CN110747194A - 一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸及其制备与应用 - Google Patents

一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸及其制备与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110747194A
CN110747194A CN201911191251.1A CN201911191251A CN110747194A CN 110747194 A CN110747194 A CN 110747194A CN 201911191251 A CN201911191251 A CN 201911191251A CN 110747194 A CN110747194 A CN 110747194A
Authority
CN
China
Prior art keywords
smpdrn
reaction system
polydeoxyribonucleotide
molecular weight
system obtained
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN201911191251.1A
Other languages
English (en)
Inventor
王超云
高原
董书萍
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN201911191251.1A priority Critical patent/CN110747194A/zh
Publication of CN110747194A publication Critical patent/CN110747194A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/13—Nucleic acids or derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
    • A61K8/606—Nucleosides; Nucleotides; Nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/52—Stabilizers
    • A61K2800/522—Antioxidants; Radical scavengers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)

Abstract

本发明针提供一种分子量集中于其功效区间的三文鱼小分子多聚脱氧核糖核苷酸(Small molecule polydeoxyribonucleotide,SMPDRN)产品及其可控精准制备方法，以及其在化妆品、药品、营养食品、保健食品领域的应用。本发明中的小分子多聚脱氧核糖核苷酸的分子量为50bp～1000bp，其分子量位于50bp～500bp片段的质量占其总质量的的85％以上。本发明中的SMPDRN的分子量集中于高功效范围，针对性更强，功效更稳定，获得的产品经细胞、动物、人体实验证实在提高细胞活性、促进胶原蛋白合成、使受损皮肤再生、促进伤口愈合、紧致皮肤、增加皮肤弹性、消除皱纹、延缓皮肤衰老、抗氧化并防止色斑形成、抗炎、修复受损细胞等方面均具有显著效果，优于现有PDRN产品。

Description

一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸及其制备与应用
技术领域
本发明具体涉及一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸及其制备与应用。
背景技术
脱氧核糖核酸(DNA)作为生物体的重要遗传物质，一方面其在调控基因、蛋白表达，改善细胞状态，维持机体的正常生理功能方面发挥着重要的作用；另一方面它作为原料库，为机体生长、发育、修复提供了所需要的脱氧核糖核苷酸。但由于DNA链比较长，分子量大且带有电荷，导致其不宜通过细胞膜被机体吸收。制药、医美、保健品行业的科研工作者长期致力于寻找碱基组成与人体相似性高的DNA生物材料。经过研究者不懈的努力，证实三文鱼DNA的碱基组成与人体DNA的相似性达98％，如图1所示。
最先发现三文鱼DNA有功效的是意大利渔民，他们发现把三文鱼精巢里的精液挤出周期性地涂抹在伤口处可以有效地抑制伤口溃烂，促进伤口愈合。意大利Mastelli公司、韩国BR PHARM公司在此基础上分别从海鳟鱼的生殖细胞、三文鱼精巢中提取聚脱氧核苷酸(PolyDeoxyRiboNucleotide，PDRN)，该物质在促进人体细胞再生，加快伤口愈合，减少疤痕生成方面具有疗效。
然而，现有PDRN制备技术工艺复杂，步骤繁琐，在纯化过程中使用了大量有机溶剂和蛋白酶，产率偏低。同时其制备的可控性及相关产品的功效显著性、功效针对性、功效稳定性尚需提高。
发明内容
本发明针对上述现有技术存在的不足，提供一种分子量集中于其功效区间的三文鱼小分子多聚脱氧核糖核苷酸(Small molecule polydeoxyribonucleotide,SMPDRN)产品及其可控精准制备方法，以及其在化妆品、药品、营养食品、保健食品领域的应用。
具体技术方案如下：
本发明的目的之一是提供一种一种分子量集中于其功效区间的三文鱼小分子多聚脱氧核糖核苷酸(Small molecule polydeoxyribonucleotide,SMPDRN)产品。
所述的三文鱼包括大西洋鲑、太平洋鲑和虹鳟。
所述的小分子多聚脱氧核糖核苷酸(即SMPDRN)其分子量区间为10bp～1500bp。
优选的，所述小分子多聚脱氧核糖核苷酸的分子量为50bp～1000bp，其中分子量位于50bp～500bp片段的质量占其总质量的85％以上。
再进一步，所述小分子多聚脱氧核糖核苷酸，其分子量位于100bp～200bp的片段的质量占小分子多聚脱氧核糖核苷酸总质量的90％以上。
本发明的第二个目的是提供一种分子量集中于其功效区间的三文鱼小分子多聚脱氧核糖核苷酸SMPDRN的制备方法。
一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸SMPDRN的制备方法，以三文鱼的内脏、肉、精巢、精液、卵为材料，包括如下步骤：
(1)将三文鱼组织使用碱裂解液进行裂解，所述的碱裂解液含有0.05～1mol/LEDTA，0.5～5mol/L NaOH,0.1wt％～5wt％SDS；
(2)将步骤(1)获得的反应体系中加入Tris-HCl；
(3)向步骤(2)中获得的反应体系中加入HCL；
(4)将步骤(3)获得的反应体系离心，收集上清；
(5)将步骤(4)获得的上清液用DNA打断仪进行分子破碎；
(6)在步骤(5)获得的反应体系中加入NH4AC，再加入无水乙醇，放置30min以上；
(7)将步骤(6)获得的反应体系离心，保留沉淀，得SMPDRN。
优选的，步骤(1)的工作条件为：在三文鱼组织中加入所述的碱裂解液，三文鱼组织与碱裂解液的用量比为1g:(5～15)mL；破碎组织，颠倒混匀，90～100℃恒温水浴15～60min。
优选的，步骤(2)的工作条件为：将步骤(1)获得的反应体系冰浴至40℃以下，按照其总体积的1/3～1的体积比例加入0.5～4mol/L Tris-HCl，，颠倒混匀。
优选的，步骤(3)的工作条件为：按照步骤(2)获得的反应体系的总体积的1/5～1的体积比例加入0.5～5mol/L HCL,颠倒混匀。
优选的，步骤(4)的工作条件为：将步骤(3)获得的反应体系0℃以上5000～12000rpm离心5～20min，收集上清。
优选的，步骤(5)的工作条件为：将步骤(4)获得的上清液用DNA打断仪破碎5s～5min。
优选的，步骤(6)的工作条件为：按照步骤(5)获得的反应体系总体积的1/10～1/5的体积比例加入10mol/L NH4AC溶液，再加入0℃以下预冷的无水乙醇，颠倒混匀，0℃以下放置30min以上；。
优选的，步骤(7)的工作条件为：将步骤(6)获得的反应液0℃以上6000～12000rpm离心5～20min，倾去无水乙醇，加入50wt％～80wt％的乙醇，使沉淀泛起，然后6000～12000rpm离心5～20min，保留沉淀。
优选的，所述的制备方法还包括用生理盐水悬浮步骤(7)获得的沉淀，然后置于真空冷冻干燥仪中干燥。
将步骤(7)获得的沉淀用TE液溶解，进行琼脂糖凝胶电泳，可验证本发明的制备方法得到的SMPDRN的分子量位于50bp～500bp的片段的数量在85％以上，高度集中。
在本发明的实施例2中，制备得SMPDRN的分子量位于100bp-200bp的片段的数量在90％以上。
本发明的制备方法产率高，达到9～14％；获得的产品纯度高，使用分光光度法检测其纯度(260nm/280nm)为1.6～1.9。
本发明特有的制备方法使SMPDRN的分子量集中于高功效范围，针对性更强，经细胞、动物、人体实验，发明人发现获得的产品在提高细胞活性、促进胶原蛋白合成、使受损皮肤再生、促进伤口愈合、紧致皮肤、增加皮肤弹性、消除皱纹、延缓皮肤衰老、抗氧化并防止色斑形成、抗炎、修复受损细胞等方面均具有显著优于现有PDRN的效果。实施例中有实验数据证实上述效果。
此外，本发明的制备方法实现了分子量集中于50～500bp甚至100bp～200bp，有效地避免了较大分子量或较小分子量片段的产生，成分的相对统一可提高其靶效性，增加其生物活性。
本发明的第三个目的是提供小分子多聚脱氧核糖核苷酸在化妆品、药品、营养食品、保健食品中的应用，应用形式包括面膜、乳剂、溶液、胶体制剂、粉针剂、注射液、片剂或胶囊。
本发明提供了SMPDRN在提高细胞活性，减少自由基生成，抗氧化中的应用
本发明提供了SMPDRN增加皮肤弹性，消除皱纹延缓皮肤衰老中的应用。
本发明提供了SMPDRN促进伤口愈合中的应用。
本发明提供了SMPDRN防止黑斑、黄褐斑、老年斑的形成中的应用。
本发明提供了SMPDRN抗炎作用，修复受损细胞中的应用.
本发明所述的SMPDRN在用于上述任一用途时，其使用剂量范围为每次0.1mg～1g，优选每次0.5mg～0.1g，更优选为每次1mg～20mg。
本发明的有益效果如下：
本发明中的SMPDRN的分子量集中于高功效范围，针对性更强，功效更稳定，获得的产品经细胞、动物、人体实验证实在提高细胞活性、促进胶原蛋白合成、使受损皮肤再生、促进伤口愈合、紧致皮肤、增加皮肤弹性、消除皱纹、延缓皮肤衰老、抗氧化并防止色斑形成、抗炎、修复受损细胞等方面均具有显著效果，优于现有PDRN产品。
此外，本发明的制备方法实现了分子量集中于50bp～500bp甚至100bp～200bp，有效地避免了较大分子量或较小分子量片段的产生,成分的相对单纯，可显著提高分子的靶效性，增强生物活性。
本发明提供了分子量可控的制备方法，实现了小分子多聚脱氧核糖核苷酸的精准制备。本发明中分子量高度集中的SMPDRN是通过本发明的制备方法获得的，本发明通过特有的裂解工艺与DNA打断仪的配合，获得了分子量高度集中于高功效区域、高纯度的产品。本发明的制备方法工艺简单、产率高、试剂成本低且不使用有机溶剂，有利于工业上规模化生产，无残留与污染排放。
由于本发明的产品功效显著、效果稳定且具有低致敏性，成分相对单纯，为化妆品、医药、营养食品、保健食品领域提供了一种优秀原料，在抗衰老、损伤修复方面具有巨大的潜力。
附图说明
图1为三文鱼DNA与人体DNA的相似性对比图；
图2为实施例1获得的SMPDRN的电泳图；
图3为实施例2、实施例3获得的SMPDRN的电泳图；
图4为实施例2获得的SMPDRN的红外色谱图；
图5为实施例2获得的SMPDRN对细胞活性的影响；
图6为实施例2获得的SMPDRN对细胞凋亡的影响；
图7为实施例2获得的SMPDRN对细胞抗氧化能力的影响；
图8为实施例2获得的SMPDRN对大鼠创口愈合的影响图表；
图9为实施例2获得的SMPDRN对斑马鱼创口愈合的影响图表；
图10为实施例8获得的SMPDRN涂抹式营养液对皮肤弹性的影响；
图11为实施例8获得的SMPDRN涂抹式营养液对皮肤含水量的影响；
图12为以本发明SMPDRN为活性成分的涂抹式营养液、导入式精华液对额头消皱、美白的效果对比照片；
图13为以本发明SMPDRN为活性成分的涂抹式营养液、导入式精华液对颈部消皱、美白的效果对比照片；
图14为以本发明SMPDRN为活性成分的涂抹式营养液、导入式精华液对背部美白的效果对比照片；
图15为以本发明SMPDRN为活性成分的面膜、导入式精华液对脸部祛痘、增白的效果对比照片；
图16为以本发明SMPDRN为活性成分的面膜、导入式精华液对额头祛痘、的效果对比照片；
图2中：A、1号样；B、2号样；C、3号样；D、4号样；
图3中：A、实施例3；B、实施例2；C、实施例2。
具体实施方式
实施例中使用的试剂与物料均为市售普通试剂与物料。实施例中使用的三文鱼为太平洋鲑鱼(大马哈鱼，来自黑龙江抚远县)。
实施例中使用的DNA打断仪型号为Sonicator-4000，生产商为美国Misonix公司。
实施例1
一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸SMPDRN的制备方法，包括如下步骤：
(1)精确称取四份三文鱼精巢组织,每份均为100g，标记为1～4号样，分别加入碱裂解液；1号样加入500mL碱裂解液(0.05mol/L EDTA,0.5mol/L NaOH,0.1％SDS)；2号样加入500mL碱裂解液(1mol/L EDTA,5mol/L NaOH,5％SDS)；3号样加入1500mL碱裂解液(0.05mol/L EDTA,0.5mol/L NaOH,0.1％SDS)；4号样加入1500mL裂解液(1mol/L EDTA,5mol/L NaOH,5wt％SDS)，迅速破碎组织，颠倒混匀，1号样置于90℃恒温水域60min，2号样置于100℃恒温水域15min，3号样置于90℃恒温水域60min，4号样置于100℃恒温水域15min。
(2)冰浴至40℃以下，1号样加入0.5mol/L Tris-HCl(pH8.0)，加入体积量占步骤(1)获得的反应体系体积的1/3；2号样加入4mol/Tris-HCl(pH8.0)，加入体积量与步骤(1)获得的反应体系体积比为1:1；3号样加入0.5mol/Tris-HCl(pH8.0)，加入体积量占步骤(1)获得的反应体系体积1/3；4号样加入4mol/Tris-HCl(pH8.0)，加入体积量与步骤(1)获得的反应体系体积比为1:1；将1～4号样均颠倒混匀；
(3)1号样加入5mol/L HCL，加入体积量占步骤(2)获得的反应体系体积的1/5；2号样加入0.5mol/L HCL，加入体积量与步骤(2)获得的反应体系体积比为1:1；3号样加入5mol/L HCL，加入的体积量占步骤(2)获得的反应体系体积的1/5；4号样加入0.5mol/LHCL，加入体积量与步骤(2)获得的反应体系体积比为1:1；将1～4号样均颠倒混匀；
(4)0～4℃条件下，1号样5000rpm离心20min；2号样12000rpm离心5min；3号样5000rpm离心20min；4号样12000rpm离心5min；1～4号样均收集上清。
(5)1号样用DNA打断仪6000焦耳/s破碎30s；2号样用DNA打断仪600焦耳/s破碎5min、3号样用DNA打断仪6000焦耳/秒破碎30s；4号样用DNA打断仪600焦耳/s破碎5min。
(6)1～4号样加入10mol/L NH4AC溶液，其体积量占步骤(5)获得的反应总体积的1/5，再加入-20℃预冷的无水乙醇，颠倒混匀，0～-20℃放置30min。
(7)0～4℃条件下，1号样6000rpm离心20min；2号样12000rpm离心5min；3号样6000rpm离心20min；4号样12000rpm离心5min；均倾去无水乙醇，加入浓度70wt％乙醇，轻轻吹打，使沉淀泛起，轻缓颠倒数次，然后12000rpm离心5min，傾去上部液体，残留乙醇用枪头吸除。
(8)取步骤(7)获得的少量沉淀，用TE液溶解，测定其浓度，进行琼脂糖凝胶电泳。
(9)用生理盐水悬浮沉淀步骤(7)获得的沉淀，然后置于真空冷冻干燥仪中干燥，获得SMPDRN。
对1～4号样的纯度进行检测，并计算产率。1号样A260/A280＝1.78，产率9.2％；2号样A260/A280＝1.80，产率9.8％；3号样A260/A280＝1.82，产率10.5％；4号样A260/A280＝1.85，产率9.4％。
如图2所示，图2为四个样品获得的SMPDRN的电泳图，1、2、3、4号样品所得SMPDRN的长短处于50bp～1000bp范围，其中50bp～500bp片段的质量占SMPDRN总质量的85％以上。
实施例2
一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸SMPDRN的制备方法，包括如下步骤：
(1)精确称取三文鱼精巢100g，加入600ml碱裂解液(0.1mol/L EDTA,2mol/LNaOH,0.5wt％SDS)，迅速破碎组织，颠倒混匀，95℃恒温水域20min.
(2)冰浴至40℃以下，加入2mol/L的Tris-HCl(pH8.0)，加入体积量占步骤(1)获得的反应体系体积的1/2，颠倒混匀。
(3)加入1mol/L的HCL，加入体积量占步骤(2)获得的反应体系体积的1/5，颠倒混匀。
(4)0～4℃条件下，6000rpm离心15min，收集上清。
(5)用DNA打断仪6000焦耳/s破碎30s。
(6)加入10mol/L NH4AC溶液,其体积占步骤(5)获得的反应体系总体积的1/10，再加入-20℃预冷的无水乙醇，颠倒混匀，-20℃放置2h。
(7)0～4℃条件下，10000rpm离心15min，倾去无水乙醇，加入浓度70wt％乙醇，轻轻吹打，使沉淀泛起，轻缓颠倒数次，然后10000rpm离心15min，傾去上部液体，残留乙醇用枪头吸除。
(8)取步骤(7)获得的少量沉淀，用TE液溶解，测定其浓度，进行琼脂糖凝胶电泳。
(9)用生理盐水悬浮沉淀步骤(7)获得的沉淀，然后置于真空冷冻干燥仪中干燥，获得SMPDRN。
实施例2获得的SMPDRN的纯度进行检测，并计算产率。纯度A260/A280＝1.82；产率高，达到14.1％。
如图3所示，图3中的B、C泳道为实施例2获得的SMPDRN的电泳图谱，其分子量长度100bp～200bp片段的质量占SMPDRN总质量90％以上。
实施例2获得的SMPDRN的红外图谱见图4。
实施例3
一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸SMPDRN的制备方法，包括如下步骤：
(1)精确称取三文鱼精巢100g，加入600ml碱裂解液(0.1mol/L EDTA,2mol/LNaOH,0.5wt％SDS)，迅速破碎组织，颠倒混匀，95℃恒温水域20min.
(2)冰浴至40℃以下，加入2mol/L的Tris-HCl(pH8.0)，加入体积量占步骤(1)获得的反应体系体积的1/2，颠倒混匀。
(3)加入1mol/L的HCL，加入体积量占步骤(2)获得的反应体系体积的1/5，颠倒混匀。
(4)0～4℃条件下，6000rpm离心15min，收集上清。
(5)用DNA打断仪600焦耳/s破碎5min。
(6)加入10mol/L NH4AC溶液,其体积占步骤(5)获得的反应体系总体积的1/10，再加入-20℃预冷的无水乙醇，颠倒混匀，-20℃放置2h。
(7)0～4℃条件下，10000rpm离心15min，倾去无水乙醇，加入浓度70wt％乙醇，轻轻吹打，使沉淀泛起，轻缓颠倒数次，然后10000rpm离心15min，傾去上部液体，残留乙醇用枪头吸除。
(8)取步骤(7)获得的少量沉淀，用TE液溶解，测定其浓度，进行琼脂糖凝胶电泳。
(9)用生理盐水悬浮沉淀步骤(7)获得的沉淀，然后置于真空冷冻干燥仪中干燥，获得SMPDRN。
如图3所示，图3中的A泳道为实施例3获得的SMPDRN的电泳图谱，其分子量长度100bp～500bp片段的质量占总质量的90％以上。实施例3与实施例2的区别仅在于其步骤(5)中DNA打断仪的破碎条件。
实施例4
一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸SMPDRN的制备方法，包括如下步骤：
(1)精确称取三文鱼卵巢100g，加入800ml碱裂解液(0.4mol/L EDTA,2mol/LNaOH,1.5wt％SDS)，迅速破碎组织，颠倒混匀，95℃恒温水域20min.
(2)冰浴至40℃以下，加入2mol/L的Tris-HCl(pH8.0)，加入体积量占步骤(1)获得的反应体系体积的1/2，颠倒混匀。
(3)加入1mol/L的HCL，加入体积量占步骤(2)获得的反应体系体积的1/4，颠倒混匀。
(4)18～25℃条件下，12000rpm离心10min，收集上清。
(5)用DNA打断仪600焦耳/s破碎5min。
(6)加入10mol/L NH4AC溶液,其体积占步骤(5)获得的反应体系总体积的1/10，再加入0℃以下预冷的无水乙醇，颠倒混匀，0℃以下放置5h。
(7)18～25℃条件下，12000rpm离心15min，倾去无水乙醇，加入浓度50wt％乙醇，轻轻吹打，使沉淀泛起，轻缓颠倒数次，然后6000rpm离心20min，傾去上部液体，残留乙醇用枪头吸除。
(8)用生理盐水悬浮沉淀步骤(7)获得的沉淀，然后置于真空冷冻干燥仪中干燥，获得SMPDRN。
实施例5
一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸SMPDRN的制备方法，包括如下步骤：
(1)精确称取三文鱼肉100g，加入1000ml碱裂解液(0.1mol/L EDTA,2mol/L NaOH,0.5wt％SDS)，迅速破碎组织，颠倒混匀，95℃恒温水域20min.
(2)冰浴至40℃以下，加入2mol/L的Tris-HCl(pH8.0)，加入体积量占步骤(1)获得的反应体系体积的1/2，颠倒混匀。
(3)加入1mol/L的HCL，加入体积量占步骤(2)获得的反应体系体积的1/2，颠倒混匀。
(4)18～25℃条件下，12000rpm离心10min，收集上清。
(5)用DNA打断仪6000焦耳/s破碎30s。
(6)加入10mol/L NH4AC溶液,其体积占步骤(5)获得的反应体系总体积的1/10，再加入0℃以下预冷的无水乙醇，颠倒混匀，0℃以下放置5h。
(7)18～25℃条件下，12000rpm离心15min，倾去无水乙醇，加入浓度50wt％乙醇，轻轻吹打，使沉淀泛起，轻缓颠倒数次，然后6000rpm离心20min，傾去上部液体，残留乙醇用枪头吸除。
(8)用生理盐水悬浮沉淀步骤(7)获得的沉淀，然后置于真空冷冻干燥仪中干燥，获得SMPDRN。
实施例6
一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸SMPDRN的制备方法，包括如下步骤：
(1)精确称取三文鱼内脏100g，加入600ml碱裂解液(0.4mol/L EDTA,2mol/LNaOH,1.5％SDS)，迅速破碎组织，颠倒混匀，95℃恒温水域20min.
(2)冰浴至40℃以下，加入2mol/L的Tris-HCl(pH8.0)，加入体积量占步骤(1)获得的反应体系体积的1/2，颠倒混匀。
(3)加入1mol/L的HCL，加入体积量占步骤(2)获得的反应体系体积的1/2，颠倒混匀。
(4)18～25℃条件下，12000rpm离心10min，收集上清。
(5)用DNA打断仪6000焦耳/s破碎20s。
(6)加入10mol/L NH4AC溶液,其体积占步骤(5)获得的反应体系总体积的1/10，再加入0℃以下预冷的无水乙醇，颠倒混匀，0℃以下放置5h。
(7)18～25℃条件下，12000rpm离心15min，倾去无水乙醇，加入浓度80wt％乙醇，轻轻吹打，使沉淀泛起，轻缓颠倒数次，然后6000rpm离心20min，傾去上部液体，残留乙醇用枪头吸除。
(8)用生理盐水悬浮沉淀步骤(7)获得的沉淀，然后置于真空冷冻干燥仪中干燥，获得SMPDRN。
实施例7
一种SMPDRN面膜的制备，以本发明实施例2获得的SMPDRN作为功效成分，具有抗氧化、增白、除皱的作用，其制备方法如下：
(1)用脂质体分别包埋0.01g还原型谷胱甘肽、0.02g透明质酸、0.005g SMPDRN和0.02g维生素E，获得各组分脂质体，然后置于60℃水浴中恒温30min；
(2)制备左旋维生素C、甘草素、六胜肽微胶囊，每个组分0.01g，然后将其置于60℃水浴中恒温30min；
(3)称取一定量尿囊素、甘油、丙二醇、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素，加水搅拌至澄明，将上述脂质体、微胶囊分别缓缓加入上述溶解液中，最后加入香精、防腐剂搅拌均匀，补足水至100.0g，即得全功效面膜精华液，然后进行灌装、包装，即得全功效面膜。
实施例8
一种SMPDRN涂抹式营养液的制备，以本发明实施例2获得的SMPDRN作为功效成分，其制备方法如下：
(1)按重量比称取各原料：25份玻尿酸、10份甘油、5份SMPDRN、2份L-抗坏血酸钠、3份稳定剂、3份角鲨烷、90份水。稳定剂由瓜尔胶、海藻糖、木糖醇搅拌混合均匀得到，其中瓜尔胶、海藻糖、木糖醇的质量比为1：1：1；
(2)将温度为90℃的水真空抽入至乳化锅内，在均质条件下加入稳定剂2000转/分均质处理5min；
(3)当温度降低至35℃时，向乳化锅内加入玻尿酸，2000转/min均质处理5min；加入SMPDRN，2000转/min均质处理5min；加入甘油，2000转/min均质处理5min；最后加入角鲨烷，2000转/min均质处理5min；降至室温，即得实施例3的直达真皮层的涂抹式营养液。
实施例9
一种SMPDRN导入式精华液的制备，以本发明实施例1中的样品1获得的SMPDRN作为功效成分，其制备方法如下：
称取5mg～100mg实施例1中的样品1获得的SMPDRN，谷胱甘肽2mg～100mg，溶于1～2ml生理盐水，制备成导入式精华液。
获得的导入式精华液具有祛痘、消皱，填充凹陷的功能。
实施例10
一种SMPDRN导入式精华液的制备，以本发明实施例2获得的SMPDRN作为功效成分，其制备方法如下：
称取5mg～100mg实施例1中的样品1获得的SMPDRN，谷胱甘肽2mg～100mg，溶于1～2ml生理盐水，制备成导入式精华液。
获得的导入式精华液具有消皱、保湿美白，增加皮肤弹性，延缓皮肤衰老的功能。
实验1
以实施例2获得的SMPDRN为例，测试SMPDRN对细胞活性、抗氧化酶活性、自由基生成的影响。
将HaCaT细胞分别接种于6孔板和96孔板，加入含10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素的DMEM高糖培养基，置于37℃5％CO2条件下培养。根据实验，将细胞分为正常对照组、H2O2组、SMPDRN(5μg/mL)、SMPDRN(50μg/mL)、SMPDRN(500μg/mL)、SMPDRN(5mg/mL)、SMPDRN(50mg/mL)。各给药组按要求给予SMPDRN使其达到终浓度。除正常组外，其余各组均加入150mMol H2O2。12小时后，分别利用MTT法、试剂盒检测细胞凋亡、抗氧化酶活性和ROS水平。
(1)HaCaT细胞接种于96孔板，除正常对照组外，其余各组均加入150mMolH2O2建立氧化应激模型。利用MTT法检测细胞活性。数值用±SD(n＝8),组间数据用SPSS 10.0单因素方差分析进行统计分析.*表示与正常对照组比较，**P<0.01,有极显著性差异；#表示与H2O2组比较，##P<0.01,有极显著性差异。结果如图5所示。
(2)HaCaT细胞接种于6孔板，除正常对照组外，其余各组均加入150mMolH2O2建立氧化应激模型。利用南京建成生物科技有限公司的凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况。数值用±SD(n＝8),组间数据用SPSS 10.0单因素方差分析进行统计分析.*表示与正常对照组比较，**P<0.01,有极显著性差异；#表示与H2O2组比较，#P<0.05或##P<0.01,有显著性或极显著性差异。结果如图6所示。
(3)HaCaT细胞接种于6孔板，除正常对照组外，其余各组均加入150mMolH2O2建立氧化应激模型。利用南京建成生物科技有限公司的生化试剂盒检测细胞抗氧化能力(SOD、GSH-Px、MDA、ROS)的变化。数值用±SD,组间数据用SPSS 10.0单因素方差分析进行统计分析.*表示与正常对照组比较，**P<0.01,有极显著性差异；#表示与H2O2组比较，#P<0.05或##P<0.01,有显著性或极显著性差异。结果如图7所示。
由图5、图6、图7可见，随着剂量的增加，本发明中的SMPDRN能有效地增加HaCaT细胞抗氧化酶活性，抑制ROS生成，降低MDA的产生。SMPDRN具有缓解氧化应激对皮肤细胞损伤的作用。
实验2
以实施例2获得的SMPDRN为例，测试SMPDRN对伤痕治愈的效果。
(1)取健康清洁级Sprague Dawley大鼠12只，分为对照组、SMPDRN(0.1％)组，每组6只。选取相同部位(背部)，用电推子剃毛。酒精棉球擦拭裸露皮肤后，用手术刀划开皮肤，伤口大小相同。对照组用生理盐水涂抹伤口，SMPDRN组用0.1％SMPDRN涂抹伤口。分别观察0、3、7、11天的伤口愈合情况。结果如图8所示。
数值用±SD(n＝6),组间数据用SPSS 10.0单因素方差分析进行统计分析.*表示与正常对照组比较，*P<0.05有显著性差异，**P<0.01有极显著性差异。
(2)选取10尾斑马鱼，分为对照组、SMPDRN(0.1％)组，每组5只。将鱼麻醉，用牙科钻距鱼鳃5mm处破损鱼表皮，将鱼放入不同的鱼缸中(对照组无任何添加，SMPDRN组加入SMPDRN其终浓度为0.05％)。观察对照组、SMPDRN组中创口在0、2、4、8、12、16天的变化。结果如图9所示。
由图8、9可见，SMPDRN能加快大鼠和斑马鱼体表创口的愈合。
实验3
皮肤弹性、皮肤角质层含水量是判断皮肤衰老的重要标志，我们通过检测上述指标来衡量含实施例8获得的SMPDRN涂抹式营养液的抗衰老作用。
选择健康、皮肤正常、无化妆品过敏史受试人群，年龄20-45岁，其中男性15位，女性15位，共分正常对照组(仅不含SMPDRN，其他成分均相同)、SMPDRN(0.001％)组、SMPDRN(0.01％)组、SMPDRN(0.1％)组、SMPDRN(1％)组5组,每组6人(3男3女)室温25℃±1℃；湿度50％±5％。一周为一个疗程，共四个疗程，每次使用前将面部清洁，且每次洁面时间相同，待皮肤晾干后使用相应产品，各组每天使用相应产品1次，取10g均匀涂抹于脸上。
(1)选择面颊部作为测试区域，分别于0周、1周、2周、3周、4周末次使用产品10min后进行测试。使用皮肤弹性测试仪测定皮肤弹性曲线，根据皮肤的拉伸量和回弹性数据，可对化妆品的保湿和抗衰老功能进行评估。
数值用±SD(n＝6),组间数据用SPSS 10.0单因素方差分析进行统计分析.*表示与正常对照组比较，*P<0.05有显著性差异，**P<0.01有极显著性差异。
(2)以面颊部4cm×4cm皮肤作为测试区域，分别于产品使用1h、2h、4h、6h后，用数字皮肤水分检测仪测面颊部皮肤含水量，用经皮水分散失测量仪测面颊部皮肤水分散失量，测定三次取平均值。
数值用±SD(n＝6),组间数据用SPSS 10.0单因素方差分析进行统计分析.*表示与正常对照组比较，*P<0.05有显著性差异，**P<0.01有极显著性差异。
不同浓度的SMPDRN涂抹式营养液，使用不同时期对皮肤弹性、含水量的影响见图10、图11。如图10所示，随着SMPDRN浓度的增加，SMPDRN涂抹式营养液能够明显增强皮肤弹性，说明SMPDRN具有良好的抗衰老和紧致肌肤等功效，增强肌肤弹性，深层修复肌肤，让肌肤充满活力。如图11所示，涂抹式营养液补水效果好、保湿时间长，说明含SMPDRN的涂抹式营养液可直达真皮层，能够有效抑制多余油脂，平衡肌肤油水，控油的同时还具有补水效果，持久保湿滋润，软化皮肤。
实验4
验证本发明的SMPDRN的消皱、美白效果。
以健康、皮肤正常、无化妆品过敏史受试人群，我们对长期(4个疗程以上，一周为一个疗程)使用以本发明的SMPDRN为主要成分的涂抹式营养液、导入式精华液的女性顾客进行跟踪观察，通过使用前与使用后的比较，如图12～14可见SMPDRN具有除皱、美白的效果。
涂抹式营养液、导入式精华液的额头除皱、美白效果见图12；
涂抹式营养液、导入式精华液的颈部消皱、美白效果见图13；
涂抹式营养液、导入式精华液的背部美白效果见图14。
需要注意的是图12、图13、图14的原图均为彩色照片，如果审查中认为显示的效果不清楚，申请人可提供原图作为证据。
实验5
以健康、无化妆品过敏史受试人群，我们对长期(5个疗程以上，一周为一个疗程)使用以本发明中SMPDRN为主要成分的增白面膜、导入式精华液的顾客进行跟踪观察，通过使用前与使用后的比较，如图可见SMPDRN具有祛斑祛痘、改善皮肤状态的效果。
脸部祛斑、增白效果见图15，额头皮肤祛痘改善效果见图16。
需要注意的是图15、图16的原图均为彩色照片，如果审查中认为显示的效果不清楚，申请人可提供原图作为证据。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (12)

1.一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸，其特征在于，来源于三文鱼，所述的小分子多聚脱氧核糖核苷酸的分子量位于50bp～500bp片段的质量占其总质量的85％以上。
2.根据权利要求1所述的小分子多聚脱氧核糖核苷酸，其特征在于，所述的小分子多聚脱氧核糖核苷酸的分子量位于100bp～200bp片段的质量占其总质量的90％以上。
3.根据根据权利要求1或2所述的小分子多聚脱氧核糖核苷酸，其特征在于，所述的小分子多聚脱氧核糖核苷酸的分子量为50～1000bp。
4.一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将三文鱼组织使用碱裂解液进行裂解，所述的碱裂解液含有0.05～1mol/L EDTA，0.5～5mol/L NaOH,0.1wt％～5wt％SDS；
(2)将步骤(1)获得的反应体系中加入Tris-HCl；
(3)向步骤(2)中获得的反应体系中加入HCL；
(4)将步骤(3)获得的反应体系离心，收集上清；
(5)将步骤(4)获得的上清液用DNA打断仪进行分子破碎；
(6)在步骤(5)获得的反应体系中加入NH4AC，再加入无水乙醇，放置30min以上；
(7)将步骤(6)获得的反应体系离心，保留沉淀，得小分子多聚脱氧核糖核苷酸。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)的工作条件为：在三文鱼组织中加入所述的碱裂解液，三文鱼组织与碱裂解液的用量比为1g:(5～15)mL；破碎组织，颠倒混匀，90～100℃恒温水浴15～60min。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)的工作条件为：将步骤(4)获得的上清液用DNA打断仪破碎5s～5min。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)的工作条件为：将步骤(1)获得的反应体系冰浴至40℃以下，按照其总体积的1/3～1的体积比例加入0.5～4mol/LTris-HCl，，颠倒混匀；
步骤(3)的工作条件为：按照步骤(2)获得的反应体系的总体积的1/5～1的体积比例加入0.5～5mol/L HCL,颠倒混匀；
步骤(4)的工作条件为：将步骤(3)获得的反应体系0℃以上5000～12000rpm离心5～20min，收集上清；
步骤(6)的工作条件为：按照步骤(5)获得的反应体系总体积的1/10～1/5的体积比例加入10mol/L NH4AC溶液，再加入0℃以下预冷的无水乙醇，颠倒混匀，0℃以下放置30min以上；
步骤(7)的工作条件为：将步骤(6)获得的反应液0℃以上6000～12000rpm离心5～20min，倾去无水乙醇，加入50wt％～80wt％的乙醇，使沉淀泛起，然后6000～12000rpm离心5～20min，保留沉淀。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法还包括用生理盐水悬浮步骤(7)获得的沉淀，然后置于真空冷冻干燥仪中干燥。
9.一种如权利要求1～3任一项所述的小分子多聚脱氧核糖核苷酸在化妆品、药品、营养食品、保健食品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，应用形式包括面膜、乳剂、溶液、胶体制剂、粉针剂、注射液、片剂或胶囊。
11.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，包括在提高细胞活性、减少自由基生成、抗氧化中的应用；包括在增加皮肤弹性、消除皱纹、延缓皮肤衰老中的应用；包括在促进伤口愈合中的应用；包括在防止黑斑、黄褐斑、老年斑的形成中的应用；包括在抗炎、修复受损细胞中的应用。
12.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述小分子多聚脱氧核糖核苷酸的使用剂量范围为0.1mg～1g/次。
CN201911191251.1A 2019-11-28 2019-11-28 一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸及其制备与应用 Withdrawn CN110747194A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911191251.1A CN110747194A (zh) 2019-11-28 2019-11-28 一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸及其制备与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911191251.1A CN110747194A (zh) 2019-11-28 2019-11-28 一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸及其制备与应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110747194A true CN110747194A (zh) 2020-02-04

Family

ID=69284968

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911191251.1A Withdrawn CN110747194A (zh) 2019-11-28 2019-11-28 一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸及其制备与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110747194A (zh)

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111214694A (zh) * 2020-03-31 2020-06-02 山东大鱼生物技术有限公司 一种具有止血和加速伤口愈合功能的敷料及其制备方法
CN112315836A (zh) * 2020-10-30 2021-02-05 润辉生物技术（威海）有限公司 一种高效的外用pdrn的制备方法及其应用
CN112618465A (zh) * 2021-01-28 2021-04-09 广州碧思特生物科技有限公司 植物祛痘褪红凝胶配方及制备工艺
CN112656701A (zh) * 2020-12-30 2021-04-16 王超云 一种含pdrn的美白祛斑组合物及其应用
CN112675063A (zh) * 2020-12-30 2021-04-20 王超云 一种含pdrn的嫩肤抗皱组合物及其应用
CN113143789A (zh) * 2021-03-30 2021-07-23 烟台德胜海洋生物科技有限公司 组合物及其在皮肤护理中的应用
CN113208993A (zh) * 2021-05-17 2021-08-06 威海萨维诺健康管理有限公司 一种具有多种功效的护肤精华液及其制备方法
CN113913420A (zh) * 2021-09-01 2022-01-11 尚诚怡美(成都)生物科技有限公司 一种固定长度重组多核苷酸/多脱氧核糖核苷酸制备方法及其应用
JP2022044559A (ja) * 2020-09-07 2022-03-17 バイオ メディ ファーム カンパニー リミテッド サケの精巣からの高純度ｐｄｒｎの抽出方法
CN115836982A (zh) * 2022-12-30 2023-03-24 南京乐韬生物科技有限公司 一种含pdrn的纳米乳液及其制备方法
CN115960153A (zh) * 2022-12-28 2023-04-14 南京乐韬生物科技有限公司 一种低内毒素小分子pdrn的制备方法及其应用
CN115960890A (zh) * 2023-03-16 2023-04-14 瑞吉明(山东)生物科技有限公司 Pdrn纯化方法及产品
CN116239668A (zh) * 2023-05-10 2023-06-09 瑞吉明(山东)生物科技有限公司 一种hCGβ亚基突变体及其在PDRN提取中的应用

Cited By (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111214694B (zh) * 2020-03-31 2022-04-22 山东大鱼生物技术有限公司 一种具有止血和加速伤口愈合功能的敷料及其制备方法
CN111214694A (zh) * 2020-03-31 2020-06-02 山东大鱼生物技术有限公司 一种具有止血和加速伤口愈合功能的敷料及其制备方法
JP2022044559A (ja) * 2020-09-07 2022-03-17 バイオ メディ ファーム カンパニー リミテッド サケの精巣からの高純度ｐｄｒｎの抽出方法
JP7236760B2 (ja) 2020-09-07 2023-03-10 バイオ メディ ファーム カンパニー リミテッド サケの精巣からのｐｄｒｎの製造方法
CN112315836A (zh) * 2020-10-30 2021-02-05 润辉生物技术（威海）有限公司 一种高效的外用pdrn的制备方法及其应用
CN112675063A (zh) * 2020-12-30 2021-04-20 王超云 一种含pdrn的嫩肤抗皱组合物及其应用
CN112656701A (zh) * 2020-12-30 2021-04-16 王超云 一种含pdrn的美白祛斑组合物及其应用
CN112618465A (zh) * 2021-01-28 2021-04-09 广州碧思特生物科技有限公司 植物祛痘褪红凝胶配方及制备工艺
CN113143789A (zh) * 2021-03-30 2021-07-23 烟台德胜海洋生物科技有限公司 组合物及其在皮肤护理中的应用
CN113143789B (zh) * 2021-03-30 2023-07-21 烟台德胜海洋生物科技有限公司 组合物及其在皮肤护理中的应用
CN113208993A (zh) * 2021-05-17 2021-08-06 威海萨维诺健康管理有限公司 一种具有多种功效的护肤精华液及其制备方法
CN113913420A (zh) * 2021-09-01 2022-01-11 尚诚怡美(成都)生物科技有限公司 一种固定长度重组多核苷酸/多脱氧核糖核苷酸制备方法及其应用
CN115960153A (zh) * 2022-12-28 2023-04-14 南京乐韬生物科技有限公司 一种低内毒素小分子pdrn的制备方法及其应用
CN115836982A (zh) * 2022-12-30 2023-03-24 南京乐韬生物科技有限公司 一种含pdrn的纳米乳液及其制备方法
CN115836982B (zh) * 2022-12-30 2024-02-06 南京乐韬生物科技有限公司 一种含pdrn的纳米乳液及其制备方法
CN115960890A (zh) * 2023-03-16 2023-04-14 瑞吉明(山东)生物科技有限公司 Pdrn纯化方法及产品
CN116239668A (zh) * 2023-05-10 2023-06-09 瑞吉明(山东)生物科技有限公司 一种hCGβ亚基突变体及其在PDRN提取中的应用
CN116239668B (zh) * 2023-05-10 2023-07-28 瑞吉明(山东)生物科技有限公司 一种hCGβ亚基突变体及其在PDRN提取中的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110747194A (zh) 一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸及其制备与应用
US10987302B2 (en) Methods for the production of a cosmetic composition from hatching fluid and uses thereof for improving the cosmetic appearance of skin
EP1663104B1 (en) Spongilla-based therapeutic compositions for treating and preventing acne
US10556937B2 (en) Methods for the production of a cosmetic composition comprising leukolectin and uses thereof
KR20100135871A (ko) 섬유모세포의 증식 및/또는 활성을 자극하는 활성 성분
EP2934556B1 (en) Cosmetic and pharmaceutical compositions from fish hatching fluid
EP2934700B1 (en) A cosmetic composition from fish hatching fluid, methods for its production and uses thereof for improving the cosmetic appearance of skin
TW201206494A (en) Use of Tiliacora triandra in cosmetics and compositions thereof
CN111991336A (zh) 一种多效凝胶精华及其制备方法与应用
KR101469797B1 (ko) 콜로이달 골드 제비집 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화 화장료 조성물
WO2020216283A1 (zh) 红色诺卡氏菌细胞壁骨架在治疗热损伤中的用途
WO2024021544A1 (zh) 维生素c乳酸酯及其类似物在制备皮肤组织用制品中的用途及其相关制品
US20100098732A1 (en) Methods, processes and compositions comprising the protein calmodulin (cam) for treatment of damaged or aging skin, and/or hair loss
KR102246949B1 (ko) 해조류 유래 폴리데옥시리보뉴클레오타이드 및 폴리뉴클레오타이드 추출물을 이용한 피부재생효과를 갖는 사료첨가제 조성물 및 이의 제조방법
CN100368540C (zh) 重组细胞球蛋白（Cytoglobin)的生产方法及其用途
JP5171752B2 (ja) 皮膚外用剤
WO2000006180A1 (es) Composicion para la estimulacion de la sintesis del pigmento melanico y procedimiento para su obtencion
CN112876535B (zh) 生物活性多肽及其应用
KR100296503B1 (ko) 비타민껌
CN112641655A (zh) 一种具有抗衰老抗炎功效的asbdv组合物及其应用
CN115960890A (zh) Pdrn纯化方法及产品
KR20050006004A (ko) 구리-펩타이드(Copper peptide)를 함유하는 화장료 조성물
WO2021037383A1 (en) COSMETIC USE OF β-L-ASPARTYL-L-ARGININE
KR20180123640A (ko) 유전자 그룹의 발현을 조절하기 위한 노티드랙 추출물의 용도
JP2009084210A (ja) 細胞賦活剤

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20200204

WW01 Invention patent application withdrawn after publication