CN110760451B - 一株解脂耶式酵母及其在制备低糖低脂椰蓉营养粉中的用途 - Google Patents
一株解脂耶式酵母及其在制备低糖低脂椰蓉营养粉中的用途 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一株解脂耶式酵母及其在制备低糖低脂椰蓉营养粉中的用途。该解脂耶式酵母的保藏编号为GDMCC No:60782，于2019年9月20日保藏于位于广州市先烈中路100号大院59栋5楼广东省微生物研究所的广东省微生物菌种保藏中心。本发明通过将椰蓉与水混合，加热；接着将加热处理后的椰蓉打浆，将得到的椰浆均质，调节pH值，灭菌，得到椰蓉悬液；在冷却的椰蓉悬液中接入解脂耶式酵母的培养液，发酵；将得到的发酵液灭菌，喷雾干燥，粉碎，得到低糖低脂椰蓉营养粉。该低糖低脂椰蓉营养粉营养丰富，低糖低脂，椰香风味浓郁，适宜作为所有人群的冲调食品。
Description
技术领域
本发明属于微生物和食品加工技术领域，特别涉及一株解脂耶式酵母及其在制备低糖低脂椰蓉营养粉中的用途。
背景技术
椰子属于棕榈科椰子属，是热带地区主要的木本油料作物之一。全世界椰子产区是印度尼西亚、菲律宾、印度、斯里兰卡、马来西亚、泰国和我国的海南省，总产量约为60亿个。椰蓉是椰肉榨汁后的剩余部分，一般情况下，椰蓉的成分为：水分3％左右，油脂45％左右，糖分2％左右，蛋白质8％左右，膳食纤维40％左右，灰分2％左右。
椰蓉含有丰富的膳食纤维和蛋白质，具有极高的营养价值和生理功能。随着人们生活水平的提高，过度饮食和高能量物质过多摄入，产生很多“亚健康”和“富贵病”现象。膳食纤维对改善当前膳食结构有较好的促进作用，受到了广泛关注，被誉为人类第七种营养素。大量研究表明，膳食纤维具有改善大肠蠕动、防止便秘、清除肠道毒素、预防结肠癌、降低血压、降低血糖、降低胆固醇等功能。椰子蛋白含有18种氨基酸，必需氨基酸配比合理，L-精氨酸高达14.8％，研究人员发现椰子蛋白具有降低血脂、降低胆固醇、提高免疫力等功效。
目前，椰蓉主要用于烘焙食品的馅料，价格比较低。为了开拓椰蓉的高附加值利用途径，有必要充分利用椰蓉中的膳食纤维和蛋白质，开发高价值的营养食品。由于椰蓉的油脂含量丰富，不适宜直接作为营养食品，需对椰子油脂进行去除处理。
目前，尚未生物方法对椰蓉油脂处理的相关报道。
发明内容
为了创新椰蓉营养粉产品，解决椰蓉的低值应用问题，本发明发明人在对椰蓉油脂处理的研究中，发现一株解脂耶式酵母，其分解椰子油的能力优异。从而，本发明的首要目的在于提供一株解脂耶式酵母。
本发明的另一目的在于提供所述的解脂耶式酵母在食品领域中的用途。
本发明的再一目的在于提供一种低糖低脂椰蓉营养粉。
为实现上述目的，本发明通过下述技术方案实现：
一株解脂耶式酵母，名称为解脂耶式酵母(Yarrowia lipolytica)YD19，保藏编号为GDMCC No:60782，于2019年9月20日保藏于位于广州市先烈中路100号大院59栋5楼广东省微生物研究所的广东省微生物菌种保藏中心。
所述的解脂耶式酵母能以糖和脂肪作为碳源，分解脂肪的性能优异，适合在食品领域中进行应用；更适合用于制备低糖低脂椰蓉营养粉。
所述的脂肪优选为椰子油。
一种低糖低脂椰蓉营养粉，通过如下步骤制备得到：
(1)椰蓉的预处理：将椰蓉与水混合，加热，目的是为了使椰蓉软化；接着将加热处理后的椰蓉打浆，将得到的椰浆均质，调节pH值，灭菌，得到椰蓉悬液；
(2)发酵与后处理：将上述解脂耶式酵母的培养液接种于冷却的椰蓉悬液中，发酵；将得到的发酵液灭菌，减压蒸发浓缩，喷雾干燥，粉碎，得到低糖低脂椰蓉营养粉。
步骤(1)中所述的水优选为纯净水。
所述的水的用量优选按椰蓉：水＝质量比1：(22～24)配比计算。
步骤(1)中所述的加热的条件优选为：于120～130℃加热30～60min。
步骤(1)中所述的打浆的条件优选为：于6000～8000r/min的转速匀浆。
步骤(1)中所述的均质的压力优选为30～40MPa。
所述的均质的次数优选为2～3次。
所述的pH值优选为6.0～7.0。
步骤(1)中所述的灭菌的条件优选为：于115～121℃灭菌10～30min；更优选为于121℃灭菌10～15min。
步骤(2)中所述的解脂耶式酵母培养液优选为摇瓶培养液；优选通过如下步骤制备得到：将解脂耶式酵母接种于摇瓶培养基中，振荡培养，得到摇瓶培养液。
所述的摇瓶培养基优选葡萄糖、酵母浸粉、麦芽浸粉、KH2PO4和MgSO4·7H2O等配制而成，配方优选为：葡萄糖25～35g/L，酵母浸粉3～5g/L，麦芽浸粉4～6g/L，KH2PO4 1～3g/L，MgSO4·7H2O 0.3～0.5g/L，调节pH5.5～6.5；更优选为：葡萄糖30g/L，酵母浸粉4g/L，麦芽浸粉5g/L，KH2PO4 2g/L，MgSO4·7H2O 0.4g/L，调节pH6.0。
所述的摇瓶培养基在摇瓶中的量优选为摇瓶容积的9％～20％；更优选为10％～20％。
所述的振荡培养的条件优选为：于26～28℃、160～200r/min培养18～20h；更优选为：于27～28℃、160～200r/min培养18～20h。
步骤(2)中所述的解脂耶式酵母的培养液的接种量优选为2％～10％(v/v)。
步骤(2)中所述的发酵的条件优选为：搅拌转速为140～200r/min，发酵温度控制为26～28℃，发酵的通气比为0.16～0.48vvm，发酵时间为96～120h；更优选如下：搅拌转速为140～200r/min，发酵温度控制为26～28℃，发酵时间为96～120h，在发酵期间的第0～36h，发酵的通气比由0.16vvm逐步增加至0.48vvm，发酵最后的24h，发酵的通气比控制为0.32vvm，中间的发酵的通气比控制为0.48vvm。
步骤(2)中所述的灭菌的条件优选为：于105～110℃灭菌10～15min。
步骤(2)中所述的减压蒸发浓缩的条件优选为：真空度为0.07～0.08MPa。
所述的减压蒸发浓缩后的体积为原体积的30％～40％。
步骤(2)中所述的喷雾干燥条件优选为：进风温度控制为160～200℃，出风温度控制为70～90℃。
步骤(2)中所述的粉碎的程度优选为粉碎至微粒达到200～300目。
本发明具有以下优点及效果：
(1)本发明提供的解脂耶式酵母能充分利用椰蓉中的油脂和糖分作为碳源。酵母含有丰富的蛋白质，其蛋白质含有人体必需的8种氨基酸，且氨基酸配比接近联合国粮农组织(FAO)推荐的优质蛋白标准。另外，酵母还含有人体所需的完整B族维生素，以及丰富的β-1,3-葡聚糖，以及锌、铁、镁、铜、硒、铬等多种矿物质。将该酵母对椰蓉进一步加工利用，得到的产品中富含酵母、椰子膳食纤维和椰子蛋白，时提升酵母和椰蓉的经济价值。
(2)由于椰蓉中油脂含量较高，无法将其制成微细的干粉。本发明利用解脂耶式酵母降解椰蓉中的油脂和糖分，制备得到微细的椰蓉营养粉，营养丰富，低糖低脂，椰香风味浓郁，适宜作为所有人群的冲调食品。
附图说明
图1是本发明的菌体扫描电镜照片图。
图2是本发明的工艺流程图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。除非特别说明，本发明所用试剂和材料均可通过市售获得。
实施例1
以自然发酵5天的椰浆为菌种筛选材料。
驯化培养基：椰子油50g/L，酵母膏10g/L，KH2PO4 2.5g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，调节pH6.0。驯化培养基于121℃灭菌20min，冷却后，按体积比10％的接种量，接入自然发酵的椰浆，于28℃、200rpm的条件下培养96h。然后，再按体积比10％的接种量，将驯化培养液转接入新鲜的驯化培养基，再培养96h。
平板筛选培养基：蛋白胨20g/L，牛肉膏10g/L，氯霉素100mg/L，琼脂20g/L，调节pH6.0。平板筛选培养基于121℃灭菌20min，趁热倒入无菌的培养皿，冷凝形成平板。在无菌操作条件下，将无菌的椰子油涂布在平板上，再将驯化培养液的梯度稀释液涂布于平板上，置于28℃下培养72h。
斜面培养基采用YEPD培养基。在无菌操作条件下，用接种针挑取平板上60个单菌落，分别接入斜面培养基，于28℃下培养，菌苔长出后，置于4℃冰箱保藏，备用。
摇瓶筛选培养基：椰子油50g/L，酵母膏10g/L，KH2PO4 2.5g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，调节pH6.0。摇瓶培养基于121℃灭菌20min，冷却后，分别接入60株斜面菌种，每瓶接入1环，然后置于28℃、200rpm的条件下培养120h。将摇瓶培养液于6000r/min的条件下离心20min，收集上清液。用等体积的正己烷对上清液中残余油脂进行萃取两次，合并萃取层，利用旋转真空蒸发器于60℃去除萃取层的正己烷，测定残余油脂的质量，计算出椰子油的降解率，筛选出降解率最高的一株菌种，即为本发明的菌种。
利用扫描电镜观察该菌种的菌体形态，菌体形态与普通酵母的菌体形态一致(如图1所示)。利用分子鉴定方法分析该菌种的26S rDNA，在NCBI数据平台上检索与比对，确定该菌种为解脂耶式酵母(Yarrowia lipolytica)。该菌种的26S rDNA如下所示。
TTTCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACAGGGATTGCCTCAGTAACGGCGAGTGAAGCGGCAAAAGCTCAAATTTGAAACCCTCGGGATTGTAATTTGAAGATTTGGCATTGGAGAAAGCTAACCCAAGTTGCTTGGAATAGTACGTCATAGAGGGTGACAACCCCGTCTGGCTAACCGTTCTCCATGTATTGCCTTATCAAAGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCAAAGTGGGTGGTAAACTCCATCTAAAGCTAAATACTGGTGAGAGACCGATAGCGAACAAGTACTGTGAAGGAAAGGTGAAAAGAACTTTGAAAAGAGAGTGAAATAGTATGTGAAATTGTTGATAGGGAAGGAAATGAGTGGAGAGTGGCCGAGGTTTCAGCCGCCCCTCGTGGGCGGTGTACTGCCGACGCCGAGTCATCGATAGCGAGACGAGGGTTACAAATGGGAGCGCCTTTCGGGCGTTCTCCCCTAACCCTCCACACTGCCACCGACGACA。
将该菌种命名为解脂耶式酵母(Yarrowia lipolytica)YD19，于2019年9月20日保藏于位于广州市先烈中路100号大院59栋5楼广东省微生物研究所的广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No:60782。
实施例2
一种低糖低脂椰蓉营养粉的制作过程，如图2所示，具体如下：
(1)椰蓉的预处理
称取0.75kg干椰蓉，加入18kg纯净水，置于130℃的条件下加热30min，使椰蓉软化。在6000r/min的条件下，利用高速匀浆机将混合液打成浆状，然后利用高压均质机在30MPa的压力下进行3次均质，调节pH至7.0，放入发酵罐内。在121℃下灭菌10min，冷却至室温，备用。
(2)椰蓉悬液的发酵与后处理
称取54g葡萄糖、7.2g酵母浸粉、9g麦芽浸粉、3.6g KH2PO4、0.72g MgSO4·7H2O，加水溶解，定容1.8L，调节pH至6.0，分装至12个1000mL三角瓶中，每瓶装液150mL，121℃灭菌20min，冷却后，接入1环解脂耶式酵母GDMCC No:60782斜面菌种的菌苔，置于180r/min、27℃的条件下进行培养19h，即得酵母摇瓶培养液。
将1.8L酵母摇瓶培养液接入发酵罐，启动搅拌和通入无菌空气，发酵96h。在发酵过程中，发酵罐搅拌转速控制为170r/min，发酵温度控制为27～28℃；根据发酵对溶解氧的需求，发酵0～24h的通气比由0.16vvm逐步增加至0.48vvm，发酵24～72h的通气比控制为0.48vvm，发酵72h后的通气比控制为0.32vvm。
发酵结束后，在105℃下对发酵液进行灭菌15min，然后将发酵液体积于真空度为0.07MPa的条件下进行蒸发浓缩至30％体积，再进行喷雾干燥。在喷雾干燥过程中，控制进风温度为190～200℃，出风温度为80～90℃，获得542g含水分2.2％的干燥物。利用超微粉碎机将干燥物粉碎至200～300目，即为低糖低脂椰蓉营养粉，经检测，该椰蓉营养粉的蛋白质含量为21.8％，膳食纤维含量为59.4％，B族维生素含量为0.016％，脂肪含量为0.53％，葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖等没有被检出。低糖低脂椰蓉营养粉产品用水冲调，椰香风味浓郁。
实施例3
一种低糖低脂椰蓉营养粉的制作过程，如图2所示，具体如下：
(1)椰蓉的预处理
称取0.954kg干椰蓉，加入21kg纯净水，置于120℃的条件下加热60min，使椰蓉软化。在8000r/min的条件下，利用高速匀浆机将混合液打成浆状，然后利用高压均质机在40MPa的压力下进行2次均质，调节pH至6.0，放入发酵罐内。在121℃下灭菌15min，冷却至室温，备用。
(2)椰蓉悬液的发酵与后处理
称取42g葡萄糖、5.6g酵母浸粉、7g麦芽浸粉、2.8g KH2PO4、0.56g MgSO4·7H2O，加水溶解，定容1.4L，调节pH至6.0，分装至7个1000mL三角瓶中，每瓶装液200mL，121℃灭菌20min，冷却后，接入1环解脂耶式酵母GDMCC No:60782斜面菌种的菌苔，置于200r/min、28℃的条件下进行培养18h，即得酵母摇瓶培养液。
将1.4L酵母摇瓶培养液接入发酵罐，启动搅拌和通入无菌空气，发酵108h。在发酵过程中，发酵罐搅拌转速控制为140r/min，发酵温度控制为26～27℃；根据发酵对溶解氧的需求，发酵0～30h的通气比由0.16vvm逐步增加至0.48vvm，发酵30～84h的通气比控制为0.48vvm，发酵84h后的通气比控制为0.32vvm。
发酵结束后，在110℃下对发酵液进行灭菌10min，然后将发酵液体积于真空度为0.075MPa的条件下进行蒸发浓缩至40％体积，再进行喷雾干燥。在喷雾干燥过程中，控制进风温度为170～180℃，出风温度为75～85℃，获得676g含水分2.4％的干燥物。利用超微粉碎机将干燥物粉碎至200～300目，即为低糖低脂椰蓉营养粉，经检测，该椰蓉营养粉的蛋白质含量为24.4％，膳食纤维含量为57.4％，B族维生素含量为0.017％，脂肪含量为0.54％，葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖等没有被检出。低糖低脂椰蓉营养粉产品用水冲调，椰香风味浓郁。
实施例4
一种低糖低脂椰蓉营养粉的制作过程，如图2所示，具体如下：
(1)椰蓉的预处理
称取0.869kg干椰蓉，加入20kg纯净水，置于125℃的条件下加热45min，使椰蓉软化。在7000r/min的条件下，利用高速匀浆机将混合液打成浆状，然后利用高压均质机在35MPa的压力下进行3次均质，调节pH至6.5，放入发酵罐内。在121℃下灭菌12min，冷却至室温，备用。
(2)椰蓉悬液的发酵与后处理
称取12g葡萄糖、1.6g酵母浸粉、2g麦芽浸粉、0.8g KH2PO4、0.16g MgSO4·7H2O，加水溶解，定容0.4L，调节pH至6.5，分装至4个1000mL三角瓶中，每瓶装液100mL，121℃灭菌20min，冷却后，接入1环解脂耶式酵母GDMCC No:60782斜面菌种的菌苔，置于200r/min、28℃的条件下进行培养20h，即得酵母摇瓶培养液。
将0.4L酵母摇瓶培养液接入发酵罐，启动搅拌和通入无菌空气，发酵120h。在发酵过程中，发酵罐搅拌转速控制为200r/min，发酵温度控制为27～28℃；根据发酵对溶解氧的需求，发酵0～36h的通气比由0.16vvm逐步增加至0.48vvm，发酵36～96h的通气比控制为0.48vvm，发酵96h后的通气比控制为0.32vvm。
发酵结束后，在108℃下对发酵液进行灭菌12min，然后将发酵液体积于真空度为0.08MPa的条件下进行蒸发浓缩至35％体积，再进行喷雾干燥。在喷雾干燥过程中，控制进风温度为160～170℃，出风温度为70～80℃，获得637g含水分2.7％的干燥物。利用超微粉碎机将干燥物粉碎至200～300目，即为低糖低脂椰蓉营养粉，经检测，该椰蓉营养粉的蛋白质含量为23.6％，膳食纤维含量为58.1％，B族维生素含量为0.017％，脂肪含量为0.53％，葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖等没有被检出。低糖低脂椰蓉营养粉产品用水冲调，椰香风味浓郁。
对比例1
(1)椰蓉的预处理
称取0.75kg干椰蓉，加入18kg纯净水，置于130℃的条件下加热30min，使椰蓉软化。在6000r/min的条件下，利用高速匀浆机将混合液打成浆状，然后利用高压均质机在30MPa的压力下进行3次均质，调节pH至7.0。在121℃下灭菌10min，冷却至室温，备用。
(2)椰蓉悬液的后处理
椰蓉悬液未经发酵，直接于真空度为0.07MPa的条件下进行蒸发浓缩至30％体积，再利用喷雾干燥塔进行喷雾干燥。在喷雾干燥过程中，控制进风温度为190～200℃，出风温度为80～90℃，由于油脂含量高，无法获得干燥的粉体。
对比例2
(1)椰蓉的预处理
称取0.75kg干椰蓉，加入18kg纯净水，置于130℃的条件下加热30min，使椰蓉软化。在6000r/min的条件下，利用高速匀浆机将混合液打成浆状，然后利用高压均质机在30MPa的压力下进行3次均质，调节pH至7.0，放入发酵罐内。在121℃下灭菌10min，冷却至室温，备用。
(2)椰蓉悬液的发酵与后处理
称取54g葡萄糖、7.2g酵母浸粉、9g麦芽浸粉、3.6g KH2PO4、0.72g MgSO4·7H2O，加水溶解，定容1.8L，调节pH至6.0，分装至12个1000mL三角瓶中，每瓶装液150mL，121℃灭菌20min，冷却后，接入1环酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CICC1252(购买于中国工业微生物菌种保藏管理中心)斜面菌种的菌苔，置于180r/min、27℃的条件下进行培养19h，即得酵母摇瓶培养液。
将1.8L酵母摇瓶培养液接入发酵罐，启动搅拌和通入无菌空气，发酵96h。在发酵过程中，发酵罐搅拌转速控制为170r/min，发酵温度控制为27～28℃；根据发酵对溶解氧的需求，发酵0～24h的通气比由0.16vvm逐步增加至0.48vvm，发酵24～72h的通气比控制为0.48vvm，发酵72h后的通气比控制为0.32vvm。
发酵结束后，在105℃下对发酵液进行灭菌15min，然后将发酵液体积于真空度为0.07MPa的条件下进行蒸发浓缩至30％体积，再进行喷雾干燥。在喷雾干燥过程中，控制进风温度为190～200℃，出风温度为80～90℃，由于油脂含量高，无法获得干燥的粉体。
对比例3
(1)椰蓉的预处理
称取0.75kg干椰蓉，加入18kg纯净水，置于130℃的条件下加热30min，使椰蓉软化。在6000r/min的条件下，利用高速匀浆机将混合液打成浆状，然后利用高压均质机在30MPa的压力下进行3次均质，调节pH至7.0，放入发酵罐内。在121℃下灭菌10min，冷却至室温，备用。
(2)椰蓉悬液的发酵与后处理
称取54g葡萄糖、7.2g酵母浸粉、9g麦芽浸粉、3.6g KH2PO4、0.72g MgSO4·7H2O，加水溶解，定容1.8L，调节pH至6.0，分装至12个1000mL三角瓶中，每瓶装液150mL，121℃灭菌20min，冷却后，接入1环解脂亚罗酵母(Yarrowia lipolytica)CICC31120(购买于中国工业微生物菌种保藏管理中心)斜面菌种的菌苔，置于180r/min、27℃的条件下进行培养19h，即得酵母摇瓶培养液。
将1.8L酵母摇瓶培养液接入发酵罐，启动搅拌和通入无菌空气，发酵96h。在发酵过程中，发酵罐搅拌转速控制为170r/min，发酵温度控制为27～28℃；根据发酵对溶解氧的需求，发酵0～24h的通气比由0.16vvm逐步增加至0.48vvm，发酵24～72h的通气比控制为0.48vvm，发酵72h后的通气比控制为0.32vvm。
发酵结束后，在105℃下对发酵液进行灭菌15min，然后将发酵液体积于真空度为0.07MPa的条件下进行蒸发浓缩至30％体积，再进行喷雾干燥。在喷雾干燥过程中，控制进风温度为190～200℃，出风温度为80～90℃，由于油脂含量高，无法获得干燥的粉体。
对比例4
(1)椰蓉的预处理
称取0.75kg干椰蓉，加入18kg纯净水，置于130℃的条件下加热30min，使椰蓉软化。在6000r/min的条件下，利用高速匀浆机将混合液打成浆状，调节pH至7.0，放入发酵罐内。在121℃下灭菌10min，冷却至室温，备用。
(2)椰蓉悬液的发酵与后处理
称取54g葡萄糖、7.2g酵母浸粉、9g麦芽浸粉、3.6g KH2PO4、0.72g MgSO4·7H2O，加水溶解，定容1.8L，调节pH至6.0，分装至12个1000mL三角瓶中，每瓶装液150mL，121℃灭菌20min，冷却后，接入1环产朊假丝酵母(Candida utilis)CICC31126(购买于中国工业微生物菌种保藏管理中心)斜面菌种的菌苔，置于180r/min、27℃的条件下进行培养19h，即得酵母摇瓶培养液。
将1.8L酵母摇瓶培养液接入发酵罐，启动搅拌和通入无菌空气，发酵96h。在发酵过程中，发酵罐搅拌转速控制为170r/min，发酵温度控制为27～28℃；根据发酵对溶解氧的需求，发酵0～24h的通气比由0.16vvm逐步增加至0.48vvm，发酵24～72h的通气比控制为0.48vvm，发酵72h后的通气比控制为0.32vvm。
发酵结束后，利用高压均质机在30MPa的压力下对发酵液进行3次均质，在105℃下对发酵液进行灭菌15min，然后将发酵液体积于真空度为0.07MPa的条件下进行蒸发浓缩至30％体积，再进行喷雾干燥。在喷雾干燥过程中，控制进风温度为190～200℃，出风温度为80～90℃，由于油脂含量高，无法获得干燥的粉体。
对比例5
(1)椰蓉的预处理
称取0.75kg干椰蓉，加入18kg纯净水，置于130℃的条件下加热30min，使椰蓉软化。在6000r/min的条件下，利用高速匀浆机将混合液打成浆状，调节pH至7.0，放入发酵罐内。在121℃下灭菌10min，冷却至室温，备用。
(2)椰蓉悬液的发酵与后处理
称取54g葡萄糖、7.2g酵母浸粉、9g麦芽浸粉、3.6g KH2PO4、0.72g MgSO4·7H2O，加水溶解，定容1.8L，调节pH至6.0，分装至12个1000mL三角瓶中，每瓶装液150mL，121℃灭菌20min，冷却后，接入1环解脂耶式酵母(Yarrowia lipolytica)CICC32520(购买于中国工业微生物菌种保藏管理中心)斜面菌种的菌苔，置于180r/min、27℃的条件下进行培养19h，即得酵母摇瓶培养液。
将1.8L酵母摇瓶培养液接入发酵罐，启动搅拌和通入无菌空气，发酵96h。在发酵过程中，发酵罐搅拌转速控制为170r/min，发酵温度控制为27～28℃；根据发酵对溶解氧的需求，发酵0～24h的通气比由0.16vvm逐步增加至0.48vvm，发酵24～72h的通气比控制为0.48vvm，发酵72h后的通气比控制为0.32vvm。
发酵结束后，利用高压均质机在30MPa的压力下对发酵液进行3次均质，在105℃下对发酵液进行灭菌15min，然后将发酵液体积于真空度为0.07MPa的条件下进行蒸发浓缩至30％体积，再进行喷雾干燥。在喷雾干燥过程中，控制进风温度为190～200℃，出风温度为80～90℃，由于油脂含量高，无法获得干燥的粉体。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 广东轻工职业技术学院
李静
邓毛程
<120> 一株解脂耶式酵母及其在制备低糖低脂椰蓉营养粉中的用途
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 514
<212> DNA
<213> 解脂耶式酵母(Yarrowia lipolytica)
<220>
<223> 26S rDNA序列
<400> 1
tttcatatca ataagcggag gaaaagaaac caacagggat tgcctcagta acggcgagtg 60
aagcggcaaa agctcaaatt tgaaaccctc gggattgtaa tttgaagatt tggcattgga 120
gaaagctaac ccaagttgct tggaatagta cgtcatagag ggtgacaacc ccgtctggct 180
aaccgttctc catgtattgc cttatcaaag agtcgagttg tttgggaatg cagctcaaag 240
tgggtggtaa actccatcta aagctaaata ctggtgagag accgatagcg aacaagtact 300
gtgaaggaaa ggtgaaaaga actttgaaaa gagagtgaaa tagtatgtga aattgttgat 360
agggaaggaa atgagtggag agtggccgag gtttcagccg cccctcgtgg gcggtgtact 420
gccgacgccg agtcatcgat agcgagacga gggttacaaa tgggagcgcc tttcgggcgt 480
tctcccctaa ccctccacac tgccaccgac gaca 514
Claims (9)
1.一株解脂耶式酵母，其特征在于：所述的解脂耶式酵母的名称为解脂耶式酵母（Yarrowia lipolytica） YD19，保藏编号为GDMCC No:60782，于2019年9月20日保藏于位于广州市先烈中路100号大院59栋5楼广东省微生物研究所的广东省微生物菌种保藏中心。
2.权利要求1所述的解脂耶式酵母在食品领域中的应用，其特征在于：所述的解脂耶式酵母用于制备低糖低脂椰蓉营养粉。
3.一种低糖低脂椰蓉营养粉，其特征在于通过如下步骤制备得到：
（1）椰蓉的预处理：将椰蓉与水混合，加热；接着将加热处理后的椰蓉打浆，将得到的椰浆均质，调节pH值，灭菌，得到椰蓉悬液；
（2）发酵与后处理：将权利要求1所述的解脂耶式酵母的培养液接种于冷却的椰蓉悬液中，发酵；将得到的发酵液灭菌，减压蒸发浓缩，喷雾干燥，粉碎，得到低糖低脂椰蓉营养粉。
4.根据权利要求3所述的低糖低脂椰蓉营养粉，其特征在于：
步骤（1）中所述的pH值为6.0~7.0；
步骤（1）中所述的加热的条件为：于120～130℃加热30～60min；
步骤（1）中所述的打浆的条件为：于6000~8000 r/min的转速匀浆；
步骤（1）中所述的均质的压力为30~40 MPa；
步骤（2）中所述的解脂耶式酵母的培养液为摇瓶培养液；
步骤（2）中所述的解脂耶式酵母的培养液的接种量为2%~10%（v/v）；
步骤（2）中所述的发酵的条件为：搅拌转速为140~200 r/min，发酵温度控制为26~28℃，发酵的通气比为0.16~0.48 vvm，发酵时间为96~120 h；
步骤（2）中所述的减压蒸发浓缩的条件为：真空度为0.07~0.08 MPa；
步骤（2）中所述的喷雾干燥条件为：进风温度控制为160~200℃，出风温度控制为70~90℃。
5.根据权利要求4所述的低糖低脂椰蓉营养粉，其特征在于：
所述的均质的次数为2～3次；
所述的减压蒸发浓缩后的体积为原体积的30%~40%。
6.根据权利要求4所述的低糖低脂椰蓉营养粉，其特征在于：
步骤（2）中所述的解脂耶式酵母的培养液通过如下步骤制备得到：将解脂耶式酵母接种于摇瓶培养基中，振荡培养，得到摇瓶培养液；
所述的摇瓶培养基的组分为：葡萄糖25～35 g/L，酵母粉 3～5 g/L，麦芽浸粉 4～6g/L，KH2PO4 1～3 g/L，MgSO4·7H2O 0.3～0.5 g/L，调节pH5.5～6.5；
所述的摇瓶培养基在摇瓶中的量为摇瓶容积的9%~20%
所述的振荡培养的条件为：于26~28℃、160~200 r/min培养18~20 h。
7.根据权利要求3所述的低糖低脂椰蓉营养粉，其特征在于：
步骤（1）中所述的水为纯净水；
所述的水的用量按椰蓉：水=质量比1：（22～24）配比计算。
8.根据权利要求3所述的低糖低脂椰蓉营养粉，其特征在于：
步骤（1）中所述的灭菌的条件为：于115～121℃灭菌10~30min；
步骤（2）中所述的灭菌的条件为：于105~110℃灭菌10~15 min。
9.根据权利要求3所述的低糖低脂椰蓉营养粉，其特征在于：步骤（2）中所述的粉碎的程度为粉碎至微粒达到200~300目。
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