CN110734475A - 一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽及其应用 - Google Patents
一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110734475A CN110734475A CN201910898119.8A CN201910898119A CN110734475A CN 110734475 A CN110734475 A CN 110734475A CN 201910898119 A CN201910898119 A CN 201910898119A CN 110734475 A CN110734475 A CN 110734475A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- oligopeptide
- glucosidase
- inhibitory activity
- leu
- ala
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 title claims abstract description 60
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 title claims abstract description 60
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 title claims abstract description 47
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 title claims abstract description 44
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 33
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 claims abstract description 27
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 8
- 235000006468 Thea sinensis Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 235000020279 black tea Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 10
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 240000005790 Oroxylum indicum Species 0.000 claims 1
- 235000012920 Oroxylum indicum Nutrition 0.000 claims 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 abstract description 20
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 6
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 abstract description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 9
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 6
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 6
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 5
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 5
- XUFXOAAUWZOOIT-SXARVLRPSA-N (2R,3R,4R,5S,6R)-5-[[(2R,3R,4R,5S,6R)-5-[[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4-dihydroxy-6-methyl-5-[[(1S,4R,5S,6S)-4,5,6-trihydroxy-3-(hydroxymethyl)-1-cyclohex-2-enyl]amino]-2-oxanyl]oxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-2-oxanyl]oxy]-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4-triol Chemical compound O([C@H]1O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O)[C@H]1O)N[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)C(CO)=C1)O)C)[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O XUFXOAAUWZOOIT-SXARVLRPSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 229960002632 acarbose Drugs 0.000 description 4
- XUFXOAAUWZOOIT-UHFFFAOYSA-N acarviostatin I01 Natural products OC1C(O)C(NC2C(C(O)C(O)C(CO)=C2)O)C(C)OC1OC(C(C1O)O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(O)C(O)C1O XUFXOAAUWZOOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical group 0.000 description 4
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 4
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 4
- 229940077274 Alpha glucosidase inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 239000003888 alpha glucosidase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000209507 Camellia Species 0.000 description 2
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 235000018597 common camellia Nutrition 0.000 description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 210000000110 microvilli Anatomy 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 2
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IFBHRQDFSNCLOZ-ZIQFBCGOSA-N 4-nitrophenyl alpha-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 IFBHRQDFSNCLOZ-ZIQFBCGOSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 241000202564 Kalopanax Species 0.000 description 1
- -1 Lys amino acids Chemical class 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 239000003875 Wang resin Substances 0.000 description 1
- NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N [4-[(4-methylphenyl)methoxy]phenyl]methanol Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1COC1=CC=C(CO)C=C1 NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Substances [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/0102—Alpha-glucosidase (3.2.1.20)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种具有α‑葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽，寡肽的缩写为AVPANLVDLNVPALLK，分子量1647.8Da，所述寡肽的氨基酸序列为Ala‑Val‑Pro‑Ala‑Asn‑Leu‑Val‑Asp‑Leu‑Asn‑Val‑Pro‑Ala‑Leu‑Leu‑Lys，所述寡肽可以从黑茶千两茶中分离得到，也可以使用固相合成仪合成得到，能够实现体外降血糖的效果，可应用于保健食品、特殊医学用途配方食品与生物制药领域，改善糖尿病病人的病症，本发明还公布了所述寡肽的制备方法、含有该寡肽的药品组合物、含有该寡肽的保健品和含有该寡肽的食品。
Description
技术领域
本发明涉及生物制药领域，特别是一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽，本发明还涉及该寡肽的制备方法和应用。
背景技术
糖尿病的早期征兆往往是餐后高血糖，特别是2型糖尿病病人,，餐后高血糖不仅极易诱发各种并发症，还会极大地提高糖尿病的死亡率，而α-葡萄糖苷酶位于小肠刷状缘膜上皮细胞,它能将双糖,如蔗糖、麦芽糖等水解成可被小肠吸收的单糖，从而导致血糖升高，因此,抑制α-葡萄糖苷酶能够延缓碳水化合物的消化,减少葡萄糖吸收入血,进而控制餐后血糖浓度的升高。
α-葡萄糖苷酶抑制剂是一类新型的降血糖药物，它可通过抑制小肠刷状缘细胞表面的α-葡萄糖苷酶活性，减缓葡萄糖的生成及吸收，同时增加肝脏及周围组织对胰岛素的敏感性，减少高血糖对胰腺刺激，从而起到降低血糖浓度糖及治疗糖尿病的目的。虽然,合成的α-葡萄糖苷酶抑制药物已经上市(如阿卡波糖等),但由于它们有一定的毒副作用,因此从植物中筛选天然的α-葡萄糖苷酶抑制剂具有广阔的前景。
发明内容
本发明旨在提供一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽及其应用。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽，所述寡肽的氨基酸序列为Ala-Val-Pro-Ala-Asn-Leu-Val-Asp-Leu-Asn-Val-Pro-Ala-Leu-Leu-Lys，所述寡肽的缩写为AVPANLVDLNVPALLK，分子量1647.8Da。
所述寡肽可以从黑茶千两茶中分离得到。具体包括如下步骤：
(1)茶蛋白提取：将千两茶叶粉碎后过20-40目筛，以料液比为1:5-40的比例混合茶粉和超纯水，于95℃加热浸提10-60min，浸提液过滤后在25℃，8000rpm/min的条件下离心20min，收集上清液，往上清液中加入饱和硫酸铵溶液(上清液:硫酸铵＝1:2-6)，在4℃静置12h，使蛋白质沉淀，然后，于4℃，6000rpm/min条件下离心20min，取沉淀，用超纯水溶解，在室温中透析24小时，以去除硫酸铵等小分子物质，获得千两茶粗蛋白；
(2)粗蛋白的酶解：将步骤(1)制得的千两茶粗蛋白样品制成2-10mg/mL的溶液，于50℃水浴中保持10min，用浓度为2.0mol/L的氢氧化钠调节PH至8.0，以酶/底物比(E/S)为1-5％(w/w)的比例添加胰蛋白酶，酶解时间为5-10h，酶解过程中用浓度为2.0mol/L的氢氧化钠溶液调节酸碱度，使其保持在pH 8.0，酶解完成后把样品置于95℃下加热20min使酶灭活，并于4℃，8000rpm/min离心10min，弃去沉淀，制得千两茶胰蛋白酶酶解组分，冻干备用；
(3)“酶-抑制肽”复合物的制备：取所述千两茶胰蛋白酶酶解组分配成1-5mg/mL样品溶液，将α-葡萄糖苷酶溶解在10mM pH 6.8磷酸盐缓冲液中配成10U/mL的α-葡萄糖苷酶溶液，再取50-300μL所述样品溶液与100-500μL所述α-葡萄糖苷酶溶液混合，于37℃下，摇床培养10-60min，使酶与抑制剂样品充分结合；
(4)未与酶结合成分的去除：培养结束后，把步骤(3)制得的混合物加入截留分子量为30kDa的超滤离心管中，并于常温下，10000rpm/min离心25min，去除样品中未与酶结合的成分，用200μL磷酸缓冲洗截留后的滤液3次，并于常温下，5000rpm/min离心5min；
(5)抑制肽的释放、分离与鉴定：离心后往上层(即“酶-抑制肽”复合物层)液体中加入100-400μL 50％乙腈水溶液，混合均匀，静置10min之后，在常温下以10000rpm/min离心10分钟，重复2次，合并滤出液，过0.22μm超滤膜，制得千两茶超滤液，进行高效液相谱分离，收集合适的峰，即获得所述具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽。
所述寡肽也可以使用固相合成仪合成制得，也就是说，将目标多肽的C-端羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连，然后以这个氨基酸的氨基作为起点，与另一分子氨基酸的羧基作用形成肽键，不断重复这一过程，合成反应完成后，去除保护基，将肽链与树脂分离，即得到目标产物。多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序从C端向N端合成。
一种药物组合物，所述药物组合物含有上述的具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽。
一种保健品，所述保健品含有上述的具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽。
一种食品，所述食品含有上述的具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽。
所述寡肽在浓度为2mg/mL时，对α-葡萄糖苷酶的体外抑制率为94.3％。
所述寡肽在浓度为1.5mg/mL时，对α-葡萄糖苷酶的体外抑制率为84.6％。
所述寡肽对α-葡萄糖苷酶的50％抑制浓度(IC50)为1.0261±0.12mg/mL。
本发明的有益效果是：可以从黑茶千两茶提取出一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽，能够实现体外降血糖的效果，可应用于保健食品、特殊医学用途配方食品与生物制药领域，改善糖尿病病人的病症。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。
图1是实施例1所述千两茶超滤液的高效液相色谱图；
图2是实施例1所述寡肽的一级质谱图；
图3是实施例1所述寡肽的二级质谱图；
图4是实施例1所述寡肽的离子碎片分析图；
图5是实施例2所述寡肽的高效液相色谱图；
图6是实施例2所述寡肽的质谱图；
图7是本发明所述寡肽与阿卡波糖的“浓度-抑制率”折线图。
具体实施方式
实施例1：
一种制备具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽的方法，包括如下步骤：
(1)茶蛋白提取：将千两茶叶粉碎后过20目筛，以料液比为1:20的比例混合茶粉和超纯水，于95℃加热浸提30min，浸提液过滤后在25℃，8000rpm/min的条件下离心20min，收集上清液，往上清液中加入饱和硫酸铵溶液(上清液:硫酸铵＝1:4)，在4℃静置12h，使蛋白质沉淀，然后，于4℃，6000rpm/min条件下离心20min，取沉淀，用超纯水溶解，在室温中透析24小时，以去除硫酸铵等小分子物质，获得千两茶粗蛋白；
(2)粗蛋白的酶解：将步骤(1)制得的千两茶粗蛋白样品制成5mg/mL的溶液，于50℃水浴中保持10min，用浓度为2.0mol/L的氢氧化钠调节PH至8.0，以酶/底物比(E/S)为1.5％(w/w)的比例添加胰蛋白酶，酶解时间为6h，酶解过程中用浓度为2.0mol/L的氢氧化钠溶液调节酸碱度，使其保持在pH 8.0，酶解完成后把样品置于95℃下加热20min使酶灭活，并于4℃，8000rpm/min离心10min，弃去沉淀，制得千两茶胰蛋白酶酶解组分，冻干备用；
(3)“酶-抑制肽”复合物的制备：取千两茶胰蛋白酶酶解组分配成2mg/mL样品溶液，将α-葡萄糖苷酶溶解在10mM pH 6.8磷酸盐缓冲液中配成10U/mL的α-葡萄糖苷酶溶液，再取100μL所述样品溶液与200μL所述α-葡萄糖苷酶溶液混合，于37℃下，摇床培养30min，使酶与抑制剂样品充分结合；
(4)未与酶结合成分的去除：培养结束后，把步骤(3)制得的混合物加入截留分子量为30kDa的超滤离心管中，并于常温下，10000rpm/min离心25min，去除样品中未与酶结合的成分，用200μL磷酸缓冲洗截留后的滤液3次，并于常温下，5000rpm/min离心5min；
(5)抑制肽的释放、分离与鉴定：离心后往上层(即“酶-抑制肽”复合物层)液体中加入200μL 50％乙腈水溶液，混合均匀，静置10min之后，在常温下以10000rpm/min离心10分钟，重复2次，合并滤出液，过0.22μm超滤膜，制得千两茶超滤液，进行高效液相谱分离。
所用的高效液相色谱仪为Angilent 1100，相关参数设置：A相为水，B相为乙腈，0-2min为85％水，15％乙腈；6-9.5min为15％水，85％乙腈；10-12min为85％水，15％乙腈，流速为0.2mL/min。高效液相色谱分离结果如图1所示，收集第7个峰即获得具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽，分子量1647.8Da，所述寡肽的氨基酸序列为Ala-Val-Pro-Ala-Asn-Leu-Val-Asp-Leu-Asn-Val-Pro-Ala-Leu-Leu-Lys，所述寡肽的缩写为AVPANLVDLNVPALLK。
质谱参数设置：ESI离子源，扫描范围50m/z-3000m/z，阳离子模式，端板偏移-500V，电压变化2000V，正离子谱测定，分子量测定范围在500-3000KD。质谱鉴定如图2至图3所示。
实施例2：
采用固相合成仪合成所述具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽，具体操作为：
(1)通过树脂的筛选合成所述寡肽，选用高分子树脂(王氏树脂，上海阿拉丁生化科技股份有限公司)，按照氨基酸序列Ala-Val-Pro-Ala-Asn-Leu-Val-Asp-Leu-Asn-Val-Pro-Ala-Leu-Leu-Lys的特征，先将Ala的羧基以共价键的形式与一个树脂的连接位点相连，然后Ala的氨基和Val的羧基缩水反应，处理后，再添加Pro，Pro的氨基和另一个Ala的羧基反应，依次从右到左添加氨基酸，加好最后一个Lys氨基酸后，再切除树脂，即得到目标多肽；
(2)采用高效液相色谱进行纯化，色谱柱型号为Phenomenex C18，尺寸4.6*150mm，流动相A：含有0.1％三氟乙酸(TFA)的乙腈；流动相B：含有0.1％TFA的水；25min内B相由95.0％下降到30.0％，流速1.0mL/min，检测波长214nm；
(3)液氮速冻，冷冻干燥，即制得所述具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽，该成品纯度为96.89％，分子质量为1647.8Da，高效液相色谱分离结果如图5所示，质谱鉴定如图6所示。
对α-葡萄糖苷酶的体外抑制活性实验：
选取实施例2制得的寡肽分别配成浓度为0.125mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、1.5mg/mL和2mg/mL的寡肽溶液，以α-葡萄糖苷酶为研究对象，测定寡肽的体外抑制活性。
在黑色96孔板中均加入10μLα-葡萄糖苷酶的酶溶液(浓度0.2U/mL)和50μL 0.2M的磷酸缓冲液(pH 6.8)，再分别加入各个浓度的20μL寡肽溶液，混合均匀后于37℃摇床反应20min，后加入40μL底物溶液(5mM p-NPG溶液)，于37℃摇床反应30min，最后加入140μLNa2CO3溶液，使反应终止，于405nm处测吸光值。
对照组加入缓冲液20μL和α-葡萄糖苷酶的酶溶液10μL，背景组加入样品溶液20μL和缓冲液10μL，阳性对照组分别为20μL相同浓度(即0.125mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、1.5mg/mL、2mg/mL和4mg/mL)的阿卡波糖溶液和α-葡萄糖苷酶的酶溶液10μL，其余操作与上述相同。
α-葡萄糖苷酶的抑制率的计算公式如下：
其中，Aa是对照组的吸光值，A0是背景组的吸光值，Ab是实验组的吸光值。
对每个孔的数据作“浓度-抑制率”图的线性图象，如图7所示，由图可知所述寡肽对α-葡萄糖苷酶的50％抑制浓度(IC50)为1.0261±0.12mg/mL；本发明的寡肽对α-葡萄糖苷酶的抑制率低于阿卡波糖，但是对于糖尿病的治疗仍有指导意义，可应用于保健食品、特殊医学用途配方食品与生物制药领域，改善糖尿病病人的病症。
实施例3：
一种药物组合物，含有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽和药学上可接受的载体或赋形剂，所述寡肽可以从黑茶千两茶中分离得到，所述寡肽的缩写为AVPANLVDLNVPALLK，分子量1647.8Da，氨基酸序列为Ala-Val-Pro-Ala-Asn-Leu-Val-Asp-Leu-Asn-Val-Pro-Ala-Leu-Leu-Lys。本实施例为注射剂，主要成分为所述寡肽，其他成分均为制药领域注射剂的常规辅料。
实施例4：
一种保健品，含有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽，所述寡肽的缩写为AVPANLVDLNVPALLK，分子量1647.8Da，氨基酸序列为Ala-Val-Pro-Ala-Asn-Leu-Val-Asp-Leu-Asn-Val-Pro-Ala-Leu-Leu-Lys，所述寡肽可以从黑茶千两茶中分离得到，其他成分均为保健品领域的常规添加材料。
实施例5：
一种食品，含有具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽，所述寡肽的缩写为AVPANLVDLNVPALLK，分子量1647.8Da，氨基酸序列为Ala-Val-Pro-Ala-Asn-Leu-Val-Asp-Leu-Asn-Val-Pro-Ala-Leu-Leu-Lys，所述寡肽可以从黑茶千两茶中分离得到，其他成分均是根据食品类型进行添加制作。
以上的实施方式不能限定本发明创造的保护范围，专业技术领域的人员在不脱离本发明创造整体构思的情况下，所做的均等修饰与变化，均仍属于本发明创造涵盖的范围之内。
Claims (9)
1.一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽，其特征在于所述寡肽的缩写为AVPANLVDLNVPALLK，所述寡肽的氨基酸序列为Ala-Val-Pro-Ala-Asn-Leu-Val-Asp-Leu-Asn-Val-Pro-Ala-Leu-Leu-Lys。
2.根据权利要求1所述的具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽，其特征在于所述寡肽可以从黑茶千两茶中分离得到。
3.一种药物组合物，其特征在于所述药物组合物含有权利要求1或2所述的具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽。
4.一种保健品，其特征在于所述保健品含有权利要求1或2所述的具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽。
5.一种食品，其特征在于所述食品含有权利要求1或2所述的具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽。
6.根据权利要求1或2所述的具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽，其特征在于所述寡肽可以使用固相合成仪合成制得。
7.根据权利要求1或2所述的具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽，其特征在于所述寡肽在浓度为2mg/mL时，对α-葡萄糖苷酶的体外抑制率为94.3％。
8.根据权利要求1或2所述的具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽，其特征在于所述寡肽在浓度为1.5mg/mL时，对α-葡萄糖苷酶的体外抑制率为84.6％。
9.根据权利要求1或2所述的具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽，其特征在于所述寡肽对α-葡萄糖苷酶的50％抑制浓度(IC50)为1.0261±0.12mg/mL。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910898119.8A CN110734475B (zh) | 2019-09-23 | 2019-09-23 | 一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910898119.8A CN110734475B (zh) | 2019-09-23 | 2019-09-23 | 一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110734475A true CN110734475A (zh) | 2020-01-31 |
| CN110734475B CN110734475B (zh) | 2021-08-31 |
Family
ID=69269427
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910898119.8A Active CN110734475B (zh) | 2019-09-23 | 2019-09-23 | 一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110734475B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114716523A (zh) * | 2022-04-15 | 2022-07-08 | 中国农业大学 | 具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的小米醇溶蛋白肽 |
| CN116239652A (zh) * | 2022-12-07 | 2023-06-09 | 中国农业大学 | 三种红小豆来源的寡肽及其在控制肥胖和糖尿病中的应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101323640A (zh) * | 2007-06-13 | 2008-12-17 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的酶解产物及其应用 |
| CN104131059A (zh) * | 2014-07-31 | 2014-11-05 | 华南理工大学 | 一种具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的汉麻籽粕多肽及其酶解制备方法与应用 |
-
2019
- 2019-09-23 CN CN201910898119.8A patent/CN110734475B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101323640A (zh) * | 2007-06-13 | 2008-12-17 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的酶解产物及其应用 |
| CN104131059A (zh) * | 2014-07-31 | 2014-11-05 | 华南理工大学 | 一种具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的汉麻籽粕多肽及其酶解制备方法与应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| KEYING SU ET AL.,: "In vitro assessment of anti-diabetic potential of 4 kinds of dark tea (Camellia sinensis L.) protein hydrolysates", 《OURNAL OF APPLIED BOTANY AND FOOD QUALITY》 * |
| ZHAO BINGLI ET AL.: "Separation and identification of enzyme inhibition peptides from dark tea protein", 《BIOORGANIC CHEMISTRY》 * |
| 苏可盈: "四种黑茶蛋白的降血糖活性及其机理的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库工程科技I辑》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114716523A (zh) * | 2022-04-15 | 2022-07-08 | 中国农业大学 | 具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的小米醇溶蛋白肽 |
| CN114716523B (zh) * | 2022-04-15 | 2023-05-23 | 中国农业大学 | 具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的小米醇溶蛋白肽 |
| CN116239652A (zh) * | 2022-12-07 | 2023-06-09 | 中国农业大学 | 三种红小豆来源的寡肽及其在控制肥胖和糖尿病中的应用 |
| CN116239652B (zh) * | 2022-12-07 | 2023-10-10 | 中国农业大学 | 三种红小豆来源的寡肽及其在控制肥胖和糖尿病中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110734475B (zh) | 2021-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109400678A (zh) | 一种刺参来源的抗氧化和dpp-iv抑制活性肽 | |
| CN103333222B (zh) | 一种具有美白功效的珍珠天然活性肽及其提取方法和应用 | |
| CN110734475B (zh) | 一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的寡肽及其应用 | |
| CN109608557A (zh) | 枸杞多糖提取分离和纯化方法、枸杞糖肽及制备方法 | |
| CN103539831A (zh) | 山杏α-葡萄糖苷酶抑制肽及其制备方法和用途 | |
| CN103539833A (zh) | 高活性α-葡萄糖苷酶抑制肽及其制备方法和用途 | |
| CN110734472B (zh) | 一种具有二肽基肽酶-4抑制活性的寡肽及其应用 | |
| CN106467561B (zh) | 一种快速分离、纯化人参精氨酸糖苷的方法 | |
| CN112795613B (zh) | 一种牡丹籽粕来源的降血糖多肽及其应用 | |
| CN111269292B (zh) | 具有促进组织修复的家蝇多肽及其制备方法与应用 | |
| CN102558298A (zh) | 一种利用固相多肽合成法合成四肽异构体的方法及其应用 | |
| CN110734471B (zh) | 一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的七肽及其应用 | |
| CN101402681B (zh) | 一种源自鹿花盘的多肽、其制法及其防治糖尿病的用途 | |
| CN113087773B (zh) | 一种具有降血糖和抗氧化功能的牦牛骨肽及其制备方法 | |
| CN109810177A (zh) | 一种具有ace抑制活性的核桃粕多肽及其制备方法和应用 | |
| JPH0278630A (ja) | 抗腫瘍剤 | |
| CN113072621B (zh) | 一种牦牛骨降血压肽及其制备方法与应用 | |
| CN111825754B (zh) | 一种从芝麻蛋白中获得的具有降血压与降血糖活性的多肽 | |
| CN114032267A (zh) | 一种活性肽的制备方法和应用 | |
| KR20120049047A (ko) | 굴 가수분해물을 유효성분으로 함유하는 항염증 조성물 | |
| CN102093469B (zh) | 一种乳源性抗氧化活性肽及其应用 | |
| CN113880916B (zh) | 一种牦牛皮抗氧化多肽及其制备方法和应用 | |
| JPH01199593A (ja) | 抗ウイルス剤 | |
| CN112961212B (zh) | 一类ace抑制肽及其制备方法和应用 | |
| CN109400687A (zh) | 一种西兰花蛋白来源的ace抑制肽及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |