CN110741099B - 评估个体的登革热病毒感染严重程度的方法、检测装置及检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

提供一种评估个体的登革热病毒感染严重程度的方法，藉由检测个体的体外生物样品以执行。所述方法包含检测体外生物样品中是否存在非结构蛋白质1，得到第一检测结果；检测体外生物样品中是否存在复合物，得到第二检测结果，其中复合物包含非结构蛋白质1与凝血酶，或是包含非结构蛋白质1与凝血酶原；及藉由第一检测结果及第二检测结果评估个体登革热病毒的感染严重程度。还提供一种用于评估个体的登革热病毒感染严重程度的检测装置及检测试剂盒。

Description

评估个体的登革热病毒感染严重程度的方法、检测装置及检 测试剂盒
技术领域
本发明是关于一种评估个体的登革热病毒感染严重程度(severity of denguevirus infection)的方法。本发明也关于一种用于评估个体的登革热病毒感染严重程度的检测装置(detection device)及检测试剂盒(detection kit)。
背景技术
登革热(dengue fever)是一种经由登革热病毒(dengue virus，DENV)的感染所引起的蚊媒热带病(mosquito-borne tropical disease)。依据世界卫生组织(World HealthOrganization，WHO)所发布的登革热的临床处理手册(Handbook for ClinicalManagement of Dengue)，感染登革热病毒的病患可依严重程度(severity)而区分为下列三群：(1)A群(group A)病患，其特征为不具有警示症状(warning signs)，例如不具有腹部疼痛或压痛(abdominal pain or tenderness)、持续性呕吐(persistent vomiting)、临床体液蓄积(clinical fluid accumulation)或黏膜出血(mucosal bleed)；(2)B群(groupB)病患，其特征为具有上述警示症状；及(3)C群(group C)病患，其特征为严重血浆渗漏(severe plasma leakage)而造成休克(shock)及体液蓄积并呼吸窘迫(respiratorydistress)、严重出血(severe bleeding)或严重器官损伤(severe organ impairment)。
登革热病毒是一种黄病毒科(Flaviviridae)、黄病毒属(Flavivirus)的单股正链RNA病毒(single positive-stranded RNA virus)，依据抗原性(antigenicity)的不同主要可区分为四种血清型(serotype)，包括DENV-1、DENV-2、DENV-3及DENV-4。受到登革热病毒感染的个体会出现口鼻出血(mouth and nose bleeding)、头痛(headache)、呕吐(vomiting)、红疹(rash)及肌肉与关节疼痛(muscle and joints pain)等症状，严重者甚至会产生止血异常(abnormal hemostasis)、登革出血热(dengue hemorrhage fever，DHF)及登革热休克综合征(dengue shock syndrome，DSS)。因此，防治登革热已成为本领域的研究人员所重视的课题。
登革热病毒的基因组(genome)包括大约11,000个碱基(base)而可编码衣壳蛋白C(capsid protein C)、膜蛋白M(membrane protein M)及包膜蛋白E(envelope protein E)等三种结构蛋白质(structural protein)及非结构蛋白质1(NS1)、非结构蛋白质2A(NS2A)、非结构蛋白质2B(NS2B)、非结构蛋白质3(NS3)、非结构蛋白质4A(NS4A)、非结构蛋白质4B(NS4B)及非结构蛋白质5(NS5)等七种非结构蛋白质(nonstructural protein，NS)，其中非结构蛋白质仅在受感染的宿主细胞中发现到。已有研究指出，非结构蛋白质1(NS1)在登革热病毒复制中扮演重要的角色，并且与登革热所引起的症状(例如登革出血热)有密切关联(Libraty D.H.et al.(2002),J.Infect.Dis.,186:1165-1168；Fan J.et al.(2014),Virol.Sin.,29:162-169)。
NS1是一种46至50kDa的糖蛋白(glycoprotein)，其在受感染的哺乳动物细胞中表达并且呈分泌型(secreted form)及膜结合型(membrane-associated form)。由于NS1与登革热之间的密切关联性，已有研究人员以NS1作为检测个体是否受到登革热病毒感染的重要标记(marker)。例如，有文献报导，检测NS1对于登革热病毒感染的早期诊断是重要的(Badave G.K.et al.(2015),Int.J.Curr.Microbiol.App.Sci.,4:779-784)。
目前已知用于检测登革热病毒感染的方法主要是单独地利用抗NS1特异性抗体(anti-NS1specific antibody)，并通过免疫方式进行检测。然而，已知方法中不论是将病毒自病患体内分离，或是藉由反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerasechain reaction，RT-PCR)来判断感染的病毒类型，都是极为耗时、高成本，且高度依赖实验室器材才能进行的检测手段，应用范围相当狭隘。
除此之外，已知的检测方法必须在条件严谨的环境下操作，以免稍有不慎造成污染，影响检测结果。更重要的是，仅单独以NS1为检测标记灵敏度(sensitivity)不足，往往造成误诊或延误治疗等后果。
此外，已有研究是利用特异性结合包含NS1与凝血酶(thrombin)的复合物(complex)或是包含NS1与凝血酶原(prothrombin)的复合物的抗体来检测登革热病毒感染。例如，TW I428598B揭示一种黄病毒科病毒感染的检测方法，藉由检测生物样本是否含有由NS1与凝血酶两种蛋白质或NS1与凝血酶原两种蛋白质所形成的复合物，以判断患者是否感染登革热病毒。US2016/0363590A1揭示一种利用如嗅介蛋白4(olfactomedin 4)或NS1的蛋白质标记(protein marker)来早期预测严重性登革热或出血性登革热(hemorrhagicdengue)的方法。
在上述的背景技术中是通过检测体外生物样品(in vitro biological sample)中是否存在包含NS1与凝血酶的复合物或是包含NS1与凝血酶原的复合物来判断个体是否有感染登革热病毒。然而，登革热的严重程度存在相当大的差异，最严重者可能会导致死亡。若患者仅得知自己感染登革热病毒而无法进一步了解感染的严重程度，很可能会忽视病况而延误治疗的时机。因此，若能开发出一种通过检测体外生物样品来评估个体的登革热病毒感染严重程度的方法、检测装置及检测试剂盒，将会对登革热的治疗策略带来突破。
发明内容
鉴于已知方法及技术仅能通过检测体外生物样品中是否存在包含NS1与凝血酶的复合物或是包含NS1与凝血酶原的复合物来判断个体是否有感染登革热病毒，而无法快速鉴定患者的登革热病毒感染的严重程度，导致患者忽视病况，甚而延误治疗的时机。
在本发明中，申请人发现且经由实验证实：依据本发明的方法可准确地检测个体的登革热病毒感染而具有高灵敏度及高准确率，且当体外生物样品中同时存在有NS1及包含NS1及凝血酶的复合物时，表示所述个体的登革热感染程度较为严重。
本发明的上述及其它目的、特征与突出效果，将在以下段落加以说明。
本发明提供一种评估个体的登革热病毒感染严重程度的方法，藉由检测个体的体外生物样品以执行。所述方法包含以下步骤：检测体外生物样品中是否存在NS1，得到第一检测结果。检测体外生物样品中是否存在复合物，得到第二检测结果，所述的复合物包含NS1与凝血酶，或是包含NS1与凝血酶原。并且，藉由第一检测结果及第二检测结果评估个体登革热病毒的感染严重程度。
本发明也提供一种检测装置，用于评估个体的登革热病毒感染严重程度。检测装置包含第一检测单元及第二检测单元。第一检测单元用以检测体外生物样品中是否存在NS1，以得到第一检测结果。第二检测单元用以检测体外生物样品中是否存在复合物以得到第二检测结果，所述的复合物包含NS1与凝血酶，或是包含NS1与凝血酶原。同时藉由第一检测结果及第二检测结果评估个体登革热病毒的感染严重程度。
本发明也提供一种检测试剂盒，其包含如上所述的检测装置。
在本说明书中，「登革病毒(dengue virus)」、「登革热病毒(dengue fevervirus)」及「DENV」可交换使用。
在本说明书中，「严重程度(severity)」意指令人痛苦的病况(distressingcondition)、症状(symptom)或一群症状(group of symptoms)的程度或强度。
在本说明书中，「生物样品(biological sample)」意指由生物体所产生的或可从生物体中分离出的所有物质。
在一种实施方式中，生物样品包括下列之一：血液(例如血清、血浆或全血)、尿液、唾液及淋巴液。在优选实施方式中，生物样品是血清。
在一种实施方式中，当生物样品中同时存在有包含NS1与凝血酶的复合物及包含NS1与凝血酶原的复合物当中之一及NS1时，表示个体是带有登革热病毒感染的B群病患或是带有登革热病毒感染的C群病患。
上述的「带有登革热病毒感染的B群病患(group B patient with dengue virusinfection)」意指具有如腹部疼痛或压痛(abdominal pain or tenderness)、持续性呕吐(persistent vomiting)、临床体液蓄积(clinical fluid accumulation)及黏膜出血(mucosal bleed)等警示症状(warning signs)的登革热病患。此部分可以参照世界卫生组织(World Health Organization，WHO)所发布的登革热的临床处理手册(Handbook forClinical Management of Dengue)。
上述的「带有登革热病毒感染的C群病患(group C patient with dengue virusinfection)」意指具有严重血浆渗漏(severe plasma leakage)而造成休克(shock)及体液蓄积并呼吸窘迫(respiratory distress)、严重出血(severe bleeding)或严重器官损伤(severe organ impairment)等症状的登革热病患。此部分可以参照世界卫生组织所发布的登革热的临床处理手册。
在一种实施方式中，检测体外生物样品中是否存在NS1是藉由使用特异性辨识NS1的抗体而进行检测。
在一种实施方式中，检测体外生物样品中是否存在复合物是藉由使用特异性辨识复合物的抗体而进行检测。
在一种实施方式中，抗体是单克隆抗体(monoclonal antibody)或多克隆抗体(polyclonal antibody)。在优选实施方式中，特异性辨识NS1的抗体是单克隆抗体。在另一种优选实施方式中，特异性辨识复合物的抗体是多克隆抗体。
前述的「抗体(antibody)」包括「基于抗体的结合部分(antibody-based bindingmoiety)」、「免疫球蛋白分子(immunoglobulin molecules)」及「免疫球蛋白分子的免疫活性决定簇(immunologically active determinants)」，例如含有一个会与NS1或前述的复合物特异性地结合(免疫反应)的抗原结合位点(antigen-binding site)的分子，并且意欲涵盖具有任一种如IgG、IgA、IgM及IgE等同种型(isotype)的所有抗体及包含其也会与NS1或前述的复合物特异性地反应的片段(fragment)。
前述的「抗体」也包括捕获抗体(capture antibody)及检测抗体(detectionantibody)。
上述的「捕获抗体」意指抗体，不论是单克隆抗体、多克隆抗体，或是抗体的免疫反应片段(immunoreactive fragment)，其能够结合感兴趣的抗原(antigen)，并且因而容许藉由被随后地施用的抗体来辨识抗原。捕获抗体可用于异质性(固相)或均质性(液相)分析法(heterogeneous(solid phase)or homogeneous(solution phase)assay)中。优选地，捕获抗体被固定在固相上，例如以尼龙、聚苯乙烯(polystyrene)、聚氯乙烯(polyvinylchloride)或硝化纤维(nitrocellulose)、聚偏二氟乙烯(polyvinylidenefluoride，PVDF)等材料所制成的基材，且基材可具有例如孔盘、管柱或试纸等不同形式。捕获抗体与生物样品中的抗原也可以在悬浮液(suspension)中结合，取决于后续与抗原结合的捕获抗体与未与抗原结合的捕获抗体的分离方式及使用者操作便利与否作为选择的依据，本发明在此不限。
前述的「检测抗体」意指包含可检测的标记(detectable label)的抗体，可检测的标记对于存在样品中的一个或多个感兴趣的分析物(analytes)具有特异性。其也涵盖对于一个或多个感兴趣的分析物具有特异性的抗体，其中抗体可与另一个包含可检测的标记的种类结合。可检测的标记的实例包括，但不限于：如生物素/链亲和素(biotin/streptavidin)及地高辛(digoxigenin，Dig)等半抗原标记(hapten label)、如寡核苷酸(oligonucleotide)标记的核酸标记、化学发光标记(chemiluminescent label)、如FITC(异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocynate))、5-羧基荧光素(5-carboxyfluorescein)、6-羧基荧光素(6-carboxyfluorescein)、花青素(anthocyanin)、藻红素(phycoerythrin)及罗丹明(rhodamine)等荧光标记(fluorescent label)、如荧光素酶(luciferase)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase)、过氧化氢酶(catalase)、辣根过氧化酶(horseradish peroxidase，HRP)、β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)、尿酸酶(uricase)、细菌发光酶及乳过氧化酶(lactoperoxidase)等酶标记(enzymatic label)、如H3、C11、C14、P32、S35、I123、I124、I125、I131、Tc111及Lu177等放射性标记(radioactive label)、如T7、c-Myc、HA、VSV-G、HSV、FLAG、V5及HIS等抗原表位标签(epitope tag)，及它们的组合。
在一种实施方式中，个体是哺乳动物。在后述的实施例中，以人类作为代表。
在一种实施方式中，检测是藉由使用下列方法学中的任一种而进行：酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、点渍法(dot blotting)、侧向层析检测(lateral flow assay，LFA)、多重免疫分析法(multiplex immunoassay)、放射免疫分析法(radioimmunoassay，RIA)、免疫放射量测定分析法(immunoradiometric assay，IRMA)、荧光免疫分析法(fluorescent immunoassay，FIA)、化学发光免疫分析法(chemiluminescent immunoassay)及免疫浊度测定法(immunonephelometry)。
在一种实施方式中，登革热病毒包括多种不同的血清型，例如DENV-1、DENV-2、DENV-3及DENV-4。
在一种实施方式中，生物样品的「生物」包括可被登革热病毒感染的动物宿主，优选是哺乳动物，例如人类、猴、鼠、牛、羊、狗、猫、及猪。在后述的实施例中，生物是人类。
在一种实施方式中，生物样品可以具有任何形式，主要登革热病毒在个体内可影响的范围，包括血液(例如血清、血浆或全血)、尿液、唾液、淋巴液等，或是血液、尿液或淋巴液流经的附近组织或细胞等。生物样品优选含有能被登革热病毒感染的细胞，包括神经细胞、肌肉细胞、肝脏细胞、内皮细胞、血球细胞及淋巴细胞；优选地，生物样品含有哺乳动物的内皮细胞或血球细胞。生物样品可以为新鲜、经组织培养或经冷藏或冷冻的样品。再者，生物样品可以为经过纯化、离心、萃取或浓缩等方法进一步提升抗原浓度的。
综上所述，本发明所提供的评估个体的登革热病毒感染严重程度的方法、检测装置及检测试剂盒，除能有效检测出是否受到登革热病毒感染外，更重要的是，相较于已知技术，本发明的检测方法、检测装置及检测试剂盒能提供更高的灵敏度及准确率。
在本说明书中被引述的所有专利和文献藉由引用而并入为本说明书公开的一部分。
附图说明
图1为本发明的评估个体的登革热病毒感染严重程度的方法的流程图；及
图2为本发明的优选实施方式的示意图。
具体实施方式
本发明将就下面的实施方式及实施例来做进一步说明，但应了解的是，所述实施方式及实施例仅是供例示说明使用，而不应限制本发明。
实施方式
以下将参照相关附图，说明本发明的一种实施方式，为一种评估个体的登革热病毒感染严重程度的方法，其具有高灵敏度及高准确率。所述方法藉由检测个体的体外生物样品予以执行。所述方法的步骤流程如图1所示，包含检测体外生物样品中是否存在非结构蛋白质1(nonstructural protein 1，NS1)，得到第一检测结果(步骤S01)；检测体外生物样品中是否存在复合物(complex)，得到第二检测结果，其中复合物包含NS1与凝血酶(thrombin)，或是包含NS1与凝血酶原(prothrombin)(步骤S02)。并且，藉由第一检测结果及第二检测结果评估个体登革热病毒的感染严重程度(步骤S03)。
在本实施方式的步骤S01中，体外生物样品是取自于带有或疑似带有登革热病毒感染的个体。在本发明的实施例中，个体是人类。在本发明的实施例中，生物样品是血清(serum)。
在本实施方式的步骤S02中，NS1与凝血酶或是NS1与凝血酶原相互缀合(conjugate)。亦即，NS1与凝血酶或是NS1与凝血酶原均具有能交互作用(interaction)或共价键结(covalent bonding)的部位。在本发明的实施方式中，NS1与凝血酶或是NS1与凝血酶原也可通过其它分子而间接地缀合。在本发明的实施方式中，血清同时具有多个复合物，部分复合物包含NS1与凝血酶，部分复合物包含NS1与凝血酶原。在本发明的实施方式中，复合物可以同时包含NS1与凝血酶及NS1与凝血酶原，且NS1、凝血酶或凝血酶原的数目均无限制，彼此缀合的关系也可以为一个NS1与两个凝血酶或凝血酶原相互缀合，或是两个以上的NS1与一个凝血酶或凝血酶原相互嵌合，本发明在此不限。在本发明的实施方式中，NS1的形式包括，但不限于：分泌至细胞外的分泌蛋白(secreted protein)及结合在宿主细胞表面的膜结合蛋白(membrane-associated protein)。在本发明的另一种实施方式中，NS1可为不经翻译后修饰(post-translational modification)或如糖基化(glycosyation)及磷酸化(phosphorylation)等经翻译后修饰的形式。在本发明的实施方式中，凝血酶或凝血酶原可以自生物体中被分离或纯化出，也可以是藉由人工合成(artificial synthesis)的功能性蛋白质(functional protein)，而这些分离、纯化及人工合成技术是本发明所属技术领域中普通技术人员所能理解的。
在本实施方式的步骤S03中，当第一检测结果是体外生物样品中存在有NS1，及第二检测结果是体外生物样品中存在有复合物时，亦即当生物样品中同时存在有包含NS1与凝血酶的复合物及包含NS1与凝血酶原的复合物当中之一及NS1时，表示个体是带有登革热病毒感染的B群病患或带有登革热病毒感染的C群病患。在本发明的实施例中，第一检测结果是体外生物样品中存在有NS1，及第二检测结果是体外生物样品中存在有包含NS1与凝血酶的复合物。
本发明也提供另一种实施方式，为一种检测装置。所述检测装置用于评估个体的登革热病毒感染严重程度。检测装置包含第一检测单元及第二检测单元。第一检测单元用以检测体外生物样品中是否存在NS1，以得到第一检测结果。第二检测单元用以检测体外生物样品中是否存在复合物以得到第二检测结果，所述的复合物包含NS1与凝血酶，或是包含NS1与凝血酶原。同时藉由第一检测结果及第二检测结果评估个体登革热病毒的感染严重程度。
在本实施方式中，体外生物样品的来源是如上面实施方式的步骤S01中所述的。
在本实施方式中，NS1与凝血酶或是NS1与凝血酶原之间的关系是如上面实施方式的步骤S02中所述的。
在本实施方式中，当第一检测结果是体外生物样品中存在有NS1，及第二检测结果是体外生物样品中存在有复合物时的代表意义是如上面实施方式的步骤S03中所述的。
本发明也提供又一种实施方式，为检测试剂盒。所述检测试剂盒包含前述的检测装置。此外，检测装置的各细部部件的组成、变化方面与其它部件的连接关系，则同于前面实施方式中所述，在此不再赘述。
以下，本发明将提供以带有登革热病毒感染的病患的血清为代表的实施例，说明本发明的一种评估个体的登革热病毒感染严重程度的方法，以补充上述说明内容，同时说明本发明的方法具有高灵敏度及准确率。然而，需注意的是，以下的说明是用来详述本发明以使熟悉该项技术者能够据以实现，但并非用以限定本发明的范围。
实施例：本发明评估方法评估个体的登革热病毒感染严重程度的灵敏度试验
实验材料：个体血清样品的制备
参与本研究的实验个体都有就他们的血清样品的捐赠而取得经告知的同意(informed consent)。本研究共计有26位人类个体参加。这些病患藉由使用针头而从各个病患的血管来收集血液，继而在常温下以2500rpm进行离心25分钟，藉此而得到血清样品。
实验方法
本实验是利用SD BIOLINETM Dengue Duo试剂盒(Standard diagnostic Inc.)并参照制造商的操作指南来进行。首先，将用来进行本实验的快速检测试剂(rapid test)分成六组，其中包括一个实验组及比较组1至5等五个比较组。各组快速检测试剂均包含标记为「C」的对照线(control line)。比较组1及比较组5的快速检测试剂包含标记为「G」及「M」的试验线(test line)，其中标记为「G」的试验线含有抗人类IgG抗体作为捕获抗体，标记为「M」的试验线含有抗人类IgM抗体作为捕获抗体；其胶体金垫含有登革热病毒膜蛋白-胶体金(membrane protein of dengue virus-colloidal gold)。比较组2、3、4与5及实验组的快速检测试剂包含标记为「T」的试验线，其含有1μL的小鼠抗NS1单克隆抗体(Cat.12100/12110,Leadgene Biomedical Inc.,Taiwan)作为捕获抗体，胶体金垫则有小鼠抗NS1单克隆抗体-胶体金。另外，比较组3、5及实验组的胶体金垫除了胶体金标记的小鼠抗NS1单克隆抗体外，还含有1μL的绵羊抗凝血酶多克隆抗体(sheep anti-thrombin polyclonalantibody)作为检测抗体。接着，将80μL的血清样品添加至设置于各组快速检测试剂的样品槽(sample pad)中并进行反应。在反应的第15分钟时，以肉眼进行结果判读。
实验结果
图2为各组快速检测试剂的示意图，其中各快速检测试剂的符号所代表的意义已在本实施例的「实验方法」段落中进行说明，在此不重复叙述。表1为依据上面「实验方法」进行实验及图2的示意图进行结果判读之后所做成的数据统计表(参见下方)。
表1
由图2及表1可见，就比较组1而言，26位带有登革热病毒感染的病患中有9位病患的血清样品测得抗登革热IgG抗体(anti-dengue IgG antibody)和/或抗登革热IgM抗体(anti-dengue IgM antibody)，灵敏度为34.61％。就比较组2而言，26位带有登革热病毒感染的病患中有19位病患的血清样品测得NS1，灵敏度为73.07％。就比较组3而言，26位带有登革热病毒感染的病患中有22位病患的血清样品测得包含NS1及凝血酶的复合物(complex)，灵敏度为84.61％。就比较组4而言，26位带有登革热病毒感染的病患中有23病患的血清样品测得NS1及抗登革热IgG抗体和/或抗登革热IgM抗体，灵敏度为88.46％。就比较组5而言，26位带有登革热病毒感染的病患中有23位病患的血清样品测得包含NS1及凝血酶的复合物及抗登革热IgG抗体和/或抗登革热IgM抗体，灵敏度为88.46％。就实验组而言，26位带有登革热病毒感染的病患中有25位病患的血清样品测得NS1及包含NS1及凝血酶的复合物，灵敏度为96.15％。本实施例的结果显示：依据本发明的方法可准确地检测个体的登革热病毒感染，因而具有高灵敏度及高准确率。特别地，申请人发现到，当带有登革热病毒感染的病患的血清样品中同时存在有NS1及包含NS1及凝血酶的复合物时，表示所述病患是带有登革热病毒感染的B群病患或带有登革热病毒感染的C群病患(数据未显示)。因此，申请人认为，依据本发明的方法可用来评估个体的登革热病毒感染严重程度，且具有高灵敏度及高准确率。
以上所述仅为举例性，而非为限制性。任何未脱离本发明的精神与范畴，而对其进行的等效修改或变更，均应包含于所附的权利要求中。

Claims (11)

1.一种特异性抗体在制备可评估个体的登革热病毒感染严重程度的试剂盒的应用，所述试剂盒用于检测所述个体的体外生物样品，其特征为：
藉由使用辨识非结构蛋白质1的特异性抗体检测所述体外生物样品中是否存在非结构蛋白质1，得到第一检测结果，其中所述辨识非结构蛋白质1的特异性抗体是抗非结构蛋白质1单克隆抗体；
藉由使用辨识复合物的特异性抗体检测所述体外生物样品中是否存在复合物，得到第二检测结果，其中所述复合物包含非结构蛋白质1与凝血酶，且所述辨识复合物的特异性抗体是特异性辨识所述复合物的多克隆抗体；及
藉由所述第一检测结果及所述第二检测结果评估所述个体登革热病毒的感染严重程度，其中当所述生物样品中同时存在有所述非结构蛋白质1，以及所述包含非结构蛋白质1与凝血酶的复合物时，表示所述个体是感染严重的病患，
其中所述生物样品是血液及淋巴液。
2.如权利要求1所述的应用，其中所述个体是哺乳动物。
3.如权利要求2所述的应用，其中所述哺乳动物是人类。
4.如权利要求1所述的应用，其中所述非结构蛋白质1是分泌蛋白或膜结合蛋白。
5.如权利要求1所述的应用，其中所述检测是藉由使用下列方法学中的任一种而进行：酶结合免疫吸附测定、点渍法、侧向层析检测、多重免疫分析法、放射免疫分析法、免疫放射量测定分析法、荧光免疫分析法、化学发光免疫分析法及免疫浊度测定法。
6.一种检测装置，用于评估个体的登革热病毒感染严重程度，所述检测装置包含：
第一检测单元，包含抗非结构蛋白质1单克隆抗体，用以检测体外生物样品中是否存在非结构蛋白质1，以得到第一检测结果；及
第二检测单元，包含特异性辨识包含非结构蛋白质1与凝血酶的复合物的多克隆抗体，用以检测所述体外生物样品中是否存在所述复合物，以得到第二检测结果，
藉由所述第一检测结果及所述第二检测结果评估所述个体登革热病毒的感染严重程度，
其中所述生物样品是血液或淋巴液。
7.如权利要求6所述的检测装置，其中所述个体是哺乳动物。
8.如权利要求7所述的检测装置，其中所述哺乳动物是人类。
9.如权利要求6所述的检测装置，其中当所述生物样品中同时存在有所述包含非结构蛋白质1与凝血酶的复合物及非结构蛋白质1时，表示所述个体是感染严重的病患。
10.如权利要求6所述的检测装置，其中所述非结构蛋白质1是分泌蛋白或膜结合蛋白。
11.一种检测试剂盒，其包含如权利要求6至10中任一项所述的检测装置。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW201321753A (zh) * 2011-11-23 2013-06-01 Univ Nat Cheng Kung 黃病毒科病毒感染之檢測方法
WO2013148335A1 (en) * 2012-03-27 2013-10-03 National University Of Singapore Host biomarkers for dengue fever (df) and methods thereof
CN106029888A (zh) * 2013-11-13 2016-10-12 新加坡国立大学 用于结合黄病毒蛋白的适体
CN205679623U (zh) * 2016-03-29 2016-11-09 云南省寄生虫病防治所 一种快速检测登革病毒ns1抗原胶体金检测试纸条及试剂盒

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101576560A (zh) * 2008-05-08 2009-11-11 南方医科大学 检测ⅲ型登革病毒ns1抗原的免疫诊断试剂盒及其应用
FR3017713B1 (fr) * 2014-02-18 2018-01-12 Biomerieux Procede et kit pour determiner la probabilite pour un patient d'evoluer vers une dengue severe

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW201321753A (zh) * 2011-11-23 2013-06-01 Univ Nat Cheng Kung 黃病毒科病毒感染之檢測方法
WO2013148335A1 (en) * 2012-03-27 2013-10-03 National University Of Singapore Host biomarkers for dengue fever (df) and methods thereof
CN106029888A (zh) * 2013-11-13 2016-10-12 新加坡国立大学 用于结合黄病毒蛋白的适体
CN205679623U (zh) * 2016-03-29 2016-11-09 云南省寄生虫病防治所 一种快速检测登革病毒ns1抗原胶体金检测试纸条及试剂盒

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Dengue virus nonstructural protein NS1 binds toprothrombin/thrombin and inhibits prothrombinactivation";Shi-Wei Lin等;《Journal of Infection》;20111125;第2012卷(第64期);325-334 *
Shi-Wei Lin等."Dengue virus nonstructural protein NS1 binds toprothrombin/thrombin and inhibits prothrombinactivation".《Journal of Infection》.2011,第2012卷(第64期),325-334. *

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