CN110678468A - 用于治疗寄生虫病的5,6-稠合双环化合物及其组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐；制备本发明化合物的方法及其治疗用途。本发明进一步提供了药理活性剂和药物组合物的组合。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求于2017年5月31日提交的美国专利申请号62/513,211和2017年11月6日提交的美国临时专利申请号62/581,919的优先权权益；这些文献各自通过引用以其全文并入本文。
技术领域
本发明涉及对原生动物锥虫(kinatoplastid)具有抗寄生虫活性的化合物。
背景技术
利什曼病是由属于利什曼属(Leishmania)的寄生性原生动物引起的疾病并且是通过某些沙蝇种类的叮咬而传播的。利什曼病有四种主要形式。皮肤利什曼病是最常见的利什曼病形式。内脏利什曼病是最严重形式(其中寄生虫迁移至重要器官)，是由寄生虫杜氏利什曼虫(Leishmania donovani)引起的，并且如果不加以治疗可能致命。它影响全世界多达1200万人，每年有150-200万新病例。内脏形式的利什曼病估计每年有500,000例新病例和60,000例死亡。
内脏利什曼病的两种主要疗法是锑衍生物葡萄糖酸锑钠和葡甲胺锑酸盐
葡萄糖酸锑钠已经使用了约70年并且对此药物的耐药性正在成为日益严重的问题。另外，治疗时间相对较长且痛苦，并且可能引起不良副作用。两性霉素现在是首选治疗方法。米替福星
和巴龙霉素是其他治疗选择。
两性霉素(AmBisome)价格昂贵并且必须静脉内给予。巴龙霉素需要肌内注射持续3周；顺应性是个主要问题。米替福星是一种口服药物并且已被证明比其他药物更有效且耐受性更好。然而，由于米替福星的致畸性和药代动力学，产生了与使用米替福星有关的问题。已发现米替福星从体内清除要慢得多并且在治疗结束后五个月仍可检测到。治疗后五个月以上血液中存在的亚治疗量(subtherapeutic)米替福星的浓度可能有助于抗药性寄生虫的选择；此外，必须重新考虑预防米替福星致畸风险的措施。当前，没有常规使用的疫苗。
恰加斯病(也称为美国锥虫病)是由鞭毛原生动物克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)引起的热带寄生虫病。克氏锥虫通常是通过锥猎椿亚科(锥蝽属科)的吸血“亲吻虫”传播给人类和其他哺乳动物的。每年，估计全世界有1000至1500万人感染了恰加斯病，其中大多数人不知道自己被感染了。每年，有14,000人死于这种疾病。在中美洲和南美，恰加斯病致死人数比任何其他寄生虫传播的疾病(包括疟疾)都要多。CDC估计生活在美国的人有超过300,000人具有克氏锥虫感染。
恰加斯病的症状在感染过程中会发生变化。在早期急性期，症状较轻并且通常只在感染部位产生局部肿胀。初始急性期对抗寄生虫治疗有反应，治愈率为60％-90％。在4-8周后，具有活动性感染的个体进入恰加斯病的慢性阶段，60％-80％的慢性感染个体在其一生中对此是无症状的。但是，剩下的20％-40％的感染者在其一生中会发展衰弱并且有时甚至危及生命的医学问题。
恰加斯病的治疗重点是杀死寄生虫并管理体征和症状。在恰加斯病的急性期间，目前可用于治疗的药物是苄硝唑和硝呋莫司。恰加斯病一旦进入慢性期，药物就无法有效治愈该病。相反，治疗取决于特定的体征和症状。然而，这些当前疗法的问题包括它们的多种副作用、治疗时长、以及在治疗期间对医疗监督的要求。已经出现了对两种一线药物的耐药性。抗真菌剂两性霉素b已被提议作为二线药物，但价格昂贵且毒性较大。尚无针对恰加斯病的疫苗。
非洲人类锥虫病(HAT)，也称为非洲昏睡病，是由原生动物布氏锥虫引起的媒介传播寄生虫病。存在两种可感染人类亚种，布氏冈比亚锥虫(T.b.gambiense)和布氏罗得西亚锥虫(T.b.rhodesiense)，前者占报告病例的95％以上并且后者占其余报告病例。通过采采蝇(舌蝇属)叮咬将这些寄生虫传播给人类，这些叮咬是从人类或带有人类病原性寄生虫的动物身上感染而来的。2008年，约有48,000人死于昏睡病。预防和消除采采蝇种群的公共卫生工作已成功控制了疾病的传播；根据世界卫生组织的数据，2009年报告的新病例不到10,000例，与1998年估计的300,000例新病例相比有了巨大的减少。
非洲锥虫病症状分为两个阶段。在第一阶段，称为血淋巴期，锥虫在皮下组织、血液和淋巴中繁殖。血淋巴期的特征是发烧、头痛、关节痛和瘙痒。在第二阶段，神经系统期，寄生虫穿过血脑屏障感染中枢神经系统。在此阶段，会出现更明显的疾病体征和症状(例如行为改变、意识混乱、感觉障碍和协调不良)。睡眠周期的紊乱(疾病得名由来)是疾病第二阶段的重要特征。如果不进行治疗，这种疾病一定是致命的，具有导致昏迷、全身器官衰竭和死亡的阶段性智力退化。
注册了四种用于治疗昏睡病的药物。方案取决于疾病的阶段。当前用于第一阶段疾病的标准治疗方法是静脉内或肌内注射喷他脒(用于布氏冈比亚锥虫)或静脉内苏拉明(用于布氏罗得西亚锥虫)。当前用于第二阶段疾病的标准治疗方法是静脉内注射美拉胂醇，或静脉内注射美拉胂醇联合口服硝呋莫司，仅静脉内注射依氟鸟氨酸或依氟鸟氨酸联合硝呋莫司。所有药物均具有不良或潜在的严重副作用。例如，注射美拉胂醇
的患者中有3％-10％发生反应性脑病(抽搐、进行性昏迷或精神病性反应)，并且此类病例的10％-70％会导致死亡。
因此，对于针对利什曼病、恰加斯病和HAT的新且更好的治疗和疗法仍然存在需要。
发明内容
在某些方面，本文提供了具有式(I)或其子式的化合物：
或其药学上可接受的盐、或其立体异构体；其中
环A是苯基或吡啶基；
R1选自：
(a)未经取代的或经1至3个独立地选自卤素和C3-6环烷基的取代基取代的C1-6烷基；并且所述C3-6环烷基是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素和C1-4烷基的取代基取代的；
(b)未经取代的或经C1-4卤代烷基取代的C1-4烷氧基；
(c)-NR5aR5b，其中R5a和R5b独立地是氢、C1-4烷基或C1-4卤代烷基；或者R5a和R5b与它们所附接的氮原子一起形成4-至7-元杂环烷基，所述杂环烷基包含1至3个独立地选自N、O和S的杂原子作为环原子；
其中所述4至7-元杂环烷基是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、C1-4烷基和C1-4烷氧基的取代基取代的；或者在所述4-至7-元杂环烷基的相同或不同的环原子上的两个取代基与它们所附接的原子一起形成附接至所述4-至7-元杂环烷基上的螺环、桥环或稠合环B；
其中环B是C3-6环烷基或包含1至3个独立地选自N、O或S的杂原子作为环原子的3-至7-元杂环烷基；
(d)单环的C3-6环烷基、C3-6环烯基或螺戊基；其各自是未经取代的或经1至3个独立地选自卤素、氰基、C1-4烷基和C1-4卤代烷基和C1-4烷氧基的取代基取代的；
(e)苯基或包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子作为环原子的5-6元杂芳基；其各自是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、氰基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、二-C1-4烷基氨基-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4羟烷基、C1-4烷氧基、和C3-6环烷基的取代基取代的；
R2和R7独立地是氢或C1-4烷基；
R3是氢或卤素并且n是0或1；并且
R4选自
(a)氢；
(b)卤素；
(c)未经取代的或经C3-6环烷基取代的C1-6卤代烷基或C1-6烷基；并且所述C3-6环烷基是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素和C1-4烷基的取代基取代的；
(d)-NR6aR6b，其中R6a是氢或C1-4烷基；R6b是氢、C1-4烷氧基羰基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基或未经取代的或经C1-4烷氧基取代的C1-4烷基；或R6a和R6b与它们所附接的氮原子一起形成4-至7-元杂环烷基，所述杂环烷基包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子作为环原子；
其中所述4-至7-元杂环烷基是未经取代的或经1至2个独立地选自以下的取代基取代的：卤素、氰基、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4烷氧基、氧代、1,1-二氧代、-C(O)-OR7或是包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基；或者在所述4-至7-元杂环烷基的相同或不同的环原子上的两个取代基与它们所附接的原子一起形成附接至所述4-至7-元杂环烷基上的螺环、桥环或稠合环C；
其中环C选自C3-6环烷基和包含1至3个独立地选自N、O或S的杂原子作为环原子的3-至7-元杂环烷基；并且独立地是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素和氧代的取代基取代的；
(e)C3-6环烷基；
(f)包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子作为环原子的4-至6-元杂环烷基；并且是未经取代的或经以下基团取代的：-C(O)OR8，-C(O)R8，其中R8是未经取代的或经1至2个卤素取代基取代的C1-4烷基和芳基C1-4烷基；并且
(g)包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子作为环原子的5-至6-元杂芳基；其是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、C1-4烷基、C1-4羟烷基和C3-6环烷基的取代基取代的。
在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的具有式(I)或其子式的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体；以及一种或多种药学上可接受的载体。
在又另一方面，本发明提供了一种组合，特别是药物组合，所述组合包含治疗有效量的具有式(I)或其子式的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体；以及一种或多种治疗活性剂。
因此，游离形式或药学上可接受的盐形式的具有式(I)或其子式的化合物可以用作可得益于抑制动质体寄生虫的生长和增殖的疾病或病症的疗法。在一方面，本发明提供了式(I)或其子式的化合物，其药学上可接受的盐或其立体异构体，用于治疗、预防、抑制、改善或消除由运动质体寄生虫引起的疾病的病理学和/或症状学。在另一方面，本发明提供了选自式(I)或其子式的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体在制造用于治疗由动质体寄生虫引起的受试者中的疾病的药物中的用途。动质体寄生虫包括但不限于利什曼原虫属的寄生虫，例如杜氏利什曼虫、婴儿利什曼虫、巴西利什曼虫，巴拿马利什曼虫、瓜亚内斯(guayanensis)利什曼虫、亚马逊利什曼虫、墨西哥利什曼原虫、热带利什曼虫、利什曼原虫(Leishmania major)；或锥虫属的寄生虫，例如克氏锥虫和布氏锥虫。因此，本发明的化合物可以在选自以下的适应症(indication)中使用：利什曼病，恰加斯病(又称美洲锥虫病)，更具体地说，是由原生动物克氏锥虫引起的恰加斯病；以及非洲人类锥虫病，更具体地说，是由原生动物布氏锥虫引起的非洲人类锥虫病。
除非另有说明，术语“本发明化合物”是指式I及其子式的化合物、化合物的盐、化合物的水合物或溶剂化物、盐以及所有的立体异构体(包括非对映体和对映体)、互变异构体和同位素标记的化合物(包括氘取代)。本发明的化合物还包含式(I)(或其子式)的化合物及其盐的多晶型物。
发明详细说明
定义
如本文所用，术语“一个/种(a/an)”、“该(the)”以及在本发明的上下文中使用的类似术语(特别是在权利要求的上下文中)应被解释为涵盖单数和复数二者，本文中除非另外指示或与上下文明显相矛盾。
如本文所用，术语“C1-6烷基”是指仅由碳和氢原子组成的直链或支链烃链基团，所述基团中不存在不饱和，具有从一至六个碳原子，并且通过单键连接到分子的其余部分。术语“C1-4烷基”应相应地解释。如本文所用，术语正烷基是指如本文所定义的直链(无支链)烷基。C1-6烷基的实例包括，但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基(-CH2CH(CH3)2)、仲丁基(-CH(CH3)CH2CH3)、叔丁基(-C(CH3)3)、正戊基、异戊基(-(CH2)2CH(CH3)2)、新戊基(-CH2C(CH3)3)、叔戊基(-C(CH3)2CH2CH3)、2-戊-基(-CH(CH3)(CH2)2CH3)、正己基等。
如本文所用，术语“C1-4烷基氨基”是指式-NH-Ra的基团，其中Ra是如以上所定义的C1-4烷基基团。
如本文所用，术语“二-(C1-4烷基)氨基”是指式-N(Ra)-Ra的基团，其中Ra是如以上所定义的可以相同或不同的C1-4烷基基团。
如本文所用，术语“C1-6烷氧基”是指式-ORa的基团，其中Ra是如以上通常所定义的C1-6烷基基团。C1-6烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、戊氧基和己氧基。
如本文所用，术语“C1-4烷基C1-4烷基”是指式-Ra-O-Ra的基团，其中Ra各自独立是如以上所定义的C1-6烷基基团。氧原子可与任一烷基中的任何碳原子键合。C1-4烷氧基C1-4烷基的实例包括，但不限于：甲氧基-甲基、甲氧基-乙基、乙氧基-乙基、1-乙氧基-丙基和2-甲氧基-丁基。
如本文所使用的，术语“C1-6烷氧基羰基”是指式-C(＝O)-O-Ra的基团，其中Ra是如以上所定义的C1-6烷基基团。
如本文所用，“芳基”是指其中所有环原子均为碳原子的6-14元单环或多环芳族环组件(assembly)。典型地，芳基是6元单环、10-12元双环或14元稠合三环芳族环系统。如本文所用，CX芳基和CX-Y芳基描述以下芳基，其中X和Y表示环系统中的碳原子数。C6-14芳基包括但不限于苯基、联苯基、萘基、薁基和蒽基。
如本文所用，“桥连环”或“桥环”是指多环系统，其中两个环共有的两个环原子不彼此直接键合。环系统的一个或多个环可包括C3-6环烷基或包含选自N、O和S的杂原子作为环原子的4-至6-元杂环。桥连环的非排他性实例包括金刚烷基、氮杂双环[3.2.1]辛-3-烯-3-基，
等。
如本文所用，术语“氰基”意指基团*-C≡N。
术语“环烷基”是指作为完全氢化的环的非芳香族碳环，包括单环、双环或多环、稠合环、桥环或螺环系统。环烷基基团的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、双环[1,1,1]戊基、环己基、降冰片基和立方烷基。
如本文所用，“稠合环”是指多环组件，其中包含所述环组件的环如此连接，使得两个环共有的环原子彼此直接键合。稠合环组件可以是饱和的、部分饱和的、芳香族的、碳环的、杂环的等。常见稠合环的非排他性实例包括十氢化萘、萘、蒽、菲、吲哚、苯并呋喃、嘌呤、喹啉等。
“卤素”或“卤代”是指溴、氯、氟、或碘；优选氟、氯或溴。
如本文所用，“C1-6卤代烷基”是指被如以上所定义的一种或多种卤代基团取代的如以上所定义C1-6烷基基团。C1-6卤代烷基的实例包括，但不限于：三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、三氯甲基、2,2,2-三氟乙基、1,3-二溴丙-2-基、3-溴-2-氟丙基以及1,4,4-三氟丁-2-基。
术语“杂芳基”是指在5至10元芳香族环系统内含有至少一个杂原子(例如，氧、硫、氮或其组合)的芳香族部分。杂芳基的实例包括但不限于吡咯基、吡唑基、吲哚基、吲唑基、噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、三嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、嘌呤基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、苯并吡喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噁唑基和1H-苯并[d][1,2,3]三唑基。杂芳香族部分可以由单环或稠合环系统组成。典型的单杂芳基环是含有1至4个独立地选自N，O和S的杂原子的5至6元环，并且典型的稠合杂芳基环系统是含有1至4个独立地选自N，O和S的杂原子的9至10元环系统。稠合的杂芳基环系统可以由稠合在一起的两个杂芳基环或稠合至芳基(例如苯基)的杂芳基组成。
如本文所用，术语“杂原子”是指氮(N)，氧(O)或硫(S)原子。除非另有说明，否则任何具有不满足的化合价的杂原子均假定具有足以满足化合价的氢原子，并且当杂原子是硫时，其可以被未氧化(S)或被氧化为S(O)或S(O)2。
如本文所用，术语“羟基”是指基团-OH。
“杂环烷基”意指如本申请中所定义的环烷基，条件是所指示的环碳中的一个或多个被选自以下的部分替代：-O-、-N＝、-NH-、-S-、-S(O)-和-S(O)2-。3至8元杂环烷基的实例包括但不限于：环氧乙烷基、氮丙啶基、氮杂环丁烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢噻吩基1,1-二氧化物、噁唑烷基、噻唑烷基、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、吡唑烷基、六氢嘧啶基、1,4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]十-8-基、硫吗啉基、亚磺酰吗啉基、磺酰吗啉基和八氢吡咯并[3,2-b]吡咯基。
如本文所使用的术语“氧代”是指二价基团＝O。
如本文所使用的术语“螺环”包括C3-6环烷基或具有一个或两个选自N、O和S的杂原子作为环成员的4至6元杂环，其中所述螺环稠合到非芳族环的单个碳原子上，从而使得两个环共享作为螺环中心的该碳原子。螺环可任选地被如所定义的如卤素、羟基或C1-4烷基取代。螺环基团的说明性实例是：
如本文所指，术语“经取代的”意指至少一个氢原子被非-氢基团替代，条件是维持正常的化合价并且取代产生稳定的化合物。在取代基是氧代(即，＝O)时，那么原子上的2个氢被替代。在本发明的化合物中存在氮原子(例如胺)的情况下，可以通过用氧化剂(例如，mCPBA和/或过氧化氢)处理将其转化为N-氧化物以提供本发明的其他化合物。
如本领域普通技术人员将能够理解，例如，分子中的酮(-CH-C(＝O)-)基团可以互变异构成其烯醇形式(-C＝C(OH)-)。因此，本发明旨在覆盖所有可能的互变异构体，即使当结构仅描述其中之一时也是如此。
当任何变量在化合物的任何成分或化学式中出现不止一次时，则每次出现时其定义独立于其他每次出现时的其定义。因此，例如，如果显示一个基团经0-3个R基团取代，则所述基团可以未经取代的或经至多三个R基团取代，并且在每次出现时，R是独立于R的定义选择的。
如本文所用，
是表示X与分子的其他部分的附接点。
如本文所使用的术语“IC50”是指产生50％抑制作用的抑制剂的摩尔浓度。
如本文所使用的术语“EC50”是指产生50％效力的抑制剂或调节剂的摩尔浓度。
如本文使用的，术语“药物组合物”是指呈适于局部给予或肠胃外给予的形式的本发明的化合物、或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指可用于制备或使用药物组合物的物质，并且包括例如适合的稀释剂、溶剂、分散介质、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂、等渗剂、缓冲液、乳化剂、吸收延迟剂、盐、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、润湿剂、甜味剂、调味剂、染料及其组合，如本领域技术人员已知的(参见，例如，Remington TheScience and Practice of Pharmacy[雷明顿：药物科学与实践],第22版,PharmaceuticalPress[药物出版社],2013,第1049-1070页)。
如本文所用，术语“抑制(inhibit、inhibition或inhibiting)”是指减少或抑制给定的病症、症状或障碍、或疾病，或在生物活性或过程的基线活性方面的显著降低。
如本文所用，术语任何疾病或障碍的“预防(prevent、preventing或prevention)”是指疾病或障碍的预防性治疗；或延迟疾病或障碍的发作或进展。
如本文所用，术语“受试者”是指灵长类(例如，人(男性或女性)、狗、兔、豚鼠、猪、大鼠和小鼠)。在某些实施例中，受试者为灵长类。在又其他的实施例中，受试者是人。
术语“治疗有效量”的本发明的化合物是指将引起受试者的生物或医学响应(例如，酶或蛋白活性的减小或抑制，或改善症状、缓解病症、减缓或延迟疾病进展或预防疾病等)的本发明的化合物的量。在一个非限制性实施例中，术语“治疗有效量”是指本发明的化合物的如下量：当给予受试者时，所述量有效(1)至少部分地缓解、抑制、预防和/或改善由动质体寄生虫的增殖引起的病症、或障碍或疾病；或(2)减少或抑制动质体寄生虫的增殖。
如本文使用的，术语任何疾病或障碍的“治疗(treat、treating或treatment)”是指缓解或改善疾病或障碍(即，减慢或阻止疾病或其至少一种临床症状的发展)；或缓解或改善与所述疾病或障碍相关的至少一种物理参数或生物标记，包括患者可能无法辨别的那些物理参数或生物标记。
具体实施方式
本发明涉及对原生动物锥虫(kinatoplastid)具有抗寄生虫活性的化合物。本发明特别是涉及通过抑制寄生性蛋白酶体而抑制动质体寄生虫细胞生长的化合物，以及其可用作利什曼病、恰加斯病和昏睡病的疗法。
本文描述了本发明的各种(列举的)实施例。每个实施例中指定的特征可以与其他指定特征组合以提供本发明的另外实施例。
实施例1.如发明概述中所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
实施例2.根据实施例1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中环A是苯基。
实施例3.根据实施例1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中环A是吡啶基。
实施例4.根据实施例1-3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自-(CH2)1-3CF3、-(CH2)-CH(CH3)-CF3、-(CH2)-C(CH3)3、-O(CH2)2CF3、-(CH2)0-2-环丙基、-(CH2)0-2-环丁基、-NHCH3、-N(CH3)2、-N(CD3)2、-N(CH3)(CH2CH3)、-N(CH3)(CH2CF3)、
以及
实施例5.根据实施例1-3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是氮杂环丁烷基，其是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素和C1-4烷基的取代基取代的；或在所述氮杂环丁烷基的同一环原子上的两个取代基与它们所附接的环原子一起形成附接到所述氮杂环丁烷基环上的螺环丙基或螺四氢呋喃基。
实施例6.根据实施例1-3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是选自
实施例7.根据实施例1-6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是卤素并且n是1。
实施例8.根据实施例7所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是氟。
实施例9.根据实施例1-8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4选自氢、氯、溴、甲基、异-丙基、-(CH2)1-2CH(CH3)2、-(CH2)0-1C(CH3)3、-C(CH3)2CH2CH3、-CH(CH3)(CH2)1-2CH3、-CH2-环丁基、-(CH2)0-1CF3、-NH-(CH2)0-1CH3、-N-(CD3)2、-N(CH3)2、-NH-CH-(CH3)2、-NH-(CH2)-CH-(CH3)2、-NHC(O)OCH(CH3)2、-NH(CH2)2OCH3、
实施例10.根据实施例1-8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是-NR6aR6b；
R6a是氢或C1-4烷基；
R6b是氢、C1-4烷氧基羰基或未经取代的或经C1-4烷氧基取代的C1-4烷基；或者R6a和R6b与它们所附接的氮原子一起形成4-至6-元杂环烷基，所述杂环烷基任选地包含1至2个独立地选自N、O和S的另外的杂原子作为环原子；
其中所述4-至6-元杂环烷基是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4烷氧基、和氧代的取代基取代的；或者在所述4-至6-元杂环烷基的相同或不同的环原子上的两个取代基与它们所附接的原子一起形成附接至所述4-至6-元杂环烷基上的螺环、桥环或稠合环C；
其中环C选自C3-6环烷基；以及包含1至3个独立地选自N、O或S的杂原子作为环原子的3-至5-元杂环烷基；并且环C独立地是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素和氧代的取代基取代的。
实施例11.根据实施例1-8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4选自
以及
实施例12.根据实施例1-3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，
其中R1是氮杂环丁烷基，其是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素和C1-4烷基的取代基取代的；或在所述氮杂环丁烷基的同一环原子上的两个取代基与它们所附接的环原子一起形成附接到所述氮杂环丁烷基环上的螺环丙基或螺四氢呋喃基；
R2是氢或C1-4烷基；
R3选自卤素，并且n是1；并且
R4是-NR6aR6b，其中R6a是氢或C1-4烷基；R6b是氢、C1-4烷氧基羰基或未经取代的或经C1-4烷氧基取代的C1-4烷基；或者R6a和R6b与它们所附接的氮原子一起形成4-至6-元杂环烷基，所述杂环烷基任选地包含1至2个独立地选自N、O和S的另外的杂原子作为环原子；
其中所述4-至6-元杂环烷基是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4烷氧基、和氧代的取代基取代的；或者在所述4-至6-元杂环烷基的相同或不同的环原子上的两个取代基与它们所附接的原子一起形成附接至所述4-至6-元杂环烷基上的螺环、桥环或稠合环C；
其中环C选自C3-6环烷基；包含1至3个独立地选自N、O或S的杂原子作为环原子的3-至5-元杂环烷基；并且环C独立地是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素和氧代的取代基取代的。
实施例13.根据实施例1-12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4选自
以及
实施例14.根据实施例1-12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4选自
以及
实施例15.一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐；
或其药学上可接受的盐、或其立体异构体；其中
W1和W2各自独立地是CH或N；
环A是苯基或吡啶基；
X是-C(O)-或-S(O)2-；
R1选自
(a)未经取代的或经1至3个独立地选自卤素和C3-6环烷基的取代基取代的C1-4烷基；其中所述C3-6环烷基是未经取代基或经1至2个独立地选自卤素和C1-4烷基的取代基取代的；
(b)未经取代的或经C1-4卤代烷基取代的C1-4烷氧基；
(c)-NR5aR5b，其中
(1)R5a和R5b各自独立地是氢或C1-4烷基；或
(2)R5a和R5b与它们所附接的氮原子一起形成4-至6-元杂环烷基，所述杂环烷基任选地包含1至3个独立地选自N、O和S的另外的杂原子作为环原子；其中
所述4-至6-元杂环烷基是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和氧代的取代基取代的，或
在所述4-至6-元杂环烷基的相同或不同的环原子上的两个取代基与它们所附接的原子一起形成附接至所述4-至6-元杂环烷基上的螺环、桥环或稠合环B；其中环B选自
(i)C3-6环烷基,
(ii)包含1至3个独立地选自N、O或S的杂原子作为环原子的3-至5-元杂环烷基；并且
(iii)包含1至3个独立地选自N或O的杂原子作为环原子的5-至6-元杂芳基；
其中(i)至(iii)的环B各自是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、氰基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和氧代的取代基取代的；
(d)单环的C3-6环烷基和多环C5-9环烷基，其各自是未经取代的或经1至3个独立地选自卤素、氰基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、和C1-4烷氧基羰基的取代基取代的；
(e)包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子作为环原子的4-至6-元杂环烷基，其是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、氧代、和C1-4烷基羰基的取代基取代的；
(f)苯基，其是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、氰基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4烷基氨基-C1-4烷基、二-C1-4烷基氨基-C1-4烷基、C1-4烷氧基、和C3-6环烷基的取代基取代的；
(g)单环的5-至6-元杂芳基以及多环7-至10-元杂芳基，其各自包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子作为环原子并且其各自是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、氰基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷基氨基-C1-4烷基、二-C1-4烷基氨基-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4烷氧基和C3-6环烷基的取代基取代；
R2是氢或C1-4烷基；
R3是卤素或C1-4烷基并且n是0、1或2；
R4选自
(a)卤素；
(b)未经取代的或经1至3个独立地选自卤素和C3-6环烷基的取代基取代的C1-6烷基；其中所述C3-6环烷基是未经取代基或经1至2个独立地选自卤素和C1-4烷基的取代基取代的；
(c)-NR6aR6b，其中
(1)R6a是氢或C1-4烷基；
(2)R6b是氢或未经取代的或经C1-4烷氧基或C1-4烷氧基羰基取代的C1-4烷基；
(3)或者R6a和R6b与它们所附接的氮原子一起形成4-至6-元杂环烷基，所述杂环烷基任选地包含1至2个独立地选自N、O和S的另外的杂原子作为环原子；其中
所述4-至6-元杂环烷基是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4烷氧基、和氧代的取代基取代的；或
在所述4-至6-元杂环烷基的相同或不同的环原子上的两个取代基与它们所附接的原子一起形成附接至所述4-至6-元杂环烷基上的螺环、桥环或稠合环C；其中环C选自
(i)C3-6环烷基,
(ii)包含1至3个独立地选自N、O或S的杂原子作为环原子的3-至5-元杂环烷基；并且
(iii)包含1至3个独立地选自N或O的杂原子作为环原子的5-至6-元杂芳基；
其中(i)至(iii)的环C各自是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、氰基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和氧代的取代基取代的；
(d)C3-6环烷基，其是未经取代的或经1至2个选自卤素、氰基、C1-4烷基、和C1-4卤代烷基的取代基取代的；
(e)包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子作为环原子的4-至6-元杂环烷基，其是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、和氧代取代基取代的；
(f)苯基，其是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、氰基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4烷基氨基-C1-4烷基、二-C1-4烷基氨基-C1-4烷基、C1-4烷氧基、和C3-6环烷基的取代基取代的；
(g)5-至6-元杂芳基，其包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子作为环原子并且其是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、氰基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷基氨基-C1-4烷基、二-C1-4烷基氨基-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4烷氧基和C3-6环烷基的取代基取代。
实施例16.根据实施例15所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式(I-B)：
实施例17.根据实施例15或16所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中环A是苯基。
实施例18.根据实施例15或16所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中环A是吡啶基。
实施例19.根据实施例15-18中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中X是-C(O)-。
实施例20.根据实施例15-19中任一项所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是氮杂环丁烷基，其是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素和C1-4烷基的取代基取代的；或在所述氮杂环丁烷基的同一环原子上的两个取代基与它们所附接的环原子一起形成附接到所述氮杂环丁烷基环上的螺环丙基或螺四氢呋喃基。
实施例21.根据实施例20所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是
实施例22.根据实施例20所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是
实施例23.根据实施例20所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是
实施例24.根据实施例15-23中任一项所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3选自卤素或C1-4烷基，并且n是1。
实施例25.根据实施例24所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是卤素。
实施例26.根据实施例25所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是氟。
实施例27.根据实施例15-26中任一项所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是-NR6aR6b；其中R6a是氢或C1-4烷基；并且R6b是氢或未经取代的或经C1-4烷氧基或C1-4烷氧基羰基取代的C1-4烷基；或者其中R6a和R6b与它们所附接的氮原子一起形成4-至6-元杂环烷基，所述杂环烷基任选地包含1至2个独立地选自N、O和S的另外的杂原子作为环原子；
其中所述4-至6-元杂环烷基是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4烷氧基、和氧代的取代基取代的；或者在所述4-至6-元杂环烷基的相同或不同的环原子上的两个取代基与它们所附接的原子一起形成附接至所述4-至6-元杂环烷基上的螺环、桥环或稠合环C；
其中环C选自C3-6环烷基；包含1至3个独立地选自N、O或S的杂原子作为环原子的3-至5-元杂环烷基；以及包含1至3个独立地选自N或O的杂原子作为环原子的5-元杂芳基；并且环C未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、氰基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和氧代的取代基取代。
实施例28.根据实施例15-27中任一项所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4选自
实施例29.根据实施例15所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式(I)D：
其中
R1选自
(a)-NR5aR5b，其中R5a和R5b与它们两者所附接的氮原子一起形成4至5元杂环烷基，其是未经取代的或被1至2个独立地选自卤素和C1-4烷基的取代基取代；并且
(b)包含独立地选自N和O作为环原子的1至2个杂原子的单环的5-元杂芳基，并且其每一个是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素和C1-4烷基的取代基取代；
R3是卤素或C1-4烷基并且n是0或1；
R4选自
(a)-NR6aR6b，其中R6a和R6b与它们两者所附接的氮原子一起形成4或5元杂环烷基，其是未经取代的或被1至2个独立地选自卤素、羟基和C1-4烷基的取代基取代；或
在所述4-或5-元杂环烷基的相同或不同的环原子上的2个取代基与它们所附接的原子一起形成附接至所述4-至5-元杂环烷基上的螺环C，其中环C是C3-6环烷基；并且
(b)包含作为环原子的1至2个氮原子的6-元杂芳基，其是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素和C1-4烷基的取代基取代。
实施例30.根据实施例29所述的化合物，其中R1选自
以及
实施例31.根据实施例29或30所述的式(I)D的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是氟或氯，并且n是1。
实施例32.根据实施例29-31中任一项所述的式(I)D的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4选自
实施例33.根据实施例29-31中任一项所述的式(I)D的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4选自
实施例34.一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其选自表1。
表1
实施例35.如实施例34所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自表1中的化合物1-76、78-79、81-87、89-115、117-118和121-353。
实施例36.一种药物组合物，其包含根据实施例1-35中任一项所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，以及至少一种赋形剂。
实施例37.一种组合，其包含根据实施例1-35中任一项所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，或其根据实施例36所述的药物组合物，以及一种或多种治疗活性剂。
实施例38.根据实施例1-35中任一项所述化合物或根据实施例36所述的药物组合物，用于在治疗中使用。
实施例39.根据实施例1-35中任一项所述的化合物，或根据实施例36所述的药物组合物，用于在治疗选自利什曼病、恰加斯病和非洲人类锥虫病的疾病中使用。
实施例40.根据实施例1-35中任一项所述的化合物或根据实施例36所述的药物组合物在制造用于治疗选自利什曼病、恰加斯病和非洲人类锥虫病的疾病的药物中的用途。
实施例41.一种抑制受试者中的动质体寄生虫的生长和增殖的方法，其包括向有需要的受试者给予治疗有效量的根据实施例1-35中任一项所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
实施例42.一种用于治疗由动质体寄生虫引起的障碍或疾病的方法，其包括向有需要的受试者给予治疗有效量的根据实施例1-35中任一项所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐以及任选地组合一种第二药剂；其中所述疾病选自利什曼病、恰加斯病和非洲人类锥虫病。
实施例43.根据实施例42所述的方法，其中所述疾病是选自内脏利什曼病和皮肤利什曼病的利什曼病。
实施例44.根据实施例43所述的方法，其中所述第二药剂选自葡萄糖酸锑、葡甲胺锑酸盐、两性霉素、米替福星和巴龙霉素。
实施例45.根据实施例42所述的方法，其中所述疾病是恰加斯病；并且所述第二药剂选自苄硝唑、硝呋莫司和两性霉素。
实施例46.根据实施例42所述的方法，其中所述疾病是非洲人类锥虫病；并且所述第二药剂是喷他脒、苏拉明、美拉胂醇、依氟鸟氨酸和硝呋莫司。
取决于起始材料和程序的选择，这些化合物可以呈可能的立体异构体形式或作为其混合物(例如作为纯的光学异构体或作为立体异构体混合物，如外消旋体和非对映异构体混合物)存在，这取决于不对称碳原子的数目。本发明旨在包括所有这些可能的立体异构体，包括外消旋混合物、非对映异构体混合物和光学纯的形式。光学活性(R)-和(S)-立体异构体可以使用手性合成子或手性试剂制备，或使用常规技术拆分。如果该化合物含有双键，取代基可以是E或Z构型。如果该化合物含有二取代的环烷基，环烷基取代基可以具有顺式-或反式-构型。所有互变异构形式也旨在包括在内。
如本文所用，术语“盐”是指本发明的化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别包括“药学上可接受的盐”。术语“药学上可接受的盐”是指保留本发明化合物的生物有效性和特性，并且通常不是生物学上或其他方面不需要的盐。在许多情况下，由于氨基和/或羧基基团或与其类似的基团的存在，本发明的化合物能够形成酸盐和/或碱盐。
可以用无机酸和有机酸形成药学上可接受的酸加成盐。可以衍生出盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。可以衍生盐的有机酸包括，例如，乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。
可以用无机碱和有机碱形成药学上可接受的碱加成盐。可以衍生出盐的无机碱包括例如铵盐和来自元素周期表第I至XII列的金属。在某些实施例中，盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别合适的盐包括铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。可以衍生出盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺；取代的胺(包括天然存在的取代的胺)；环胺；碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括异丙胺、苄星、胆碱盐、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。
在另一个方面，本发明提供了呈以下形式的具有式(I)或其子式的化合物：乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、氯脲鎓酸盐(chlortheophyllonate)、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、黏酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八烷酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐三氟甲磺酸盐、三氟乙酸盐或昔萘酸盐形式。
在另一方面，本发明提供了呈以下形式的具有式(I)或其子式的化合物：钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌、铜、异丙胺、苄星、胆碱、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨丁三醇盐形式。
本文给出的任何式表示未标记的形式以及化合物的同位素标记形式。同位素标记的化合物具有由本文给出的式表示的结构，除了一个或多个原子被具有所选择的原子质量或质量数的原子取代。可以掺入本发明的化合物中的同位素包括例如氢的同位素。
此外，掺入某些同位素，特别是氘(即2H或D)可提供更高代谢稳定性导致的某些治疗优势，例如增加的体内半衰期或减少的剂量要求或治疗指数或耐受性的改善。应理解，在此上下文中的氘被认为是具有式(I)的化合物的取代基。氘的浓度可以由同位素富集因子定义。如本文所用，术语“同位素富集因子”意指同位素丰度与特定同位素的天然丰度之间的比率。如果本发明的化合物中的取代基指示氘，这样的化合物具有针对每个指定的氘原子的同位素富集因子为至少3500(在每个指定的氘原子上52.5％氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)或至少6633.3(99.5％氘掺入)。应当理解，术语“同位素富集因子”能以与对氘描述的相同方式应用于任何同位素。
可以掺入本发明的化合物的同位素的其他实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，如分别是3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl、123I、124I、125I。因此，应当理解，本发明包括掺入任何上述同位素中一种或多种的化合物，包括例如放射性同位素，例如3H和14C，或其中掺入非放射性同位素例如2H和13C的那些。这种同位素标记的化合物可用于代谢研究(用14C)、反应动力学研究(例如用2H或3H)、检测或成像技术，例如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)，包括药物或底物组织分布测定，或用于患者的放射治疗。特别地，18F或标记的化合物对于PET或SPECT研究可能是特别期望的。同位素标记的具有式(I)的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与所附实例和制备中所述的那些类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替未标记的先前使用的试剂来制备。
本发明的化合物的任何非对称原子(例如，碳或类似物)可以外消旋或对映体上富集的形式存在，例如，(R)-、(S)-或(R,S)-构型。在某些实施例中，每个不对称的原子在(R)-或(S)-构型中具有至少50％对映异构体过量、至少60％对映异构体过量、至少70％对映异构体过量、至少80％对映异构体过量、至少90％对映异构体过量、至少95％对映异构体过量或至少99％对映异构体过量。如果可能，在具有不饱和双键的原子上的取代基可以按顺式-(Z)-或反式-(E)-形式存在。
因此，如本文所用，本发明的化合物可以呈可能的立体异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体或其混合物之一的形式，例如，作为基本上纯的几何(顺式或反式)立体异构体、非对映异构体、光学异构体(对映体)、外消旋体或其混合物。
可以基于组分的物理化学差异，例如通过色谱法和/或分级结晶法将任何所得的立体异构体混合物分离成纯的或基本上纯的几何或光学异构体、非对映异构体、外消旋体。
可以通过已知方法将任何所得的终产物或中间体的外消旋体拆分成旋光对映体，例如通过分离用光学活性酸或碱得到的其非对映异构体盐，并释放出光学活性的酸性或碱性化合物。特别地，因此可以采用碱性部分将本发明的化合物拆分成它们的旋光对映体，例如通过用光学活性酸形成的盐的分级结晶，例如酒石酸、联苯甲酰酒石酸、二乙酰酒石酸、二-O,O'-对甲苯甲酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸。外消旋产物也可以通过手性色谱法分离，例如使用手性吸附剂的高压液相色谱法(HPLC)。
药理学及效用
在一个方面中，本发明涉及靶向动质体寄生虫蛋白酶体并可用作治疗的式(I)的小分子化合物；特别是，用于预防和治疗由运动质体寄生虫感染引起的疾病和病状。根据本发明的化合物的活性可借由如下文生物测定部分中所述的下列活体外及活体内方法进行评估。应当理解的是所述测定法说明了本发明，而不以任何方式限制本发明的范围。
因此，作为另一个方面，本发明提供了式(I)或其子式的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体作为可从抑制运动质体寄生虫的生长和增殖中受益的疾病或病状的疗法的用途；以及用于制造例如用于治疗由动质体寄生虫的生长和增殖引起的疾病的药物的用途。在一个实施例中，进行治疗的疾病选自利什曼病、恰加斯病和非洲人类锥虫病。在另一个实施例中，进行治疗的疾病是由以下寄生虫引起的利什曼病，包括但不限于：杜氏利什曼虫、婴儿利什曼虫、巴西利什曼虫，巴拿马利什曼虫、瓜亚内斯利什曼虫、亚马逊利什曼虫、墨西哥利什曼原虫、热带利什曼虫、利什曼原虫。在一实施例中，进行治疗的疾病是内脏利什曼病。在另一个实施例中，进行治疗的疾病是皮肤利什曼病。在另一个实施例中，进行治疗的疾病是由克氏锥虫引起的恰加斯病。在又另一个实施例中，进行治疗的疾病是由布氏锥虫、布氏冈比亚锥虫或布氏罗得西亚锥虫引起的非洲人类锥虫病。
根据前述内容，本发明进一步提供了一种在需要这种治疗的受试者中预防或治疗利什曼病、恰加斯病或非洲人类锥虫病的方法，该方法包括向所述对象给予治疗有效量的选自下式(I)或其子式的化合物、其药学上可接受的盐或立体异构体。所需剂量将根据给药方式、待治疗的具体病状和所希望的效果而变化。
药物组合物、剂型和给予
在另一个方面，本发明提供了药物组合物，该药物组合物包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐、和药学上可接受的载体。在另外的实施例中，组合物包含至少两种药学上可接受的载体(例如本文描述的那些)。所述药物组合物可以配制用于特定的给药途径，例如口服给药、肠胃外给药(例如通过注射、输注、透皮或局部给药)和直肠给药。局部给药也可以涉及吸入或鼻内给药。本发明的药物组合物可以固体形式(包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、颗粒、粉末或栓剂)、或以液体形式(包括但不限于溶液、悬浮液或乳液)制成。片剂可以根据本领域已知的方法进行薄膜包衣或肠溶包衣。典型地，药物组合物是包含活性成分及以下中的一个或多个的片剂或明胶胶囊：
a)稀释剂，例如，乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；
b)润滑剂，例如，二氧化硅、滑石、硬酯酸、其镁盐或钙盐和/或聚乙二醇；就片剂而言还包含
c)粘合剂，例如，硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果希望
d)崩解剂，例如，淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐或泡腾混合物；并且
e)吸附剂、着色剂、调味剂及甜味剂。
对于约50-70kg的受试者，本发明的药物组合物或组合可以处于单位剂量为约1-1000mg的一种或多种活性成分，或约1-500mg或约1-250mg或约1-150mg或约0.5-100mg或约1-50mg的活性成分。化合物、药物组合物、或其组合的治疗有效剂量取决于该受试者的物种、体重、年龄及治疗中的个别病状、病症或疾病或其严重性。具有普通技能的医师、临床医生或兽医可以容易地确定预防、治疗或抑制障碍或疾病进展所必需的每种活性成分的有效量。
使用有利的哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、狗、猴)或其分离的器官、组织和制品在体外和体内测试中证明上述剂量特性。本发明的化合物可以溶液的形式(例如，水溶液)活体外施用，及肠内、非经肠、有利地静脉内，例如，作为悬浮液或在水溶液中活体内施用。体外剂量可以在约10-3摩尔浓度和10-9摩尔浓度之间的范围内。取决于给予途径，体内治疗有效量可以在约0.1-500mg/kg之间，或约1-100mg/kg之间的范围内。
本发明的化合物可以与一种或多种治疗剂(药物组合)组合以治疗有效量给予。本发明的化合物可以与一种或多种其他的治疗剂同时给予或在该治疗剂之前或之后给予。本发明化合物可以通过与其他药剂相同或不同的施与途径分开施与，或在相同的药物组合物中一起施与。治疗剂是例如化学化合物、肽、抗体、抗体片段或核酸，当将所述治疗剂与本发明的化合物组合给予患者时，所述治疗剂具有治疗活性或增强治疗活性。
作为组合制剂提供的产品包括组合物，所述组合物包含具有式(I)或其子式的化合物、其药学上可接受的盐或立体异构体和一起在相同的药物组合物中的一种或多种其他治疗剂，或具有式(I)的化合物和呈分开形式(例如，呈试剂盒的形式)的一种或多种其他治疗剂。在一个实施例中，本发明提供了药物组合物，所述药物组合物包含式(I)或其子式的化合物、其药学上可接受的盐、或其立体异构体、以及一种或多种另外的治疗剂。任选地，所述药物组合物可以包含如上所述的药学上可接受的载体。在另一个实施例中，本发明提供了包含具有式(I)的化合物和至少一种其他的治疗剂的产品，作为组合制剂用于在疗法中同时的、分开的或顺序的使用。
在一个实施例中，本披露提供了药剂盒，所述药剂盒包含两种或更多种单独的药物组合物，这些药物组合物中的至少一种含有具有式(I)或其子式的化合物、其药学上可接受的盐、或其立体异构体。在一个实施例中，所述试剂盒包含用于分别保留所述组合物的装置(例如容器、分开的瓶子、或分开的箔包)。这种试剂盒的实例是泡罩包装，如典型地用于片剂、胶囊等的包装。本发明的试剂盒可以用于给予不同剂型(例如，口服和肠胃外)，用于以不同剂量间隔给予单独组合物或用于相对在彼此滴定单独组合物。为了有助于依从性，本发明的试剂盒典型地包含用于给予的用法说明书。
在本发明的组合疗法中，本发明化合物和其他治疗剂可以由相同或不同的制造商生产和/或配制。此外，可以将本发明化合物和另一种治疗剂一起形成组合疗法：(i)在向医师发布组合产品(例如，在包含本发明化合物和另一种治疗剂的试剂盒的情况下)之前进行；(ii)在给予前不久由医师本人(或在医师指导下)进行；(iii)在患者本身中，例如在顺序给予本发明化合物和其他治疗剂期间进行。
因此，本发明提供了式(I)的化合物用于治疗由动质体寄生虫的生长和增殖引起的疾病或病状的用途，其中制备所述药物用于与另一种治疗剂一起给予。本发明还提供了另一种治疗剂用于治疗由动质体寄生虫的生长和增殖引起的疾病或病状的用途，其中所述药物与式(I)的化合物一起给予。
本发明还提供了式(I)的化合物用于治疗由动质体寄生虫的生长和增殖引起的疾病或病状的用途，其中患者先前(例如24小时内)已经用另一种治疗剂进行治疗。本发明还提供了另一种治疗剂用于治疗由动质体寄生虫的生长和增殖引起的疾病或病状的用途，其中患者先前(例如在24小时内)已经用式(I)的化合物进行了治疗。
在一个实施例中，为了治疗利什曼病，所述另一种治疗剂选自葡萄糖酸锑、葡甲胺锑酸盐、两性霉素、米替福星和巴龙霉素。在一个实施例中，为了治疗恰加斯病，另一种治疗剂选自苄硝唑、硝呋莫司和/或两性霉素。在另一个实施例中，为了治疗非洲人类锥虫病，另一种治疗剂选自喷他脒、苏拉明、美拉胂醇、依氟鸟氨酸和/或硝呋莫司。当本发明的化合物与其他疗法联合给予时，共同给予的化合物的剂量当然将根据所用的联合药物的类型、所用的特定药物、所治疗的病症等而变化。
化合物的制备
考虑到本文提供的方法、反应方案和实例，可以以有机合成领域的技术人员已知的多种方式制备本发明的化合物。为了说明的目的，下面描述的反应方案提供了合成本发明化合物以及关键中间体的潜在途径。有关各个反应步骤的详细说明，请参见下面的实例部分。本领域技术人员将理解，可以使用其他合成路线来合成本发明的化合物。尽管在方案中描述了具体的原料和试剂，并在下面进行了讨论，但是可以替换其他起始材料和试剂以提供各种衍生物和/或反应条件。另外，根据本披露，可以使用本领域技术人员熟知的常规化学进一步修饰通过下述方法制备的许多化合物。在本文描述的所有方法能够以任何合适顺序进行，除非另外指明或另外与上下文明显相矛盾。
式(I)的化合物可以如以下方案1-3中总体说明的那样制备，其中R1、R2、R3、R4和n是如发明内容中所定义。
式(I)的化合物可以如以下方案1-3中总体说明的那样制备，其中X是氯、溴或三氟甲基；并且R1、R2、R3、R4和n是如发明内容中所定义。
方案1
作为替代方案，可以按照方案2中的程序由中间体(1d)制备式(I)。
方案2
作为替代方案，可以按照方案3中的程序由中间体(1e)制备式(I)。
方案3
本发明进一步包括本发明方法中的任何变体，其中将可在其任何阶段获得的中间体产物用作起始材料并进行其余步骤，或其中起始物质在反应条件下原位形成，或其中将反应组分以其盐或光学纯物质的形式使用。本发明的化合物及中间物还可根据本领域普通技术人员通常已知的方法彼此转化。
实例
以下实例仅是说明本发明并且不限制另外要求保护的本发明的范围。
温度以摄氏度给出。如果没有另外提及，所有蒸发都在减压下进行，典型地在约15mm Hg与100mm Hg(＝20-133mbar)之间。最终产物、中间体和起始材料的结构通过标准分析方法(例如，微量分析和光谱特征(例如，MS、IR、NMR))确认。
用于合成本发明的化合物的所有起始材料、结构单元、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂是可商购获得的或可通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法生产(Houben-Weyl第4版1952,Methods of Organic Synthesis[有机合成方法],Thieme[蒂梅出版社],第21卷)。此外，本发明的化合物可以通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法生产，如以下实例所示。当需要时，根据标准惯例，使用常规保护基来保护反应性官能团，例如，参见T.W.Greene和P.G.M.Wuts约翰威利父与子1991(John Wiley and Sons,1991)的“保护有机合成中的基团”。
除非另有说明，否则起始材料通常可从非排他性商业来源获得，例如奥尔德里奇化学公司(Aldrich Chemicals Co.)(密尔沃基，威斯康星州)、TCI精细化学品公司(TCIFine Chemicals)(日本)、上海凯米有限公司(Shanghai Chemhere Co.,Ltd.)(上海，中国)、奥罗拉精细化学品公司(Aurora Fine Chemicals LLC(圣地亚哥，加利福尼亚州)、FCH集团(FCH Group)(乌克兰)、兰斯特合成公司(Lancaster Synthesis,Inc.)(温厄姆，新罕布什尔州)、阿克洛斯有机公司(Acros Organics)(费尔劳恩，新泽西州)、美桥化工有限公司(Maybridge Chemical Company,Ltd.)(康沃尔，英格兰)、泰格科学公司(TygerScientific)(普林斯顿，新泽西州)、阿斯利康制药公司(AstraZeneca Pharmaceuticals)(伦敦，英国)、康侨公司(Chembridge Corporation)(美国)、美奇丝科学公司(MatrixScientific)(美国)、卡耐儿化学制药公司(Conier Chem&Pharm Co.,Ltd)(中国)、安娜敏公司(Enamine Ltd)(乌克兰)、Combi-Blocks公司(Combi-Blocks,Inc.)(圣地亚哥，美国)、奥克伍德公司(Oakwood Products,Inc.)(美国)、阿波罗科学公司(Apollo ScientificLtd.)(英国)、艾莉化学公司(Allichem LLC.)(美国)、雷吉金属公司(Rieke Metals)(美国)、Silicycle公司(Silicycle Inc)(加拿大)和乌克罗公司(Ukrorgsyntez Ltd)(拉脱维亚)；或者使用本领域技术人员熟知的方法很容易地制备(例如通过一般描述于以下中的方法制备：Louis F.Fieser和Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis[用于有机合成的试剂],第1-19卷,Wiley,纽约(1967-1999编辑),Larock,R.C.,ComprehensiveOrganic Transformations[有机官能团转换],第2版,Wiley-VCH Weinheim,德国(1999),或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie[贝尔斯坦有机化学手册],4,Aufl.编辑Springer-Verlag[斯普林格出版社],柏林,包括增刊(也可以经由Beilstein在线数据库获得)。
缩写
本文使用的缩写定义如下：“1x”表示一次，“2x”表示两次，“3x”表示三次，“℃”表示摄氏度，“aq”表示水性，“Col”表示柱，“eq”表示当量(equivalent或equivalents)，“g”表示克(gram或grams)，“mg”表示毫克(milligram或milligrams)，“L”表示升(liter或liters)，“mL”或“ml”表示毫升(milliliter或milliliters)，“μL”、或“μl”表示微升(microliter或microliters)，“N”表示正常，“M”表示摩尔，“μM”表示微摩尔，“nM”表示纳摩尔，“mol”表示摩尔(mole或moles)，“mmol”表示毫摩尔(millimole或millimoles)，“min”表示分钟(minute或minutes)，“h”或“hrs”表示小时(hour或hours)，“RT”表示室温，“ON”表示过夜，“atm”表示大气压，“psi”表示每平方英寸磅数，“conc.”表示浓度，“aq”表示水性，“sat”或“sat'd”表示饱和的，“MW”表示分子量，“mw”或“μwave”表示微波，“mp”表示熔点，“Wt”表示重量，“MS”或“Mass Spec”表示质谱分析法，“ESI”表示电喷雾质谱，“HR”表示高分辨率，“HRMS”表示高分辨质谱法，“LCMS”表示液相色谱质谱，“HPLC”表示高效液相色谱，“RPHPLC”表示反相HPLC，“TLC”或“tlc”表示薄层色谱，“NMR”表示核磁共振光谱，“nOe”表示核欧沃豪斯效应谱，“1H”表示质子，“δ”表示δ(delta)，“s”表示单峰，“d”表示双重峰，“t”表示三重峰，“q”表示四重峰，“m”表示多重峰，“br”表示宽峰，“Hz”表示赫兹，“ee”表示“对映异构体过量”以及“α”、“β”、“R”、“r”、“S”、“s”、“E”、和“Z”是本领域技术人员熟悉的立体化学指定。
以下本文中使用的下列缩写具有相应的含义：
AIBN 偶氮二异丁腈
Bn 苄基
Boc 叔丁氧基羰基
Boc2O 二碳酸二叔丁基酯
Bu 丁基
Cs2CO3 无水碳酸铯
CHCl3 氯仿
DAST 二乙基氨基三氟化硫
DBA 二苄叉丙酮
DBU 2,3,4,6,7,8,9,10-八氢嘧啶并[1,2-a]氮杂
DCM 二氯甲烷
DIEA N,N-二异丙基乙胺
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
DPP 二苯膦
DPPA 二苯基磷酰基叠氮化物
Dppf 1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁
EA 乙酸乙酯
Equiv. 等量
Et 乙基
Et2O 乙醚
EtOH 乙醇
EtOAc 乙酸乙酯
FA 甲酸
HATU 2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HCl 盐酸
i-Bu 异丁基
i-Pr 异丙基
KOAc 乙酸钾
LiAlH4 氢化铝锂
Me 甲基
mCPBA 3-氯过氧苯甲酸
MeCN 乙腈
MnO2 二氧化锰
N2 氮气
NaBH4 硼氢化钠
NaHCO3 碳酸氢钠
Na2SO4 硫酸钠
NBS N-溴代琥珀酰亚胺
Ph 苯基
PPh3 三苯基膦
Ph3P＝O 三苯基氧化膦
Rf 保留因子
RT 室温(℃)
SFC 超临界液相色谱法
t-Bu或But 叔丁基
TEA 三乙胺
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
Troc 2,2,2-三氯乙基
LCMS
方法1：
沃特斯公司(Waters)的Acquity UPLC系统：
-带有脱气器的Acquity二元梯度管理器
-设定为50℃的Acquity柱温箱
-Acquity二极管阵列检测器
安捷来技术公司(Leap Technologies)的HTS Pal自动进样器
Antek化学发光氮检测仪(CLND)
沃特斯公司的3100质谱仪
HPLC柱：Thermo Syncronis C18 30 x 2.1mm
流动相：(A)95％H2O/5％MeOH/IPA(75/25,v/v)+0.05％甲酸、(B)MeOH/IPA(75/25,v/v)+0.035％甲酸
梯度：0.4mL/分钟，初始2％B持续1.0分钟，在2.5分钟内斜升至95％B，直至4.0分钟，在4.25分钟内返回至2％B直至5.0时运行结束。
MS扫描：1秒内150至1000amu
二极管阵列检测器：190nm-400nm
方法2：
沃特斯公司的Acquity UPLC系统：
-带有脱气器的Acquity二元梯度管理器
-设定为50℃的Acquity柱温箱
-Acquity二极管阵列检测器
-Acquity ELSD
安捷来技术公司的HTS Pal自动进样器
沃特斯公司的Qda质谱仪
HPLC柱：沃特斯公司的Acquity C18 1.7μm 2.1 x 30mm
流动相：(A)H2O+0.05％TFA以及(B)乙腈+0.05％TFA
梯度：1mL/分钟，初始5％B持续0.1分钟，在1.5分钟内斜升至95％B，保持直至1.6分钟，然后在1.7分钟时至100％B并且在1.9分钟时返回至5％B直至在2.25时运行结束。
MS扫描：在0.4秒内160至1000amu
二极管阵列检测器：214nm-400nm
NMR.除非另有说明，否则质子光谱是在带有5mm QNP低温探头的Bruker AVANCEII 400MHz或带有5mm QNP探头的Bruker AVANCE III 500MHz上记录的。相对于二甲亚砜(δ2.50)、氯仿(δ7.26)、甲醇(δ3.34)或二氯甲烷(δ5.32)，化学位移以ppm报告。将少量干燥样品(2mg至5mg)溶于适当的氘代溶剂(1mL)中。
中间体1：3-(5-溴-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯胺(I-1)
步骤A：将NaN3(8g，122.5mmol，1eq)，5-溴-2-氟-吡啶-3-甲醛(25g，122.5mmol，1eq)在DMF(250mL)中的反应混合物在70℃下搅拌1小时。将反应混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释并且倾倒至冰水(500mL)中。将水层分离并且用乙酸乙酯(500mL*6)萃取。将合并的有机层用盐水(300mL*3)洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。将残余物与Et2O(100mL)一起研磨，得到化合物I-1a，为黄色固体。1H NMR：(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.26-10.46(m,1H),10.12(d,J＝1.51Hz,1H),8.64(d,J＝1.51Hz,1H)。为安全处理低分子量叠氮化物，进行了该反应的几个批次，并合并用于步骤B。
步骤B：将1-1a(30g，132.1mmol，1eq)和2-氟-5-硝基-苯胺(20.6g，132.1mmol，1eq)在EtOH(500mL)中的反应混合物在N2气氛下85℃下搅拌4小时。将反应混合物在真空中浓缩。将甲苯(700mL)添加到粗材料中并将反应混合物回流16小时。将反应混合物浓缩并将材料通过硅胶色谱法使用在DCM中0-50％的EtOAc洗脱进行纯化。将所得材料与EtOAc(100mL)一起研磨，得到1-1b，为黄色固体。1H NMR：(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.04(d,J＝2.26Hz,1H),8.85(dd,J＝6.53,3.01Hz,1H),8.79(d,J＝2.26Hz,1H),8.60-8.71(m,1H),8.47(dt,J＝9.03,3.39Hz,1H),7.92(dd,J＝10.54,9.29Hz,1H)。
步骤C：将化合物1-1b(25g，74.2mmol，1eq)，二碘锌(diiodozinc)(9.5g，29.7mmol，0.4eq)和雷尼-Ni(50g，583.6mmol，7.9eq)在THF(500mL)中的反应混合物在20℃、15psi的H2下搅拌12小时。将反应混合物用MeOH(450mL)稀释，过滤并且将滤饼用MeOH(200mL*3)洗涤。将滤液浓缩并用水(500mL)研磨并且真空干燥，得到I-1，为黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.81(br d,J＝1.51Hz,1H),8.71(br d,J＝1.76Hz,1H),8.58(br d,J＝1.76Hz,1H),7.10-7.41(m,2H),6.56-6.85(m,1H),5.45(br s,2H).
中间体2：2,2,2-三氯乙基(3-(5-溴-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)氨基甲酸酯(I-2)
向I-1(5g，16.3mmol，1eq)的EtOAc(150mL)溶液中添加饱和NaHCO3水溶液(150mL)。将反应混合物冷却至0℃，然后逐滴添加2,2,2-三氯乙基氯甲酸酯(6.9g，32.6mmol，2eq)。将混合物在0℃下搅拌2hr并且然后在25℃下搅拌20hr。通过过滤收集固体，并将其用水(150mL)和乙酸乙酯(20mL)洗涤，得到化合物I-2，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δppm,10.57(br s,1H),8.92(d,J＝2.51Hz,1H),8.76(d,J＝2.26Hz,1H),8.63(d,J＝2.51Hz,1H),8.27(br d,J＝4.52Hz,1H),7.62-7.67(m,1H),7.55-7.61(m,1H),4.99(s,2H).
中间体3:N-(3-(5-溴-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)-3,3-二氟氮杂环丁烷-1-甲酰胺(I-3)(也是化合物125)
向I-2(2g，4.14mmol，1eq)和3,3-二氟氮杂环丁烷HCl(1.1g，8.3mmol，2eq)在DMSO(15mL)中的溶液中添加DMAP(25.3mg，207μmol，0.05eq)和DIEA(1.1g，8.3mmol，1.45mL，2eq)。将混合物在60℃搅拌15小时。通过加入60mL水和10mL乙酸乙酯沉淀出产物，并将其通过过滤收集。将滤饼用40mL水和10mL乙酸乙酯洗涤，并将所得固体在减压下干燥，得到I-3，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δppm,9.25(s,1H),8.91(br s,1H),8.76(br s,1H),8.63(br s,1H),8.25(br s,1H),7.69(br s,1H),7.51(br t,J＝10.16Hz,1H),4.41(br t,J＝12.67Hz,4H).
中间体4：N-(3-(5-溴-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)-3-氟氮杂环丁烷-1-甲酰胺(I-4)(也是化合物126)
向I-2(2g，4.14mmol，1eq)和3-氟氮杂环丁烷HCl(924mg，8.28mmol，2eq)在DMSO(15mL)中的溶液中添加DMAP(25.3mg，207μmol，0.05eq)和DIEA(1.07g，8.28mmol，1.45mL，2eq)。将混合物在60℃搅拌15小时。通过加入60mL水和10mL乙酸乙酯沉淀出产物，并将其通过过滤收集。将滤饼用40mL水和10mL乙酸乙酯洗涤，并将所得固体在减压下干燥，得到I-4，为固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δppm,8.98(s,1H),8.90(d,J＝2.51Hz,1H),8.76(d,J＝2.51Hz,1H),8.63(d,J＝2.51Hz,1H),8.24(dd,J＝7.03,2.76Hz,1H),7.67-7.74(m,1H),7.49(dd,J＝11.17,9.16Hz,1H),5.29-5.51(m,1H),4.25-4.39(m,2H),3.96-4.10(m,2H).
中间体5：(R)-N-(3-(5-溴-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)-3-氟代吡咯烷-1-甲酰胺(I-5)(也是化合物127)
中间体I-5以与中间体I-3类似的方式，使用(R)-3-氟代吡咯烷HCl作为起始材料制备。1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δppm,8.90(d,J＝2.26Hz,1H),8.76(d,J＝2.51Hz,1H),8.66(s,1H),8.63(d,J＝2.26Hz,1H),8.27(dd,J＝7.03,2.76Hz,1H),7.71-7.77(m,1H),7.48(dd,J＝11.17,9.16Hz,1H),5.28-5.48(m,1H),3.40-3.78(m,4H),2.01-2.27(m,2H).
中间体6：N-(3-(5-溴-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺I-6(也是化合物129)
向I-2(1.6g，3.32mmol，1eq)和氮杂环丁烷(379mg，6.63mmol，2eq)在DMSO(15mL)中的溶液中添加DMAP(20.3mg，166μmol，0.05eq)和DIEA(857mg，6.63mmol，2eq)。将混合物在60℃搅拌15小时。通过添加60mL水和10mL乙酸乙酯沉淀出产物，并将其通过过滤收集。将滤饼用40mL水和10mL乙酸乙酯洗涤，并将所得固体在减压下干燥。将所得固体用10mL乙酸乙酯研磨，得到I-6，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δppm,8.89(d,J＝2.01Hz,1H),8.70-8.80(m,2H),8.62(d,J＝2.26Hz,1H),8.25(dd,J＝6.90,2.38Hz,1H),7.72(br d,J＝9.03Hz,1H),7.46(br t,J＝10.16Hz,1H),3.98(br t,J＝7.53Hz,4H),2.20(quin,J＝7.59Hz,2H).
中间体7：N-(3-(5-溴-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)-2,4-二甲基噁唑-5-甲酰胺(I-7)(也是化合物128)
向I-1(1g，3.3mmol，1eq)和2,4-二甲基噁唑-5-甲酸(552.1mg，3.9mmol，1.2eq)在DMF(15mL)中的溶液中添加HATU(1.5g，3.9mmol，1.2eq)和DIEA(632mg，4.9mmol，854uL，1.50eq)。将混合物在25℃搅拌13小时。向反应混合物中添加饱和NaHCO3水溶液(40mL)，并通过过滤收集固体。将滤饼用水(30mL)和乙酸乙酯(10mL)洗涤。将所得固体在水(20mL)中研磨，得到I-7，为棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δppm,10.53(s,1H),8.94(d,J＝2.51Hz,1H),8.77(d,J＝2.26Hz,1H),8.64(d,J＝2.26Hz,1H),8.58(dd,J＝7.15,2.64Hz,1H),7.89-7.97(m,1H),7.59(dd,J＝11.17,9.16Hz,1H),2.52-2.53(s,3H),2.40(s,3H).
中间体8：N-(3-(5-溴-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)呋喃-2-甲酰胺(I-8)(也是化合物130)
使用呋喃-2-甲酸作为起始原料，以与中间体I-7类似的方式制备中间体I-8。1HNMR(400MHz,DMSO-d6),δppm,10.58(br s,1H),8.94(d,J＝2.26Hz,1H),8.77(d,J＝2.26Hz,1H),8.64(d,J＝2.26Hz,1H),8.53(dd,J＝7.03,2.51Hz,1H),7.92-8.02(m,2H),7.60(dd,J＝11.04,9.29Hz,1H),7.40(d,J＝3.26Hz,1H),6.74(dd,J＝3.26,1.51Hz,1H).
中间体9：4-氟-3-(5-异丙基-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯胺(I-9)
步骤A：向中间体I-1(4g，13.0mmol，1eq)在THF(60mL)和H2O(9mL)中的溶液中添加Cs2CO3(12.7g，39.1mmol，3eq)、Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(531.8mg，651.2μmol，0.05eq)和三氟(丙-1-烯-2-基)硼酸钾(2.2g，14.7mmol，1.1eq)。将混合物在80℃搅拌16小时。将反应混合物用EtOAc萃取(100mL*2)。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法用石油醚:EtOAc＝1:2)洗脱进行纯化，得到化合物I-9a，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.00(d,J＝2.26Hz,1H),8.78(d,J＝2.38Hz,1H),8.23(d,J＝2.26Hz,1H),7.09-7.29(m,2H),6.68(dt,J＝8.88,3.34Hz,1H),5.64(s,1H),5.44(s,2H),5.22(s,1H),2.18(s,3H),M+H＝269.1.
步骤B：向中间体I-9a(3.4g，12.7mmol，1eq)在EtOH(216mL)中的溶液中添加20％Pd(OH)2/C(5.3g，7.60mmol，0.6eq)并将混合物在25℃下在15psi的H2气氛下搅拌4小时。通过硅藻土过滤得到反应混合物，并用乙醇(30mL)洗涤滤饼。将滤饼浓缩，将所得残余物溶解在EtOAc(10mL)中并且添加在EtOAc(2mL)中4M的HCl。通过过滤收集固体并且将其真空干燥，得到I-9的HCl盐，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.10(d,J＝2.26Hz,1H),8.90(d,J＝2.01Hz,1H),8.47(br d,J＝1.63Hz,1H),8.07(br dd,J＝6.46,2.45Hz,1H),7.72(br dd,J＝10.85,9.10Hz,1H),7.58(dt,J＝8.50,3.28Hz,1H),3.07-3.25(m,1H),1.32(d,J＝6.78Hz,6H),M+H＝271.1.
中间体10：(2-(2-氟-5-(3-氟氮杂环丁烷-1-甲酰氨基)苯基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-5-基)硼酸(I-10)
向中间体I-4(300mg，734.9μmol，1eq)在二噁烷(18mL)中的溶液中添加4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(223.9mg，881.9μmol，1.2eq)、Pd(dppf)Cl2(53.8mg，73.5μmol，0.1eq)和KOAc(144.3mg,1.5mmol,2eq)。将混合物在100℃搅拌16小时。浓缩反应混合物并且残余物用EtOAc(5mL)、水(5mL)洗涤，并减压干燥，得到化合物I-10，为黑色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.00(br s,2H),8.70(br s,1H),8.45(br s,1H),8.24(br s,1H),7.69(br s,1H),7.56(br s,1H),7.50(br s,1H),6.59(br s,1H),5.25-5.56(m,1H),4.33(br s,2H),3.90-4.13(m,2H),M+H＝374.2.
中间体11：4-氟-3-(5-(吡啶-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯胺I-11
将I-1(947mg，3.1mmol)和Pd(Ph3P)4(178mg，0.15mmol)在烧瓶中合并并且置于氮气气氛下。添加在THF(24.7mL，12.3mmol)中0.5M的吡啶-2-基锌(II)溴化物并且将反应加热至65℃持续4小时。将反应用水淬灭并浓缩。将粗材料通过C18快速色谱，使用在水中10-80％的乙腈洗脱进行纯化，得到I-11，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.45(d,J＝2.3Hz,1H),8.93(dd,J＝3.4,2.4Hz,2H),8.73(ddd,J＝4.8,1.8,0.9Hz,1H),8.12(dt,J＝8.0,1.0Hz,1H),7.95(td,J＝7.7,1.8Hz,1H),7.46-7.40(m,1H),7.26-7.16(m,2H),6.69(ddd,J＝8.9,3.9,2.9Hz,1H),5.46(s,2H).
中间体12：2-(5-氨基-2-氟苯基)-N,N-二甲基-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-5-胺(I-12)
将N-甲基甲胺(4.4g，98.7mmol，5mL，50.5eq)，I-1(0.6g，1.9mmol，1eq)、L-脯氨酸(22.5mg，195.4μmol，0.1eq)、CuI(37.2mg，195.4μmol，0.1eq)和K2CO3(540mg，3.9mmol，2eq)在DMSO(5mL)中的反应混合物在90℃下搅拌12小时。用10％NH4OH水溶液(20mL)淬灭反应，并将其用乙酸乙酯(25mL*4)萃取。将合并的乙酸乙酯层用盐水(15mL*3)洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法，使用20％乙酸乙酯和20％DCM的石油醚洗脱进行纯化，得到I-12，为黄色固体。1H NMR：(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.68(br s,1H),8.48(br s,1H),7.16(br s,3H),6.63(br s,1H),5.38(br s,2H),2.95(br s,6H).M+H＝391.1.
中间体13：2,2,2-三氯乙基(3-(5-(二甲氨基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)氨基甲酸酯(I-13)
I-13的合成在实例9中描述。
中间体14：(R)-N-(3-(5-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)-3-氟代吡咯烷-1-甲酰胺(I-14)
I-14的合成在实例18中描述。
中间体15：N-(3-(5-溴-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氮杂螺[2.3]己烷-5-甲酰胺I-15(也是化合物254)
中间体I-15(化合物254)以与中间体I-3类似的方式使用5-氮杂螺[2.3]己烷半草酸酯(hemioxalate)作为起始材料制备。1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δppm,8.90(d,J＝2.45Hz,1H),8.85(s,1H),8.74-8.78(m,1H),8.61-8.65(m,1H),8.26(dd,J＝7.09,2.69Hz,1H),7.69-7.76(m,1H),7.47(dd,J＝11.25,9.29Hz,1H),4.05(s,4H),0.66(s,4H).方法1：RT＝2.95min.；M+H＝416.0,418.0.
中间体16：3-(5-氯-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯胺(I-16)
使用5-氯-2-氟吡啶甲醛作为起始原料，以与中间体I-1类似的方式制备中间体I-16。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.82(d,J＝2.26Hz,1H),8.67(d,J＝2.51Hz,1H),8.44(d,J＝2.51Hz,1H),7.12-7.28(m,2H),6.61-6.75(m,1H),5.44(br s,2H).
中间体17：2-(5-溴-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)吡啶-4-胺(I-17)
在步骤B中使用4-硝基吡啶-2-胺作为起始原料，以与中间体I-1类似的方式制备中间体I-17。1H NMR(400MHz,DMSO)δppm 9.19(br s,1H),8.73(br s,1H),8.59(br s,1H),8.01(br d,J＝5.27Hz,1H),7.42(br s,1H),6.54-6.74(m,3H).
中间体18：3-(5-溴-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氯苯胺(I-18)
在步骤B中使用2-氯-5-硝基-苯胺作为起始原料，以与中间体I-1类似的方式制备中间体I-18。M+H＝325.0.
中间体19：3-(5-溴-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯胺(I-19)
在步骤B中使用3-硝基苯胺作为起始原料，以与中间体I-1类似的方式制备中间体I-19。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.99(s,1H),8.69(d,J＝2.44Hz,1H),8.56(d,J＝2.45Hz,1H),7.31(t,J＝2.08Hz,1H),7.12-7.26(m,2H),6.61-6.72(m,1H),5.56(br s,2H).
中间体20：2,2,2-三氯乙基(2-(5-溴-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)吡啶-4-基)氨基甲酸酯(I-20)
I-20的合成在实例21中描述。
中间体21：3-(2-(5-溴-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)吡啶-4-基)-1,1-二甲基脲(I-21)
I-21的合成在实例21中描述。
中间体22：N-(2-(5-溴-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)吡啶-4-基)-3,3-二氟氮杂环丁烷-1-甲酰胺(I-22)
I-22的合成在实例22中描述。
中间体23：4-氟-3-(5-(三氟甲基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯胺(I-23)
使用2-氟-5-(三氟甲基)吡啶甲醛作为起始原料，以与中间体I-1类似的方式制备中间体I-23。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm,9.06(d,J＝2.01Hz,1H),8.98(d,J＝2.26Hz,1H),8.85(s,1H),7.16-7.30(m,2H),6.72(dt,J＝8.91,3.33Hz,1H),5.48(s,2H).
中间体24:N-(3-(5-溴-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)环丙烷甲酰胺(I-24)
使用环丙烷甲酸作为起始原料，以与中间体I-7类似的方式制备中间体I-24。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.90(d,J＝2.38Hz,1H),8.75(d,J＝2.38Hz,1H),8.62(d,J＝2.38Hz,1H),8.38(dd,J＝7.03,2.51Hz,1H),8.25-8.30(m,1H),7.66-7.75(m,1H),7.53(dd,J＝11.17,9.16Hz,1H),1.72-1.83(m,1H),0.83(d,J＝6.15Hz,4H).
中间体25：3-(5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯胺(I-25)
步骤A：将I-1(10g，32.6mmol，1eq)和Boc2O(21.3g，97.7mmol，22.4mL，3eq)在THF(100mL)中的反应混合物在76℃下搅拌12小时。浓缩反应混合物，并将残余物与石油醚(100mL)一起研磨，得到I-25a，为棕色固体。M+H＝408.9.
步骤B：将I-25a(0.5g，1.2mmol，1eq)、1H-吡唑(126mg，1.8mmol，1.5eq)、CuI(35mg,184.5μmol，0.15eq)、喹啉-8-醇(27mg，184.5μmol，31.9uL，0.15eq)和K2CO3(221mg，1.6mmol，1.3eq)在DMSO(5mL)中的反应混合物在120℃下搅拌12小时。将反应混合物倾倒入水(20mL)中，并用DCM(20mL×3)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩，得到I-25b，为黑色固体。M+H＝395.3.
步骤C：将I-25b(0.4g，1.0mmol，1eq)在HCl/二噁烷(10mL)中的反应混合物在25℃下搅拌12小时。将反应混合物浓缩并通过制备型HPLC(菲罗门公司(Phenomenex)的Gemini150*25mm*10um；流动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-乙腈]；B％：18％-48％,12min)纯化，得到I-25，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δppm 9.28(d,J＝2.69Hz,1H),8.90(d,J＝2.45Hz,1H),8.61(dd,J＝10.64,2.57Hz,2H),7.84(d,J＝1.47Hz,1H),7.14-7.31(m,2H),6.66-6.75(m,1H),6.57-6.65(m,1H),5.45(s,2H).
中间体26：4-氟-3-(5-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯胺(I-26)
在步骤B中使用4-甲基-1H-咪唑作为起始原料，以与中间体I-25类似的方式制备中间体I-26。1H NMR：(400MHz,DMSO)δppm 9.00(d,J＝2.69Hz,1H),8.89(d,J＝2.20Hz,1H),8.37-8.49(m,1H),8.20(s,1H),7.53(s,1H),7.13-7.30(m,3H),6.61-6.80(m,1H),5.45(s,2H),2.21(s,3H).
中间体27：N-(3-(5-溴-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)吡咯烷-1-甲酰胺(I-27)
使用吡咯烷作为起始原料，以与中间体I-3类似的方式制备中间体I-27。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.89(d,J＝2.26Hz,1H),8.75(d,J＝2.26Hz,1H),8.62(d,J＝2.51Hz,1H),8.51(s,1H),8.28(dd,J＝7.03,2.51Hz,1H),7.74(dt,J＝9.10,3.48Hz,1H),7.46(dd,J＝11.29,9.29Hz,1H),3.39(br s,4H),1.87(br t,J＝6.40Hz,4H).
中间体28：4-氟-3-(5-(3-甲基吡啶-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯胺I-28
使用(3-甲基吡啶-2-基)锌(II)溴化物作为起始原料，以与中间体I-11类似的方式制备中间体I-28。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)8.89(dd,J＝8.2,2.4Hz,2H),8.56(dd,J＝4.6,1.7Hz,1H),8.47(d,J＝2.2Hz,1H),7.80(ddd,J＝7.7,1.7,0.8Hz,1H),7.40-7.32(m,1H),7.24-7.14(m,2H),6.69(ddd,J＝9.0,3.9,2.8Hz,1H),5.46(s,2H),2.44(s,3H).
中间体29：4-氟-3-(5-(3-(三氟甲基)氮杂环丁烷-1-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯胺I-29
步骤A：将I-25a(100mg，245.6μmol，1eq)、3-(三氟甲基)氮杂环丁烷(48mg，294.7μmol，1.2eq，HCl)、NaOBu-t(2M，368.3uL，3eq)、XantPhos(28mg，49.11μmol，0.2eq)和Pd2(dba)3(22mg，24.6μmol，0.1eq)在二噁烷(2mL)中的混合物脱气，并且然后在80℃在N2下搅拌1小时。将混合物淬灭并用1M HOAc调节至pH＝7。将混合物通过硅胶色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到I-29a，为黄色固体。M+H＝452.3.
步骤B：该步骤以与I-25步骤C类似的方式进行，得到I-29。1H NMR(400MHz,DMSO)δppm 8.49(d,J＝2.45Hz,1H),8.29(d,J＝2.81Hz,1H),7.09-7.22(m,2H),7.02(d,J＝2.69Hz,1H),6.63(dt,J＝8.74,3.33Hz,1H),5.38(s,2H),4.07-4.23(m,2H),3.98(dd,J＝7.95,5.38Hz,2H),3.66-3.83(m,1H).
中间体30：2-(2-(2-氟-5-(3-氟氮杂环丁烷-1-甲酰氨基)苯基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-5-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(I-30)
I-30的合成在实例24中描述。
中间体31：反式-N-(3-(5-溴-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)-2-氟代环丙烷-1-甲酰胺(I-31)
向I-1(2.5g，8.1mmol，1eq)和反式-2-氟代环丙烷甲酸(1.0g，9.8mmol，1.2eq)在DMF(20mL)中的溶液中添加HATU(3.7g，9.8mmol，1.2eq)和DIEA(1.6g，12.2mmol，2.1mL，1.5eq)。将混合物在25℃搅拌16小时。将反应用乙酸乙酯(150mL)稀释，并用饱和NaHCO3(50mL)和盐水100mL(50mL*2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物在叔丁基甲基醚(20mL)中研磨，并通过过滤收集，得到I-31，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.74(s,1H),8.91(d,J＝2.51Hz,1H),8.75(d,J＝2.26Hz,1H),8.62(d,J＝2.26Hz,1H),8.36(dd,J＝7.03,2.51Hz,1H),7.60-7.74(m,1H),7.55(dd,J＝11.17,9.16Hz,1H),4.70-5.12(m,1H),2.89(s,1H),2.23-2.41(m,1H),1.46-1.66(m,1H).
中间体32：4-(甲氧基甲基)-2-甲基噁唑-5-甲酸(I-32)
步骤A：将乙酰胺(1.7g，28.6mmol，4eq)和2-羟基-N,N,N-三甲基乙烷-1-铵氯化物(1g，7.2mmol，1eq)合并并且加热至60℃持续30min。将NBS(2.5g，14.3mmol，2eq)和4-甲氧基-3-氧代丁酸甲酯(2.1g，14.3mmol，2eq)添加到反应中并加热至60℃持续1小时。将反应混合物通过制备型TLC，使用石油醚中50％乙酸乙酯洗脱进行纯化，得到I-32a，为浅黄色油。1HNMR：(400MHz,CDCl3)δppm 4.66(s,2H),3.94(s,3H),3.47(s,3H),2.55(s,3H)。
步骤B：将I-32a(60mg，324.01μmol，1eq)和LiOH.H2O(27.2mg，648.0μmol，2eq)在THF(1mL)、MeOH(1mL)和H2O(0.5mL)中的混合物在25℃下在N2气氛下搅拌16小时。将反应混合物真空浓缩，得到60mg I-32的锂盐，为黄色固体。
中间体33：N-(4-氟-3-(5-(3-甲基吡啶-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)-4-(甲氧基甲基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(I-33)
I-33的合成在实例28中描述。
中间体34：4-甲基-2-(甲基-d3)噁唑-5-甲酸(I-34)
步骤A：向3-氧代丁酸甲酯(900mg，7.7mmol，833uL，1eq)在甲苯(15mL)中的溶液中添加2,2,2-三氘代乙酰胺(962mg，15.5mmol，2eq)和TsOH(13.3)mg，77.5μmol，0.01eq)。将混合物在120℃搅拌12小时。将混合物在真空下浓缩，得到残余物，将其通过硅胶色谱法，用石油醚:乙酸乙酯以30:1-10:1的梯度洗脱进行纯化，得到I-34a，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.88(br s,1H),5.02(s,1H),3.63(s,3H),2.29(s,3H).
步骤B：向I-34a(250mg，1.6mmol，1eq)在DCE(8mL)中的溶液中添加(二乙酰氧基碘)苯(654mg，2.0mmol，1.3eq)和BF3.Et2O(443mg，3.1mmol，385uL，2eq)。将混合物在90℃搅拌2小时。将混合物在真空下浓缩，得到残余物，将其通过硅胶色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯以30:1-10:1的梯度洗脱，得到I-34b，为白色固体。1H NMR：(400MHz,DMSO-d6)δppm3.81(s,3H),2.33(s,3H)。
步骤C：向I-34b(100mg，632μmol，1eq)在THF(1mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加15％的NaOH(1mL)水溶液。将混合物在70℃搅拌2小时。通过添加HCl水溶液(1M)将pH调节至5，并形成白色固体。过滤悬浮液并用H2O(5mL)洗涤滤饼。减压干燥滤饼，得到I-34，为白色固体。1H NMR：(400MHz,DMSO-d6)δppm 13.30(br s,1H),2.32(s,3H)。
中间体35：2-(叔丁氧基甲基)-N-(4-氟-3-(5-(3-甲基吡啶-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)-4-甲基噁唑-5-甲酰胺(I-35)
I-35的合成在实例29中描述。
中间体36：4-氟-3-(5-苯基-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯胺(I-36)
步骤A：将含有I-1b(500mg，1.483mmol)和苯基硼酸(181mg，1.483mmol)在DME:H2O(8:2)(15mL)中的100ml密封管用氩气吹扫15min。添加NaHCO3(249mg，2.966mmol)和Pd(dppf)Cl2.DCM(61mg,0.074mmol)并且将反应在80℃下搅拌1小时。将反应混合物用水稀释，用EtOAc萃取(100mL X 2)。将合并的有机层用1x水(150mL)，用1x盐水(100mL)洗涤，并且然后经硫酸钠干燥并真空浓缩。将粗化合物通过硅胶色谱法使用在正己烷中25％EtOAc洗脱进行纯化得到I-36a。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.32-9.29(m,1H),9.10(s,1H),8.69(s,1H),8.34-8.29(m,1H),8.23(s,1H),7.65(d,J＝6.9Hz,2H),7.55-7.41(m,4H).；M+H＝335.2
步骤B：向含有在EtOH:H2O(8:2)(20mL)中的I-36a(150mg，0.449mmol)的烧瓶中添加铁粉(370mg，6.730mmol)和CaCl2(995mg，8.973mmol)并且将反应在65℃下搅拌2小时。将反应混合物用水稀释，并且用EtOAc萃取(100mL X 2)。将合并的有机层用1x水(100mL)和1x盐水(100mL)洗涤，并且然后经硫酸钠干燥并真空浓缩。将粗化合物通过正戊烷洗涤纯化，得到I-36。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.04(s,1H),8.61(s,1H),8.22(s,1H),7.70-7.40(m,6H),7.20-7.00(m,1H),6.75-6.60(m,1H)；M+H＝305.30.
实例1：N-(4-氟-3-(5-(3-甲基吡啶-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)-2,4-二甲基噁唑-5-甲酰胺(化合物1)
向I-7(30mg，0.070mmol)和Siliacat DPP-Pd 0.25mmol/g(0.014g，3.52μmol，0.05eq)的混合物中添加0.5mL无水THF。将反应混合物置于氮气气氛下，并添加(3-甲基吡啶-2-基)锌(II)溴化物(在THF中0.5M，0.56mL，0.28mmol，4eq)，并将反应在65℃下搅拌过夜。将反应用0.2mL水淬灭，并通过制备HPLC(沃特斯公司的Atlantis T3 C18 19*50mm*10um柱)，用在水中的20％-80％乙腈(0.035％TFA)(0.05％TFA)洗脱进行纯化，得到化合物1。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.90(dd,J＝13.2,2.3Hz,2H),8.59-8.43(m,3H),7.97-7.81(m,2H),7.55-7.35(m,2H),2.56(s,3H),2.48-2.45(m,6H).方法1：RT＝2.69min.；M+H＝443.1.
根据上述方案，使用相应的溴化锌(II)合成化合物16、17、101、102、103、104、105、106、107和108。
实例2：N-(4-氟-3-(5-(3-甲基吡啶-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)呋喃-2-甲酰胺(化合物2)
使用I-8作为起始原料，以与化合物1类似的方式制备化合物2。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.92(d,J＝2.4Hz,1H),8.88(d,J＝2.2Hz,1H),8.55-8.45(m,3H),7.96(m,1H),7.87(m,1H),7.78(m,1H),7.52-7.39(m,2H),7.32(m,1H),6.68(m,1H),2.46(s,3H).方法2：RT＝0.89min.；M+H＝414.3.
根据上述方案，使用相应的溴化锌(II)合成化合物54、55、56、57、59、60、61、62、63和64。
实例3：N-(4-氟-3-(5-(3-甲基吡啶-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物3)
使用I-6作为起始原料，以与化合物1类似的方式制备化合物3。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.89-8.84(m,2H),8.52(m,1H),8.48(m,1H),8.18(m,1H),7.86(m,1H),7.67(m,1H),7.44-7.32(m,2H),4.18-4.06(m,4H),2.46(s,3H),2.41-2.26(m,2H).方法1：RT＝2.41min.；M+H＝403.3.
根据上述方案，使用相应的溴化锌(II)合成化合物99。
实例4：(R)-3-氟-N-(4-氟-3-(5-(3-甲基吡啶-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)吡咯烷-1-甲酰胺(化合物4)
使用I-5作为起始原料，以与化合物1类似的方式制备化合物4。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.87(dd,J＝4.7,2.3Hz,2H),8.52(m,1H),8.49(m,1H),8.19(m,1H),7.86(m,1H),7.67(m,1H),7.45-7.34(m,2H),5.42-5.25(m,1H),3.85-3.55(m,4H),2.46(s,3H),2.39-2.19(m,2H).方法1：RT＝2.41min.；M+H＝435.3.
根据上述方案，使用相应的溴化锌(II)合成化合物41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52和53。
实例5：3,3-二氟-N-(4-氟-3-(5-(3-甲基吡啶-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物5)
使用I-3作为起始原料，以与化合物1类似的方式制备化合物5。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.88(dd,J＝5.4,2.3Hz,2H),8.52(m,1H),8.48(m,1H),8.22(m,1H),7.86(m,1H),7.69(m,1H),7.45-7.36(m,2H),4.44(m,4H),2.46(s,3H).方法2：RT＝0.76min.；M+H＝439.1.
实例6：3-氟-N-(4-氟-3-(5-(3-甲基吡啶-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物6)
使用I-4作为起始原料，以与化合物1类似的方式制备化合物6。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.98(s,1H),8.94(dd,J＝16.9,2.3Hz,2H),8.57(ddd,J＝4.8,1.7,0.7Hz,1H),8.49(d,J＝2.3Hz,1H),8.28(dd,J＝7.0,2.7Hz,1H),7.80(ddd,J＝7.7,1.7,0.8Hz,1H),7.72(ddd,J＝9.1,4.1,2.7Hz,1H),7.49(dd,J＝11.2,9.1Hz,1H),7.37(dd,J＝7.7,4.7Hz,1H),5.41(dtt,J＝57.5,6.1,3.1Hz,1H),4.34(dddd,J＝21.7,10.4,6.0,1.4Hz,2H),4.04(dddd,J＝24.9,10.4,3.1,1.4Hz,2H),2.44(s,3H).方法1：RT＝2.39min.；M+H＝421.1.
根据上述方案，使用相应的溴化锌(II)合成化合物14、15、18、19、20、21、23、24、25、26、27和28。
根据上述方案，使用二甲基锌合成化合物318。
实例7：N-(4-氟-3-(5-异丁基-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物7)
使用I-6和异丁基锌(II)溴化物作为起始原料，以与化合物1类似的方式制备化合物7。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.66(d,J＝2.4Hz,1H),8.56(d,J＝2.2Hz,1H),8.12(m,1H),8.07(m,1H),7.64(m,1H),7.34(m,1H),4.19-4.01(m,4H),2.67(m,2H),2.41-2.24(m,2H),1.97(m,1H),0.99(m,6H).方法1：RT＝3.11min.；M+H＝368.3.
根据上述方案，使用相应的溴化锌(II)合成化合物91、93、94、95、96、97和98。
实例8：3,3-二氟-N-(4-氟-3-(5-异丁基-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物8)
使用I-3和异丁基锌(II)溴化物作为起始原料，以与化合物1类似的方式制备化合物8。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.59(d,J＝2.5Hz,1H),8.46(d,J＝2.2Hz,1H),8.06(m,1H),7.97(m,1H),7.56(m,1H),7.30-7.24(m,1H),4.33(m,4H),2.57(m,2H),1.92-1.81(m,1H),0.89(m,6H).方法2：RT＝1.09min.M+H＝404.1.
根据上述方案，使用相应的溴化锌(II)合成化合物29、30、31、32、33、34、35、36、37和38。
实例9：N-(3-(5-(二甲氨基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)-3,3-二氟氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物9)
步骤A：在0℃下向I-12(0.5g，1.8mmol，1eq)在乙酸乙酯(5mL)和饱和NaHCO3水溶液(5mL)中的溶液中添加氯甲酸2,2,2-三氯乙基酯(585.7mg，2.8mmol，370.7uL，1.5eq)，并且将反应在0℃下搅拌1小时。将反应混合物用EtOAc(30mL*3)萃取并且将合并的有机物经硫酸钠干燥并浓缩。将所得残余物通过硅胶色谱法，使用20％EtOAc和20％DCM的石油醚洗脱进行纯化，得到I-13，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.52(br s,1H),8.71(d,J＝2.93Hz,1H),8.57(d,J＝2.69Hz,1H),8.25(br d,J＝5.14Hz,1H),7.44-7.64(m,2H),7.16(d,J＝2.69Hz,1H),4.99(s,2H),2.96(s,6H).
步骤B：将I-13(60mg，134.3μmol，1eq)、3,3-二氟氮杂环丁烷HCl(25mg，268.6μmol，2eq)、DIEA(34.6mg，268.6μmol，46.7μL，2eq)、DMAP(1.6mg，13.4μmol，0.1eq)在DMSO(1mL)中的反应混合物在60℃下搅拌12小时并且在70℃下再搅拌12小时。将反应混合物通过制备HPLC柱：菲罗门公司的Gemini C18 250*50mm*10um；流动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-乙腈]；B％：25％-55％,12min纯化，得到9为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm9.18(s,1H),8.70(d,J＝3.01Hz,1H),8.55(d,J＝2.76Hz,1H),8.20(dd,J＝6.90,2.64Hz,1H),7.56-7.78(m,1H),7.45(dd,J＝11.42,9.16Hz,1H),7.15(d,J＝3.01Hz,1H),4.41(t,J＝12.67Hz,4H),2.95(s,6H).方法1：RT＝2.84min.；M+H＝391.1.
根据上述方案，使用中间体I-9、I-12、I-16、I-23、I-25或I-26和相应的胺合成了化合物100、124、133、142、143、156、167、170、195、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、260、276、319、320、321，322、323、324和328。
实例10：N-(3-(5-(氮杂环丁烷-1-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物10)
将I-6(80mg，205μmol，1eq)、氮杂环丁烷(17.6mg，307.5μmol，20.7μL，1.5eq)、NaOt-Bu(THF中2M，307.5μL、3eq)、XantPhos(23.7mg、41μmol、0.20eq)和Pd2(dba)3(18.8mg、20.5μmol、0.10eq)在二噁烷(3mL)中的混合物用氩气脱气并加热到90℃持续4小时。将反应用1M HOAc淬灭，并通过制备HPLC(柱：菲罗门公司的Gemini C18 250*50mm*10μm；流动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-乙腈]；B％：28％-58％,12min)纯化，得到10，为黄色固体。1HNMR(400MHz,甲醇-d4),δppm,8.42(d,J＝2.51Hz,1H),8.22(d,J＝2.76Hz,1H),8.05(dd,J＝6.78,2.76Hz,1H),7.58-7.62(m,1H),7.30(dd,J＝11.04,9.16Hz,1H),7.01(d,J＝2.64Hz,1H),4.10(t,J＝7.65Hz,4H),3.99(t,J＝7.22Hz,4H),2.41-2.49(m,2H),2.27-2.35(m,2H).方法1：RT＝2.80min.；M+H＝367.1.
根据上述方案，使用相应的中间体I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8、I-24、I-27或I-31和相应的胺合成化合物40、58、92、122、131、132、134、135、137、141、144、145、147、149、151、155、157、158、161、163、171、172、177、178、179、180、181、183、184、185、186、190、191、192、193、194、197、198、199、200、201、202、203、204、205、230、231、232、234、235、236、237、238、239、240、241、243、244、245、248、249、250、251、252、253、255、263、266、272、290、291、292、298、299、300、302、303、306、307、308、314、326、327、338和339。
使用上述反应条件，除化合物241外，还分离出化合物242。使用上述反应条件，除化合物202外，类似地分离出化合物246。
使用Boc-哌啶使用上述方案合成化合物270，然后使用TFA在DCM中的0.36:1的比例除去Boc基团，然后用Et3N中和至pH＝7，并且然后进行制备型HPLC纯化(柱：菲罗门公司的Synergi C18 150*25*10um；流动相：[水(0.225％FA)-乙腈]；B％：3％-30％,10min)，得到化合物270。
实例11：4,4,4-三氟-N-(4-氟-3-(5-异丙基-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)丁酰胺(化合物173)
向I-9(25mg，0.092mmol)在DMF(1.5ml)和DIEA(0.040ml，0.23mmol)中的溶液中添加4,4,4-三氟丁酰氯(14.9mg，0.092mmol)，并将反应在室温下搅拌12小时。将粗反应混合物直接在15g C18快速色谱柱上使用在水中20％-90％乙腈洗脱纯化，得到化合物173，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.45(s,1H),8.81(d,J＝2.7Hz,1H),8.69(d,J＝2.3Hz,1H),8.36(dd,J＝7.0,2.7Hz,1H),8.05(dd,J＝2.3,0.8Hz,1H),7.68(ddd,J＝9.1,4.2,2.7Hz,1H),7.54(dd,J＝11.2,9.0Hz,1H),3.08(pd,J＝6.9,0.8Hz,1H),2.72-2.55(m,4H),1.30(d,J＝6.9Hz,6H).方法1：RT＝3.19min.；M+H＝395.2.
根据上述方案，使用相应的氯甲酸代替酰氯合成化合物174。
实例12：N-(4-氟-3-(5-异丙基-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)吡嗪-2-甲酰胺(化合物87)
将吡嗪-2-甲酸(16.5mg，0.13mmol)添加到烧瓶中，然后将I-9(30mg，0.11mmol)溶于0.25mL DMF中。将DIEA(0.058mL，0.33mmol)和HATU(50.6mg，0.13mmol)在0.25mL DMF中的溶液添加到反应中，并将所得混合物搅拌过夜。将反应通过0.2微米的注射器式过滤器过滤，并将材料通过制备型HPLC(沃特斯公司的Atlantis T3 C18 19*50mm*10um柱)用在水中的20％-80％乙腈(0.035％TFA)(0.05％TFA)洗脱进行纯化，得到化合物87。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.36(m,1H),8.84(m,1H),8.76(m,1H),8.72(m,1H),8.66(m,1H),8.57(m,1H),8.13(m,1H),7.99(m,1H),7.46(m,1H),3.13(m,1H),1.38(2s,6H).方法1：RT＝3.05min.；M+H＝377.3.
根据上述方案，使用相应的羧酸合成了化合物65、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、196、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、261、262和351。
根据上述方案，使用I-12、I-29或I-36和相应的羧酸合成化合物139、140、153、154、279、330和352。
根据上述方案，使用I-28和I-34作为起始材料合成化合物278。
实例13：3-氟-N-(4-氟-3-(5-(2,2,2-三氟乙基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物152)
在N2气氛下，向I-10(106mg，285.6μmol，1eq)在二噁烷(1mL)中的溶液中添加1,1,1-三氟-2-碘乙烷(119.9mg，571.10μmol，56.03uL，2eq)、Pd2(dba)3(13.1mg，14.3μmol，0.05eq)、XantPhos(28.1mg，48.5μmol，0.2eq)和Cs2CO3(372.15mg，1.1mmol，4eq)。1分钟后，添加水(92.6mg，5.1mmol，92.6uL，18eq)，并将混合物在80℃下搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物用DCM(30mL)稀释并且将有机层用水(10mL*2)洗涤，经Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型TLC(SiO2，DCM:甲醇＝10:1)纯化并且进一步通过制备型HPLC(柱：菲罗门公司的Gemini C18 250*50mm*10um；流动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-乙腈]；B％：28％-58％,12min)纯化，得到化合物152，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δppm,8.98(s,1H),8.95(d,J＝2.51Hz,1H),8.69(d,J＝2.01Hz,1H),8.33(d,J＝1.76Hz,1H),8.24(dd,J＝6.90,2.63Hz,1H),7.67-7.74(m,1H),7.48(dd,J＝11.29,9.29Hz,1H),5.30-5.52(m,1H),4.26-4.39(m,2H),3.97-4.09(m,2H),3.87(q,J＝11.71Hz,2H).方法1：RT＝2.76min.；M+H＝412.2.
根据上述方案，使用相应硼酸以与I-10相同方式由中间体I-3、I-5、I-6、I-7或I-8制备合成化合物162、164、166、175和176。
实例14：(2-(2-氟-5-(3-氟氮杂环丁烷-1-甲酰氨基)苯基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-5-基)氨基甲酸异丙基酯(化合物168)
在氩气气氛下，向I-4(120mg，294μmol，1eq)、氨基甲酸异丙基酯(45.5mg，441μmol，1.5eq)和Cs2CO3(287.3mg，881.9μmol，3eq)在二噁烷(3mL)中的混合物中添加XantPhos(34.0mg，58.8μmol，0.20eq)和Pd2(dba)3(26.9mg，29.4μmol，0.10eq)。将混合物加热至90℃并且搅拌4小时。将混合物通过添加1M HOAc淬灭，并通过制备型HPLC纯化(柱：Boston pH-lex 150*25 10um；流动相：[水(0.225％甲酸)-乙腈]；B％：33％-63％,10min，然后在柱：菲罗门公司的Gemini C18 250*50mm*10um；流动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-乙腈]；B％：28％-58％,12min)上纯化。得到化合物168，为黄色固体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4),δppm,8.64(br d,J＝2.26Hz,1H),8.61(br d,J＝2.64Hz,1H),8.44(br s,1H),8.10(dd,J＝6.71,2.70Hz,1H),7.60-7.67(m,1H),7.33(dd,J＝10.92,9.16Hz,1H),5.25-5.47(m,1H),5.01(dt,J＝12.52,6.23Hz,1H),4.32-4.43(m,2H),4.07-4.19(m,2H),1.33(d,J＝6.27Hz,6H).方法1：RT＝2.88min.；M+H＝431.1.
根据上述方案，使用相应中间体I-3、I-5、I-6、I-7或I-8合成化合物123、136、138、146和159。
实例15：3-氟-N-(4-氟-3-(5-(3-氟吡啶-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物187)
向中间体I-10(95mg，254.6μmol，1eq)在DMF(3mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(18.6mg，25.5μmol，0.1eq)、Na2CO3(81mg，763.8μmol，3eq)和2-溴-3-氟吡啶(89.5mg，509.2μmol，2eq)。将混合物在90℃搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩，并通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS 150*305u；流动相：[水(0.225％FA)-乙腈]；B％：35％-65％,10min)进行纯化，得到化合物187，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.27(s,1H),9.00-9.09(m,2H),8.82(s,1H),8.63(br d,J＝4.39Hz,1H),8.29(dd,J＝6.90,2.51Hz,1H),7.93(dd,J＝10.73,8.47Hz,1H),7.72(dt,J＝8.60,3.48Hz,1H),7.52-7.58(m,1H),7.46-7.51(m,1H),5.28-5.55(m,1H),4.25-4.44(m,2H),3.93-4.14(m,2H).方法1：RT＝2.74min.；M+H＝425.1.
根据上述方案，使用相应的溴化物合成化合物188、294、295、297、301、304、312、325、329、330和335。
实例16：5-氟-N-(4-氟-3-(5-(吡啶-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)呋喃-2-甲酰胺(化合物11)
将I-11(40mg，0.131mmol)溶解在2mL的DMF中。将5-氟呋喃-2-甲酸(25.6mg，0.20mmol)、DIEA(0.058mL，0.33mmol)和HATU(50.6mg，0.13mmol)添加到反应中，并将所得混合物搅拌过夜。将反应用EtOAc稀释，并用饱和Na2CO3水溶液洗涤1x并且用水洗涤1x。将有机物经Na2SO4干燥并且浓缩。将粗材料经硅胶色谱，使用庚烷中的0-100％3:1EtOAc:EtOH洗脱纯化，得到化合物11。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.53(s,1H),9.49(d,J＝2.3Hz,1H),9.06(d,J＝2.6Hz,1H),8.96(d,J＝2.3Hz,1H),8.74(ddd,J＝4.8,1.9,0.9Hz,1H),8.53(dd,J＝7.0,2.7Hz,1H),8.14(dt,J＝8.0,1.1Hz,1H),8.01-7.91(m,2H),7.62(dd,J＝11.2,9.1Hz,1H),7.50-7.38(m,2H),6.14(dd,J＝7.0,3.7Hz,1H).方法2：RT＝0.91min.；M+H＝418.1.
根据上述方案，使用相应的羧酸合成化合物12、13、206、218、345、346、347、348、和349。
根据上述方案，使用相应的羧酸和I-28合成化合物350。
实例17：3-氟-N-(4-氟-3-(5-(吡啶-4-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物182)
在N2气氛下，向I-4(80mg，196μmol，1eq)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(60.3mg，294μmol，1.5eq)在DME(3mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(14.34mg，19.6μmol，0.1eq)和Na2CO3(2M，294uL，3eq)。将混合物在90℃搅拌20小时。将反应混合物浓缩并将残余物用EtOAc(30mL)稀释。有机层用水(10mL*2)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：菲罗门公司的Gemini C18 250*50mm*10um；流动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-乙腈]；B％：18％-48％,12min)进行纯化，得到化合物182，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δppm,9.17(d,J＝2.26Hz,1H),9.03(d,J＝2.51Hz,1H),9.00(s,1H),8.75(d,J＝2.51Hz,1H),8.67-8.73(m,2H),8.28(dd,J＝6.90,2.64Hz,1H),7.84-7.90(m,2H),7.68-7.75(m,1H),7.50(dd,J＝11.29,9.03Hz,1H),5.30-5.52(m,1H),4.27-4.40(m,2H),3.97-4.10(m,2H).方法2：RT＝0.58min.；M+H＝407.1.
根据上述方案，使用相应的硼酸酯合成化合物189。
实例18：(R)-3-氟-N-(4-氟-3-(5-(四氢-2H-吡喃-4-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)吡咯烷-1-甲酰胺(化合物150)
步骤A：在氩气气氛下，向2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(65.7mg，312.6μmol，1.1eq)、I-5(120mg，284.2μmol，1eq)和Na2CO3(2M，426.3uL，3eq)在DME(3mL)和水(0.5mL)中的混合物中添加Pd(dppf)Cl2(20.8mg，28.4μmol，0.1eq)。将混合物加热至90℃持续4小时。将混合物通过制备型TLC，使用石油醚中90％EtOAc洗脱进行纯化，得到I-14，为白色固体。M+H＝426.2.
步骤B：向I-14(85mg，199.8μmol，1eq)在甲醇(10mL)中的混合物中添加Pd/C(30mg，10％纯度)。将该悬浮液在真空下脱气并用H2吹扫几次。将混合物在H2(15psi)、在10℃下搅拌1小时。将混合物过滤并将滤液浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS 150*30 5u；流动相：[水(0.225％FA)-乙腈]；B％：27％-51％,10min)进行纯化，得到化合物150，为黄色固体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4),δppm,9.15((d,J＝2.01Hz,1H)),8.98(s,1H),8.85(d,J＝1.88Hz,1H),8.33(dd,J＝6.78,9.16Hz,1H),7.61-7.65(m,1H),7.42(dd,J＝11.04,9.16Hz,1H),5.28-5.41(m,1H),4.11-4.14(m,2H),3.57-3.85(m,6H),3.14-3.20(m,1H),2.11-2.32(m,2H),1.91-1.97(m,4H).方法1：RT＝2.60min.；M+H＝428.2.
根据上述方案，使用中间体I-3、I-4、I-6或I-7和相应的硼酸或硼酸酯合成化合物148、160、165、169、296和305。
使用I-4和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁基酯，使用上述方案合成化合物293，然后使用1:5的比率的TFA与DCM以除去Boc基团，然后浓缩，并且然后制备型HPLC纯化(柱：菲罗门公司的Synergi C18 150*25*10um；流动相：[水(0.225％FA)-乙腈]；B％：2％-22％,10min)，得到化合物293。
实例19：N-(3-(5-(5-氮杂螺[2.3]己-5-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物257)
将I-6(400mg，1.0mmol，1eq)、5-氮杂螺[2.3]己烷半草酸酯(128mg，1.0mmol，1eq)、NaOBu-t(2M，在THF中，1.5mL，3eq)和Xphos Pd G3(87mg，102.5μmol，0.1eq)在二噁烷(10mL)中的混合物脱气，置于氩气气氛中并且加热至90℃持续1小时。将反应通过添加饱和的NH4Cl(40mL)淬灭。将所得的混合物通过二氯甲烷(30mL×6)萃取并且将有机相经Na2SO4干燥并过滤。将滤液浓缩并且将残余物通过硅胶色谱法，用50％MeOH的DCM溶液洗脱进行纯化，然后制备型HPLC纯化(柱：菲罗门公司的Synergi C18 150*25*10um；流动相：[水(0.225％FA)-乙腈]；B％：30％-60％,10min)，得到化合物257，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δppm 8.69(s,1H),8.52(d,J＝2.63Hz,1H),8.28(d,J＝2.76Hz,1H),8.20(dd,J＝7.03,2.63Hz,1H),7.62-7.69(m,1H),7.40(dd,J＝11.29,9.16Hz,1H),6.91(d,J＝2.76Hz,1H),4.01(s,4H),3.97(t,J＝7.53Hz,4H),2.19(quin,J＝7.56Hz,2H),0.68(s,4H).方法1：RT＝2.90min.；M+H＝393.2.
根据上述方案，使用相应中间体I-3、I-4、I-5或I-27合成化合物233、258、259、和337。
实例20：3-氟-N-(4-氟-3-(5-(3-(三氟甲基)氮杂环丁烷-1-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物265)
在N2气氛下，将I-4(3.5g，8.6mmol，1eq)、3-(三氟甲基)氮杂环丁烷HCl盐(1.7g，10.3mmol，1.2eq)、Pd2(dba)3(785mg，857.4μmol，0.1eq)、XantPhos(992mg，1.7mmol，0.2eq)和Cs2CO3(8.4g，25.7mmol，3eq)在噁烷(60mL)中的混合物脱气并且然后加热至85℃持续1.2小时。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(400mL)淬灭并且用EtOAc(300mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法，使用MeOH/乙酸乙酯/DCM＝0:1:1至1:5:1洗脱进行纯化，得到黄色固体，将其进一步通过制备型HPLC柱：菲罗门公司的Synergi Max-RP 250*80mm*10um；流动相：[水(0.225％FA)-乙腈]；B％：30％-60％，35min进行纯化。用在H2O中20％NH3将溶液的pH调节至pH＝7并且在30℃下真空去除乙腈。通过过滤收集所得黄色固体，将其用水100mL×4洗涤，并冻干，得到化合物265，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δppm 8.93(s,1H),8.58(d,J＝2.76Hz,1H),8.32(d,J＝2.76Hz,1H),8.20(dd,J＝7.03,2.64Hz,1H),7.65(dd,J＝7.34,4.58Hz,1H),7.44(dd,J＝11.17,9.16Hz,1H),7.03(d,J＝2.89Hz,1H),5.29-5.51(m,1H),4.24-4.38(m,2H),4.18(t,J＝8.34Hz,2H),3.95-4.10(m,4H),3.65-3.85(m,1H).方法1：RT＝2.86min.；M+H＝453.1.
根据上述方案，使用相应中间体I-5或1-6合成化合物274和275。
实例21：N-(2-(5-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)吡啶-4-基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物280)
步骤A：向I-17(2.5g，8.6mmol，1eq)在吡啶(30mL)中的溶液中添加氯甲酸2,2,2-三氯乙基酯(3.6g，17.2mmol，2.3mL，2eq)。将混合物在30℃搅拌22小时。通过添加100mL水使反应混合物沉淀，并且然后过滤。将滤饼用水(50mL)洗涤并且减压干燥。然后将沉淀在叔丁基甲基醚(20mL)中研磨，并通过过滤收集，得到I-20，为褐色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δppm 11.08(s,1H),9.32(s,1H),8.77(d,J＝1.71Hz,1H),8.62(d,J＝1.96Hz,1H),8.52(d,J＝1.71Hz,1H),8.49(d,J＝3.91Hz,1H),7.75(dd,J＝5.38,1.71Hz,1H),5.05(s,2H).
步骤B：向I-20(1.2g，2.6mmol，1eq)和氮杂环丁烷盐酸盐(482mg，5.2mmol，2eq)在DMSO(12mL)中的溶液中添加DMAP(31mg，257.8μmol，0.10eq)和DIEA(666mg，5.2mmol，898.0uL，2eq)。将混合物在60℃搅拌144小时。通过添加100mL水使反应混合物沉淀，并且然后过滤。将滤饼用50mL水洗涤，减压干燥，得到I-21，为棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δppm 9.24(s,2H),8.75(d,J＝2.45Hz,1H),8.60(d,J＝2.20Hz,1H),8.49(d,J＝1.71Hz,1H),8.35(d,J＝5.62Hz,1H),7.73(dd,J＝5.75,1.83Hz,1H),4.04(br t,J＝7.58Hz,4H),2.23(quin,J＝7.64Hz,2H).
步骤C：在N2气氛中，将I-21(180mg，482.3μmol，1eq)、3,3-二氟氮杂环丁烷(125mg，964.6μmol，2eq，HCl)、XantPhos(56mg，96.5μmol，0.20eq)、Pd2(dba)3(44mg，48.2μmol，0.10eq)和NaOBu-t(2M，964.6uL，4eq)在二噁烷中的混合物(3mL)在90℃下搅拌16小时。将反应混合物减压浓缩以去除溶剂。将残余物通过硅胶色谱法，用10％-100％石油醚在乙酸乙酯中的溶液洗脱进行纯化，得到65mg残余物。将残余物在MeOH(3mL)中研磨并通过过滤收集固体，得到化合物280，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.18(s,1H),8.99(s,1H),8.44(d,J＝1.76Hz,1H),8.36(d,J＝2.76Hz,1H),8.31(d,J＝5.77Hz,1H),7.67(dd,J＝5.52,2.01Hz,1H),7.14(d,J＝2.76Hz,1H),4.42(t,J＝12.17Hz,4H),4.04(t,J＝7.53Hz,4H),2.16-2.29(m,2H).方法1：RT＝2.76min.；M+H＝386.0.
根据上述方案，使用中间体I-17、I-18或I-19和相应的胺合成化合物282、284、286、287和343。
根据步骤A和步骤B中所述的方案，使用(R)-3-氟吡咯烷合成化合物340。
实例22：3,3-二氟-N-(2-(5-(吡啶-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)吡啶-4-基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物281)
步骤A：向I-20(800mg，1.7mmol，1eq)和3,3-氟氮杂环丁烷HCl盐(445mg，3.4mmol，2eq)在DMSO(10mL)中的溶液中添加DMAP(21mg，171.8μmol，0.1eq)和DIEA(444mg，3.4mmol，598.7uL，2eq)。将混合物在60℃搅拌320小时。通过添加水(100mL)使反应混合物沉淀，并且然后过滤。将滤饼用50mL水洗涤，减压干燥，得到I-22，为棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.69(s,1H),9.23-9.27(m,1H),8.75(d,J＝2.45Hz,1H),8.61(d,J＝2.44Hz,1H),8.47(d,J＝1.96Hz,1H),8.41(d,J＝5.62Hz,1H),7.71(dd,J＝5.62,1.96Hz,1H),4.48(t,J＝12.72Hz,4H).
步骤B：向I-22(460mg，1.12mmol，1eq)和三丁基(2-吡啶基)锡烷(497mg，1.3mmol，1.2eq)在DMF(10mL)中的溶液中添加Pd(PPh3)4(130mg，112.4μmol，0.1eq)和CuI(21mg，112.4μmol，0.1eq)。将混合物在N2气氛下在85℃搅拌16小时。将反应混合物减压浓缩以去除溶剂。将残余物通过硅胶法，用在乙酸乙酯中10％-100％石油醚洗脱进行纯化，得到固体，将其在DCM(3mL)中研磨。通过过滤收集所得固体，得到化合物281，为灰白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.70(s,1H),9.47(d,J＝2.20Hz,1H),9.38(s,1H),8.95(d,J＝2.20Hz,1H),8.71-8.77(m,1H),8.49(d,J＝1.71Hz,1H),8.42(d,J＝5.62Hz,1H),8.12(d,J＝8.07Hz,1H),7.96(td,J＝7.76,1.83Hz,1H),7.72(dd,J＝5.62,1.96Hz,1H),7.39-7.47(m,1H),4.49(t,J＝12.72Hz,4H).方法1：RT＝2.81min.；M+H＝408.0.
根据上述方案，使用中间体I-1、I-17、I-18或I-19和相应的胺和相应的有机锡合成化合物283、285、309、310、313、315、317、341、342和344。
根据步骤B的方案，使用I-24、I-27或I-31以及相应的有机锡，合成化合物256、332、333、和336。
实例23：3-氟-N-(4-氟-3-(2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物311)
在N2气氛下，向I-4(100mg，245μmol，1eq)在EtOH(2mL)溶液中添加TEA(25mg，245μmol，34.1uL，1eq)和Pd(OH)2/C(34mg，24.5μmol，10％纯度，0.1eq)。将该悬浮液脱气并用H2吹扫3次。将混合物在H2(15psi)、在25℃下搅拌3小时。过滤反应混合物，并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(柱：Luna C18 150*25*5um；流动相：[水(0.225％FA)-乙腈]；B％：17％-44％,10min)纯化并冻干，得到化合物311，作为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6),ppm,8.98(s,1H),8.90(d,J＝2.26Hz,1H),8.72(d,J＝3.01Hz,1H),8.31(d,J＝8.28Hz,1H),8.25(dd,J＝7.03,2.51Hz,1H),7.66-7.73(m,1H),7.43-7.51(m,1H),7.20(dd,J＝8.41,4.14Hz,1H),5.29-5.51(m,1H),4.24-4.39(m,2H),3.96-4.10(m,2H).方法1：RT＝2.41min.；M+H＝330.1.
实例24：N-(3-(5-(1-乙酰基氮杂环丁烷-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)-3-氟氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物267)
步骤A：在加热和超声下，将1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-2-甲酸(394mg，2mmol)，I-4(400mg，1mmol)、1,1,3,3-四甲基胍(226mg，1.96mmol)、NiCl2(dme)(22mg，0.1mmol)、4,4'-二-叔丁基-2,2'-联吡啶(26mg，0.1mol)和2,4,5,6-四(9H-咔唑-9-基)间苯二甲腈(23mg，0.03mmol)溶解在DMSO(9.8mL)。将溶液(0.10mL/min)通过光反应器(反应器体积-0.9mL；PFA管0.04”ID，0.0625”ID；照射面积20cm2；距离LED板1cm；400-750nm LED；8800lm亮度)并且收集在小瓶。将反应通过C18快速色谱法用水中的15％-85％乙腈洗脱纯化并浓缩。将材料通过硅胶色谱、使用庚烷中的40-100％EtOAc洗脱进一步纯化，得到化合物I-30。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.98(s,1H),8.94(d,J＝2.3Hz,1H),8.71(d,J＝4.3Hz,1H),8.22(dd,J＝7.0,2.7Hz,1H),7.70(ddd,J＝9.1,4.1,2.8Hz,1H),7.48(dd,J＝11.1,9.1Hz,1H),7.13(d,J＝4.4Hz,1H),5.55(dd,J＝9.0,6.4Hz,1H),5.48-5.30(m,1H),4.32(dddd,J＝21.7,10.4,6.0,1.4Hz,2H),4.11-3.94(m,6H),1.27(s,9H).
步骤B：将I-30(83mg，0.171mmol)溶解在DCM(1mL)中并且添加TFA(0.5mL)。将反应搅拌3小时并浓缩，溶于MeOH中并通过C18快速色谱法用水中的5％-40％乙腈洗脱进行纯化。冻干产生化合物264，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.38(s,1H),9.07-8.96(m,2H),8.84(d,J＝4.3Hz,1H),8.30(dd,J＝7.0,2.7Hz,1H),7.72-7.62(m,1H),7.52(dd,J＝11.2,9.1Hz,1H),7.33(dd,J＝4.4,1.2Hz,1H),6.04(s,1H),5.41(dtt,J＝57.4,6.1,3.1Hz,1H),4.40-4.25(m,2H),4.27-4.16(m,1H),4.10-3.94(m,2H),3.90-3.77(m,1H),3.06-2.94(m,1H),2.86(dtd,J＝11.7,8.7,4.4Hz,1H).方法1：RT＝1.69min.；M+H＝385.2.
步骤C：将化合物264(20mg，0.052mmol)溶解在DCM(体积：1mL)中并且添加DIEA(0.027mL，0.16mmol)和乙酰氯(5.55μl，0.078mmol)并搅拌60小时。将反应通过SFC在Princeton PPU 250 x 21.2mm柱上，用液体CO2中的20％-60％MeOH洗脱进行纯化，得到化合物267。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.86(dd,J＝3.4,2.2Hz,1H),8.74(d,J＝4.4Hz,0.5H),8.67(d,J＝4.5Hz,0.5H),8.17(dd,J＝6.8,2.7Hz,0.5H),8.13(dd,J＝6.8,2.7Hz,0.5H),7.66(dddd,J＝8.8,4.3,2.7,1.7Hz,1H),7.37(ddd,J＝10.9,9.1,3.7Hz,1H),7.28(dd,J＝4.4,0.8Hz,0.5H),7.18(dd,J＝4.5,0.9Hz,0.5H),5.93(dd,J＝9.2,5.6Hz,0.5H),5.73(dd,J＝9.3,6.1Hz,0.5H),5.37(dtt,J＝57.1,6.1,3.2Hz,1H),4.48-4.32(m,3H),4.24-4.15(m,2H),4.11(ddd,J＝10.3,3.2,1.4Hz,1H),3.05-2.91(m,1H),2.34-2.21(m,1H),2.03(s,1.5H),1.71(s,1.5H).方法2：RT＝0.66min.；M+H＝427.2.
根据上述步骤A中的方案，使用1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-甲酸作为起始原料合成化合物247。
实例25：N-(4-氟-3-(5-(四氢-2H-吡喃-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物288)
将I-6(30mg，0.077mmol)、氯化镍(II)乙二醇二甲基醚络合物(1.7mg，7.8μmol)、1,1,3,3-四甲基胍(53mg，0.46mmol)、4,4'-二-叔丁基-3,3'-联吡啶(2.1mg，7.7μmol)、四氢-2H-吡喃-2-甲酸(60mg，0.46mmol)、和[4,4'-双(叔丁基)-2,2'-联吡啶]双[3,5-二氟-2-[5-甲基-2-吡啶基]苯基]铱(III)六氟磷酸盐(3.90mg，3.84μmol)在加热和超声下溶解在DMSO(769μL)中。将该溶液添加到0.3mL的96特氟隆孔板的孔中并照射3小时(照射面积20cm2；至LED板10cm；400-750nm LED；7600lm亮度)。将所得溶液通过制备型HPLC(沃特斯公司的Atlantis T3 C18 19*50mm*10um柱)，用在水(0.05％TFA)中的乙腈(0.035％TFA)洗脱进行纯化，得到化合物288。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.03(d,J＝2.2Hz,1H),8.73(d,J＝4.9Hz,1H),8.19(dd,J＝6.8,2.7Hz,1H),7.63(ddd,J＝9.1,4.2,2.7Hz,1H),7.37(dd,J＝10.9,9.1Hz,1H),7.32(dd,J＝5.0,0.9Hz,1H),4.92(ddt,J＝2.7,1.4,0.7Hz,1H),4.23(d,J＝10.3Hz,1H),4.17-4.07(m,2H),3.74(td,J＝11.6,2.5Hz,1H),3.37-3.32(m,2H),2.33(p,J＝7.6Hz,2H),2.15-1.98(m,2H),1.92-1.57(m,4H).方法2：RT＝0.89min.；M+H＝396.0.
根据上述方案，使用1,4-二噁烷-2-甲酸作为起始原料合成化合物289。
实例26A和B：(1S,2R)-2-氟-N-(4-氟-3-(5-(吡啶-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)环丙烷-1-甲酰胺或(1R,2S)-2-氟-N-(4-氟-3-(5-(吡啶-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物269和273)
将化合物256(170mg)通过SFC(柱：
OJ-H(250mm*25mm,10um)；流动相：[CO2-MeOH(0.1％NH3H2O]；B％：50％)分离，得到化合物269(峰1，RT＝5.42min)作为黄色固体和化合物273(峰2，RT＝6.75min)作为灰白色固体。
269(峰1):SFC RT：5.42min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm10.75(s,1H),9.48(d,J＝2.26Hz,1H),9.03(d,J＝2.38Hz,1H),8.95(d,J＝2.26Hz,1H),8.74(d,J＝4.14Hz,1H),8.39(dd,J＝6.96,2.57Hz,1H),8.13(d,J＝8.03Hz,1H),7.96(td,J＝7.75,1.69Hz,1H),7.65-7.74(m,1H),7.57(dd,J＝11.11,9.10Hz,1H),7.42(dd,J＝7.22,5.21Hz,1H),4.78-5.06(m,1H),2.26-2.35(m,1H),1.49-1.66(m,1H),1.24-1.33(m,1H).方法1：RT＝2.80min.；M+H＝392.2.
273(峰2):SFC RT：6.75min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm10.75(s,1H),9.48(d,J＝2.08Hz,1H),9.03(d,J＝2.32Hz,1H),8.95(d,J＝2.20Hz,1H),8.74(d,J＝4.52Hz,1H),8.40(dd,J＝7.03,2.51Hz,1H),8.13(d,J＝8.07Hz,1H),7.96(td,J＝7.79,1.77Hz,1H),7.69(dt,J＝8.47,3.53Hz,1H),7.57(dd,J＝11.00,9.17Hz,1H),7.42(dd,J＝7.09,5.14Hz,1H),4.80-5.05(m,1H),2.25-2.34(m,1H),1.48-1.67(m,1H),1.28(dq,J＝13.13,6.67Hz,1H).方法1：RT＝2.82min.；M+H＝392.2.
实例27A和B：(1S,2R)-N-(3-(5-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)-2-氟代环丙烷-1-甲酰胺或(1R,2S)-N-(3-(5-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)-2-氟代环丙烷-1-甲酰胺(化合物268和271)
将化合物339(130mg)通过SFC(柱：OD-H(250mm*25mm,10um)；流动相：[CO2-MeOH(0.1％NH3H2O]；B％：50％)分离，得到化合物271(峰1，RT＝4.58min)作为黄色固体和化合物268(峰2，RT＝8.01min)作为黄色固体。
268(峰2):SFC RT：8.01min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm10.69(s,1H),8.64(d,J＝2.69Hz,1H),8.37(d,J＝2.81Hz,1H),8.32(dd,J＝7.03,2.51Hz,1H),7.61-7.67(m,1H),7.52(dd,J＝11.19,9.11Hz,1H),7.15(d,J＝2.81Hz,1H),4.80-5.03(m,1H),4.41(t,J＝12.29Hz,4H),2.24-2.33(m,1H),1.46-1.67(m,1H),1.27(dd,J＝13.27,6.54Hz,1H).方法1：RT＝2.89min.；M+H＝406.0.
271(峰1):SFC RT：4.58min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm10.75(s,1H),8.70(d,J＝2.69Hz,1H),8.43(d,J＝2.81Hz,1H),8.38(dd,J＝6.97,2.57Hz,1H),7.66-7.77(m,1H),7.52-7.63(m,1H),7.20(d,J＝2.81Hz,1H),4.85-5.08(m,1H),4.47(t,J＝12.23Hz,4H),2.27-2.39(m,1H),1.52-1.72(m,1H),1.33(dq,J＝13.11,6.43Hz,1H).方法1：RT＝2.89min.；M+H＝406.0.
实例28：N-(4-氟-3-(5-(3-甲基吡啶-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)-4-(羟甲基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(化合物277)
步骤A：使用I-28和I-32作为起始原料，以与实例12类似的方式制备中间体I-33。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.70(s,1H),9.04(d,J＝2.45Hz,1H),8.95(d,J＝2.20Hz,1H),8.60-8.66(m,2H),8.55(d,J＝2.20Hz,1H),7.89-7.96(m,2H),7.62(dd,J＝11.00,9.29Hz,1H),7.44-7.52(m,1H),4.64(s,2H),3.31(s,3H),2.57(s,3H),2.46(s,3H).M+H＝473.0.
步骤B：在-78℃下，向I-33(15mg，28.9μmol，1eq，FA)在DCM(1mL)中的溶液中滴加在DCM(0.5mL)中的BBr3(14.5mg，57.9μmol，5.6uL,2eq)。将混合物在N2气氛下在20℃搅拌18小时。添加饱和NaHCO3(3mL)并且将混合物用DCM(10mL)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩，以给出残余物。将残余物通过制备型HPLC(柱：菲罗门公司的Gemini150*25mm*10um；流动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-乙腈]；B％：30％-60％,12min)纯化并冻干，得到化合物277，作为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.00(d,J＝2.20Hz,1H),8.94(d,J＝1.96Hz,1H),8.53-8.63(m,2H),8.51(d,J＝2.20Hz,1H),7.85-7.95(m,1H),7.81(br d,J＝7.34Hz,1H),7.55-7.67(m,1H),7.37(dd,J＝7.46,4.77Hz,1H),4.69(s,2H),2.55(s,3H),2.45(s,3H).方法1：RT＝2.50min.；M+H＝459.0.
实例29：N-(4-氟-3-(5-(3-甲基吡啶-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)-2-(羟甲基)-4-甲基噁唑-5-甲酰胺(化合物334)
步骤A：使用I-28和2-(叔丁氧基甲基)-4-甲基噁唑-5-甲酸作为起始原料，以与实例12类似的方式制备中间体I-35。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.55-10.67(m,1H)9.00(d,J＝2.45Hz,1H)8.91-8.97(m,1H)8.54-8.65(m,2H)8.47-8.53(m,1H)7.96(s,1H)7.80(dd,J＝7.70,0.86Hz,1H)7.55-7.65(m,1H)7.37(dd,J＝7.70,4.77Hz,1H)4.54(s,2H)2.69(s,3H)2.44(s,3H)1.24(s,9H).
步骤B：向I-35(70mg，136.04μmol，1eq)在DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(0.5mL，6.75mmol，49.6eq)。将混合物在25℃搅拌3小时。将反应混合物减压浓缩以去除溶剂。用TEA将pH调节至7。将残余物通过制备型HPLC(柱：菲罗门公司的Gemini 150*25mm*10um；流动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-乙腈]；B％：20％-50％,12min)纯化并冻干，得到化合物334，作为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm,10.63(s,1H),9.00(d,J＝2.20Hz,1H),8.94(d,J＝2.20Hz,1H),8.62(dd,J＝7.09,2.45Hz,1H),8.57(d,J＝3.67Hz,1H),8.51(d,J＝2.20Hz,1H),7.91-8.01(m,1H),7.81(d,J＝7.34Hz,1H),7.60(dd,J＝11.00,9.05Hz,1H),7.37(dd,J＝7.70,4.77Hz,1H),5.83(t,J＝5.99Hz,1H),4.60(d,J＝6.11Hz,2H),2.45(s,6H).方法1：RT＝2.57min.；M+H＝459.0.
实例30：3,3-二氟-N-(4-氟-3-(5-(吡啶-2-基)-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物39)
在N2气氛下，向I-3(3.00g，7.04mmol，1eq)和三丁基(2-吡啶基)锡烷(3.4g，9.1mmol，1.3eq)在DMF(40mL)中的溶液添加Pd(PPh3)4(813mg，703.9μmol，0.1eq)和CuI(134mg，703.9μmol，0.1eq)。将混合物在85℃搅拌2小时。将反应混合物减压浓缩以去除溶剂。将残余物通过硅胶色谱法使用石油醚/乙酸乙酯＝2:1至0:1洗脱进行纯化，得到化合物39，为黄色固体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.36(d,J＝2.3Hz,1H),9.00-8.93(m,2H),8.79-8.75(m,1H),8.26(dd,J＝6.8,2.7Hz,1H),8.19-8.14(m,2H),7.70-7.64(m,1H),7.64-7.56(m,1H),7.46-7.35(m,1H),4.44(td,J＝12.3,3.0Hz,4H).方法2：RT＝0.99min.；M+H＝425.0.
实例31：3,3-二氟-N-(4-氟-3-(5-苯基-2H-吡唑[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物353)
在-5℃-0℃下，向三光气(23mg，0.079mmol)在干燥THF(1mL)中的搅拌溶液中添加在干燥THF(2mL)中的I-36(40mg，0.131mmol)并且在室温下搅拌10分钟。在0℃下滴加在干THF(2mL)中的3,3-二氟氮杂环丁烷盐酸盐(34mg，0.263mmol)和DIEA(51mg，0.394mmol)并且将反应在室温下搅拌1小时。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭并且用EtOAc萃取(50mLX 2)。将合并的有机层用水(20mL)、盐水(10mL)洗涤并且经硫酸钠干燥并真空浓缩。将粗化合物通过硅胶色谱法使用在正己烷中50％EtOAc洗脱进行纯化得到353，为灰白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)9.25(s,1H),9.06-9.05(d,J＝2.8,1H),8.96-8.95(d,J＝2.0,1H),8.52-8.51(d,J＝2.4,1H),8.27-8.25(m,1H),7.80-7.78(d,J＝7.2,2H),7.72-7.67(m,1H),7.56-7.48(m,3H),7.44-7.41(m,1H),4.44-4.38(t,J＝16.4,4H).
表2列出了根据以上实例制备的化合物。
表2
生物测定
本文描述的测定说明了本发明并且不限制本发明的范围。
缩写
如以下本文中使用的缩写具有相应的含义：
CPRG 氯酚红-β-D-吡喃半乳糖苷
ATP 三磷酸腺苷
BSA 牛血清白蛋白
DMSO 二甲亚砜
FBS 胎牛血清
PBS 磷酸盐缓冲盐水
RPMI 1640 罗斯威尔公园纪念研究所(RPMI)1640培养基
用于杜氏利什曼虫无菌无鞭毛体生长抑制的体外测定
将杜氏利什曼虫无菌无鞭毛体寄生虫在37℃下、5％CO2在由以下组成的培养基中生长：RPMI 1640、4mM L-谷氨酰胺、20％加热灭活的FBS、100单位/ml的青霉素和100μg/ml的链霉素、23μM的叶酸、100μM腺苷、22mM D-葡萄糖、25mM MES。使用HCl在37℃将培养基的pH调节至5.5。首先将20μL培养基分配到384孔板中并且然后将100nL DMSO中的本发明化合物添加到板孔中。同时，将对照化合物和DMSO添加到板中，分别作为阳性和阴性对照。然后将40μL寄生虫培养物(9600个寄生虫)添加到板孔中。然后将板放入培养箱中。孵育两天后，将20μL Cell 
(Promega)添加到板孔中。使用Envision阅读器(Perkin Elmer)测量每个孔的发光信号。
用于抑制小鼠巨噬细胞中的利什曼虫的寄生虫血症的测定
该测定测量了使用DNA嵌入染料，SYBR Green染料(INVITROGEN)中以染色利什曼虫细胞核在测定板孔中的寄生虫数量的增加。通过用107个利什曼虫寄生虫通过尾静脉注射感染BALB/c小鼠，可繁殖出杜氏利什曼虫HU3株。使感染的小鼠在感染后9-11周期间发展感染。在此期间，寄生虫在受感染的小鼠脾脏中积聚了大量，并且受感染的小鼠充当了体外测量化合物功效的寄生虫来源。为了测定化合物用于抗利什曼虫活性，将从非感染BALB/c的小鼠中分离出的腹膜巨噬细胞以2x104巨噬细胞/孔的密度接种在384孔板中25mL培养基中(RPMI1640、10％胎牛血清白蛋白、10mM HEPES、1mM丙酮酸钠、1％Pen/Strep)。随后，将接种过的板放入设定为保持37℃的温度和具有5％CO2的气氛的恒温箱中。
第二天，从感染了9-11周的小鼠的脾脏中分离出利什曼虫寄生虫，并将10mL上述培养基中的4×105个分离的寄生虫添加到每个板孔中。然后将板放回培养箱中并使感染进行24小时。巨噬细胞感染完成后，将在上述培养基中也含有5％DMSO的5mL本发明化合物添加到含有被感染巨噬细胞的板孔中。同时，将对照化合物(两性霉素和米替福星)和DMSO添加到板中，分别作为阳性和阴性对照。添加化合物后，将板放回培养箱并且将感染寄生虫的细胞培养5天。培养结束时，将40mL8％的低聚甲醛添加到板孔中并在室温下孵育15分钟。孵育后，吸出板孔中的多聚甲醛，并将40mL的含有0.2％Triton X-100的PBS添加到孔中。孵育15分钟后，再次从孔中吸出溶液，并用PBS中的
Green Dye溶液(1:125,000稀释液)代替。将感染的细胞用Evotec Opera高内涵(high-content)显微镜成像，并且孔中的寄生虫数量通过对用
Green染料染色可见的寄生虫核计数来确定。
用于动质体寄生虫克氏锥虫的生长抑制的测定
可以测定本发明的化合物对在3T3成纤维细胞中培养的克氏锥虫锥虫无鞭毛体的抑制剂活性。该测定是使用哺乳动物级克氏锥虫(无鞭毛体)(其在宿主细胞中的细胞内空间复制)进行。宿主细胞最初感染源自培养物的锥鞭毛体，其迅速侵入并且然后分裂为无鞭毛体。该方案使用已被工程化表达大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因(Lac-Z)的克氏锥虫的Tulahuen株(Antimicr.Agents Chemoth.[抗药性化学制剂]40：2592，1996)。这样允许通过使用底物CPRG和吸光度板读数器进行比色读数。
将3T3成纤维细胞重新悬浮在RPMI-1640培养基中，该培养基不含酚红培养基、其中补充有10％FBS(热灭活的)，100μg/ml青霉素和100μg/ml链霉素。将40μL悬浮液(1,000个细胞)分配到384孔板中，并在37℃的温度下和含有5％CO2的气氛中孵育过夜。第二天，将在DMSO中的100nL本发明化合物添加到含有3T3细胞的板孔中。同时，将对照化合物(苄硝唑和硝呋莫司)和DMSO添加到板中，分别作为阳性和阴性对照。此后，将10μL含10,000克氏锥虫锥鞭毛体的培养基添加到每个板孔中，并将板放回培养箱中。孵育6天后，将10μL试剂溶液(0.6mM CPRG，PBS中的0.6％NP-40)添加到板中并在室温下孵育2小时。然后在SpectraMaxGEMINI荧光计上测量吸光度，以确定每个板孔中存在的克氏锥虫细胞的相对数量。
用于布氏锥虫指明亚种(Trypanosoma brucei brucei)的生长抑制的测定
通过添加发光细胞活力测定法来量化增殖，该测定法基于细胞ATP含量的定量来测量培养物中活细胞的数量，这是代谢活性细胞的指标。
将布氏锥虫指明亚种(Lister 427)株在补充了10％v/v胎牛血清(FBS)并且加10％v/v血清的Hirumi 9(HMI-9)培养基中生长。为了测量细胞增殖抑制，将测试化合物一式两份地连续三倍稀释至384孔白板中，每种化合物得到10倍稀释液。将体积为40μL的布氏锥虫指明亚种培养液(10,000个寄生虫/mL)添加至每个孔中，并将测定板在37℃下于CO2培养箱中培养2天。通过测量ATP水平监测生长抑制，ATP水平用作生长的替代指标。添加40μl的Cell
30分钟后，使用
M1000测量相对发光单位。通过使用HELIOS软件分析数据来确定IC50值。IC50定义为与未经处理的对照相比，抑制布氏锥虫指明亚种野生型株的50％生长的化合物的最低浓度。
表3显示了化合物对以下项的抑制效力(EC50)：体外杜氏利什曼虫无菌无鞭毛体(第2栏)；小鼠腹膜巨噬细胞中的杜氏利什曼虫(第3栏)；克氏锥虫(第4栏)；以及布氏锥虫指明亚种(第5栏)。本发明的化合物的EC50为范围从>10μM至<0.01μM。在特定的实施例中，本发明的化合物的EC50<1μM、<500nM、<100nM或<50nM。
表3
表4比较了式(I)的化合物与具有不同核心的化合物的活性。除非另有说明，否则EC50值是从上述测定中获得的。
表4
应理解，本文描述的实例和实施例仅用于举例说明目的，其各种修饰或改变对于本领域技术人员将是明了的，并包括在本申请的精神和范围内和所附权利要求书的范围内。本文引用的所有出版物、专利、和专利申请都出于所有目的，通过引用特此结合。
Claims (20)
1.一种式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐、或其立体异构体；其中
环A是苯基或吡啶基；
R1选自：
(a)未经取代的或经1至3个独立地选自卤素和C3-6环烷基的取代基取代的C1-6烷基；并且所述C3-6环烷基是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素和C1-4烷基的取代基取代的；
(b)未经取代的或经C1-4卤代烷基取代的C1-4烷氧基；
(c)-NR5aR5b，其中R5a和R5b独立地是氢、C1-4烷基或C1-4卤代烷基；或者R5a和R5b与它们所附接的氮原子一起形成4-至7-元杂环烷基，所述杂环烷基包含1至3个独立地选自N、O和S的杂原子作为环原子；
其中所述4至7-元杂环烷基是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、C1-4烷基和C1-4烷氧基的取代基取代的；或者在所述4-至7-元杂环烷基的相同或不同的环原子上的两个取代基与它们所附接的原子一起形成附接至所述4-至7-元杂环烷基上的螺环、桥环或稠合环B；
其中环B是C3-6环烷基或包含1至3个独立地选自N、O或S的杂原子作为环原子的3-至7-元杂环烷基；
(d)单环的C3-6环烷基、C3-6环烯基或螺戊基；其各自是未经取代的或经1至3个独立地选自卤素、氰基、C1-4烷基和C1-4卤代烷基和C1-4烷氧基的取代基取代的；
(e)苯基或包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子作为环原子的5-6元杂芳基；其各自是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、氰基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、二-C1-4烷基氨基-C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4羟烷基、C1-4烷氧基、和C3-6环烷基的取代基取代的；
R2和R7独立地是氢或C1-4烷基；
R3是氢或卤素并且n是0或1；并且
R4选自
(a)氢；
(b)卤素；
(c)未经取代的或经C3-6环烷基取代的C1-6卤代烷基或C1-6烷基；并且所述C3-6环烷基是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素和C1-4烷基的取代基取代的；
(d)-NR6aR6b，其中R6a是氢或C1-4烷基；R6b是氢、C1-4烷氧基羰基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基或未经取代的或经C1-4烷氧基取代的C1-4烷基；或R6a和R6b与它们所附接的氮原子一起形成4-至7-元杂环烷基，所述杂环烷基包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子作为环原子；
其中所述4-至7-元杂环烷基是未经取代的或经1至2个独立地选自以下的取代基取代的：卤素、氰基、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4烷氧基、氧代、1,1-二氧代、-C(O)-OR7或是包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基；或者在所述4-至7-元杂环烷基的相同或不同的环原子上的两个取代基与它们所附接的原子一起形成附接至所述4-至7-元杂环烷基上的螺环、桥环或稠合环C；
其中环C选自C3-6环烷基和包含1至3个独立地选自N、O或S的杂原子作为环原子的3-至7-元杂环烷基；并且独立地是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素和氧代的取代基取代的；
(e)C3-6环烷基；
(f)包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子作为环原子的4-至6-元杂环烷基；并且是未经取代的或经以下基团取代的：-C(O)OR8，-C(O)R8，其中R8是未经取代的或经1至2个卤素取代基取代的C1-4烷基和芳基C1-4烷基；以及
(g)包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子作为环原子的5-至6-元杂芳基；其是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素、C1-4烷基、C1-4羟烷基和C3-6环烷基的取代基取代的。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中环A是苯基。
3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中环A是吡啶基。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自-(CH2)1-3CF3、-(CH2)-CH(CH3)-CF3、-(CH2)-C(CH3)3、-O(CH2)2CF3、-(CH2)0-2-环丙基、-(CH2)0-2-环丁基、-NHCH3、-N(CH3)2、-N(CD3)2、-N(CH3)(CH2CH3)、-N(CH3)(CH2CF3)、
以及
5.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是氮杂环丁烷基，其是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素和C1-4烷基的取代基取代的；或在所述氮杂环丁烷基的同一环原子上的两个取代基与它们所附接的环原子一起形成附接到所述氮杂环丁烷基环上的螺环丙基或螺四氢呋喃基。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自
以及
7.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是卤素并且n是1。
8.根据权利要求7所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是氟。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4选自氢、氯、溴、甲基、异丙基、-(CH2)1-2CH(CH3)2、-(CH2)0-1C(CH3)3、-C(CH3)2CH2CH3、-CH(CH3)(CH2)1- 2CH3、-CH2-环丁基、-(CH2)0-1CF3、-NH-(CH2)0-1CH3、-N-(CD3)2、-N(CH3)2、-NH-CH-(CH3)2、-NH-(CH2)-CH-(CH3)2、-NHC(O)OCH(CH3)2、-NH(CH2)2OCH3, 
以及
10.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是-NR6aR6b；
R6a是氢或C1-4烷基；
R6b是氢、C1-4烷氧基羰基或未经取代的或经C1-4烷氧基取代的C1-4烷基；或者R6a和R6b与它们所附接的氮原子一起形成4-至6-元杂环烷基，所述杂环烷基任选地包含1至2个独立地选自N、O和S的另外的杂原子作为环原子；
其中所述4-至6-元杂环烷基是未经取代的或经1至2个独立地选自以下的取代基取代的：卤素、氰基、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4烷氧基和氧代；或者在所述4-至6-元杂环烷基的相同或不同的环原子上的两个取代基与它们所附接的原子一起形成附接至所述4-至6-元杂环烷基上的螺环、桥环或稠合环C；
其中环C选自C3-6环烷基；以及包含1至3个独立地选自N、O或S的杂原子作为环原子的3-至5-元杂环烷基；并且环C独立地是未经取代的或经1至2个独立地选自卤素和氧代的取代基取代的。
11.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4选自
12.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4选自
以及
13.一种化合物或其药学上可接受的盐，其选自表1中披露的化合物1至353。
14.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1-13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及至少一种赋形剂。
15.一种组合，所述组合包含根据权利要求1-13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种治疗活性剂。
16.根据权利要求1-13中任一项所述的化合物在制造用于治疗选自利什曼病、恰加斯病和非洲人类锥虫病的障碍或疾病的药物中的用途。
17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述疾病是选自内脏利什曼病和皮肤利什曼病的利什曼病。
18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述第二药剂选自葡萄糖酸锑、葡甲胺锑酸盐、两性霉素、米替福星和巴龙霉素。
19.根据权利要求16所述的方法，其中，所述疾病是恰加斯病；并且所述第二药剂选自苄硝唑、硝呋莫司和两性霉素。
20.根据权利要求16所述的方法，其中，所述疾病是非洲人类锥虫病；并且所述第二药剂是喷他脒、苏拉明、美拉胂醇、依氟鸟氨酸和硝呋莫司。
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