CN110736846A - 一种小而密脂蛋白的测定试剂、方法和试剂盒 - Google Patents

一种小而密脂蛋白的测定试剂、方法和试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于清除脂蛋白样品中的乳糜微粒的组合物，所述组合物包括以下的组分：2.0g/L～16.0g/L聚乙二醇，0.145～1.6％表面活性剂A，0.1～2.0KU/L脂蛋白酯酶，所述表面活性剂A是花王公司Emulgen B66与陶氏公司Tergitol 15‑S系列或NP系列的组合，所述％为质量百分比。公开了一种清除脂蛋白样品中的乳糜微粒的方法和上述的组合物在测定小而密脂蛋白中的应用。还公开了一种用于测定小而密脂蛋白的组合试剂和一种小而密脂蛋白的非疾病诊断的测定方法。所述的测定方法能够特定、专一地检测sdLDL。还公开了一种测定小而密脂蛋白的试剂盒，所述的试剂盒操作简便、效果良好。

Description

一种小而密脂蛋白的测定试剂、方法和试剂盒
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种小而密脂蛋白的测定试剂、方法和试剂盒。
背景技术
血液中存在的脂蛋白根据其比重大致分为高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)以及乳糜微粒(CM)4类。其中低密度脂蛋白(LDL)是由一系列大小、密度和化学组成各异的颗粒组成。一般将LDL亚组分中颗粒较小密度较大的LDL称为小而密脂蛋白(small dense Low-Density Lipoprotein，简称sdLDL)；将颗粒较大、密度较小的LDL称为大而轻LDL，简称LgLDL；介于二者之间的亚组分为中密度LDL。近来研究发现，与普通LDL相比，sdLDL致动脉粥样硬化的能力更强，是公认的引发心血管病的重要危险因素之一。
目前在临床检测应用中，测定sdLDL的方法有电泳法、超速离心法和分级沉淀法等。但这些方法检测时间很长，不能进行大规模自动化检测，且需要昂贵的仪器设备，故不能应用于一般的临床医学检测。发明人的专利申请201610139400.X提供了一种测定小而密脂蛋白的方法，其快速简便，但有具有无法完全排除被测样本中高乳糜(CM)干扰的缺点。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，针对目前小而密脂蛋白的检测方法的不足，提供一种小而密胆固醇的测定试剂、方法和试剂盒，其能排除样品中乳糜的干扰，从而获得更为精确的检测结果。
通过大量的实验研究，本发明人发现，采用与脂蛋白结合的聚阴离子化合物、表面活性剂和脂蛋白酯酶的组合，能够在第一试剂中排除脂蛋白样品中乳糜微粒的干扰，从而实现测定sdLDL的目的。
为解决所述技术问题，本发明的技术方案之一是，提供一种用于清除脂蛋白样品中的乳糜微粒的组合物，其包括以下的组分：
2.0g/L～16.0g/L聚乙二醇，
0.145～1.6％表面活性剂A，
0.1～2.0KU/L脂蛋白酯酶，
所述表面活性剂A是花王公司Emulgen B66与陶氏公司Tergitol 15-S系列或NP系列的组合。
优选地，所述聚乙二醇为聚乙二醇6000，其含量为5.0～15.0g/L；
表面活性剂A中Emulgen B66含量为0.135％～1.5％，
Tergitol 15-S含量为0.01～0.10％，
脂蛋白酯酶含量为0.2～1.0KU/L。
更优选地，所述聚乙二醇的含量为12.0g/L，
表面活性剂A中Emulgen B66含量为0.55％，
Tergitol 15-S含量为0.05％，
脂蛋白酯酶含量为0.2KU/L；所述％为质量百分比。
为解决所述技术问题，本发明的技术方案之一是提供一种清除脂蛋白样品中的乳糜微粒的方法，其特征在于，其包含使用上述的组合物。
为解决所述技术问题，本发明的技术方案之一是提供一种上述的组合物在测定小而密脂蛋白中的应用。
为解决所述技术问题，本发明的技术方案之一是提供一种第一试剂，其包括以下的组分：
2.0g/L～16.0g/L聚乙二醇，
0.145～1.6％表面活性剂A，
0.1～2.0KU/L脂蛋白酯酶，
所述表面活性剂A是花王公司Emulgen B66与陶氏公司Tergitol 15-S系列或NP系列的组合；
优选地，所述聚乙二醇为聚乙二醇6000，其含量为5.0～15.0g/L；
表面活性剂A中Emulgen B66含量为0.135％～1.5％，
Tergitol 15-S含量为0.01～0.10％，
脂蛋白酯酶含量为0.2～1.0KU/L；
更优选地，所述聚乙二醇的含量为12.0g/L，
表面活性剂A中Emulgen B66含量为0.55％，
Tergitol 15-S含量为0.05％，
脂蛋白酯酶含量为0.2KU/L；所述％为质量百分比。
优选地，第一试剂还包含以下的组分：
1.0～3.0mmol/L Trinder’s色原化合物，
200～4000U/L肝素钠，
2～50mmol/L二价金属离子，
1.0～4.8KU/L胆固醇酯酶，
1.0～5.0KU/L胆固醇氧化酶，和
1.0～5.0MU/L过氧化氢酶，
所述第一试剂的pH为6.40-6.70。
更优选地，第一试剂包括以下的组分：
1.5～2.0mmol/L Trinder’s色原化合物；和/或，
300～3500U/L肝素钠；和/或，
15～25mmol/L二价金属离子，所述二价金属离子为镁离子或锰离子；和/或，
1.5～2.8KU/L胆固醇酯酶；和/或，
2.0～4.0KU/L胆固醇氧化酶；和/或，
2.0～3.0MU/L过氧化氢酶。
本发明所述第一试剂中，所述Trinder’s色原化合物为本领域常规的Trinder’s色原化合物，较佳地为3-(N-乙基-3-甲基苯胺基)-2-羟基丙磺酸钠(TOOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺(TOPS)或N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺(HDAOS)，更佳地为TOOS。
本发明中，较佳地，所述第一试剂还包括缓冲液。所述缓冲液为本领域常规的缓冲液，较佳地为MOPS缓冲液或MOPSO缓冲液，更佳地为MOPS缓冲液。所述缓冲液的含量为本领域常规的含量，较佳地为25～120mmol/L，更佳地为30～50mmol/L。
本发明中，较佳地，所述第一试剂还包括稳定剂，所述稳定剂为抗坏血酸氧化酶、牛血清白蛋白、氯化钠或EDTA中的一种或多种；较佳地抗坏血酸氧化酶的含量为3.5KU/L；较佳地为牛血清白蛋白、氯化钠和EDTA；所述牛血清白蛋白的含量为1.0～5.0g/L；较佳地为2.0～4.0g/L；所述氯化钠的含量为5～150mmol/L；较佳地为25～55mmol/L；和/或，所述EDTA的含量为0.2mmol/L。
本发明中，更佳地，所述的第一试剂包括以下的组分：
12.0g/L聚乙二醇6000，
0.55％Emulgen B-66，
0.05％Tergitol 15-S-12,
0.2KU/L脂蛋白酯酶，
2.0mM Trinder’s色原化合物，
3000U/L肝素钠，
15mM硫酸镁，
2.0KU/L胆固醇酯酶，
3.5KU/L胆固醇氧化酶，
2.0MU/L过氧化氢酶，
55mM氯化钠，
0.2mM EDTA，
3.5KU/L抗坏血酸氧化酶，
2.5g/L牛血清白蛋白，和
50mM MOPS缓冲液(pH6.5)，所述％为质量百分比。
本发明的技术方案之一是，提供一种测定小而密脂蛋白的第二试剂，其包括以下的组分：
2.0～10KU/L过氧化物酶，
0.2～1.0g/L 4-氨基安替比林，
0.1～0.2％叠氮钠，和，
1.0～3.0％表面活性剂Triton X-100，
所述第一试剂的pH为6.40-6.70，所述％为质量百分比。
较优选地，第二试剂包括以下的组分：
2.5～6.5KU/L过氧化物酶；和/或，
0.3～0.6g/L 4-氨基安替比林；和/或，
1.2～2.5％Triton X-100；和/或，
用于调节pH的25～50mmol/L缓冲液；和/或，
所述第二试剂还包括稳定剂，所述稳定剂的含量为0.2～6.5g/L，较佳地，所述稳定剂为牛血清白蛋白；所述％为质量百分比。
更优选地，所述的第二试剂包括以下的组分：
6.0KU/L过氧化物酶，
0.5g/L 4-氨基安替比林，
5.0g/L牛血清蛋白，
0.1％叠氮钠，
2％Triton X-100，和
30mM MOPS缓冲液(pH6.5)，所述％为质量百分比。
本发明所述第二试剂的形态为澄清液体。
本发明中，较佳地，所述缓冲液和所述稳定剂中的一种或多种在调节pH之前添加。
本发明的技术方案之一是，提供一种小而密脂蛋白的非疾病诊断的测定方法，其包括以下的步骤：
(1)、将样品与如权利要求4～6任一项所述的第一试剂混合反应，得反应液1；所述样品与上述第一试剂的体积比为本领域常规的体积比，较佳地为1:75～1:100，更佳地为1:75；
(2)、将步骤(1)所得的反应液1与如权利要求7～8任一项所述的组合试剂中的第二试剂混合反应，得反应液2；所述反应液1与上述第二试剂的体积比为本领域常规的体积比，较佳地为5:1～3:1，更佳地为3:1；
(3)、读取步骤(2)所得的反应液2在546nm和700nm波长处的吸光度值，计算小而密脂蛋白的含量；较佳地，spline方法计算小而密脂蛋白的含量。
上述测定方法所使用的仪器是本领域常规的仪器，较佳地为本领域常规的全自动生化分析仪，更佳地为日立7180全自动生化分析仪或贝克曼系列全自动生化分析仪。
本发明的技术方案之一是提供一种测定小而密脂蛋白的试剂盒，其包括上述的第一试剂和上述的第二试剂。
本发明中，较佳地，所述的试剂盒还包括标准品，所述的试剂盒标准品可为本领域常规使用的商品化试剂盒标准品，较佳地为朗道血脂标准液。
本发明所述的试剂盒操作简便，能够高效、准确地特异性检测小而密脂蛋白。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：其采用与脂蛋白结合的聚阴离子化合物、脂蛋白酯酶和表面活性剂的组合，能够在第一试剂中排除乳糜颗粒的干扰，从而实现测定sdLDL的目的。本发明所述的试剂配制简单方便，能够高效、准确地应用于所述方法中进行特异性检测sdLDL。本发明所述的测定方法，能够特定、专一地检测小而密脂蛋白(sdLDL)，并且该测定方法可靠性高、成本低、效率高，能够大规模自动化特异性检测sdLDL。本发明所述的试剂盒操作简便，能够高效、准确地特异性检测sdLDL。
附图说明
图1为小而密脂蛋白测定曲线；其中A表示使用本发明的方法，B表示使用现有技术CN201610139400.X的方法，1和2分别代表不同标本编号。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例中所述缓冲液购自苏州贝克生物科技有限公司、Trinders色原购自东仁化学科技(上海)有限公司、所有的酶购自旭化成株式会社、4-氨基安替比林购自西格玛奥德里奇中国，其它试剂购自上海化学试剂商店。所述标准品为RANDOX(英国朗道实验诊断有限公司)血脂类质控试剂，货号LE2662。
实施例1
第一试剂：
将聚乙二醇6000、Emulgen B-66、Tergitol 15-S-12和脂蛋白酯酶加入水中配成溶液，用于去除样品中的乳糜颗粒。其后，将MOPS缓冲液(pH6.5)、硫酸镁、氯化钠、EDTA、BSA、肝素钠和Trinder’s色原化合物加入上述溶液中，搅拌至完全溶解，调节pH至6.50-7.00。最后加入胆固醇酯酶、脂蛋白酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化氢酶，并使上述物质达到下列的浓度，其中百分比为质量百分比：
Figure BDA0001737625430000071
Figure BDA0001737625430000081
第二试剂：
将MOPS缓冲液(pH6.5)、4-氨基安替比林、叠氮钠和Triton X-100和牛血清蛋白加入水中，搅拌至完全溶解，调节pH至6.50-7.00，然后加入过氧化物酶入水中混合，并使上述物质达到下列的浓度，其中百分比(％)为质量百分比：
Figure BDA0001737625430000082
在日立7180全自动生化分析仪上，180μL上述第一试剂与2.4μL临床人血清样品反应5分钟，然后加入60μL第二试剂，在主/副波长546nm/700nm处采用两点终点法，读点16～34点。与采用同样测定参数的朗道标准品定标曲线比对计算，测定20例临床标本结果如表1所示，并与超速离心法(参见Menys VC1,Liu Y,Mackness MI,Caslake MJ,Kwok S,Durrington PN.Measurement of plasma small-dense LDL concentration by asimplified ultracentrifugation procedure and immunoassay of apolipoproteinB.Clin Chim Acta.2003Aug；334(1-2):95-106.)对照，实施例1测定的相关系数为0.981。
实施例1测定的相关系数接近1，说明采用实施例1所述的第一试剂和第二试剂能够可靠地检测出小而密脂蛋白。由于采用的临床血清标本含有多种严重乳糜标本，从测定结果可见，本实施例不受高浓度血清乳糜的干扰。
表1检测结果
实施例2
第一试剂：
同实施例1的步骤，分别将MOPS缓冲液(pH6.5)、硫酸镁、氯化钠、EDTA、BSA、聚乙二醇、肝素钠、Trinder’s色原化合物和表面活性剂A加入水中，搅拌至完全溶解，调节pH至6.50-7.00，然后加入胆固醇酯酶、脂蛋白酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化氢酶，并使上述物质达到下列的浓度，其中百分比为质量百分比：
第二试剂：
将MOPS缓冲液(pH6.5)、4-氨基安替比林、叠氮钠和Triton X-100和牛血清蛋白加入水中，搅拌至完全溶解，调节pH至6.50-7.00，然后加入过氧化物酶入水中混合，并使上述物质达到下列的浓度，其中百分比％为质量百分比：
Figure BDA0001737625430000102
Figure BDA0001737625430000111
在日立7180全自动生化分析仪上，180μL上述第一试剂与2.4μL临床人血清样品反应5分钟，然后加入60μL第二试剂，在主/副546nm/700nm波长处采用两点终点法，读点16～34点。与采用同样测定参数的朗道标准品定标曲线比对计算，测定16例临床标本结果如表1所示，并与超速离心法对照，实施例2测定的相关系数为0.940。实施例2测定的相关系数接近1，说明采用实施例2所述的第一试剂和第二试剂能够可靠地检测出小而密脂蛋白。由于采用的临床血清标本含有多种严重乳糜标本，从测定结果可见，本实施例不受高浓度血清乳糜的干扰。
表2检测结果
Figure BDA0001737625430000112
Figure BDA0001737625430000121
实施例3
第一试剂：
同实施例1的步骤，分别将MOPS缓冲液(pH6.5)、硫酸镁、氯化钠、EDTA、BSA、聚乙二醇、肝素钠、Trinder’s色原化合物和表面活性剂A加入水中，搅拌至完全溶解，调节pH至6.50-7.00，然后加入胆固醇酯酶、脂蛋白酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化氢酶，并使上述物质达到下列的浓度，其中百分比为质量百分比：
Figure BDA0001737625430000122
第二试剂：
将MOPS缓冲液(pH6.5)、4-氨基安替比林、叠氮钠和Triton X-100和牛血清蛋白加入水中，搅拌至完全溶解，调节pH至6.50-7.00，然后加入过氧化物酶入水中混合，并使上述物质达到下列的浓度，其中百分比为质量百分比：
Figure BDA0001737625430000131
在日立7180全自动生化分析仪上，180μL上述第一试剂与2.4μL临床人血清样品反应5分钟，然后加入60μL第二试剂，在主/副546nm/700nm波长处采用两点终点法，读点16～34点。与采用同样测定参数的朗道标准品定标曲线比对计算，测定17例临床标本结果如表1所示，并与超速离心法对照，实施例3测定的相关系数为0.975。实施例3测定的相关系数接近1，说明采用实施例3所述的第一试剂和第二试剂能够可靠地检测出小而密脂蛋白。由于采用的临床血清标本含有多种严重乳糜标本，从测定结果可见，本实施例不受高浓度血清乳糜的干扰。
表3检测结果
Figure BDA0001737625430000132
Figure BDA0001737625430000141
实施例4
第一试剂：
同实施例1的步骤，分别将MOPS缓冲液(pH6.5)、硫酸镁、氯化钠、EDTA、BSA、聚乙二醇、肝素钠、Trinder’s色原化合物和表面活性剂A加入水中，搅拌至完全溶解，调节pH至6.50-7.00，然后加入胆固醇酯酶、脂蛋白酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化氢酶，并使上述物质达到下列的浓度，其中百分比为质量百分比：
Figure BDA0001737625430000142
Figure BDA0001737625430000151
第二试剂：
将MOPS缓冲液(pH6.5)、4-氨基安替比林、叠氮钠和Triton X-100和牛血清蛋白加入水中，搅拌至完全溶解，调节pH至6.50-7.00，然后加入过氧化物酶入水中混合，并使上述物质达到下列的浓度，其中百分比为质量百分比：
Figure BDA0001737625430000152
在日立7180全自动生化分析仪上，180μL上述第一试剂与2.4μL临床人血清样品反应5分钟，然后加入60μL第二试剂，在主/副546nm/700nm波长处采用两点终点法，读点16～34点。与采用同样测定参数的朗道标准品定标曲线比对计算，测定8例临床标本结果如表1所示，并与超速离心法对照，实施例4测定的相关系数为0.948。实施例5测定的相关系数接近1，说明采用实施例1所述的第一试剂和第二试剂能够可靠地检测出小而密脂蛋白。由于采用的临床血清标本含有多种严重乳糜标本，从测定结果可见，本实施例不受高浓度血清乳糜的干扰。
表4检测结果
Figure BDA0001737625430000153
Figure BDA0001737625430000161
实施例5
第一试剂：
同实施例1的步骤，分别将MOPS缓冲液(pH6.5)、硫酸镁、氯化钠、EDTA、BSA、抗坏血酸氧化酶、聚乙二醇、肝素钠、Trinder’s色原化合物和表面活性剂A加入水中，搅拌至完全溶解，调节pH至6.50-7.00，然后加入胆固醇酯酶、脂蛋白酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化氢酶，并使上述物质达到下列的浓度，其中百分比为质量百分比：
Figure BDA0001737625430000162
Figure BDA0001737625430000171
第二试剂：
将MOPS缓冲液(pH6.5)、4-氨基安替比林、叠氮钠和Triton X-100和牛血清蛋白加入水中，搅拌至完全溶解，调节pH至6.50-7.00，然后加入过氧化物酶入水中混合，并使上述物质达到下列的浓度，其中百分比为质量百分比：
Figure BDA0001737625430000172
在日立7180全自动生化分析仪上，180μL上述第一试剂与2.4μL临床人血清样品反应5分钟，然后加入60μL第二试剂，在主/副546nm/700nm波长处采用两点终点法，读点16～34点。与采用同样测定参数的朗道标准品定标曲线比对计算，测定8例临床标本结果如表5所示，并与超速离心法对照，实施例5测定的相关系数为0.973。实施例5测定的相关系数接近1，说明采用实施例5所述的第一试剂和第二试剂能够可靠地检测出小而密脂蛋白。由于采用的临床血清标本含有多种严重乳糜标本，从测定结果可见，本实施例不受高浓度血清乳糜的干扰。
表5检测结果
Figure BDA0001737625430000181
对比例1
此对比例即现有技术CN201610139400.X中实施例3使用的测定小而密脂蛋白的试剂，其中第一试剂为：
将MOPS缓冲液(pH6.5)、4-氨基安替比林、硫酸葡聚糖500、肝素钠、硫酸镁、氯化钠、EDTA、Emulgen A-90、Emulgen B-66和BSA加入水中，搅拌至完全溶解，调节pH至6.40-6.70，然后加入胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化氢酶，并使上述物质达到下列的浓度，其中百分比为质量百分比：
Figure BDA0001737625430000192
第二试剂为：
将MOPS缓冲液(pH6.5)、TOOS、Pluronic F-88和叠氮钠入水中，搅拌至完全溶解，调节pH至6.40-6.70，然后加入过氧化物酶，并使上述物质达到下列的浓度，其中百分比为质量百分比：
在日立7180全自动生化分析仪上，180μL上述第一试剂与2.4μL临床人血清样品反应5分钟，然后加入60μL第二试剂，在主/副546nm/700nm波长处采用两点终点法，读点16～34点。与采用同样测定参数的标准品定标曲线比对计算，测定10例临床标本结果如表6所示，并与超速离心法对照，对比例1测定的相关系数为0.957。
表6检测结果
Figure BDA0001737625430000202
此外，对比现有技术和本发明的小而密脂蛋白测定曲线，发现现有技术反应曲线显示(附图1，样本B1和B2)：反应一直持续，没有终点，提示样本中乳糜参与反应，影响最终实验结果的准确性。而本发明的反应曲线显示(附图1，样本A1和A2)：反应达到或几乎达到终点，乳糜干扰在时间格点16时被完全排除，最终实验结果准确。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不构成对权利要求范围的限制，本领域技术人员可以想到的其他实质上等同的替代，均在本发明保护范围内。

Claims (10)

1.一种用于清除脂蛋白样品中的乳糜微粒的组合物，其特征在于，所述组合物包括以下的组分：
2.0g/L～16.0g/L聚乙二醇，
0.145～1.6％表面活性剂A，
0.1～2.0KU/L脂蛋白酯酶，
所述表面活性剂A是花王公司Emulgen B66与陶氏公司Tergitol 15-S系列或NP系列的组合；
优选地，所述聚乙二醇为聚乙二醇6000，其含量为5.0～15.0g/L；
表面活性剂A中Emulgen B66含量为0.135％～1.5％，
Tergitol 15-S含量为0.01～0.10％，
脂蛋白酯酶含量为0.15～1.0KU/L；
更优选地，所述聚乙二醇的含量为12.0g/L，
表面活性剂A中Emulgen B66含量为0.55％，
Tergitol 15-S含量为0.05％，
脂蛋白酯酶含量为0.2KU/L；所述％为质量百分比。
2.一种清除脂蛋白样品中的乳糜微粒的方法，其特征在于，其包含使用如权利要求1所述的组合物。
3.如权利要求1所述的组合物在测定小而密脂蛋白中的应用。
4.一种用于测定小而密脂蛋白的第一试剂，其特征在于，其包含如权1所述的组合物。
5.如权利要求4所述的第一试剂，其特征在于，其还包含以下的组分：
1.0～3.0mmol/L Trinder’s色原化合物，
200～4000U/L肝素钠，
2～50mmol/L二价金属离子，
1.0～4.8KU/L胆固醇酯酶，
1.0～5.0KU/L胆固醇氧化酶，和
1.0～5.0MU/L过氧化氢酶，
所述第一试剂的pH为6.40-6.70。
6.如权利要求5所述的第一试剂，其特征在于，
1.5～2.0mmol/L Trinder’s色原化合物；和/或，
300～3500U/L肝素钠；和/或，
15～25mmol/L二价金属离子，所述二价金属离子为镁离子或锰离子；和/或，
1.5～2.8KU/L胆固醇酯酶；和/或，
2.0～4.0KU/L胆固醇氧化酶；和/或，
2.0～3.0MU/L过氧化氢酶；和/或，
用于调节pH的25～50mmol/L缓冲液，较佳地，所述缓冲液为MOPS缓冲液；和/或，
所述第一试剂还包括稳定剂，所述稳定剂为抗坏血酸氧化酶、牛血清白蛋白、氯化钠或EDTA中的一种或多种；较佳地抗坏血酸氧化酶的含量为3.5KU/L；较佳地为牛血清白蛋白、氯化钠和EDTA；所述牛血清白蛋白的含量为1.0～5.0g/L；较佳地为2.0～4.0g/L；所述氯化钠的含量为5～150mmol/L；较佳地为25～55mmol/L；和/或，所述EDTA的含量为0.2mmol/L；
优选地，所述的第一试剂包括以下的组分：
12.0g/L聚乙二醇6000，
0.55％Emulgen B-66，
0.05％Tergitol 15-S-12,
0.2KU/L脂蛋白酯酶，
2.0mM Trinder’s色原化合物，
3000U/L肝素钠，
15mM硫酸镁，
2.0KU/L胆固醇酯酶，
3.5KU/L胆固醇氧化酶，
2.0MU/L过氧化氢酶，
55mM氯化钠，
0.2mM EDTA，
3.5KU/L抗坏血酸氧化酶，
2.5g/L牛血清白蛋白，和
50mM MOPS缓冲液(pH6.5)，所述％为质量百分比。
7.一种用于测定小而密脂蛋白的组合试剂，其特征在于，其包括如权利要求4～6任一项所述的第一试剂，以及第二试剂；所述的第二试剂包括以下的组分：
2.0～10KU/L过氧化物酶，
0.2～1.0g/L 4-氨基安替比林，
0.1～0.2％叠氮钠，和，
1.0～3.0％表面活性剂Triton X-100，
所述第一试剂的pH为6.40-6.70，所述％为质量百分比。
8.如权利要求7所述的组合试剂，其特征在于，所述的第二试剂包括以下的组分：
2.5～6.5KU/L过氧化物酶；和/或，
0.3～0.6g/L 4-氨基安替比林；和/或，
1.2～2.5％Triton X-100；和/或，
用于调节pH的25～50mmol/L缓冲液；和/或，
所述第二试剂还包括稳定剂，所述稳定剂的含量为0.2～6.5g/L，较佳地，所述稳定剂为牛血清白蛋白；所述％为质量百分比；
优选地，所述的第二试剂包括以下的组分：
6.0KU/L过氧化物酶，
0.5g/L 4-氨基安替比林，
5.0g/L牛血清蛋白，
0.1％叠氮钠，
2％Triton X-100，和
30mM MOPS缓冲液(pH6.5)，所述％为质量百分比。
9.一种小而密脂蛋白的非疾病诊断的测定方法，其特征在于，其包括以下的步骤：
(1)、将样品与如权利要求4～6任一项所述的第一试剂混合反应，得反应液1；所述样品与上述第一试剂的体积比为本领域常规的体积比，较佳地为1:75～1:100，更佳地为1:75；
(2)、将步骤(1)所得的反应液1与如权利要求7～8任一项所述的组合试剂中的第二试剂混合反应，得反应液2；所述反应液1与上述第二试剂的体积比为本领域常规的体积比，较佳地为5:1～3:1，更佳地为3:1；
(3)、读取步骤(2)所得的反应液2在546nm和700nm波长处的吸光度值，计算小而密脂蛋白的含量；较佳地，spline方法计算小而密脂蛋白的含量。
10.一种测定小而密脂蛋白的试剂盒，其特征在于，其包括如权利要求7或8所述的组合试剂；较佳地，所述的试剂盒还包括标准品，所述的试剂盒标准品可为本领域常规使用的商品化试剂盒标准品，较佳地为朗道血脂标准液。
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