CN110638893B - 一种抗hpv感染的药物组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种具有抗HPV感染的组合物及其应用，属于医药卫生技术领域。一种组合物主要由紫草粉碎物、川黄柏粉碎物、黄芪粉碎物等组成，可以制成散剂、片剂、胶囊或软膏剂。另一种组合物主要由紫草醇提取物、川黄柏水提取物、黄芪水提取物，再加入丙二醇、去离子水和抗菌肽等组成，可以制成拴剂、凝胶剂、洗剂、泡沫剂或软膏剂。本发明通过各种原料的协同作用，具有清热燥湿、解毒祛瘀、增强机体免疫功能、有效抑制和清除HPV病毒，还具有消炎作用，可显著防止HPV病毒的再次感染；本发明所述的抗HPV感染组合物，可用于预防和治疗HPV感染引发的临床症状，特别是寻常疣、扁平疣、外阴癌、肛门癌、宫颈癌等。

Description

一种抗HPV感染的药物组合物及其应用
技术领域
本发明属于医药卫生技术领域，具体涉及一种抗HPV感染的药物组合物及其应用。
背景技术
宫颈癌目前已成为威胁全球女性健康的首要恶性肿瘤之一，每年世界各地新发病率及致死率都在不断上升且发病年龄逐渐趋于年轻化。全球每年新发病例数高达50万，其中发展中国家的比率达50％以上，每年全球大约有20万女性死于该病，已严重威胁女性的身心健康。在我国，每年新发宫颈癌病例数达14万。早期发现和治疗宫颈癌及癌前病变是降低病死率的主要方法。
人乳头瘤病毒(Human Papilloma Virus，HPV)是一种环状DNA病毒，人是其唯一宿主。目前研究已证明高危型HPV的感染是导致宫颈癌病变及宫颈癌的根本病因，其中高危型HPV16和HPV18型时引起宫颈癌中最常见且最重要两种类型。据报道，HPV16与宫颈鳞癌发病最为密切。宫颈癌发病及分型中宫颈鳞癌占75％～80％，腺癌占20％～25％。基因型中E6和E7基因已被证实是HPV病毒致癌基因。E6/E7的持续表达是恶性肿瘤转化和维持的关键因素。E6/E7的表达水平与宫颈病变严重程度有一定相关性。研究表明通过沉默E6/E7的表达、干扰E6/E7基因的转录翻译均可达到抗肿瘤的目的。
宫颈癌的治疗目前主要有放疗、化疗和手术三种，对于中晚期的宫颈癌患者，药物治疗仍是主要的方法之一。但目前治疗宫颈癌的药物有限，找到合理有效的治疗药物仍是研究的重点。我国拥有丰富的中药资源，而且已有几千年的应用传统。中药含有多种活性成分，药理作用广泛，可从多层面、多环节、多靶点发挥作用。另外中药抗肿瘤还具有副反应小、安全性高、使用方便等优势，因此具有广阔的前景。
发明内容
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：
本发明提供了一种抗HPV感染的药物组合物，其特征在于该药物组合物由以下重量份数的组分组成：1～25份的紫草粉碎物、5～30份的川黄柏粉碎物和5～30份的黄芪粉碎物。
所述的药物组合物由以下重量份数的组分组成：1～25份的紫草粉碎物、5～30份的川黄柏粉碎物、5～30份的黄芪粉碎物和1～10份的蒲公英粉碎物、1～10份的绿茶粉碎物、1～10份的金银花粉碎物、1～10份的苦参粉碎物、1～10份黄精粉碎物、1～10份当归粉碎物、1～10份鸦胆子粉碎物、1～10份土茯苓粉碎物、1～10份鱼腥草粉碎物、1～10份杜仲粉碎物、1～10份苍术粉碎物和1～10份北豆根粉碎物中的一种或一种以上的组合物。
所述的抗HPV感染的药物组合物，其特征在于该药物组合物加入药学上可接受的辅料制成临床上或药学上可接受的剂型，所述的剂型为散剂、片剂、胶囊或软膏剂。
本发明还提供了另一种抗HPV感染的药物组合物，其特征在于该药物组合物由以下重量份数的组分组成：0.1～10份的紫草醇提取物、0.1～10份的川黄柏水提取物、0.1～10份的黄芪水提取物、1～35份的丙二醇、1～40份的去离子水和0.1～10份的抗菌肽。
所述的另一种抗HPV感染的药物组合物由以下重量份数的组分组成：0.1～10份的紫草醇提取物、0.1～10份的川黄柏水提取物、0.1～10份的黄芪水提取物、1～35份的丙二醇、1～40份的去离子水、0.1～10份的抗菌肽和0.1～10份的蒲公英醇提取物、0.1～10份的绿茶醇提取物、0.1～10份的金银花醇提取物、0.1～10份的苦参水提取物、0.1～10份黄精水提取物、0.1～10份当归水提取物、0.1～10份鸦胆子水提取物、0.1～10份土茯苓水提取物、0.1～10份鱼腥草醇提取物、0.1～10份杜仲醇提取物、0.1～10份北豆根水提取物和0.1～15份冰片中的一种或一种以上的组合物。
所述的另一种抗HPV感染的药物组合物，其特征在于该药物组合物加入药学上可接受的辅料制成临床上或药学上可接受的剂型，所述的剂型为拴剂、凝胶剂、洗剂、泡沫剂或软膏剂。
本发明提供了两种抗HPV感染的药物组合物，具有以下优势：
1、本发明提供的抗HPV感染的药物组合物，立足于HPV发病机理和治疗原理，选用了具有提高机体免疫功能，祛湿燥热、清热解毒、抗病毒、消炎等功效成分的中药，选料配伍科学合理，协同增效；本发明的产品涂抹于患处以后，能迅速扩散至不适处，深入肌理，可显著抑制和清除HPV病毒，并防止HPV病毒再次感染，可用于预防和治疗HPV感染引发的临床症状，特别是对寻常疣、扁平疣、外阴癌、肛门癌、宫颈癌等的疗效显著；
2、本发明的提供的两种药物组合物，分别采用超微粉破碎技术和低温萃取工艺，其中超微粉碎后的中药材细胞壁破碎率大大得以提高，从而有利于药物有效成分的释放和吸收，提高其生物利用度和药效；而另一种药物组合物则根据中药材中有效成分的特性，采用分类低温萃取工艺，可使中药中的有效成分最大限度得以提取出来，并保持其生物活性，提高治疗效果；
3、本发明的药物组合物，来源丰富，制作方法简单，适用于规模化的工业生产；
4、本发明采用天然中药原料，质量可控，对人体无副作用；
具体实施方式
实施例1～实施例4 一种抗HPV感染的药物组合物散剂的制备
表1为实施例1～实施例4的一种抗HPV感染的药物组合物的具体配方。
表1 本发明实施例1～实施例4的4个具体配方
Figure BSA0000193277450000021
实施例1～实施例4中A1～A4制备方法：
(1)分别将清洗后的紫草、川黄柏、黄芪、绿茶、金银花、蒲公英、苦参、黄精、当归、鸦胆子、土茯苓、鱼腥草、北豆根在45～50℃下烘干至恒重；
(2)按各配方中的重量份数分别称取烘干后的中药材，混合后置于超微粉碎机中粉碎，得到超微粉中药材粉末，其粒径为0.1～75μm，其均匀度的变异系数小于5％；即分别获得抗HPV感染的药物组合物散剂A1、A2、A3和A4。
实施例5 一种抗HPV感染的药物组合物软膏剂的制备
药物组合物组成：实施例1～实施例4中A1～A4号配方
制备方法：称取实施例1～实施例4中A1～A4药物组合物，加入20％～30％的麻油，搅拌均匀调成软膏，即获得抗HPV感染软膏B1～B4。
实施例6～实施例8 另一种抗HPV感染药物组合物的制备
表2 另一种抗HPV感染的药物组合物的具体配方
Figure BSA0000193277450000031
实施例6～实施例8中C1～C3的制备方法：
(1)将各中药清洗除杂后，在40℃下烘干备用；
(2)将紫草、绿茶、蒲公英、金银花、鱼腥草、杜仲中分别加入乙醇，在35～45℃下进行低温萃取三次，过滤，合并滤液，浓缩至适量，分别得到各中药材的醇提取物；
(3)然后将川黄柏、黄芪和苦参、黄精、当归、鸦胆子、土茯苓、北豆根分别加入去离子水在40～50℃下进行低温萃取三次，过滤，合并滤液，浓缩至适量，分别得到各中药材的水提取物；
(4)按配方C1～C3分别称取适当的提取物，再加入丙二醇、抗菌肽和水等，搅拌均匀后，即得到所述的抗HPV感染的药物组合物C1～C3。
实施例9 另一种抗HPV感染药物组合物凝胶剂的制备
药物组合物组成：实施例6中C1配方。
制备方法：取卡波姆1.2份(重量份数，下同)溶胀于84.8份去离子水中，静置至溶胀完全后，加入预先混合好的丙二醇7份和生物杀菌剂BioMAPAs 2份(皓尔生物)，抗HPV感染的药物组合物C1 5份，搅拌混合均匀，然后调节pH至4.4-4.8，分装，即可。
实施例10 另一种抗HPV感染的药物组合物栓剂的制备
药物组合物组成：实施例7中C2配方。
制备方法：将3份抗HPV感染的药物组合物C2，3份生物杀菌剂BioMAPAs与4份的聚山梨酯80混匀；再将聚氧乙烯硬脂酸酯89份，置于水浴上加热使熔化，加入上述药液，搅拌均匀，罐装，每只装量2.5g～3.0g，即制成拴剂。
实施例11 另一种抗HPV感染的药物组合物洗剂的制备
药物组合物组成：实施例8中C3配方。
制备方法：将20份抗HPV感染的药物组合物C3，20份生物杀菌剂BioMAPAs和加入120份吐温80混合均匀后，加入乙醇2份，搅拌均匀后加入注射用水838份，搅匀，分装，得浓溶液，使用时加水稀释10倍。
实施例12 另一种抗HPV感染的药物组合物软膏剂的制备
药物组合物的组成：实施例8中C3配方。
制备方法：将100份的凡士林在控温80～100℃下熔化后，控温115～120℃灭菌，将已灭菌的凡士林冷却至70～75℃；将羊毛脂5份在120℃灭菌；将二甲亚砜3.5份在60℃左右熔化；将凡士林加入配制罐中，在搅拌下将二甲亚砜和羊毛脂倒入共熔；然后将10份的抗HPV的药物组合物C3加入配制罐中，搅拌均匀，即成。
以下通过具体试验例来说明本发明抗HPV感染的药物组合物的有益效果。
试验例1 对HPV16、HPV18基因抑制作用的影响
1 试验材料
1.1 细胞系
H8细胞系，HPV16阳性的人宫颈癌上皮细胞株，源自中国医学科学院基础医学研究所；
Hela细胞系，HPV18阳性的人宫颈癌细胞株，源自中国医学科学院基础医学研究所。
1.2 试验药物
对照组：试剂空白
药物组：实施例9所得的凝胶剂
1.3 试剂
DMEM细胞培养基：Hyclone公司
RPMI1640培养液：杭州吉诺生物医药技术有限公司
胎牛血清：天津市川页生化制品有限公司
RE-PCR(AMV)：购自大连宝生物公司
胰蛋白酶：Sigma公司
MTT：Sigma公司
2 试验方法
2.1 细胞培养
H8细胞在含2％胎牛血清的DMEM培养基中，37℃5％的CO2饱和湿度恒温培养箱中培养。Hela细胞在10％胎牛血清的RPMI-1640培养基中，置于37℃下，5％的CO2饱和湿度恒温培养箱中培养。
2.2 细胞形态观察
采用光学显微镜观察和荧光染色观察法。
2.3 细胞活性检测
采用MTT比色法检测细胞生长抑制率，采用流式细胞仪检测细胞凋亡。
2.4 HPV16E6 mRNA和HPV18E7 mRNA的表达
采用RT-PCR检测。
3 试验结果
3.1 对H8细胞和Hela细胞的生长的抑制作用
表3 对H8细胞24、36、48h的相对生长率和24h时细胞凋亡率的影响
Figure BSA0000193277450000051
注：n＝4，*表示与对照组相比P＜0.05，**表示与对照组相比P＜0.01
由表3可见，采用抗HPV感染的药物凝胶剂组处理HPV16阳性的人宫颈癌上皮细胞24h、36h、48h，均可显著抑制H8细胞的生长(P＜0.01)；作用24h时，可显著促进H8细胞的凋亡(P＜0.05)。
荧光显微镜观察H8细胞凋亡形态，结果显示：作用H8细胞24h后，对照组细胞核形态较为完整，染色质较均匀；而抗HPV感染药物凝胶剂组处理的H8细胞可见细胞核染色质聚集、核固缩、核破裂、出现凋亡小体等。
表4 对Hela细胞24、48、72h的相对生长率和24h时细胞凋亡率的影响
Figure BSA0000193277450000052
注：n＝4，*表示与对照组相比P＜0.05，**表示与对照组相比P＜0.01
由表4可见，采用抗HPV感染的药物凝胶剂组处理HPV18阳性的人宫颈癌Hela细胞24h、48h、72h，均可显著抑制Hela细胞的生长(P＜0.01)；作用24h时，对Hela细胞的凋亡率显著提高(P＜0.01)。
3.2 对HPV16E6 mRNA的表达的影响
表5 对处理H8细胞HPV16E6 mRNA的表达的影响
对照组 药物组
表达量 3.981±0.489 0.689±0.098<sup>**</sup>
注：n＝3，*表示与对照组相比P＜0.05，**表示与对照组相比P＜0.01
作用HPV16型基因阳性的人宫颈癌上皮细胞H8 72小时后(见表5)，结果可见，与对照组相比，采用抗HPV感染的药物凝胶剂组处理的H8细胞中HPV16E6 mRNA表达量显著降低(P＜0.01)。由此可见本发明的抗HPV感染的药物组合物可显著抑制致癌基因HPV16E6 mRNA的表达，从而阻断细胞转化或致癌变。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (2)

1.一种抑制HPV16或18型感染引发宫颈癌的药物组合物，其特征在于，该药物组合物由以下重量份数的组分组成：1份的紫草醇提取物、1.5份的川黄柏水提取物、2份的黄芪水提取物、3份的丙二醇、2份的去离子水、0.2份的抗菌肽和0.5份的绿茶醇提取物。
2.根据权利要求1所述的抑制HPV16或18型感染引发宫颈癌的药物组合物，其特征在于，该药物组合物加入药学上可接受的辅料制成临床上或药学上可接受的剂型，所述的剂型为栓剂 、凝胶剂、洗剂、泡沫剂或软膏剂。
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