CN110747253A - Dna酶检测荧光探针与dna酶活力检测方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物检测技术领域，具体而言，提供了一种DNA酶检测荧光探针与DNA酶活力检测方法及应用。本发明提供一种DNA酶检测荧光探针，该荧光探针为一条具有茎环结构的单链DNA探针，其中，环部序列长度为10‑20bp，茎部序列的长度为10‑20bp，以及，5’端和3’端的不对称碱基长度为0‑5bp，此外，该探针5’端带有荧光基团，3’端带有淬灭基团。该DNA酶检测荧光探针的茎环结构可以提高探针的稳定性，同时提高探针的灵敏度，实现该探针的高灵敏检测，具体地，当该荧光探针保持完整结构存在时，报告基团和淬灭基团距离较近，无荧光信号产生；当该底物被DNA酶酶切断裂并解离后，未淬灭的报告基团发出荧光信号。
Description
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，具体而言，涉及一种DNA酶检测荧光探针与DNA酶活力检测方法及应用。
背景技术
DNA酶即脱氧核糖核酸酶(DNases)，在环境和生物体内无处不在。脱氧核糖核酸酶主要通过催化DNA分子主链中的磷酸二酯键对各种DNA链进行切割，它是生物过程的重要参与者，也是研究生物机理的一类重要的水解酶。DNase种类很多，如单链特异性、双链特异性和非特异性酶等，近年来研究最多的主要是DNaseI。DNaseI是一种核酸内切酶，可切割单链和双链DNA，水解磷酸二酯键，产生具有5’-磷酸和3’-羟基基团的单核苷酸和寡聚脱氧核糖核苷酸。
尽管许多脱氧核酸酶已成为有价值的实验室试剂，但实际上，它们也是所有分子生物学实验室都非常关注的质控问题。DNase的存在会降解与其接触的任何DNA分子，导致有价值的样品丢失或干扰实验。由生物体表达制成的生物制品，或者实验环境、平台中易存在DNase残留污染，DNase会迅速降解芯片研究，实时荧光定量PCR，Sorthern Blots，分子克隆等实验中的重要样品，导致实验数据的丢失，以及时间或金钱的浪费。因此，DNase污染检测是生物制品，试剂以及分子生物学实验室环境等的关键质控点。
目前对于DNase污染的检测主要通过如下两个方法进行：一是以DNase的活力单位Kunitz U定义为基础，通过检测单位时间内吸光度OD260的变化值来检测是否有DNase污染。二是通过与DNA孵育的方法，电泳检测DNA条带是否降解来判断是否存在DNase污染。该两种方法均存在灵敏度偏低，检测操作繁琐，检测通量偏低等缺陷。另外目前国外市场上有DNase污染检测的相关商品，但其价格普遍昂贵，并不适合于大批量的生物检测领域，且仅是定性检测方案，并不包括定量检测方案。鉴于以上技术问题，本领域亟需能够经济，简便，高效进行DNA酶污染检测的更优方案。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种DNA酶检测荧光探针，以缓解现有技术中缺少可以有效判断待检测样本中是否存在DNA酶污染的技术手段。
本发明的第二目的在于提供上述DNA酶检测荧光探针的应用。
本发明的第三目的在于提供一种DNA酶检测试剂盒，以缓解现有技术中无法准确、灵敏并且高效检测DNA酶污染的技术问题。
本发明的第四目的在于提供一种检测DNA酶活力的方法，以缓解现有技术中无法实现DNA酶污染有效检测的问题。
本发明的第五目的在于提供由上述方法的应用。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种DNA酶检测荧光探针，DNA酶检测荧光探针具有茎环结构，其中，环部序列长度为10-20bp，茎部序列的长度为10-20bp，以及，5’端和3’端的不对称碱基长度为0-5bp；
所述DNA酶检测荧光探针5’端带有荧光基团，3’端带有淬灭基团。
进一步地，DNA酶检测荧光探针的序列为如下SEQ ID NO.1-3任一种：
5’-ATCCACAGCCAAGGAGCGCCTCATCCTGGCCTTGGCTGTGGAT-3’(SEQ ID NO.1)，环部序列为AGCGCCTCATCCTGG；
5’-ATCCACAGCCAAGGGGACATGGTATGGCTCCTTGGCTGTGGAT-3’(SEQ ID NO.2)，环部序列为GGACATGGTATGGCT；
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进一步地，所述荧光基团包括FAM、ROX、JOE或VIC，优选为FAM；
优选地，所述淬灭基团包括NFQ、BHQ1、BHQ2或TAMRA，优选为BHQ1。
上述DNA酶检测荧光探针在如下a)-c)任一项中的应用：
a)DNA酶污染检测；
b)DNA酶活力检测；
c)制备检测DNA酶的试剂盒。
一种DNA酶检测试剂盒，包括上述DNA酶检测荧光探针。
一种应用上述DNA酶检测荧光探针检测DNA酶活力的方法，在待检测样本中加入DNA酶检测荧光探针孵育，采集待检测样本中的荧光信号，根据荧光信号强度判断待检测样本中DNA酶的含量。
进一步地，DNA酶检测荧光探针的工作浓度为0.1-5μmol/L。
进一步地，所述采集待检测样本中的荧光信号的方法包括如下a)、b)或c)：
a)35-39℃条件下孵育25-35min后，肉眼可视观察法；
b)35-39℃条件下孵育25-35min后，微量荧光分光光度计信号采集法；
c)荧光定量PCR仪信号采集法。
进一步地，所述方法还包括制备标准曲线的步骤，将待检测样本的荧光信号与标准曲线比对，得到待检测样本中DNA酶的含量；
所述标准曲线包括DNA酶标准品的不同浓度与DNA酶标准品荧光信号的对应关系，其中，DNA酶标准品荧光信号的检测方法与待检测样本的荧光信号检测方法相同。
上述方法在a)-c)任一项中的应用：
a)检测待检测样本中是否存在DNA酶污染；
b)检测待检测样本中DNA酶的含量或相对含量；
c)比较两个以上待检测样本中DNA酶的含量或相对含量。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供一种DNA酶检测荧光探针，该荧光探针为一条具有茎环结构的单链DNA探针，其中，环部序列长度为10-20bp，茎部序列的长度为10-20bp，以及，5’端和3’端的不对称碱基长度为0-5bp，此外，该探针5’端带有荧光基团，3’端带有淬灭基团。对该DNA酶检测荧光探针的长度进行限定，保证茎部稳定状态的适当，避免设计的茎部序列过长使得发夹结构过于稳定而出现的假阴性，或者茎部序列过短使其稳定性下降出现假阳性，同时，环部则需要避免出现任何可能的二级结构，影响到茎环结构。该DNA酶检测荧光探针的茎环结构可以提高探针的稳定性，同时提高探针的灵敏度，实现该探针的高灵敏检测，具体地，当该荧光探针保持完整结构存在时，报告基团和淬灭基团距离较近，无荧光信号产生；当该底物被DNA酶酶切断裂并解离后，未淬灭的报告基团发出荧光信号。所以，该DNA酶检测荧光探针灵敏度高，操作简便，成本低同时可以实现高通量。此外应用上述DNA酶检测荧光探针的DNA酶活力检测方法，可以通过检测荧光信号的强度来判断待检测样品中是否含有DNA酶污染。该方法可在1小时之内检测出微量的DNA酶污染残留，简单快捷，结果可靠。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明中检测DNA酶活力的反应机理图；
图2是实施例1中探针A的灵敏度检测结果图；
图3是实施例1中探针B的灵敏度检测结果图；
图4是实施例1中探针C的灵敏度检测结果图；
图5是实施例1中探针D的灵敏度检测结果图；
图6是实施例1中定性检测DNA酶污染的蓝光下探针显色图；
图7是实施例2中定性检测DNA酶污染的蓝光下探针显色图；
图8是实施例3中定性检测DNA酶污染的蓝光下探针显色图；
图9是实施例3中相对定量检测DNA酶污染的标准曲线图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。
除非另有说明，本文中所用的专业与科学术语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法或材料也可应用于本发明中。
一种DNA酶检测荧光探针具有茎环结构，其中，环部序列长度为10-20bp，茎部序列的长度为10-20bp，以及，5’端和3’端的不对称碱基长度为0-5bp；同时，DNA酶检测荧光探针5’端带有荧光基团，3’端带有淬灭基团。
对该DNA酶检测荧光探针的长度进行限定，保证茎部稳定状态的适当，避免设计的茎部序列过长使得发夹结构过于稳定而出现的假阴性，或者茎部序列过短使其稳定性下降出现假阳性，同时，环部则需要避免出现任何可能的二级结构，影响到茎环结构。本发明中，DNA酶检测荧光探针形成的茎环结构亦为颈环结构，是指该探针的中间存在一段不能配对的单链区，5’端和3’端存在互补的一段序列，探针长链回折，互补的部分配对成双链区形成茎部，不能配对的单链区突出形成环部，此外，5’端和3’端可以完全互补，也可以5’端或3’端多出0-5bp的碱基不能与3’端或5’端互补。该DNA酶检测荧光探针的茎环结构可以提高探针的稳定性，同时提高探针的灵敏度，实现该探针的高灵敏检测，具体地，当该荧光探针保持完整结构存在时，报告基团和淬灭基团距离较近，无荧光信号产生；当该底物被DNA酶酶切断裂并解离后，未淬灭的报告基团发出荧光信号。所以，该DNA酶检测荧光探针灵敏度高，操作简便，成本低同时可以实现高通量。
在优选地实施方式中，DNA酶检测荧光探针的序列为如下SEQ ID NO.1-3任一种：
5’-ATCCACAGCCAAGGAGCGCCTCATCCTGGCCTTGGCTGTGGAT-3’(SEQ ID NO.1)，环部序列为AGCGCCTCATCCTGG；
5’-ATCCACAGCCAAGGGGACATGGTATGGCTCCTTGGCTGTGGAT-3’(SEQ ID NO.2)，环部序列为GGACATGGTATGGCT；
5’-ATCCACAGCCAAGGCCAAGCCATACCATGCCTTGGCTGTGGAT-3’(SEQ ID NO.3)，环部序列为CAAGCCATACCAT。
在优选地实施方式中，荧光基团包括FAM、ROX、JOE或VIC，优选为FAM。
在优选地实施方式中，淬灭基团包括NFQ、BHQ1、BHQ2或TAMRA，优选为BHQ1。
本发明提供的上述DNA酶检测荧光探针在如下a)-c)任一项中的应用：
a)DNA酶污染检测；
b)DNA酶活力检测；
c)制备检测DNA酶的试剂盒。
在优选地实施方式中，DNA酶检测荧光探针为DNA酶反应底物。
一种DNA酶检测试剂盒，包括本发明提供的上述DNA酶检测荧光探针。该试剂盒包含本发明提供的DNA酶检测荧光探针，以该DNA酶检测荧光探针作为底物检测DNA酶灵敏度高，检测操作较为方便，实用性强。
一种应用上述DNA酶检测荧光探针检测DNA酶活力的方法，在待检测样本中加入DNA酶检测荧光探针孵育，采集待检测样本中的荧光信号，根据荧光信号强度判断待检测样本中DNA酶的含量。
本发明的反应机理如图1所示：DNA酶检测荧光探针底物为一条具有茎环结构的单链DNA探针，该探针5’端带有荧光报告基团，3’端带有淬灭基团。当该底物保持完整结构存在时，报告基团和淬灭基团距离较近，无荧光信号产生；当该底物被DNases酶切断裂并解离后，未淬灭的报告基团发出荧光信号。通过检测荧光信号的强度来判断待检测样品中是否含有DNA酶。该方法可在1小时之内检测出微量的DNA酶，灵敏度高，简单快捷，结果可靠。该方法可以简单，方便，可视，迅速实现对DNA酶活力的检测，亦可检测DNA酶的污染水平，灵敏度高，可检测出微量的DNaseI以及其他单链或双链DNA内切酶污染，且可广泛应用于检测生物制品，试剂，缓冲液，表面环境(实验台，仪器，耗材表面等)的DNA酶污染水平，对于实验物料的质控和实验室环境的监控有较准确的指导意义。
在优选地实施方式中，可以以无酶水作为负对照进行检测，检测标准为待测样品的荧光信号比负对照的荧光信号高2倍以上即可判定为待检测样品中含有DNA酶污染。
在优选地实施方式中，DNA酶检测荧光探针的工作浓度为0.1-5μmol/L。
在优选地实施方式中，采集待检测样本中的荧光信号的方法包括如下a)、b)或c)：
a)35-39℃条件下孵育25-35min后，肉眼可视观察法；
b)35-39℃条件下孵育25-35min后，微量荧光分光光度计信号采集法；
c)荧光定量PCR仪信号采集法。
上述荧光信号的采集方法可以根据检测精度的要求选取不同的方式。
在优选地实施方式中，肉眼可视观察法可在紫外灯或者蓝光灯照射下，观察每组样品是否产生荧光。优选地，在蓝光灯下进行观察。微量荧光分光光度计信号采集法通过分别直接测定和读取样品的RFU值。荧光定量PCR仪信号采集法是将反应体系置于荧光定量PCR仪器中，按照如下程序运行，36℃，10s和37℃，50s(收集信号)为1cycle，共运行60Cycles。
在优选地实施方式中，方法还包括制备标准曲线的步骤，将待检测样本的荧光信号与标准曲线比对，得到待检测样本中DNA酶的含量，其中，标准曲线包括DNA酶标准品的不同浓度与DNA酶标准品荧光信号的对应关系，其中，DNA酶标准品荧光信号的检测方法与待检测样本的荧光信号检测方法相同。
通过建立标准曲线的方式可以实现待检测样本中DNA酶含量的定量检测，具体地，可以将DNA酶标准品进行梯度稀释，得到不同浓度(即活力)的标准品，然后采用上述的检测方法，在不同浓度的标准品中分别加入等量的本发明提供的DNA酶检测荧光探针孵育，采集得到每个样本的荧光信号，建立荧光信号和标准品的浓度之间的关系曲线，再用相同的检测方法收集得到待检测样本的荧光信号，带入关系曲线中，得到待检测样本中DNA酶的含量。
本发明提供的上述方法在a)-c)任一项中的应用：
a)检测待检测样本中是否存在DNA酶污染；
b)检测待检测样本中DNA酶的含量或相对含量；
c)比较两个以上待检测样本中DNA酶的含量或相对含量。
在优选地实施方式中，DNA酶污染程度(U/mg)＝计算得到的DNA酶活力单位U/反应体系中所用样品质量mg。
下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
实施例1
不同序列探针灵敏度对比筛选
1.1材料准备
分别合成下表中不同序列的探针，斜体代表环部结构。
上述探针A-D均用无酶水稀释至10μmol/L的工作浓度；荧光定量PCR仪器型号为ABI 7500。
1.2反应条件
在无酶的PCR管中按照下表体系加入：
阴性对照为不加入DNaseI的反应组。
将反应体系置于荧光定量PCR仪器中，按照如下程序运行，
运行结束后，导出其原始荧光值数据。
1.3对比结果
结果如图2-图5所示，依次分别为探针A到探针D的结果，可以看出，其中探针D的灵敏度最好，即发现茎部序列相同的情况下，环部序列不同，检测信号值高低也会有所差异。此外，发明人利用相同的筛选条件，得到本发明提供的SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3的DNA酶检测荧光探针。后续实施例中，以SEQ ID NO.1的DNA酶检测荧光探针的技术效果为例说明本发明的有益效果。
定性检测蛋白酶K中的DNA酶污染
1.1检测反应
1.1.1材料准备
DNA酶探针(SEQ ID NO.1，荧光基团为FAM，淬灭基团为BHQ1)，用无酶水稀释至10μmol/L的工作浓度；
10×Reaction Buffer配制方法：向容器中加入500mL无酶水，分别称取三羟甲基氨基甲烷12.114g，六水合氯化镁5.083g，氯化钙0.111g，加入到容器中，搅拌至溶解，调节pH至7.5，加入无酶水定容至1L，然后过滤除菌备用；
正对照；DNaseI标准品购自Thermo(DNaseI,RNase-free Cat.No.EN0521)；
负对照：无酶水；
Nanodrop3300微量荧光分光光度计；蓝光透射仪。
1.1.2配制反应体系
为了避免DNaseI加入之后就迅速消化探针，反应操作要迅速，在加酶之后立即置于冰上进行操作。
1.2检测结果
1.2.1蓝光下显色结果见图6。分别为负对照，样品，正对照，每组设置三个平行重复。结果显示，检测样品和负对照一样，不发出荧光，表示蛋白酶K样品无DNA酶污染。
1.2.2 RFU测定
样品蛋白酶K的荧光值与负对照基本相当，表示样品中无DNA酶污染。
实施例2
定性检测实验室耗材离心管中的DNA酶污染
2.1样品制备
检测样品为2.0ml离心管。
2.1.1处理一：为了检测整个管子是否存在污染，用无酶水将若干样品浸泡40min，再吸取40μl浸泡液，加入到反应体系中，37℃，静置30min，蓝光灯下观察，并且使用Nanodrop3300测定RFU值。
2.1.2处理二：为了检测管子内部是否存在污染，向离心管中加入500μl无酶水，振荡一分钟使管内壁接触到液体，再吸取40μl浸泡液，加入到反应体系中，37℃，静置30min，蓝光灯下观察，并且使用Nanodrop3300测定RFU值。
2.2反应体系
为了避免DNaseI加入之后就迅速消化探针，反应操作要迅速，在加酶之后立即置于冰上进行操作。
2.3检测结果
2.3.1蓝光下显色结果见图7。分别为正对照，负对照，检测样品外，检测样品内，每组设置三个平行重复。结果显示，检测样品内外均和负对照一样，不发出荧光，表示离心管样品无DNA酶污染。
2.3.2 RFU测定
| 正对照 | 负对照 | 样品外 | 样品内 | |
| 重复1 | 20639.1 | 268 | 193.1 | 245.8 |
| 重复2 | 23268 | 204.2 | 251.1 | 262.9 |
| 重复3 | 20092 | 260 | 216 | 243.4 |
离心管样品的荧光值与负对照基本相当，表示离心管样品无DNA酶污染。
实施例3
相对定量检测RNaseA酶中的DNA酶污染
3.1反应体系
在无酶的PCR管中按照下表体系加入：
| 试剂 | 用量 |
| DNA酶探针(10μmol/L) | 1.25μl |
| 不同量的RNaseA样品/DNaseI标准品 | 20μl/1μl |
| 10×Reaction Buffer | 2.5μl |
| 无酶水 | To 25μl |
加好后混匀瞬时离心，37℃孵育30min。在蓝光下观察并且检测荧光值(RFU)。根据对照和检测样品的荧光值判断是否存在DNA酶污染。
若存在则进一步定量存在污染的酶活，以DNaseI作为标准品建立标准曲线，计算样品中DNA酶污染程度。
3.2定性检测结果
3.2.1蓝光下显色结果见图8。分别为负对照，样品和正对照。每组设置三个平行重复。结果显示，检测样品发出绿色荧光，表示RNaseA样品存在DNA酶污染。
3.2.2 RFU测定
样品的RFU值大于负对照的2倍以上，表示RNaseA样品存在明显的DNA酶污染。
3.3定量检测结果
3.3.1绘制标准曲线
以DNaseI标准品(Thermo Cat No.EN0521)构建标准曲线，对RNaseA样品中DNA酶污染程度进行相对定量。DNaseI标准品设置五个用量梯度，分别为0.0005U、0.001U、0.002U、0.004U、0.006U。RFU测定结果如下表。
绘制标准曲线，见图9。曲线方程：y＝80994x-139.3，R2＝0.998。y值代表RFU值，x值代表酶活U值。
3.3.2计算样品污染程度
RNaseA样品设置两个用量梯度，分别为0.05mg和0.025mg。RFU测定结果如下表。
将RFU平均值代入标准曲线方程，计算得，0.05mg样品中含有0.0599U的DNA酶活性，即1.20U/mg的DNA酶污染水平；0.025mg样品中含有0.0318U的DNA酶活性，即1.27U/mg的DNA酶污染水平。
所以，RNaseA样品中DNA酶污染的相对定量结果为1.24U/mg。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。
SEQUENCE LISTING
<110> 生工生物工程（上海）股份有限公司
<120> DNA酶检测荧光探针与DNA酶活力检测方法及应用
<160> 6
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
atccacagcc aaggagcgcc tcatcctggc cttggctgtg gat 43
<210> 2
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
atccacagcc aaggggacat ggtatggctc cttggctgtg gat 43
<210> 3
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
atccacagcc aaggccaagc cataccatgc cttggctgtg gat 43
<210> 4
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
atccacagcc aaggtcatcc tggacgtctc cttggctgtg gat 43
<210> 5
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
atccacagcc aagggcctcc taccagcgcc cttggctgtg gat 43
<210> 6
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
atccacagcc aaggtcggtg agtatctccc cttggctgtg gat 43
Claims (10)
1.一种DNA酶检测荧光探针，其特征在于，DNA酶检测荧光探针具有茎环结构，其中，环部序列长度为10-20bp，茎部序列的长度为10-20bp，以及，5’端和3’端的不对称碱基长度为0-5bp；
所述DNA酶检测荧光探针5’端带有荧光基团，3’端带有淬灭基团。
2.根据权利要求1所述的DNA酶检测荧光探针，其特征在于，DNA酶检测荧光探针的序列为如下SEQ ID NO.1-3任一种：
5’-ATCCACAGCCAAGGAGCGCCTCATCCTGGCCTTGGCTGTGGAT-3’(SEQ ID NO.1)，环部序列为AGCGCCTCATCCTGG；
5’-ATCCACAGCCAAGGGGACATGGTATGGCTCCTTGGCTGTGGAT-3’(SEQ ID NO.2)，环部序列为GGACATGGTATGGCT；
5’-ATCCACAGCCAAGGCCAAGCCATACCATGCCTTGGCTGTGGAT-3’(SEQ ID NO.3)，环部序列为CAAGCCATACCAT。
3.根据权利要求1或2所述的DNA酶检测荧光探针，其特征在于，所述荧光基团包括FAM、ROX、JOE或VIC，优选为FAM；
优选地，所述淬灭基团包括NFQ、BHQ1、BHQ2或TAMRA，优选为BHQ1。
4.权利要求1-3任一项所述的DNA酶检测荧光探针在如下a)-c)任一项中的应用：
a)DNA酶污染检测；
b)DNA酶活力检测；
c)制备检测DNA酶的试剂盒。
5.一种DNA酶检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述的DNA酶检测荧光探针。
6.一种应用权利要求1-3任一项所述DNA酶检测荧光探针检测DNA酶活力的方法，其特征在于，在待检测样本中加入DNA酶检测荧光探针孵育，采集待检测样本中的荧光信号，根据荧光信号强度判断待检测样本中DNA酶的含量。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，DNA酶检测荧光探针的工作浓度为0.1-5μmol/L。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述采集待检测样本中的荧光信号的方法包括如下a)、b)或c)：
a)35-39℃条件下孵育25-35min后，肉眼可视观察法；
b)35-39℃条件下孵育25-35min后，微量荧光分光光度计信号采集法；
c)荧光定量PCR仪信号采集法。
9.根据权利要求6-8任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括制备标准曲线的步骤，将待检测样本的荧光信号与标准曲线比对，得到待检测样本中DNA酶的含量；
所述标准曲线包括DNA酶标准品的不同浓度与DNA酶标准品荧光信号的对应关系，其中，DNA酶标准品荧光信号的检测方法与待检测样本的荧光信号检测方法相同。
10.权利要求6-9任一项所述的方法在a)-c)任一项中的应用：
a)检测待检测样本中是否存在DNA酶污染；
b)检测待检测样本中DNA酶的含量或相对含量；
c)比较两个以上待检测样本中DNA酶的含量或相对含量。
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| CN111500683A (zh) * | 2020-03-19 | 2020-08-07 | 浙江帝格生物科技有限责任公司 | 体外检测dnase1l3蛋白的方法 |
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| CN105648062A (zh) * | 2016-02-03 | 2016-06-08 | 广州市锐博生物科技有限公司 | 检测脱氧核糖核酸酶的dna探针、试剂盒和方法 |
-
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