1800 МЕ/мл, 1900 МЕ/мл, 2000 МЕ/мл, 2100 МЕ/мл, 2200 МЕ/мл, 2300 МЕ/мл, 2400 МЕ/мл или 2500 МЕ/мл. Предпочтительно концентрация C1–Inh находится в пределах от 100 до 1500 МЕ/мл, более предпочтительно в пределах от 150 до 1000 МЕ/мл. В случае лиофилизированного препарата C1–Inh, в рамках настоящей заявки, концентрация C1–Inh определена как концентрация после восстановления.
Продукт C1–Inh с необходимой чистотой может быть получен следующим способом. Для получения из человеческой плазмы крови композиций C1–Inh достаточно высокой чистоты может быть применен следующий способ очистки.
Гепарин добавляют в охлажденную плазму, обедненную криопреципитатом. После захвата на смоле QAE и последующей элюцией проводят этап инактивации вирусов при использовании комбинации растворителя и детергента (S/D обработка). Обработанный S/D раствор затем разбавляют водой.
Этот разбавленный раствор затем подвергают анионообменной хроматографии, при которой C1–Inh связывается со смолой и затем элюируется с NaCl в буферном растворе. Полученный элюат охлаждают до 5±4°C, после чего начинают осаждение ПЭГ.
Приблизительно 60% раствор ПЭГ–4000 смешивают с элюатом для осаждения нежелательных белков. После удаления осадка, например, с помощью объемной фильтрации, полученный фильтрат C1–Inh смешивают с твердым ПЭГ для осаждения C1–Inh. Твердые частицы отделяют от жидкости, например, с помощью объемной фильтрации, и полученную пасту, которую можно хранить замороженной, сохраняют для последующей обработки, так как она содержит C1–Inh.
Пасту C1–Inh солюбилизируют в буфере при pH=6,0±0,2 и затем очищают полученный раствор. Очищенный раствор подвергают катионообменной хроматографии. Примеси смывают с нагруженной смолы, а затем C1–Inh элюируют с чистотой >90%.
Хроматографию HIC проводят с элюатом после катионообменной хроматографии с получением чистоты C1–Inh >99%. C1–Inh связывают со смолой и при снижении ионной силы элюируют в чистой форме без полимеров и примесей, на что указывает SEC AUC <1%, отличающаяся от мономерного пика. Буфер меняют с помощью ультра/диафильтрации (UDF) с использованием 10 кДа мембраны, против буфера, содержащего гистидин, хлорид натрия и аминокислоты. Полученный после замены буфера элюат C1–Inh подвергают предварительной фильтрации с последующей нанофильтрацией для удаления патогенов. Полученный нанофильтрат затем подвергают еще одной UDF с 10 кДа мембраной для концентрирования до нужной концентрации C1–Inh и добавляют требуемые вспомогательные вещества.
В альтернативе продукт C1–Inh может быть получен с помощью способов, известных из предшествующего уровня техники, таких как Kumar et al.
Было неожиданно обнаружено, что в лиофилизированные препараты настоящего изобретения не требуется добавлять объемообразующие вещества для получения лиофилизационного слоя, позволяющего производить быстрое восстановление.
Препарат C1–Inh согласно первому аспекту может включать другие природные аминокислоты в дополнение к гистидину.
Например, препарат C1–Inh может включать одну, две, три, четыре, пять или шесть дополнительных природных аминокислот. Согласно одному варианту осуществления первого аспекта препарат C1–Inh включает одну или две дополнительные аминокислоты, выбранные из аргинина и глицина.
При использовании в настоящем документе термин "аргинин" относится к протеиногенному L–аргинину. Аргинин может быть добавлен в препарат C1–Inh в чистой форме, в форме моногидрохлорида, моногидрата или в форме другой соли кроме моногидрохлорида. Глицин может быть добавлен в препарат C1–Inh в чистой форме, в форме моногидрохлорида, моногидрата или в форме соли. Аргинин может присутствовать в концентрации в пределах 5–400 мМ. Концентрация аргинина может составлять 5 мМ, 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 15 мМ, 20 мМ, 25 мМ, 30 мМ, 35 мМ, 40 мМ, 45 мМ, 50 мМ, 60 мМ, 70 мМ, 80 мМ, 90 мМ, 100 мМ, 110 мМ, 120 мМ, 130 мМ, 140 мМ, 150 мМ, 160 мМ, 170 мМ, 180 мМ, 190 мМ, 200 мМ, 210 мМ, 220 мМ, 230 мМ, 240 мМ, 250 мМ, 260 мМ, 270 мМ, 280 мМ, 290 мМ, 300 мМ, 310 мМ, 320 мМ, 330 мМ, 340 мМ, 350 мМ, 360 мМ, 370 мМ, 380 мМ, 390 мМ или 400 мМ.
Согласно одному варианту осуществления первого аспекта концентрация аргинина находится в пределах 10–300 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация аргинина находится в пределах 20–250 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация аргинина находится в пределах 30–150 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация аргинина находится в пределах 50–100 мМ.
Глицин может присутствовать в концентрации в пределах 2–200 мМ. Концентрация глицина в препарате C1–Inh может составлять 2 мМ, 3 мМ, 4, мМ, 5 мМ, 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 15 мМ, 20 мМ, 25 мМ, 30 мМ, 35 мМ, 40 мМ, 45 мМ, 50 мМ, 60 мМ, 70 мМ, 80 мМ, 90 мМ, 100 мМ, 110 мМ, 120 мМ, 130 мМ, 140 мМ, 150 мМ, 160 мМ, 170 мМ, 180 мМ, 190 мМ или 200 мМ.
Согласно одному варианту осуществления первого аспекта концентрация глицина находится в пределах 5–200 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация глицина находится в пределах 7–150 мМ. Согласно другому варианту осуществления, концентрация глицина находится в пределах 8–80 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация глицина находится в пределах 9–60 мМ.
Согласно одному варианту осуществления препарат C1–Inh содержит аргинин и глицин. Согласно другому варианту осуществления концентрация аргинина находится в пределах 50–100 мМ, и концентрация глицина находится в пределах 9–60 мМ.
Из экспериментов видно, что, без ограничения теорией, в дополнение к присутствию гистидина для стабильности C1–Inh важна осмоляльность. Согласно одному варианту осуществления первого аспекта осмоляльность препарата C1–Inh находится в пределах от 200 до 800 мОсмоль/кг. Согласно другому варианту осуществления осмоляльность находится в пределах 200–600 мОсмоль/кг. Согласно другому варианту осуществления осмоляльность находится в пределах 250–500 мОсмоль/кг.
Для достижения осмоляльности общая концентрация аминокислот предпочтительно находится в пределах 50–600 мМ. Согласно другому варианту осуществления общая концентрация аминокислот находится в пределах 80–400 мМ. Согласно другому варианту осуществления общая концентрация аминокислот находится в пределах 90–350 мМ. Согласно другому варианту осуществления общая концентрация аминокислот находится в пределах 100–280 мМ.
Препарат C1–Inh согласно изобретению может дополнительно включать соль. Соль предпочтительно выбрана из группы, состоящей из NaCl, NaSO4, MgSO4, MgCl2, CaCl2 и KCl или их смеси.
Соль может присутствовать в концентрации в пределах 5–200 мМ. Концентрация соли в препарате C1–Inh может составлять 5 мМ, 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 15 мМ, 20 мМ, 25 мМ, 30 мМ, 35 мМ, 40 мМ, 45 мМ, 50 мМ, 60 мМ, 70 мМ, 80 мМ, 90 мМ, 100 мМ, 110 мМ, 120 мМ, 130 мМ, 140 мМ, 150 мМ, 160 мМ, 170 мМ, 180 мМ, 190 мМ или 200 мМ.
Согласно одному варианту осуществления концентрация соли находится в пределах 8–150 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация соли находится в пределах 10–100 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация соли находится в пределах 15–80 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация соли находится в пределах 20–60 мМ.
Согласно одному варианту осуществления первого аспекта соль является хлоридом натрия (NaCl).
Таким образом, препарат C1–Inh может включать глицин и хлорид натрия. В альтернативе препарат C1–Inh может включать аргинин и хлорид натрия. Согласно одному варианту осуществления препарат C1–Inh включает аргинин и хлорид натрия.
В лиофилизированном состоянии препарат C1–Inh согласно первому аспекту стабилен в течение по меньшей мере 18 месяцев при 1–30°C, в частности при 1–25°C, где препарат не содержит цитрат или фосфат. Требуемые свойства могут быть получены с помощью лекарственных форм настоящего изобретения в сочетании с чистотой C1–Inh, получаемой с применением способа, описанного выше, или других способов, известных из предшествующего уровня техники, таких как Kumar et al.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является препарат C1–Inh в лиофилизированном состоянии, включающий C1–Inh высокой чистоты в концентрации 50–2500 МЕ/мл после восстановления, в частности 100–1500 МЕ/мл, предпочтительно 150–1000 МЕ/мл, который подходит для подкожного или внутривенного применения, содержит в своем составе гистидин и одну или две дополнительных аминокислоты, выбранных из аргинина и глицина.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является лиофилизированный препарат, включающий C1–Inh высокой чистоты в буфере лекарственной формы, содержащем гистидин, хлорид натрия и одну или вторую дополнительную аминокислоту, выбранную из глицина и аргинина, где препарат имеет осмоляльность 200–800 мОсмоль/кг и значение pH 6,0–8,0, в частности значение pH в пределах 7,0–7,8, предпочтительно значение pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является лиофилизированный препарат, включающий C1–Inh высокой чистоты в буфере лекарственной формы, содержащем гистидин, хлорид натрия и аргинин, где препарат имеет осмоляльность 200–800 мОсмоль/кг, в частности 250–500 мОсмоль/кг, и значение pH 6,0–8,0, в частности значение pH в пределах 7,0–7,8, предпочтительно значение pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является лиофилизированный препарат C1–Inh, включающий буфер лекарственной формы, состоящий из 10–100 мМ хлорида натрия, 5–400 мМ гистидина и 5–400 мМ аргинина, отличающийся осмоляльностью 200–800 мОсмоль/кг, в частности 250–500 мОсмоль/кг, и значением pH 6,0–8,0, в частности значением pH в пределах 7,0–7,8, предпочтительно значением pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является лиофилизированный препарат C1–Inh, содержащий 200±50 МЕ/мл C1–Inh, 25–35 мМ хлорида натрия, 10–20 мМ гистидина и 70–90 мМ аргинина, в частности приблизительно 16 мМ гистидина, приблизительно 80 мМ аргинина, приблизительно 40 мМ глицина и приблизительно 31 мМ NaCl, который доведен до pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является лиофилизированный препарат C1–Inh, содержащий 500±125 МЕ/мл C1–Inh, 25–35 мМ хлорида натрия, 10–20 мМ гистидина и 70–90 мМ аргинина, в частности приблизительно 16 мМ гистидина, приблизительно 80 мМ аргинина, приблизительно 40 мМ глицина и приблизительно 31 мМ NaCl, который доведен до pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является лиофилизированный препарат C1–Inh, содержащий 1000±250 МЕ/мл C1–Inh, 25–35 мМ хлорида натрия, 10–20 мМ гистидина и 70–90 мМ аргинина, в частности приблизительно 16 мМ гистидина, приблизительно 80 мМ аргинина, приблизительно 40 мМ глицина и приблизительно 31 мМ NaCl, который доведен до pH 7,1–7,5.
Согласно одному варианту осуществления первого аспекта препарат, включающий C1–Inh высокой чистоты, является жидким препаратом и стабилен в течение по меньшей мере 12 месяцев при 1–8°C, в частности в течение по меньшей мере 24 месяцев при 1–8°C, где препарат не содержит цитрат или фосфат. Требуемые свойства могут быть получены с помощью лекарственной формы настоящего изобретения в сочетании с чистотой C1–Inh, получаемой способом, описанным выше, или другими способами, известными из предшествующего уровня техники, такими как Kumar et al.
Предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта настоящего изобретения является жидкий препарат C1–Inh, который стабилен в течение по меньшей мере одного месяца при комнатной температуре, в частности при температурах до 25°C. Такой препарат удобно брать в короткие поездки, или пациент может носить его в течение 24 часов в день в качестве возможной экстренной неотложной терапии.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта данного изобретения является жидкий C1–Inh, который стабилен в течение по меньшей мере одного месяца при комнатной температуре, в частности при температурах до 25°C, после того, как он хранился до 13 месяцев при 1–8°C.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является жидкий препарат C1–Inh, включающий C1–Inh высокой чистоты в концентрации 50–2500 МЕ/мл, в частности 100–1500 МЕ/мл, предпочтительно 150–1000 МЕ/мл, который подходит для подкожного или внутривенного применения, содержит гистидин и одну или две дополнительных аминокислот, выбранных из аргинина и глицина.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является жидкий препарат C1–Inh в буфере лекарственной формы, содержащем гистидин, хлорид натрия и одну или вторую дополнительную аминокислоту, выбранную из глицина и аргинина, где препарат имеет осмоляльность 200–800 мОсмоль/кг, в частности 250–500 мОсмоль/кг, и значение pH 6,0–8,0, в частности значение pH в пределах 7,0–7,8, предпочтительно значение pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является жидкий препарат C1–Inh в буфере лекарственной формы, включающем гистидин, хлорид натрия и аргинин, где препарат имеет осмоляльность 200–800 мОсмоль/кг, в частности 250–500 мОсмоль/кг, и значение pH 6,0–8,0, в частности значение pH в пределах 7,0–7,8, предпочтительно значение pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является жидкий препарат, включающий C1–Inh высокой чистоты в буфере лекарственной формы, состоящем из 10–100 мМ хлорида натрия, 5–400 мМ гистидина и 5–400 мМ аргинина, отличающемся осмоляльностью 200–800 мОсмоль/кг, в частности 250–500 мОсмоль/кг, и значением pH 6,0–8,0, в частности значением pH в пределах 7,0–7,8, предпочтительно значением pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления второго аспекта является жидкий препарат C1–Inh в буфере лекарственной формы, состоящем из 10–100 мМ хлорида натрия, 10–100 мМ гистидина и 30–200 мМ аргинина, отличающемся осмоляльностью 200–800 мОсмоль/кг, в частности 250–500 мОсмоль/кг, и значением pH 6,0–8,0, в частности значением pH в пределах 7,0–7,8, предпочтительно значением pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления второго аспекта является жидкий препарат C1–Inh в буфере лекарственной формы, состоящем из 20–50 мМ хлорида натрия, 10–50 мМ гистидина и 50–150 мМ аргинина, отличающемся осмоляльностью 200–800 мОсмоль/кг, в частности 250–500 мОсмоль/кг, и значением pH 6,0–8,0, в частности значением pH в пределах 7,0–7,8, предпочтительно значением pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является жидкий препарат C1–Inh, включающий 25–40 мМ хлорида натрия, 100–140 мМ гистидина, 90–130 мМ аргинина и 5–30 мМ глицина, отличающийся осмоляльностью 380–500 мОсмоль/кг и значением pH 6,0–8,0, в частности значением pH в пределах 7,0–7,8, предпочтительно значением pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является жидкий препарат C1–Inh, включающий 200±50 МЕ/мл C1–Inh, 20–50 мМ хлорида натрия, 10–20 мМ гистидина и 70–90 мМ аргинина, в частности приблизительно 16 мМ гистидина, приблизительно 80 мМ аргинина, приблизительно 40 мМ глицина и приблизительно 31 мМ NaCl, который доведен до pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является жидкий препарат C1–Inh, содержащий 200±50 МЕ/мл C1–Inh, 25–35 мМ хлорида натрия, 10–20 мМ аргинина 70–90 мм гистидина и 35–65 мМ глицина, в частности приблизительно 15 мМ гистидина, приблизительно 80 мМ аргинина, приблизительно 55 мМ глицина и приблизительно 30 мМ NaCl, который доведен до pH 7,1–7,5.
Другой предпочтительный вариант осуществления первого аспекта включает жидкий препарат C1–Inh, содержащий 500±125 МЕ/мл C1–Inh, 25–35 мМ хлорида натрия, 25–35 мМ гистидина и 100–110 мМ аргинина, в частности приблизительно 30 мМ гистидина, приблизительно 105 мМ аргинина и приблизительно 30 мМ NaCl, который доведен до pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является жидкий препарат, включающий C1–Inh высокой чистоты, содержащий в своем составе 500±125 МЕ/мл C1–Inh, 25–35 мМ хлорида натрия, 115–125 мМ гистидина, 105–115 мМ аргинина и 15–25 мМ глицина, в частности приблизительно 120 мМ гистидина, приблизительно 110 мМ аргинина, приблизительно 20 мМ глицина и приблизительно 33 мМ NaCl, который доведен до pH 7,1–7,5.
Другим предпочтительным вариантом осуществления первого аспекта является жидкий препарат C1–Inh, содержащий 1000±250 МЕ/мл C1–Inh, 25–35 мМ хлорида натрия, 10–20 мМ гистидина и 70–90 мМ аргинина, в частности приблизительно 16 мМ гистидина, приблизительно 80 мМ аргинина, приблизительно 40 мМ глицина и приблизительно 31 мМ NaCl, который доведен до pH 7,1–7,5. Препарат C1–Inh согласно первому аспекту, в частности, может применяться для лечения наследственного или врожденного ангионевротического отека (НАО).
Таким образом, согласно второму аспекту изобретения предложен препарат C1–Inh для применения в лечении наследственного или врожденного ангионевротического отека (НАО), где препарат C1–Inh определен согласно первому аспекту.
Препарат C1–Inh можно вводить, в частности, парентерально, например, путем внутривенного, внутримышечного или подкожного введения. Согласно одному варианту осуществления второго аспекта применение отличается подкожным введением препарата C1–Inh.
Авторы настоящего изобретения дополнительно показали, что композиции C1–Inh, изготовленные с гистидином, обладают высокой биодоступностью при подкожном введении. Согласно одному варианту осуществления препарат C1–Inh согласно изобретению имеет биодоступность более 60%, предпочтительно более 70%, более предпочтительно более 80%, наиболее предпочтительно более 90% при подкожном введении по сравнению с внутривенно вводимым C1–Inh в той же дозе. Высокая биодоступность препарата C1–Inh при подкожном введении показана в Таблице 8.
В частности, как подтверждено результатами эксперимента, показанными в Таблице 8, высокие концентрации гистидина приводят к особенно высокой биодоступности C1–Inh при подкожном введении препарата C1–Inh согласно изобретению, в частности, при высоких концентрациях C1–Inh приблизительно 500 МЕ/мл. Таким образом, препараты C1–Inh с концентрацией C1–Inh больше 300 МЕ/мл, в частности от 300 МЕ/мл до 1000 МЕ/мл. Концентрация гистидина предпочтительно находится в пределах от 50 мМ до 400 мМ, более предпочтительно в пределах 70–300 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация гистидина находится в пределах 80–200 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация гистидина находится в пределах 100–150 мМ. Согласно другому варианту осуществления концентрация гистидина находится в пределах 110–130 мМ.
Согласно третьему аспекту изобретения предложен набор, состоящий из первой емкости, содержащей препарат C1–Inh согласно первому аспекту, второй емкости, содержащей воду для инъекций и систему переноса, которые позволяют выполнять восстановление лиофилизата в стерильных условиях. Ресуспендированный препарат C1–Inh перед применением можно хранить до одного месяца при комнатной температуре до 20–25°C.
Согласно четвертому аспекту изобретения предложен набор, состоящий из шприца, предварительно наполненного препаратом C1–Inh согласно первому аспекту, где препарат C1–Inh является жидкостью, и где препарат стабилен в течение по меньшей мере 12 месяцев в условиях хранения при 1–8°C, в частности в течение по меньшей мере 24 месяцев при 1–8°C.
Согласно одному варианту осуществления четвертого аспекта препарат C1–Inh стабилен в течение по меньшей мере 23 месяцев в условиях хранения при 1–8°C и в течение одного дополнительного месяца после нагревания до комнатной температуры при условии, что комнатная температура 20–25°C не была превышена в течение указанного дополнительного месяца. В частности, положительным эффектом набора согласно четвертому аспекту является возможность носить набор без охлаждения, находясь в пути, для экстренного применения в случае острого приступа. Кроме того, благодаря стабильности можно будет все еще безопасно применять набор, например, после 2–3 недель при комнатной температуре, с целью профилактического лечения. Профилактическое лечение обычно проводят два раза в неделю.
Согласно другому варианту осуществления четвертого аспекта набор состоит из устройства, подходящего для п/к применения, такого как "нательный инъектор", предварительно наполненный препаратом C1–Inh согласно первому аспекту, где препарат C1–Inh является жидкостью, где препарат стабилен в течение по меньшей мере 23 месяцев в условиях хранения при 1–8°C и в течение по меньшей мере одного дополнительного месяца после нагревания до комнатной температуры при условии, что комнатная температура 20–25°C не была превышена в течение указанного дополнительного месяца.
Согласно пятому аспекту изобретение относится к применению гистидина для стабилизации C1–Inh, где гистидин добавляют в буфер лекарственной формы C1–Inh, и где концентрация гистидина находится в пределах от 5 до 400 мМ.
В применении согласно пятому аспекту может использоваться концентрация гистидина, как определено для препарата C1–Inh согласно первому аспекту. Кроме того, может использоваться концентрация C1–Inh, как определено для препарата C1–Inh согласно первому аспекту. Буфер лекарственной формы C1–Inh может дополнительно содержать любой из компонентов, определенных для препарата C1–Inh согласно первому аспекту. Препарат C1–Inh, который стабилизирован гистидином, может быть жидким или лиофилизированным.
Кроме того, отношение между молярной концентрацией гистидина и содержанием C1–Inh в МЕ/мл может быть в пределах от 1 (мМ):500 (МЕ/мл) до 8:1. Предпочтительно, отношение между молярной концентрацией гистидина и содержанием C1–Inh в МЕ/мл находится в пределах от 1:50 до 4:1, более предпочтительно отношение между молярной концентрацией гистидина и содержанием C1–Inh в МЕ/мл находится в пределах от 1:20 до 1:1.
Согласно шестому аспекту изобретение относится к применению гистидина для увеличения биодоступности подкожно вводимого C1–Inh, где гистидин добавляют в буфер лекарственной формы C1–Inh перед введением, и где концентрация гистидина находится в пределах от 5 до 400 мМ.
В применении согласно шестому аспекту может использоваться концентрация гистидина, как определено для препарата C1–Inh согласно первому аспекту. Кроме того, может использоваться концентрация C1–Inh, как определено для препарата C1–Inh согласно первому аспекту. Буфер лекарственной формы C1–Inh может дополнительно содержать любой из компонентов, определенных для препарата C1–Inh согласно первому аспекту. Препарат C1–Inh, который стабилизирован гистидином, может быть жидким или лиофилизированным.
Для достижения высокой биодоступности подкожно вводимого C1–Inh, отношение между молярной концентрацией гистидина и содержанием C1–Inh в МЕ/мл может быть в пределах от 1 (мМ):500 (МЕ/мл) до 8:1. Предпочтительно отношение между молярной концентрацией гистидина и содержанием C1–Inh в МЕ/мл находится в пределах от 1:50 до 4:1. более предпочтительно отношение между молярной концентрацией гистидина и содержанием C1–Inh в МЕ/мл находится в пределах от 1:10 до 1:1.
Определение чистоты с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC)
SEC используют для определения чистоты раствора C1–ингибитора. Может использоваться стандартная система ВЭЖХ, оборудованная SEC колонкой Tosoh TSKgel® – Super SW3000 и УФ–детектором при 280 нм. Рабочий буфер содержит 40 мМ фосфата натрия и 300 мМ хлорида натрия при pH=6,95, при этом используется рекомендуемая производителем колонки скорость потока 0,3 мл/мин.
Для оценки хроматограммы интегрируют и суммируют площади под кривой образца продукта и вычисляют отдельные площади пиков в % от общей площади пиков. Мономолекулярный C1–Inh элюируется примерно за 9,2 минуты, а сигналы до или после этого основного сигнала представляют немономерную фракцию. Хорошие результаты получают при описанных выше условиях с концентрациями белка приблизительно 5 мг/мл, объемом вводимой пробы 10 мкл и интегрированием с 2 до 13 минут. Сигнал мономолекулярного C1–Inh является основным, и его интегрирование с 8,6 до 10,3 минут дает хорошие результаты для достаточно чистых препаратов.
Определение биодоступности
Для определения биодоступности C1–Inh, вводимого подкожно, по сравнению с C1–Inh, вводимого внутривенно, проводили исследование на животных. Из–за сходства кожи человека и свиньи в качестве животных выбрали свиней. Определяли фармакокинетику вводимого п/к и в/в C1–Inh и вычисляли биодоступность вводимого п/к C1–Inh в % от площади под кривой (AUC) вводимого в/в C1–Inh в такой же дозе (МЕ/кг). Уровни C1–Inh в крови контролировали в течение 168 часов после однократного введения.
Определение стабильности
Стабильность согласно настоящему изобретению относится к стабильности при хранении, то есть, в частности, к низкой склонности к образованию агрегатов при хранении в течение определенного периода, в частности, более 6 месяцев. Таким образом, препарат считается "стабильным" и обычно имеет низкую склонность к образованию агрегатов. Стабильность конкретного препарата также зависит от заданного времени, температуры хранения и агрегатного состояния.
Таким образом, лиофилизированный препарат C1–Inh считается стабильным в течение определенного периода, если количество немономерной фракции составляет меньше 4% после хранения при температуре 25°C или ниже в течение определенного периода. Например, препарат считается стабильным в течение по меньшей мере 12 месяцев, если в течение периода хранения длительностью 12 месяцев при температуре 25°C или ниже содержание NMF оставалось ниже 4%.
Жидкий препарат C1–Inh считается стабильным в течение определенного периода, если количество немономерной фракции составляет меньше 4% после хранения при температуре 5°C или ниже в течение определенного периода. Например, жидкий препарат считается стабильным в течение по меньшей мере 12 месяцев, если в течение периода хранения длительностью 12 месяцев при температуре 5°C содержание NMF оставалось ниже 4%.
Жидкий препарат C1–Inh считается стабильным в течение определенного периода, если количество немономерной фракции составляет меньше 15% после хранения при температуре 15°C или ниже в течение определенного периода. Например, жидкий препарат считается стабильным в течение по меньшей мере 10 месяцев, если в течение периода хранения длительностью 10 месяцев при температуре 15°C содержание NMF оставалось ниже 15%.
"Немономерная фракция", "немономолекулярная весовая фракция" или "NMF" относятся к любому компоненту с другой молекулярной массой, чем у мономерного C1–Inh, например, агрегированного C1–Inh, фрагмента C1–Inh или белковых примесей. При SEC, NMF элюируется до или после основного сигнала C1–Inh.
ПРИМЕРЫ
Аргинин и гистидин обычно использовали в виде моногидрохлорида, если не указано иное.
Лиофилизированные препараты согласно настоящему изобретению
Препаратлио 1 (Plyo 1) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 15 мМ гистидина, 80 мМ аргинина, 40 мМ глицина и 30 мМ NaCl, pH 7,3. Препарат Plyo 1 имел расчетную осмоляльность 290 мОсмоль/кг.
Препаратлио 2 (Plyo 2) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 50 мМ гистидина, 67 мМ аргинина и 28 мМ NaCl, pH 7,4. Препарат Plyo 2 имел расчетную осмоляльность приблизительно 290 мОсмоль/кг.
Препаратлио 3 (Plyo 3) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 25 мМ гистидина, 66 мМ аргинина, 9 мМ глицина и 49 мМ NaCl, pH 7,3. Препарат Plyo 3 имел расчетную осмоляльность приблизительно 290 мОсмоль/кг.
Препаратлио 4 (Plyo 4) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 25 мМ гистидина, 100 мМ аргинина и 21 мМ NaCl, pH 7,3. Препарат Plyo 4 имел расчетную осмоляльность приблизительно 290 мОсмоль/кг.
Препаратлио 6 (Plyo 6) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 10 мМ гистидина, 50 мМ аргинина, 80 мМ глицина и 50 мМ NaCl, pH 7,3. Препарат Plyo 6 имел расчетную осмоляльность приблизительно 300 мОсмоль/кг.
Препаратлио 5 (Plyo 5) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 10 мМ гистидина, 74 мМ аргинина, 9 мМ глицина и 57 мМ NaCl, pH 7,3. Препарат Plyo 5 имел расчетную осмоляльность приблизительно 290 мОсмоль/кг.
Жидкие препараты согласно настоящему изобретению
Препарат 1 (P1) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 15 мМ гистидина основания, 80 мМ аргинина, 55 мМ глицина и 30 мМ NaCl, pH 7,4. Препарат P1 имел расчетную осмоляльность приблизительно 290 мОсмоль/кг.
Препарат 2 (P2) состоял из 500 МЕ/мл C1–Inh, 30 мМ гистидина основания, 105 мМ аргинина и 30 мМ NaCl, pH 7,3. Препарат P2 имел осмоляльность приблизительно 300 мОсмоль/кг.
Препарат 3 (P3) состоял из 520 МЕ/мл C1–Inh, 120 мМ гистидина основания, 110 мМ аргинина, 20 мМ глицина и 33 мМ NaCl, pH 7,3. Препарат P3 имел осмоляльность приблизительно 430 мОсмоль/кг.
Сравнительные препараты, содержащие C1–Inh такой же высокой чистоты, но изготовленные не в соответствии с настоящим изобретением
Лиофилизированные препараты не в соответствии с настоящим изобретением
Сравнительный Препаратлио 1 (CPlyo 1) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 0 мМ гистидина (без гистидина), 80 мМ аргинина, 40 мМ глицина и 45 мМ NaCl, pH 7,3. Препарат CPlyo 1 имел расчетную осмоляльность приблизительно 290 мОсмоль/кг.
Сравнительный Препаратлио 2 (CPlyo 2) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 0 мМ гистидина (без гистидина), 50 мМ аргинин, 80 мМ глицина и 50 мМ NaCl, pH 7,3. Препарат CPlyo 2 имел расчетную осмоляльность приблизительно 280 мОсмоль/кг.
Жидкие препараты не в соответствии с настоящим изобретением
Сравнительный Препарат 1 (CP 1) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 137 мМ хлорида натрия, 2,7 мМ хлорида калия, 10 мМ гидрофосфата динатрия и 1,8 мМ дигидрофосфата калия, pH 7,3. Препарат CP 1 имел расчетную осмоляльность приблизительно 315 мОсмоль/кг.
Сравнительный Препарат 2 (CP 2) состоял из 200 МЕ/мл C1–Inh, 70,2 мМ хлорида натрия, 61,3 мМ сахарозы, 10,1 мМ цитрата натрия, 17,1 мМ L–валина, 13,5 мМ L–аланина и 37,8 мМ L–треонина, pH 7,0. Препарат CP 2 имел расчетную осмоляльность приблизительно 380 мОсмоль/кг.
Результаты
Данные SEC для немономерной фракции (NMF) обозначены в таблицах как NMF.
Таблица 1 содержит данные SEC, приведенные в % от общей площади лиофилизированных препаратов согласно изобретению, определенные непосредственно после изготовления лекарственной формы (to) и после хранения в течение нескольких месяцев при 25°C.
Таблица 2 содержит данные SEC, приведенные в % от общей площади лиофилизированных препаратов, которые не соответствуют настоящему изобретению. Данные SEC определяли непосредственно после изготовления лекарственной формы (to) и после хранения в течение нескольких месяцев при 25°C.
Таблица 3 содержит данные SEC, приведенные в % от общей площади жидких препаратов согласно изобретению, определенные непосредственно после изготовления лекарственной формы (to) и после хранения в течение нескольких месяцев при 5°C.
Таблица 4 содержит данные SEC, приведенные в % от общей площади жидких препаратов, которые не соответствуют настоящему изобретению. Данные SEC определяли непосредственно после изготовления лекарственной формы (to) и после хранения в течение нескольких месяцев при 5°C.
Таблица 5 содержит данные SEC, приведенные в % от общей площади жидких препаратов согласно изобретению, определенные непосредственно после изготовления лекарственной формы (to) и после хранения в течение нескольких месяцев при 15°C.
Таблица 6 содержит данные SEC, приведенные в % от общей площади жидких препаратов, которые не соответствуют настоящему изобретению. Данные SEC определяли непосредственно после изготовления лекарственной формы (to) и после хранения в течение нескольких месяцев при 15°C.
Таблица 7 содержит данные SEC, приведенные в % от общей площади жидких препаратов согласно изобретению, определенные непосредственно после изготовления лекарственной формы (to) и после хранения в течение одного месяца при 25°C.
Таблица 8 содержит данные, которые относятся к кинетике препаратов C1–ингибитора, применяемых подкожно и соответственно внутривенно. Данные приведены в % от площади под кривой (AUC) введенного внутривенно C1–ингибитора согласно такой же схеме применения, т.е. биодоступность.
t0 | 1 месяц | 3 месяца | 6 месяцев | |
Plyo 1 Мономол. C1I |
99,59 | 99,49 | 99,47 | 99,47 |
Plyo 1 NMF | 0,41 | 0,51 | 0,53 | 0,53 |
Plyo 2 Мономол. C1I |
99,60 | 99,58 | 99,38 | 99,33 |
Plyo 2 NMF | 0,40 | 0,42 | 0,62 | 0,67 |
Plyo 3 Мономол. C1I |
99,61 | 99,56 | 99,33 | 99,37 |
Plyo 3 NMF | 0,39 | 0,44 | 0,67 | 0,63 |
Plyo 4 Мономол. C1I |
99,61 | 99,53 | 99,48 | 99,36 |
Plyo 4 NMF | 0,39 | 0,47 | 0,52 | 0,64 |
Plyo 5 Мономол. C1I |
99,59 | 99,51 | 99,28 | 99,40 |
Plyo 5 NMF | 0,41 | 0,49 | 0,72 | 0,60 |
Plyo 6 Мономол. C1I | 99,54 | 99,47 | 99,37 | 99,17 |
Plyo 6 NMF | 0,46 | 0,53 | 0,63 | 0,83 |
Таблица 1 (лиофилизированный, 25°C) – значения приведены в [%]
t0 | 1 месяц | 3 месяца | 6 месяцев | |
CPlyo 1 Мономол. C1I |
99,58 | 99,48 | 99,25 | 99,09 |
CPlyo 1 NMF | 0,42 | 0,52 | 0,75 | 0,91 |
CPlyo 2 Мономол. C1I |
99,58 | 99,50 | 99,33 | 99,37 |
CPlyo 2 NMF | 0,42 | 0,50 | 0,67 | 0,63 |
Таблица 2 (лиофилизированный, 25°C) – значения приведены в [%]
t0 | 1,5 месяца | 2 месяца | 4 месяца | 10 месяцев | 13 месяцев | |
P1 Мономол. C1I |
99,57 | 99,56 | 99,28 | 98,96 | 98,75 | 98,77 |
P1 NMF | 0,43 | 0,44 | 0,72 | 1,04 | 1,25 | 1,23 |
P2 Мономол. C1I |
99,55 | 99,59 | 99,38 | 99,24 | 99,04 | 99,00 |
P2 NMF | 0,45 | 0,41 | 0,62 | 0,76 | 0,96 | 1,00 |
Таблица 3 (жидкий, 5°C) – значения приведены в [%]
t0 | 4 месяца | 6 месяцев | 9 месяцев | |
CP1 Мономол. C1I |
98,24 | n.d. | 90,83 | 89,31 |
CP1 NMF | 1,76 | n.d. | 9,17 | 10,69 |
CP2 Мономол. C1I |
97,51 | n.d. | 76,57 | 80,30 |
CP2 NMF | 2,49 | n.d. | 23,43 | 19,7 |
Таблица 4 (жидкий, 5°C) – значения приведены в [%]; n.d. – не определяли
t0 | 1,5 месяца | 2 месяца | 4 месяца | 9 месяцев | 13 месяцев | |
P1 Мономол. C1I |
99,55 | 99,02 | 98,60 | 97,64 | 88,94 | 84,59 |
P1 NMF | 0,45 | 0,98 | 1,40 | 2,36 | 11,06 | 15,41 |
P2 Мономол. C1I |
99,55 | 99,11 | 98,71 | 97,85 | 89,60 | 85,48 |
P2 NMF | 0,45 | 0,89 | 1,29 | 2,15 | 10,40 | 14,52 |
Таблица 5 (жидкий, 15°C) – значения приведены в [%]
t0 | 1,5 месяца | 2 месяца | 4 месяца | 9 месяцев | |
CP1 Мономол. C1I |
98,24 | n.d. | n.d. | n.d. | 83,43 |
CP1 NMF | 1,76 | n.d. | n.d. | n.d. | 16,57 |
CP2 Мономол. C1I |
97,51 | n.d. | n.d. | n.d. | 71,50 |
CP2 NMF | 2,49 | n.d. | n.d. | n.d. | 28,5 |
Таблица 6 (жидкий, 15°C) – значения приведены в [%]; n.d. – не определяли
t0 | 1 месяц | |
P1 Мономол. C1I |
99,55 | 97,36 |
P1 NMF | 0,45 | 2,64 |
P2 Мономол. C1I |
99,55 | 97,83 |
P2 NMF | 0,45 | 2,17 |
Таблица 7 (жидкий, 25°C) – значения приведены в [%]
Применяемая доза [МЕ/кг] | % AUC для в/в | |
P2 в/в | 40 | 100 |
P2 п/к | 40 | 72 |
P2 в/в | 70 | 100 |
P2 п/к | 70 | 75 |
P3 в/в | 40 | 100 |
P3 п/к | 40 | 95 |
Таблица 8 Биодоступность C1–ингибитора подкожно вводимых препаратов по сравнению с внутривенно вводимыми препаратами в такой же дозе.
ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ ИСТОЧНИКИ
Kumar et al. C1–Esterase Inhibitor from Human Plasma – An Improved Process to Achieve Therapeutic Grade Purity; J. BIOPROCESS BIOTECH. 2014; 4 (6):174.
Sim and Reboul. Preparation and Properties of Human C1 Inhibitor; METHODS IN ENZYMOLOGY. 1981; Vol. 80:43–54.
Prograis et al. Purification of C1 Inhibitor; JOURNAL OF IMMUNOLOGICAL METHODS. 1987; Vol. 99:113–122.
Teh and Froger. Evaluation of the chromatographie procedure for the preparation of a high–purity C1–esterase inhibitor concentrate from cryosupernatant plasma; JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY. 1992; Vol. 582:65–70.
Feussner et al. Biochemical comparison of four commercially available C1 esterase inhibitor concentrates for treatment of hereditary angioedema; TRANSFUSION. 2014; 54:2566–2573.
Claims (31)
1. Препарат ингибитора C1-эстеразы (C1-Inh), где препарат C1-Inh содержит гистидин в концентрации в пределах 8-300 мМ, но не содержит цитрат или фосфат, причем препарат C1-Inh содержит аргинин и необязательно глицин, причем концентрация аргинина находится в диапазоне от 20 до 250 мМ, а концентрация глицина находится в диапазоне от 5 до 200 мМ, и причем осмоляльность препарата C1-Inh находится в диапазоне от 250 до 500 мОсмоль/кг.
2. Препарат C1-Inh по п. 1, где концентрация гистидина находится в пределах 10-250 мМ, предпочтительно в пределах 12-200 мМ, более предпочтительно в пределах 14-150 мМ.
3. Препарат C1-Inh по п. 1, где C1-Inh находится в концентрации в пределах 50-2500 МЕ/мл, предпочтительно в пределах 100-1500 МЕ/мл, более предпочтительно 150-1000 МЕ/мл.
4. Препарат C1-Inh по п.1 или 2, где препарат C1-Inh подходит для подкожного или внутривенного применения.
5. Препарат C1-Inh по п. 4, где концентрация аргинина находится в пределах 30-150 мМ, предпочтительно в пределах 50-120 мМ.
6. Препарат C1-Inh по п. 5, где концентрация глицина находится в пределах 7-150 мМ, предпочтительно в пределах 8-120 мМ, предпочтительно концентрация глицина находится в пределах 9-60 мМ.
7. Препарат C1-Inh по любому из пп. 1-6, дополнительно включающий соль, выбранную из группы, состоящей из NaCl, NaSO4, MgSO4, MgCl2, CaCl2 и KCl или их смеси, предпочтительно хлорид натрия, где концентрация соли предпочтительно находится в пределах 8-150 мМ, более предпочтительно в пределах 10-100 мМ, наиболее предпочтительно в пределах 15-80 мМ.
8. Препарат C1-Inh по любому из пп. 1-7, где pH препарата находится в пределах 6,0-8,0, предпочтительно в пределах 7,0-7,8, более предпочтительно в пределах 7,1-7,5.
9. Препарат C1-Inh по любому из пп. 1-8, где общая концентрация аминокислот в препарате C1-Inh находится в пределах 50-600 мМ, предпочтительно в пределах 80-400 мМ, более предпочтительно в пределах 90-350 мМ, наиболее предпочтительно в пределах 100-350 мМ.
10. Препарат C1-Inh по любому из пп. 1-9, где препарат C1-Inh лиофилизирован.
11. Препарат C1-Inh по п. 10, содержащий хлорид натрия и аргинин, отличающийся осмоляльностью 250-500 мОсмоль/кг и значением pH 6,0-8,0, в частности 7,0-7,8, предпочтительно значением pH 7,1-7,5.
12. Препарат C1-Inh по п. 10, содержащий 10-100 мМ хлорида натрия, 8-300 мМ гистидина и 20-250 мМ аргинина.
13. Препарат C1-Inh по п. 10, содержащий 25-35 мМ хлорида натрия, 10-20 мМ гистидина и 70-90 мМ аргинина, отличающийся осмоляльностью 250-500 мОсмоль/кг и значением pH 7,1-7,5.
14. Препарат C1-Inh по п. 10, содержащий 25-35 мМ хлорида натрия, 20-40 мМ гистидина и 90-115 мМ аргинина, отличающийся осмоляльностью 250-500 мОсмоль/кг и значением pH 7,1-7,5.
15. Препарат C1-Inh по п. 10, содержащий 25-40 мМ хлорида натрия, 100-140 мМ гистидина, 90-130 мМ аргинина и 5-30 мМ глицина, отличающийся осмоляльностью 380-500 мОсмоль/кг и значением pH 7,1-7,5.
16. Препарат C1-Inh по пп. 10-15, отличающийся биодоступностью подкожно применяемого C1-Inh больше 60% от применяемого внутривенно C1-Inh, вводимого в такой же дозе, определенной как площадь под кривой (AUC) за 168 часов.
17. Препарат C1-Inh по любому из пп. 11-16, отличающийся стабильностью в течение по меньшей мере 24 месяцев в условиях хранения при 1-35°C, в частности, при 1-30°C, еще более конкретно при 1-25°C.
18. Препарат C1-Inh по любому из пп. 1-9, где препарат является жидкостью.
19. Препарат C1-Inh по п. 18, содержащий хлорид натрия и аргинин, отличающийся осмоляльностью 250-500 мОсмоль/кг и значением pH 6,0-8,0, в частности, 7,0-7,8, еще более конкретно значением pH 7,1-7,5.
20. Препарат C1-Inh по п. 18, содержащий 10-100 мМ хлорида натрия, 8-300 мМ гистидина и 20-250 мМ аргинина, отличающийся осмоляльностью 250-500 мОсмоль/кг и значением pH 7,1-7,5.
21. Препарат C1-Inh по п. 18, содержащий 10-100 мМ хлорида натрия, 10-100 мМ гистидина и 30-200 мМ аргинина, отличающийся осмоляльностью 250-500 мОсмоль/кг и значением pH 6,0-8,0.
22. Препарат C1-Inh по п. 18, содержащий 25-35 мМ хлорида натрия, 100-140 мМ гистидина, 90-130 мМ аргинина и 5-30 мМ глицина, отличающийся осмоляльностью 380-500 мОсмоль/кг и значением pH 7,1-7,5.
23. Препарат C1-Inh по п. 18, содержащий 25-35 мМ хлорида натрия, 20-40 мМ гистидина и 90-115 мМ аргинина, отличающийся осмоляльностью 250-350 мОсмоль/кг и значением pH 7,1-7,5.
24. Препарат C1-Inh по п. 18, содержащий 25-35 мМ хлорида натрия, 10-20 мМ гистидина, 70-90 мМ аргинина и 35-65 мМ глицина и имеющий значение pH 7,1-7,5.
25. Препараты C1-Inh по пп. 18-24, отличающиеся стабильностью в течение по меньшей мере 12 месяцев при 1-8°C, в частности, стабильностью в течение по меньшей мере 24 месяцев при 1-8°C.
26. Препараты C1-Inh по пп. 18-25, отличающиеся биодоступностью подкожно применяемого C1-Inh больше 60% от применяемого внутривенно C1-Inh, вводимого в такой же дозе, определяемой как AUC за 168 часов.
27. Применение препарата C1-Inh в лечении наследственного или врожденного ангионевротического отека (НАО), где препарат C1-Inh определен согласно любому из пп. 1-26.
28. Набор для лечения НАО, состоящий из первой емкости, содержащей препарат C1-Inh по любому из пп. 10-17, второй емкости, содержащей воду для инъекций, системы переноса, позволяющей производить восстановление лиофилизата в стерильных условиях, где ресуспендированный препарат C1-Inh можно хранить при комнатной температуре до одного месяца перед применением.
29. Шприц, предварительно наполненный препаратом C1-Inh по любому из пп. 18-27, для лечения НАО, где препарат стабилен в течение по меньшей мере 12 месяцев в условиях хранения при 1-8°C, в частности, в течение по меньшей мере 24 месяцев при 1-8°C.
30. Шприц, предварительно наполненный препаратами C1-Inh по пп. 18-27, для лечения НАО, где препарат стабилен в течение по меньшей мере 12 месяцев в условиях хранения при 1-8°C и в течение одного дополнительного месяца после нагревания до комнатной температуры, при условии, что комнатная температура 20-25°C в течение указанного дополнительного месяца не была превышена.
31. Устройство, подходящее для подкожного применения, такое как "нательный инъектор", предварительно наполненное препаратами C1-Inh по пп. 18-27, для лечения НАО, где препарат стабилен в течение по меньшей мере 12 месяцев в условиях хранения при 1-8°C и в течение одного дополнительного месяца после нагревания до комнатной температуры, при условии, что комнатная температура 20-25°C в течение указанного дополнительного месяца не была превышена.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP17171352.2 | 2017-05-16 | ||
EP17171352 | 2017-05-16 | ||
PCT/EP2018/062766 WO2018210944A1 (en) | 2017-05-16 | 2018-05-16 | C1-esterase inhibitor preparation |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2019141288A RU2019141288A (ru) | 2021-06-16 |
RU2019141288A3 RU2019141288A3 (ru) | 2021-09-13 |
RU2785431C2 true RU2785431C2 (ru) | 2022-12-07 |
Family
ID=
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5681750A (en) * | 1994-07-28 | 1997-10-28 | Association Pour L'essor De La Transfusion Sanguine Dans | Process for preparing a C1-esterase inhibitor concentrate (C1-INH), and concentrate obtained, for therapeutic use |
WO2009073569A2 (en) * | 2007-11-30 | 2009-06-11 | Abbott Laboratories | Protein formulations and methods of making same |
WO2016131958A1 (en) * | 2015-02-20 | 2016-08-25 | Csl Behring Gmbh | Pharmaceutical formulations of c1 esterase inhibitor |
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5681750A (en) * | 1994-07-28 | 1997-10-28 | Association Pour L'essor De La Transfusion Sanguine Dans | Process for preparing a C1-esterase inhibitor concentrate (C1-INH), and concentrate obtained, for therapeutic use |
WO2009073569A2 (en) * | 2007-11-30 | 2009-06-11 | Abbott Laboratories | Protein formulations and methods of making same |
WO2016131958A1 (en) * | 2015-02-20 | 2016-08-25 | Csl Behring Gmbh | Pharmaceutical formulations of c1 esterase inhibitor |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
TWI285112B (en) | Pharmaceutical preparation of recombinant factor VIII lyophilized without albumin as a stabilizer | |
US5945098A (en) | Stable intravenously-administrable immune globulin preparation | |
RU2510279C2 (ru) | Новые защитные композиции для рекомбинантного фактора viii | |
IL172844A (en) | Process for obtaining cryoprecipitable proteins including a virus inactivation step | |
WO1997002832A1 (fr) | Preparations lyophilisees de hgf | |
AU2004200745B8 (en) | Process for Removing Viruses in Fibrinogen Solutions and Fibrinogen Obtained by Said Process | |
EP0148843B2 (en) | A concentrate of the antihemophilic factor viii and a process for producing it | |
JP4871720B2 (ja) | 血清アルブミンを含まない、安定なヒトエリスロポエチン水溶液 | |
JP4668904B2 (ja) | α1−アンチトリプシン溶液の製造方法 | |
KR101897534B1 (ko) | 건조한 트랜스글루타미나제 조성물 | |
CN109071596B (zh) | 用于纯化纤维蛋白原的方法 | |
RU2785431C2 (ru) | Препарат ингибитора c1-эстеразы | |
AU2018269656B2 (en) | C1-esterase inhibitor preparation | |
JPS61189228A (ja) | 血液凝固第8因子製剤の製法 | |
CN102430116A (zh) | 用于人凝血因子ⅷ制剂的干热处理方法及其稳定剂 | |
AU2017305856A1 (en) | Pharmaceutical formulations of C1 esterase inhibitor | |
CN115768789A (zh) | 用于获得包含人血浆来源的免疫球蛋白m的组合物的方法 | |
JP2024528312A (ja) | ヒト血漿由来第viii因子/フォンヴィレブラント因子の製造方法および得られた組成物 | |
CN115397847A (zh) | 由c-1抑制剂耗尽的血浆生产免疫球蛋白制剂的方法 | |
WO2002060475A1 (en) | Methods for stabilizing lyophilized blood proteins | |
MXPA06001112A (en) | Process for preparing an alpha-1-antitrypsin solution | |
DK157170B (da) | Koncentrat af den anti-haemofile faktor viii samt fremgangsmaade til fremstilling deraf |