CN110642850A

CN110642850A - 一种异黄烷类化合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN110642850A
Application number: CN201910848684.3A
Authority: CN
Inventors: 龚云; 张鹏; 杨秀伟; 刘晓艳
Original assignee: Zhuzhou Qianjin Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Zhuzhou Qianjin Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2019-09-09
Filing date: 2019-09-09
Publication date: 2020-01-03

Abstract

本发明提供了一种异黄烷类化合物及其制备方法和应用。该异黄烷类化合物的结构为首次报道，并且其来源于鸡血藤，可以作为鸡血藤中异黄烷类物质鉴别的标准品。本发明提供的异黄烷类化合物是从鸡血藤正品的乙酸乙酯萃取物中分离得到，采用同样的制备方法，我们并未在其他鸡血藤地方药材中分离得到该化合物，因此，该异黄烷类化合物还有望作为鉴别鸡血藤正品与地方药材的指纹化合物。

Description

一种异黄烷类化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于天然植物化学领域，更具体地，涉及一种从鸡血藤中获得的异黄烷类化合物及其制备方法和应用。

背景技术

黄烷类化合物是自然界中广泛存在的一类天然产物，已知的黄烷类化合物大部分是从天然植物中提取分离发现的。已知的黄烷类化合物中，大部分都具有生理活性和药理活性，例如是降低血液中胆甾醇含量、抗菌、抗病毒等。因此黄烷类化合物如果利用得当，可以开发具有重要价值的新药并对农业化学作出重要贡献。

鸡血藤的植物来源复杂，分属于豆科、五味子科的6个属，包含15个种及2个变种，2010版《中国药典》规定豆科植物密花豆的干燥藤茎为正品，其他的植物作为地产药材使用。鸡血藤中化学成分包括黄酮类、木脂素类、萜类、甾醇类、蒽醌类、酚酸类及其苷类等。其中黄酮类是主要成分，也是一类重要的活性物质。鸡血藤所含的黄酮类物质包括了异黄酮类、二氢黄酮类、二氢黄酮醇类、查尔酮类、花青素类、紫檀烷类、异黄烷类等。然而目前对这些物质的研究还不够深入，无论是从定性角度还是定量角度均不能完全把鸡血藤中的异黄烷类物质识别出来。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种异黄烷类化合物。该异黄烷类化合物的结构为首次报道，并且其来源于鸡血藤，从鸡血藤的提取物中分离得到，可以为鸡血藤中异黄烷类物质的鉴别提供标准品。

本发明的另一目的在于提供所述异黄烷类化合物的制备方法。

本发明的另一目的在于提供所述异黄烷类化合物的应用。

本发明的上述目的通过如下技术方案予以实现：

一种异黄烷类化合物，所述异黄烷类化合物具有如式(Ⅰ)所示结构式：

所述异黄烷类化合物药学上可接受的盐，具有如式(Ⅱ)所示结构式：

M为碱金属或碱土金属，n＝1或2。

该异黄烷类化合物是首次从植物中分离得到的异黄烷类化合物，可以命名为7,2'-二羟基-8-甲氧基-4,5’-亚甲二氧基异黄烷-4-醇；其可以作为鸡血藤中异黄烷类物质鉴别的标准品。

尽管现有技术中已经公开了鸡血藤中含有异黄烷类物质，然而从文献的报道结果来看，分离得到的含量仅仅是毫克级的，在发明人的实验验证中，也证实了，我们从几十公斤的鸡血藤药材中，仅分离出包括异豆素、紫苜蓿烷等7种异黄烷类物质，其分离含量约为几毫克～几十毫克。本申请所述异黄烷类化合物正是其中一种，因此，是否检测本申请所述异黄烷类物质会直接影响鸡血藤中异黄烷类物质含量测定结果的全面性和准确性。

本申请中，所述碱金属选自钾、钠、锂；所述碱土金属选自钙、镁、钡。

所述异黄烷类化合物的制备方法，包括如下步骤：

S1.鸡血藤正品药材加水回流提取，浓缩，干燥，获得鸡血藤干浸膏；

S2.将S1.所得鸡血藤干浸膏用水溶解，采用乙酸乙酯进行萃取，得到乙酸乙酯萃取物；

S3.用氯仿：甲醇(70～90):1的体系在硅胶柱上洗脱S2.所得乙酸乙酯萃取物，得到组分Fr.1；

S4.Fr.1经硅胶色谱以(50～70):1氯仿-甲醇的混合体系进行洗脱，收集得到的组分即Fr.1-1；

S5.Fr.1-1浓缩至干，用甲醇复溶，在3～6℃条件下静置，直到不再有晶体析出，进行固液分离，收集液相，浓缩，转移至硅胶柱中，并依次用体积比100:1、80:1、40:1、20:1、10:1、5:1、1:1的氯仿-甲醇混合溶液对浓缩后的液相进行梯度洗脱，收集1:1洗脱得到的组分，命名为Fr.1-1-7；

S6.Fr.1-1-7再经硅胶柱色谱依次用体积比80:1、40:1的氯仿-甲醇混合溶液进行洗脱，收集40:1的洗脱液，即为Fr.1-1-7b，Fr.1-1-7b经RP-SP-HPLC在以乙腈:水＝(30-40):(60-70)，ν/ν的条件下制备得到所述异黄烷类化合物。

本发明中，所述鸡血藤正品药材为豆科植物密花豆Spatholobus suberectusDunn.的干燥藤茎。

优选地，S1.中，所述鸡血藤与水的质量比为1:5。

优选地，S1.中，提取次数为2次。

优选地，S1.中，所述浓缩为减压浓缩。

优选地，S1.中，所述干燥为75℃真空干燥。

优选地，S2.中，所述萃取的次数为8次。

优选地，S3.中，所述氯仿与甲醇的体积比为(70-90):1。

更优选地，S3.中，所述氯仿与甲醇的体积比为80:1。

优选地，S4.中，所述氯仿与甲醇的体积比为(50-70):1。

更优选地，S4.中，所述氯仿与甲醇的体积比为60:1。

S5.Fr.1-1经硅胶色谱以氯仿-甲醇依次用100:1、80:1、40:1、20:1、10:1、5:1、1:1的比例进行洗脱时，进行TLC跟踪，当用同一比例的洗脱剂得到的洗脱液显示成分发生变化时，更换下一种比例的洗脱剂。

所述异黄烷类化合物在作为检测鸡血藤中异黄烷类物质含量的标准品中的应用。另外地，采用同样的制备方法，我们并未在其他鸡血藤地方药材中分离得到该化合物，因此，该异黄烷类化合物有望作为鉴别鸡血藤正品与地方药材的指纹化合物。

现有技术中，揭示带有异黄烷类结构化合物具有一定的生物活性，例如是抗病毒、抗肿瘤等活性，我们推断本申请所述异黄烷类结构化合物也有类似的生物活性。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明公开一种新的异黄烷类化合物，该异黄烷类化合物从鸡血藤正品中提取分离获得，可以作为检测鸡血藤中黄酮类物质含量的标准品。另外地，采用同样的制备方法，我们并未在其他鸡血藤地方药材中分离得到该化合物，因此，该异黄烷类化合物有望作为鉴别鸡血藤正品与地方药材的指纹化合物。

附图说明

图1为本发明所述异黄烷类化合物的质谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的简单修改或替换，均属于本发明的范围；若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1化合物7,2'-二羟基-8-甲氧基-4,5’-亚甲二氧基异黄烷-4-醇的提取和分离

鸡血藤正品药材2016年3月采自云南，并鉴定为豆科植物密花豆Spatholobussuberectus Dunn.的干燥藤茎，凭证标本(Y008-1608010)保存在北京大学药学院天然药物及仿生药物国家重点实验室。

称取干燥鸡血藤药材70kg，加5倍量水回流提取2次，每次2h，合并提取液，减压浓缩，75℃真空干燥7h，得鸡血藤干浸膏6kg(收率为8.57％)，留存1kg，其余5kg用6L去离子水溶解，依次用适量乙酸乙酯萃取8次，分别合并各萃取液，减压浓缩蒸干，得乙酸乙酯萃取物320g(按投料生药计算收率为0.46％)。

取乙酸乙酯萃取物(270g)进行硅胶柱色谱分离，用氯仿-甲醇体系80:1洗脱，得组分Fr.1。

Fr.1(19.9g)经硅胶柱色谱，氯仿-甲醇60:1洗脱，得到Fr.1-1，Fr.1-1浓缩至干，用甲醇复溶，在4℃条件下静置，直到不再有晶体析出，固液分离，剩余液相浓缩，转移至硅胶柱中，并依次用体积比100:1、80:1、40:1、20:1、10:1、5:1、1:1的氯仿-甲醇混合溶液对浓缩后的液相进行洗脱，每个梯度洗脱3个柱体积，收集1:1洗脱得到的组分，即为Fr.1-1-7，Fr.1-1-7再经硅胶柱色谱依次用体积比80:1、40:1的氯仿-甲醇混合溶液进行洗脱，每个梯度洗脱3个柱体积，收集40:1的洗脱液，即为Fr.1-1-7b，Fr.1-1-7b经RP-SP-HPLC在以乙腈:水＝36:64，ν/ν的条件下制备得到所述异黄烷类化合物(19.8mg，tR＝58.2min)。

实施例2

化合物7,2'-二羟基-8-甲氧基-4,5’-亚甲二氧基异黄烷-4-醇在提取和分离过程中，S3.中氯仿与甲醇体系的体积比也可以用70:1在硅胶柱上洗脱S2.所得乙酸乙酯萃取物，得到组分Fr.1，Fr.1经硅胶色谱以50:1的氯仿-甲醇混合体系进行洗脱，收集得到的组分即Fr.1-1，其他步骤均按实施例1所述提取和分离过程进行，得到本发明所述化合物。

实施例3

化合物7,2'-二羟基-8-甲氧基-4,5’-亚甲二氧基异黄烷-4-醇在提取和分离过程中，S3.中氯仿与甲醇体系的体积比也可以用90:1在硅胶柱上洗脱S2.所得乙酸乙酯萃取物，得到组分Fr.1，Fr.1经硅胶色谱以70:1的氯仿-甲醇混合体系进行洗脱，收集得到的组分即Fr.1-1，其他步骤均按实施例1所述提取和分离过程进行，得到本发明所述化合物。

实施例4

化合物7,2'-二羟基-8-甲氧基-4,5’-亚甲二氧基异黄烷-4-醇在提取和分离过程中，S6.中Fr.1-1-7b经RP-SP-HPLC可以在以乙腈:水＝30:70，ν/ν的条件下制备得到本发明所述化合物。

实施例5

化合物7,2'-二羟基-8-甲氧基-4,5’-亚甲二氧基异黄烷-4-醇在提取和分离过程中，S6.中Fr.1-1-7b经RP-SP-HPLC可以在以乙腈:水＝40:60，ν/ν的条件下制备得到本发明所述化合物。

实施例6化合物7,2'-二羟基-8-甲氧基-4,5’-亚甲二氧基异黄烷-4-醇的结构鉴定

所述异黄烷类化合物的氢谱、碳谱、质谱数据如下：

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:4.29(1H,br dd,J＝9.7,3.5Hz,H-2α),3.61(1H,t,J＝9.7Hz,H-2β),3.56(1H,ddd,J＝9.7,7.0,3.5H,H-3β),5.52(1H,d,J＝7.0Hz,H-4α),6.99(1H,d,J＝8.5Hz,H-5),6.54(1H,d,J＝8.5Hz,H-6),6.52(1H,s,H-3'),6.97(1H,s,H-6'),5.95(1H,d,J＝0.9Hz,-O-CH2-O-),5.91(1H,d,J＝0.9Hz,-O-CH2-O-),3.66(3H,s,8-OMe),9.59(1H,s,7-OH)；

13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:66.2(C-2),40.6(C-3),78.2(C-4),125.7(C-5),110.1(C-6),151.3(C-7),135.8(C-8),149.7(C-9),112.5(C-10),118.5(C-1'),153.9(C-2'),93.3(C-3'),147.6(C-4'),141.2(C-5'),105.5(C-6'),60.2(8-OMe),101.2(-O-CH2-O-)。

该化合物HR-ESI-MS谱给出准分子离子峰为m/z 331.0840，[M-H]^-(calcd forC₁₇H₁₅O₇,331.0823)，详见图1。

对比例1

取昆明鸡血藤，并鉴定为豆科植物崖豆Millettia dielsiana Harms的干燥藤茎。

称取干燥昆明鸡血藤药材70kg，加5倍量水回流提取2次，每次2h，合并提取液，减压浓缩，75℃真空干燥7h，得昆明鸡血藤干浸膏5.5kg(收率为7.86％)，留存1kg，其余4.5kg用6L去离子水溶解，依次用适量乙酸乙酯萃取8次，分别合并各萃取液，减压浓缩蒸干，得乙酸乙酯萃取物285g(按投料生药计算收率为0.41％)。取乙酸乙酯萃取物(255g)进行硅胶柱色谱分离，用氯仿-甲醇体系80:1洗脱，收集洗脱液，洗脱液进行HPLC检测，并未发现所述异黄烷类化合物。

Claims

1.一种异黄烷类化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，所述异黄烷类化合物具有如式(Ⅰ)所示结构式：

所述异黄烷类化合物药学上可接受的盐具有如式(Ⅱ)所示结构式：

M为碱金属或碱土金属，n＝1或2。

2.权利要求1所述异黄烷类化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S3.用氯仿：甲醇体积比(70～90):1的体系在硅胶柱上洗脱S2.所得乙酸乙酯萃取物，得到组分Fr.1；

S4.Fr.1经硅胶色谱以(50～70):1的氯仿-甲醇的混合体系进行洗脱，收集得到的组分即Fr.1-1；

S6.Fr.1-1-7再经硅胶柱色谱依次用体积比80:1、40:1的氯仿-甲醇混合溶液进行洗脱，收集40:1的洗脱液，即为Fr.1-1-7b，Fr.1-1-7b经RP-SP-HPLC在以乙腈:水＝(30～40):(60～70)，ν/ν的条件下制备得到所述异黄烷类化合物。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，S1.中，所述鸡血藤与水的质量比为1:5。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，S1.中，提取次数为2次，所述浓缩为减压浓缩。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，S1.中，所述干燥为75℃真空干燥。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，S2.中，所述萃取的次数为8次。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，S3.中，所述氯仿与甲醇的体积比为80:1。

8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，S4.中，所述氯仿与甲醇的体积比为60:1。

9.权利要求1所述异黄烷类化合物在作为检测鸡血藤中异黄烷类物质含量的标准品中的应用。

10.权利要求1所述异黄烷类化合物在作为识别鸡血藤正品与地方药材的指纹化合物中的应用。