CN110746618A - 一种可注射丝素蛋白原位凝胶的制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种可注射丝素蛋白原位凝胶的制备方法及其应用，是将改性丝素蛋白溶液与预混液充分混合得到，其中，改性丝素蛋白溶液与预混液的体积比为1：3～5，所述改性丝素蛋白溶液是将丝素蛋白溶液中的丝素蛋白经二乙烯三胺五乙酸改性而得，所述预混液是由壳聚糖硫酸酯、1,2‑丙二醇碳酸酯、第一部分蒸馏水、β‑甘油磷酸钠、泊洛沙姆188、第二部分蒸馏水混合，由于改性丝素蛋白与预混液成分均具有较多的亲水性基团，彼此之间反向胶凝，故整体在常温状态下呈液体状态，满足给药时良好的流动性，注射给药后，随着体内温度升高，逐渐凝胶化，由液体状态变为半固体凝胶状，有助于药物缓慢释放，从而达到缓释目的。

Description

一种可注射丝素蛋白原位凝胶的制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别地，涉及一种可注射丝素蛋白原位凝胶的制备方法及其应用。
背景技术
水凝胶是一种以水为分散介质的高分子交联网状结构的材料，因其富含水分，性质柔软并具有一定形态，因其在传感器、医学应用、化妆品等领域具有突出的应用前景，尤其是在组织修复材料、药物缓释基质材料、皮肤病防治和术后止血及防粘连方面，故备受关注。在临床实际使用过程中，通过针头或导管将流动性的液体或半固体凝胶注射到体内，再通过控制某种物理或化学条件诱导其快速形成水不溶性的固体状凝胶，即可注射原位凝胶，从而实现无痛、免开刀治疗。
其中，天然高分子如透明质酸、葡聚糖、海藻酸、硫酸软骨素、壳聚糖、果胶、明胶、聚乙二醇、纤维蛋白等因其优良的生物相容性和可降解或可被吸收等特点，被深入地研究和广泛地应用于医用水凝胶的设计与合成。但每种材料各有优缺点，包括降解时间过短，植入体内引发炎症反应，包埋的药物活性丢失及材料处理制备过程复杂等，很难满足临床应用的要求。对于大多数组织修复和药物缓释应用来说，治疗的周期都较长(几周至几个月)，通常使用的医用聚合物凝胶，如胶原蛋白、透明质酸、聚乙酸等由于降解时间通常较快(几天至几周)，很难达到临床应用的要求。
丝素蛋白是从蚕丝中提取的天然生物材料，可以加工成薄膜、颗粒、多孔支架和水凝胶等多种材料形态。丝素蛋白可通过多种方法制备水凝胶，如改变溶液的酸碱度，盐析，超声振荡法，旋涡混合法，电泳法，聚乙二醇诱导法等。但丝素蛋白水凝胶仍存在种种不足，例如低浓度的丝素蛋白水凝胶机械性能较差，降解速率太快，药物的突释明显，后期缓释不稳定等；高浓度的丝素蛋白水凝胶包埋的药物释放不完全等。
专利CN103289107B公开了一种可注射丝素蛋白原位凝胶，是将质量百分比3～30％的丝素蛋白水溶液与质量百分比50～100％的聚乙二醇或丙二醇溶液按照一定体积比进行充分混合，得到共混合，然后凝固形成原位凝胶。该专利实现了在1～10分钟内原位成胶，并且通过羟丙基-β-环糊精的作用有效防止丝素蛋白在保存和冻干过程中发生变性凝聚。但是，该原位凝胶包埋药物后前期释放过快(降解过快)，后期释放缓慢(降解放缓，导致药物释放不完全)，不能实现药物的均匀缓慢释放。
发明内容
本发明目的在于提供一种可注射丝素蛋白原位凝胶的制备方法及其应用，以解决药物释放不均匀等技术问题。
为实现上述目的，本发明提供了一种可注射丝素蛋白原位凝胶的制备方法，是将改性丝素蛋白溶液与预混液充分混合得到，其中，改性丝素蛋白溶液与预混液的体积比为1：3～5，所述改性丝素蛋白溶液是将丝素蛋白溶液中的丝素蛋白经二乙烯三胺五乙酸改性而得，所述预混液是由壳聚糖硫酸酯、1,2-丙二醇碳酸酯、第一部分蒸馏水、β-甘油磷酸钠、泊洛沙姆188、第二部分蒸馏水按照质量比1：0.2～0.3：3～5：0.5～0.8：2～3：8～10混合，然后利用二乙烯三胺五乙酸改性得到。
优选的，所述改性丝素蛋白溶液的制备方法如下：以质量份计，先将1份二乙烯三胺五乙酸用3～5份蒸馏水溶解后，调节pH＝4～5，然后加入4～6份N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的盐酸溶液，0～5℃混合均匀后滴加至5～8份丝素蛋白溶液中，加热至70～80℃搅拌反应20～25小时，自然冷却至室温(25℃)，即得所述的改性丝素蛋白溶液。
进一步优选的，N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的盐酸溶液是将N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐加入3～5倍两者总重量的质量浓度20～30％的盐酸溶液中，搅拌溶解即得，其中，N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1：1.1～1.3。
优选的，丝素蛋白溶液的制备方法如下：先将蚕丝进行脱胶处理，然后进行水解，即得所述的丝素蛋白溶液。
进一步优选的，所述蚕丝为桑蚕丝、柞蚕丝、蓖麻蚕丝或天蚕丝。
进一步优选的，脱胶处理的具体方法是：将蚕丝浸泡于4～6倍重量的质量浓度0.05～0.1％碳酸钠水溶液中，边搅拌边煮沸处理30～40分钟，重复3～4次，捞出后用去离子水洗涤2～3次即可。
进一步优选的，水解的具体方法是：将脱胶处理后的蚕丝浸泡于3～5倍重量的质量浓度1～1.2％的氯化钾溶液中，在130～140℃和0.5～0.6MPa条件下处理2～3小时。
优选的，所述预混液的制备方法如下：先将壳聚糖硫酸酯和1,2-丙二醇碳酸酯加入第一部分蒸馏水中，60～80℃水浴加热20～30分钟，接着加入预先溶于第二部分蒸馏水的β-甘油磷酸钠、泊洛沙姆188，搅拌混匀得到混合液，然后利用二乙烯三胺五乙酸进行改性处理即得。
进一步优选的，改性处理的具体方法是：以质量份计，先将1份二乙烯三胺五乙酸用3～5份蒸馏水溶解后，调节pH＝4～5，然后加入4～6份N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的盐酸溶液，0～5℃混合均匀后滴加至6～8份混合液中，加热至70～80℃搅拌反应20～25小时，自然冷却至室温(25℃)，即得所述的预混液。
更进一步优选的，N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的盐酸溶液是将N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐加入3～5倍两者总重量的质量浓度20～30％的盐酸溶液中，搅拌溶解即得，其中，N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1：1.1～1.3。
优选的，丝素蛋白溶液与预混液的混合方法如下：将丝素蛋白溶液与预混液分别吸入两个注射器中，溶液的体积不超过注射器体积的一半，再将两个注射器以连接器相连，之后交替互推，直至充分混合。
进一步优选的，注射时，可将充分混合后所得共混液置于一侧的注射器中，去掉另一侧的空注射器和连接器，换上针头，缓慢将共混液推出针头进行注射。
利用上述制备方法得到的一种可注射丝素蛋白原位凝胶。
上述一种可注射丝素蛋白原位凝胶作为药物缓释材料的应用。
本发明具有以下有益效果：
本发明利用改性丝素蛋白溶液与预混液充分混合得到一种可注射丝素蛋白原位凝胶，由于改性丝素蛋白与预混液成分均具有较多的亲水性基团，彼此之间反向胶凝，故整体在常温状态下呈液体状态，满足给药时良好的流动性，注射给药后，随着体内温度升高，逐渐凝胶化，由液体状态变为半固体凝胶状，有助于药物缓慢释放，从而达到缓释目的。
本发明的改性丝素蛋白溶液与预混液的配比非常关键，预混液的用量过少会导致凝胶化不充分，造成药物突释等问题，预混液的用量过多会导致过度凝胶化，使得药物无法完全释放。改性丝素蛋白溶液和预混液均利用二乙烯三胺五乙酸进行改性处理，二乙烯三胺五乙酸有5个羧基，具有良好的亲水性，促进丝素蛋白的常温预混液中稳定存在，防止胶凝化。而当注射入体内后，由温度敏感的泊洛沙姆188率先胶凝化，打破整个体系亲水平衡，逐渐、缓慢胶凝化，可促进药物在其中的均匀分布，有利于后续缓慢、均匀释放。
改性丝素蛋白溶液是由丝素蛋白溶液经二乙烯三胺五乙酸改性而得，丝素蛋白本身含有丰富的氨基、羧基，经二乙烯三胺五乙酸改性后，由于二乙烯三胺五乙酸有5个羧基，通过1个羧基与丝素蛋白中氨基的反应，引入更多羧基，实现丝素蛋白的高度枝化。预混液是由壳聚糖硫酸酯、1,2-丙二醇碳酸酯、第一部分蒸馏水、β-甘油磷酸钠、泊洛沙姆188、第二部分蒸馏水混合后利用二乙烯三胺五乙酸改性得到，壳聚糖硫酸酯具有大量氨基和羟基，丙二醇碳酸酯的羰基两侧分别连接氧原子并形成五元环结构，β-甘油磷酸钠具有羟基，泊洛沙姆188含有羟基和大量醚键，预混液也利用二乙烯三胺五乙酸改性实现高度枝化。高度枝化结构使得形成的凝胶更加疏松，缓释效果更好。
由于丝素蛋白含有丰富的羟基、氨基、亚氨基等，经改性处理后还有大量羧基，它们可与预混液中的氨基、羟基等形成氢键，一旦凝胶化开始，可以促进凝胶化进程的快速实现。
除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本发明还有其它的目的、特征和优点。下面将对本发明作进一步详细的说明。
具体实施方式
以下对本发明的实施例进行详细说明，但是本发明可以根据权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。
实施例1：
一种可注射丝素蛋白原位凝胶的制备方法，是将改性丝素蛋白溶液与预混液充分混合得到，其中，改性丝素蛋白溶液与预混液的体积比为1：5，所述改性丝素蛋白溶液是将丝素蛋白溶液中的丝素蛋白经二乙烯三胺五乙酸改性而得，所述预混液是由壳聚糖硫酸酯、1,2-丙二醇碳酸酯、第一部分蒸馏水、β-甘油磷酸钠、泊洛沙姆188、第二部分蒸馏水按照质量比1：0.2：5：0.5：3：8混合，然后利用二乙烯三胺五乙酸改性得到。
改性丝素蛋白溶液的制备方法如下：以质量份计，先将1份二乙烯三胺五乙酸用5份蒸馏水溶解后，调节pH＝4，然后加入6份N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的盐酸溶液，0℃混合均匀后滴加至8份丝素蛋白溶液中，加热至70℃搅拌反应25小时，自然冷却至室温(25℃)，即得所述的改性丝素蛋白溶液。
N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的盐酸溶液是将N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐加入3倍两者总重量的质量浓度30％的盐酸溶液中，搅拌溶解即得，其中，N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1：1.1。
丝素蛋白溶液的制备方法如下：先将蚕丝进行脱胶处理，然后进行水解，即得所述的丝素蛋白溶液。所述蚕丝为桑蚕丝。脱胶处理的具体方法是：将蚕丝浸泡于6倍重量的质量浓度0.05％碳酸钠水溶液中，边搅拌边煮沸处理40分钟，重复3次，捞出后用去离子水洗涤3次即可。水解的具体方法是：将脱胶处理后的蚕丝浸泡于3倍重量的质量浓度1.2％的氯化钾溶液中，在130℃和0.6MPa条件下处理2小时。
预混液的制备方法如下：先将壳聚糖硫酸酯和1,2-丙二醇碳酸酯加入第一部分蒸馏水中，80℃水浴加热20分钟，接着加入预先溶于第二部分蒸馏水的β-甘油磷酸钠、泊洛沙姆188，搅拌混匀得到混合液，然后利用二乙烯三胺五乙酸进行改性处理即得。
改性处理的具体方法是：以质量份计，先将1份二乙烯三胺五乙酸用5份蒸馏水溶解后，调节pH＝5，然后加入4份N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的盐酸溶液，5℃混合均匀后滴加至6份混合液中，加热至80℃搅拌反应20小时，自然冷却至室温(25℃)，即得所述的预混液。
N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的盐酸溶液是将N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐加入5倍两者总重量的质量浓度20％的盐酸溶液中，搅拌溶解即得，其中，N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1：1.3。
丝素蛋白溶液与预混液的混合方法如下：将丝素蛋白溶液与预混液分别吸入两个注射器中，溶液的体积不超过注射器体积的一半，再将两个注射器以连接器相连，之后交替互推，直至充分混合。注射时，可将充分混合后所得共混液置于一侧的注射器中，去掉另一侧的空注射器和连接器，换上针头，缓慢将共混液推出针头进行注射。
实施例2：
一种可注射丝素蛋白原位凝胶的制备方法，是将改性丝素蛋白溶液与预混液充分混合得到，其中，改性丝素蛋白溶液与预混液的体积比为1：3，所述改性丝素蛋白溶液是将丝素蛋白溶液中的丝素蛋白经二乙烯三胺五乙酸改性而得，所述预混液是由壳聚糖硫酸酯、1,2-丙二醇碳酸酯、第一部分蒸馏水、β-甘油磷酸钠、泊洛沙姆188、第二部分蒸馏水按照质量比1：0.3：3：0.8：2：10混合，然后利用二乙烯三胺五乙酸改性得到。
改性丝素蛋白溶液的制备方法如下：以质量份计，先将1份二乙烯三胺五乙酸用3份蒸馏水溶解后，调节pH＝5，然后加入4份N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的盐酸溶液，5℃混合均匀后滴加至5份丝素蛋白溶液中，加热至80℃搅拌反应20小时，自然冷却至室温(25℃)，即得所述的改性丝素蛋白溶液。
N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的盐酸溶液是将N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐加入5倍两者总重量的质量浓度20％的盐酸溶液中，搅拌溶解即得，其中，N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1：1.3。
丝素蛋白溶液的制备方法如下：先将蚕丝进行脱胶处理，然后进行水解，即得所述的丝素蛋白溶液。所述蚕丝为天蚕丝。脱胶处理的具体方法是：将蚕丝浸泡于4倍重量的质量浓度0.1％碳酸钠水溶液中，边搅拌边煮沸处理30分钟，重复4次，捞出后用去离子水洗涤2次即可。水解的具体方法是：将脱胶处理后的蚕丝浸泡于5倍重量的质量浓度1％的氯化钾溶液中，在140℃和0.5MPa条件下处理3小时。
预混液的制备方法如下：先将壳聚糖硫酸酯和1,2-丙二醇碳酸酯加入第一部分蒸馏水中，60℃水浴加热30分钟，接着加入预先溶于第二部分蒸馏水的β-甘油磷酸钠、泊洛沙姆188，搅拌混匀得到混合液，然后利用二乙烯三胺五乙酸进行改性处理即得。
改性处理的具体方法是：以质量份计，先将1份二乙烯三胺五乙酸用3份蒸馏水溶解后，调节pH＝5，然后加入4份N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的盐酸溶液，0℃混合均匀后滴加至8份混合液中，加热至70℃搅拌反应25小时，自然冷却至室温(25℃)，即得所述的预混液。
N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的盐酸溶液是将N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐加入3倍两者总重量的质量浓度30％的盐酸溶液中，搅拌溶解即得，其中，N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1：1.1。
丝素蛋白溶液与预混液的混合方法如下：将丝素蛋白溶液与预混液分别吸入两个注射器中，溶液的体积不超过注射器体积的一半，再将两个注射器以连接器相连，之后交替互推，直至充分混合。注射时，可将充分混合后所得共混液置于一侧的注射器中，去掉另一侧的空注射器和连接器，换上针头，缓慢将共混液推出针头进行注射。
实施例3：
一种可注射丝素蛋白原位凝胶的制备方法，是将改性丝素蛋白溶液与预混液充分混合得到，其中，改性丝素蛋白溶液与预混液的体积比为1：4，所述改性丝素蛋白溶液是将丝素蛋白溶液中的丝素蛋白经二乙烯三胺五乙酸改性而得，所述预混液是由壳聚糖硫酸酯、1,2-丙二醇碳酸酯、第一部分蒸馏水、β-甘油磷酸钠、泊洛沙姆188、第二部分蒸馏水按照质量比1：0.25：4：0.6：2.5：9混合，然后利用二乙烯三胺五乙酸改性得到。
改性丝素蛋白溶液的制备方法如下：以质量份计，先将1份二乙烯三胺五乙酸用4份蒸馏水溶解后，调节pH＝4，然后加入5份N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的盐酸溶液，2℃混合均匀后滴加至7份丝素蛋白溶液中，加热至75℃搅拌反应22小时，自然冷却至室温(25℃)，即得所述的改性丝素蛋白溶液。
N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的盐酸溶液是将N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐加入4倍两者总重量的质量浓度25％的盐酸溶液中，搅拌溶解即得，其中，N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1：1.2。
丝素蛋白溶液的制备方法如下：先将蚕丝进行脱胶处理，然后进行水解，即得所述的丝素蛋白溶液。所述蚕丝为柞蚕丝。脱胶处理的具体方法是：将蚕丝浸泡于5倍重量的质量浓度0.08％碳酸钠水溶液中，边搅拌边煮沸处理35分钟，重复4次，捞出后用去离子水洗涤2次即可。水解的具体方法是：将脱胶处理后的蚕丝浸泡于4倍重量的质量浓度1.1％的氯化钾溶液中，在135℃和0.55MPa条件下处理2.5小时。
预混液的制备方法如下：先将壳聚糖硫酸酯和1,2-丙二醇碳酸酯加入第一部分蒸馏水中，70℃水浴加热25分钟，接着加入预先溶于第二部分蒸馏水的β-甘油磷酸钠、泊洛沙姆188，搅拌混匀得到混合液，然后利用二乙烯三胺五乙酸进行改性处理即得。
改性处理的具体方法是：以质量份计，先将1份二乙烯三胺五乙酸用4份蒸馏水溶解后，调节pH＝4，然后加入5份N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的盐酸溶液，2℃混合均匀后滴加至7份混合液中，加热至75℃搅拌反应22小时，自然冷却至室温(25℃)，即得所述的预混液。
N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的盐酸溶液是将N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐加入4倍两者总重量的质量浓度25％的盐酸溶液中，搅拌溶解即得，其中，N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1：1.2。
丝素蛋白溶液与预混液的混合方法如下：将丝素蛋白溶液与预混液分别吸入两个注射器中，溶液的体积不超过注射器体积的一半，再将两个注射器以连接器相连，之后交替互推，直至充分混合。注射时，可将充分混合后所得共混液置于一侧的注射器中，去掉另一侧的空注射器和连接器，换上针头，缓慢将共混液推出针头进行注射。
对比例1
丝素蛋白溶液未经改性处理，其余同实施例1。
对比例2
预混液未经改性处理，其余同实施例1。
对比例3
预混液中略去壳聚糖硫酸酯，其余同实施例1。
对比例4
预混液中略去1,2-丙二醇碳酸酯，其余同实施例1。
对比例5
预混液中略去β-甘油磷酸酯，其余同实施例1。
对比例6
预混液中略去泊洛沙姆188，其余同实施例1。
试验例
以人胰岛素为例，直接将胰岛素(胰岛素与预混液的质量比为1：5)加入预混液中，搅拌混匀后立刻按照实施例1～3或对比例1～6的方法进行混合，将充分混合后的共混液注射到pH7.4的磷酸缓冲液中，37℃温育，观察呈凝胶状的时间，随后利用高压液相色谱(HPLC)和酶联免疫吸附法(ELISA)对磷酸缓冲液中的胰岛素浓度进行实时定量检测，并定期更换新鲜的磷酸缓冲液，直到胰岛素从凝胶中的释放基本结束。检测结果见表1。
表1.缓释效果考察
Figure BDA0002259261100000071
Figure BDA0002259261100000081
由表1可知，实施例1～3凝胶化进程快，且凝胶的缓释效果好。对比例1的丝素蛋白溶液未经改性处理，对比例2的预混液未经改性处理，对比例3的预混液中略去壳聚糖硫酸酯，对比例4的预混液中略去1,2-丙二醇碳酸酯，对比例5的预混液中略去β-甘油磷酸酯，对比例6的预混液中略去泊洛沙姆188，所得凝胶的缓释效果均明显变差(开始释放快，最后无法完全释放)，说明本发明的枝化处理和预混液组分的协同配合有利于改善凝胶的缓释效果。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种可注射丝素蛋白原位凝胶的制备方法，是将改性丝素蛋白溶液与预混液充分混合得到，其特征在于，改性丝素蛋白溶液与预混液的体积比为1：3～5，所述改性丝素蛋白溶液是将丝素蛋白溶液中的丝素蛋白经二乙烯三胺五乙酸改性而得，所述预混液是由壳聚糖硫酸酯、1,2-丙二醇碳酸酯、第一部分蒸馏水、β-甘油磷酸钠、泊洛沙姆188、第二部分蒸馏水按照质量比1：0.2～0.3：3～5：0.5～0.8：2～3：8～10混合，然后利用二乙烯三胺五乙酸改性得到。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述改性丝素蛋白溶液的制备方法如下：以质量份计，先将1份二乙烯三胺五乙酸用3～5份蒸馏水溶解后，调节pH＝4～5，然后加入4～6份N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的盐酸溶液，0～5℃混合均匀后滴加至5～8份丝素蛋白溶液中，加热至70～80℃搅拌反应20～25小时，自然冷却至室温，即得所述的改性丝素蛋白溶液。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，丝素蛋白溶液的制备方法如下：先将蚕丝进行脱胶处理，然后进行水解，即得所述的丝素蛋白溶液。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述预混液的制备方法如下：先将壳聚糖硫酸酯和1,2-丙二醇碳酸酯加入第一部分蒸馏水中，60～80℃水浴加热20～30分钟，接着加入预先溶于第二部分蒸馏水的β-甘油磷酸钠、泊洛沙姆188，搅拌混匀得到混合液，然后利用二乙烯三胺五乙酸进行改性处理即得。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，改性处理的具体方法是：以质量份计，先将1份二乙烯三胺五乙酸用3～5份蒸馏水溶解后，调节pH＝4～5，然后加入4～6份N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的盐酸溶液，0～5℃混合均匀后滴加至6～8份混合液中，加热至70～80℃搅拌反应20～25小时，自然冷却至室温，即得所述的预混液。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，丝素蛋白溶液与预混液的混合方法如下：将丝素蛋白溶液与预混液分别吸入两个注射器中，溶液的体积不超过注射器体积的一半，再将两个注射器以连接器相连，之后交替互推，直至充分混合。
7.利用权利要求1～6中任一项所述制备方法得到的一种可注射丝素蛋白原位凝胶。
8.权利要求7所述一种可注射丝素蛋白原位凝胶作为药物缓释材料的应用。
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