CN110638756A - 一种含大麻二酚的组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明关于一种大麻二酚高稳定性制剂及其制备方法，由下列重量比的原料制成：大麻二酚0.1～10份、中链甘油三酯(MCT)5～15份、大豆卵磷脂1～15份、γ环糊精1～20份、聚甘油‑10硬脂酸酯10～20份、甘油10～45份，余量为蒸馏水。本发明通过纳米包裹技术，将大麻二酚制备成高稳定性的制剂，不仅保留了大麻二酚原有的结构和活性，还能使大麻二酚最大限度地被吸收利用，大大提高了大麻二酚的生物利用率，扩大了大麻二酚的应用范围。为下游市场应用、配方开发提供可靠的技术支持。

Description

一种含大麻二酚的组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种组合物，特别是一种含大麻二酚(CBD)的组合物及其制备方法，属于生物技术领域。

背景技术

大麻二酚(Cannabidiol，简称CBD)是从大麻(Cannabis sativa L.)中提取的非精神活性成分，不会导致生理依赖，具有良好的耐受性，对精神疾病、癫痫、肿瘤、硬化症、厌食症、青光眼、糖尿病、肝损伤、炎症和疼痛等多种疾病和症状都表现出一定的治疗特性，在医药、保健食品、食品、化妆品等领域都显现出广阔的应用前景。

由于大麻二酚是一种高亲脂性的成分，因此其在水系产品中的应用和生物利用度等方便都有一定的局限性，同时为了使其在临床应用时，具有更稳定、更持久的药物活性，我们通过纳米乳制剂的方式，来改善和解决这些问题，使大麻二酚更有效的应用在各类产品当中。

虽然现有技术中公开了大麻二酚的纳米乳制剂，但是，仍有必要开发出稳定性好，且能持久发挥活性的新型组合物，为医药、食品、化妆品等领域提供更加安全、持久、稳定的产品。

发明内容

为解决大麻二酚不稳定，以及生物利用度低的问题，本发明第一个目的在于提供一种大麻二酚的高稳定性制剂。

本发明的第二个目的在于提供一种含大麻二酚高稳定性制剂的制备方法。

本发明第一个目的通过下列技术方案实现：一种大麻二酚高稳定性制剂，其特征在于由下列重量比的原料制成：

所述乳化剂为：卵磷脂、聚甘油-10硬脂酸酯、聚甘油-10油酸酯、月桂酸聚甘油酯中的一种或几种；

所述助乳化剂为：中链甘油三酯、1，2-丙二醇、甘油中的一种或几种；

其他辅料包括：γ环糊精、羟丙基β环糊精、果胶、蔗糖、卡波姆中的一种或几种。

在一些实施方式中，所述卵磷脂为大豆卵磷脂，进一步地，所述大豆卵磷脂优选磷脂酰胆碱含量≥90％(质量比)，将高磷脂酰胆碱含量的大豆卵磷脂应用于本发明中，可以获得更好的乳化效果，所制得的乳剂的粒径更小，缓释的效果也进一步有所改善。

在一些实施方式中，所述的大麻二酚高稳定性制剂，由下列重量比的原料制成：

在一些实施方式中，所述大麻二酚高稳定制剂，由下列重量比的原料制成：

本发明第二个目的通过下列技术方案实现：一种大麻二酚高稳定性制剂的制备方法，包括如下步骤：

S1、将大豆卵磷脂、聚甘油-10硬脂酸酯和中链甘油三酯混合，于65±5℃和500rpm～5000rpm条件下搅拌加热1h，得到油状液体，为第一混合油相；

S2、将大麻二酚加入到第一混合油相，继续于65±5℃和500rpm～5000rpm条件下搅拌加热15min，在氮气保护下使其充分混合，得到油状液体，为第二混合油相；

S3、将γ环糊精、甘油和蒸馏水按重量比称量，然后在40±5℃和500rpm～5000rpm条件下充分混合，得到澄清水溶液，为水相；

S4、将第二混合油相逐滴分散到水相中，直至分散完全，然后用高剪切得到浅黄色至乳白色的不透明乳液，为大麻二酚粗乳液；

S5、将大麻二酚粗乳液在10000rpm～30000rpm下进行高压匀质，得到浅黄色至乳白色半透明乳液，为大麻二酚水包油型纳米乳液。

本发明所述的大麻二酚高稳定性制剂，可以是一种纳米乳。

进一步地，本发明所述纳米乳可以为外用制剂或口服制剂。

进一步地，所述外用制剂为乳膏、软膏或乳液；所述口服制剂为口服液、软胶囊、片剂、颗粒剂、硬胶囊。

本发明的有益效果：

(1)制得的纳米乳，所用原辅料都是可食用的，保证了大麻二酚纳米乳制剂的生物安全性。

(2)制备条件温和，没有高温，减少了大麻二酚在制备过程中损失，提高了大麻二酚的包埋率。

(3)制备的大麻二酚乳液呈浅黄色或乳白色乳液，乳液平均粒径Z-average：70～120nm，电位Zeta：-28.8±0.5mV，分散指数PDI：0.16说明本发明具有良好的乳化效果。

(4)制得的纳米乳具有外观性状更好，粒径更小，稳定性更好的特点；

(5)制得的纳米乳具有缓释效果，可持续更长时间发挥药物活性。

附图说明

图1：Caco-2细胞对游离CBD与实施例1的CBD纳米乳在不同时间摄取行为的CLSM荧光成像图。

具体实施方式

以下配合附图及本发明的优选实施例，进一步阐述本发明为达成预定发明目的所采取的技术手段。实施例中所述试验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得，或可以常规方法制备。

实施例1

制备方法包括下列步骤：

S1、将大豆卵磷脂、聚甘油-10硬脂酸酯和中链甘油三酯混合，于65℃和500rpm条件下搅拌加热1h，得到浅黄色油状液体，为第一混合油相；

S2、将大麻二酚加入到第一混合油相，继续于65℃和500rpm条件下搅拌加热15min，在氮气保护下使其充分混合，得到油状液体，为第二混合油相；

S3、将γ环糊精、甘油和蒸馏水按重量比称量，然后在40℃和500rpm条件下充分混合，得到澄清水溶液，为水相；

S4、将第二混合油相逐滴分散到水相中，直至分散完全，然后用高剪切得到浅黄色不透明乳液，为大麻二酚粗乳液；

S5、将大麻二酚粗乳液在20000rpm进行高压匀质，得到浅黄色乳液，为实施例1。

实施例1及后面的具体实施例及对比例中的大豆卵磷脂中磷脂酰胆碱的含量为95.2％(质量比)，购买于德国Lipoid公司。

实施例2

制备方法包括下列步骤：

S1、将大豆卵磷脂、聚甘油-10硬脂酸酯和中链甘油三酯(MCT)混合，于65℃和1000rpm条件下搅拌加热1h，得到浅黄色油状液体，为第一混合油相；

S2、将大麻二酚加入到第一混合油相，继续于65℃和1000rpm条件下搅拌加热15min，在氮气保护下使其充分混合，得到油状液体，为第二混合油相；

S3、将γ环糊精、甘油和蒸馏水按重量比称量，然后在40℃和1000rpm条件下充分混合，得到澄清水溶液，为水相；

S4、将第二混合油相逐滴分散到水相中，直至分散完全，然后用高剪切得到浅黄色不透明乳液，为大麻二酚粗乳液；

S5、将大麻二酚粗乳液在20000rpm下进行高压匀质，得到浅黄色乳液，为实施例2。

实施例3

制备方法包括下列步骤：

S1、将大豆卵磷脂、聚甘油-10硬脂酸酯和中链甘油三酯(MCT)混合，于65℃和1000rpm条件下搅拌加热1h，得到浅黄色油状液体，为第一混合油相；

S2、将大麻二酚加入到第一混合油相，继续于65℃和1000rpm条件下搅拌加热15min，在氮气保护下使其充分混合，得到油状液体，为第二混合油相；

S3、将γ环糊精、甘油和蒸馏水按重量比称量，然后在40℃和1000rpm条件下充分混合，得到澄清水溶液，为水相；

S4、将第二混合油相逐滴分散到水相中，直至分散完全，然后用高剪切得到浅黄色不透明乳液，为大麻二酚粗乳液；

S5、将大麻二酚粗乳液在20000rpm下进行高压匀质，得到浅黄色乳液，为实施例3。

实施例4

制备方法包括下列步骤：

S1、将大豆卵磷脂、聚甘油-10硬脂酸酯和中链甘油三酯(MCT)混合，于65℃和1000rpm条件下搅拌加热1h，得到浅黄色油状液体，为第一混合油相；

S2、将大麻二酚加入到第一混合油相，继续于65℃和1000rpm条件下搅拌加热15min，在氮气保护下使其充分混合，得到油状液体，为第二混合油相；

S3、将γ环糊精、甘油和蒸馏水按重量比称量，然后在40℃和1000rpm条件下充分混合，得到澄清水溶液，为水相；

S4、将第二混合油相逐滴分散到水相中，直至分散完全，然后用高剪切得到浅黄色不透明乳液，为大麻二酚粗乳液；

S5、将大麻二酚粗乳液在20000rpm下进行高压匀质，得到浅黄色乳液，为实施例4。

对比例1

制备方法包括下列步骤：

S1、将大豆卵磷脂、聚甘油-10硬脂酸酯和大豆油混合，于65℃和1000rpm条件下搅拌加热1h，得到乳黄色油状液体，为第一混合油相；

S2、将大麻二酚加入到第一混合油相，继续于65℃和1000rpm条件下搅拌加热15min，在氮气保护下使其充分混合，得到油状液体，为第二混合油相；

S3、将γ环糊精、甘油和蒸馏水按重量比称量，然后在40℃和1000rpm条件下充分混合，得到澄清水溶液，为水相；

S4、将第二混合油相逐滴分散到水相中，直至分散完全，然后用高剪切得到浅黄色不透明乳液，为大麻二酚粗乳液；

S5、将大麻二酚粗乳液在20000rpm下进行高压匀质，得到对比例1。

对比例2

制备方法包括下列步骤：

S1、将大豆卵磷脂、聚甘油-10硬脂酸酯和中链甘油三酯(MCT)混合，于65℃和1000rpm条件下搅拌加热1h，得到乳黄色油状液体，为第一混合油相；

S2、将大麻二酚加入到第一混合油相，继续于65℃和1000rpm条件下搅拌加热15min，在氮气保护下使其充分混合，得到油状液体，为第二混合油相；

S3、将α环糊精、甘油和蒸馏水按重量比称量，然后在40℃和1000rpm条件下充分混合，得到澄清水溶液，为水相；

S4、将第二混合油相逐滴分散到水相中，直至分散完全，然后用高剪切得到浅黄色浑浊乳液，为大麻二酚粗乳液；

S5、将大麻二酚粗在20000rpm下乳液进行高压匀质，得到对比例2。

为验证本发明的大麻二酚制剂的稳定性和缓释效果，进行以下试验：

一、稳定性试验

1.检测指标为：外观(浑浊、分层、沉淀、絮状)、粒径、大麻二酚CBD含量测定。

2.实验条件：将对比例1、对比例2、实施例1、实施例2、实施例3和实施例4所制备的样品，分别配置成1％水溶液(1％水溶液指的是将1重量份的样品加入到99重量份的蒸馏水中)，并分别放置于-20℃的条件下保存3天，然后再放置于45℃条件下保存3天。分别在0天和6天对所述样品(1％水溶液)的外观、粒径和CBD的含量进行检测。

3.检测结果：见下表1。

表1

(1)外观测定：目测。

(2)CBD含量测定(高效液相色谱法)：采用外标法。色谱柱：Agilent E-clipseXDB-C18(150mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-水(体积比为78∶22)；流速1.0mL/min；检测波长220nm；柱温25℃，标准品：中检所生产(货号：171235-200808)。

(3)粒径测定：采用纳米粒径电位分析仪(Mastersizer2000)进行测得。

从表1可见，本发明通过采用中链甘油三酯及γ环糊精与其他辅料制备CBD纳米乳，可以达到更好的乳化效果，粒径以及制剂稳定性方面取得了出乎意料的技术效果。从表1中实施例4的数据可见，当大豆卵磷脂的比例加大时，可以得到粒径更小，稳定性更好的纳米乳制剂。

二、缓释效果测试(Caco-2细胞摄取试验)

1.检测指标为：Caco-2细胞摄取CBD的荧光强度。其中Caco-2细胞购自于北京协和医学院细胞资源中心。

2.实验条件：采用激光扫描共聚焦显微镜(CLSM，LEICA SP8，×40)评估Caco-2细胞对游离CBD和实施例1的纳米乳CBD的细胞摄取行为，并通过观测0、1、4和12小时的荧光强度变化来评估缓释效果。大致操作步骤如下：

(1)首先采用MTT法对游离CBD和实施例1的CBD纳米乳针对Caco-2细胞进行毒性测试，确定在使用浓度内(≤50μg/ml)，对Caco-2细胞活性无影响。

(2)分别将配制后CBD浓度为10μg/ml的游离CBD和CBD浓度为10μg/ml的实施例1加入到Caco-2细胞中分别培养0，1，4，12小时。

(3)培养后的Caco-2细胞使用PBS(0.01M，pH 7.4，美国Hyclone公司)漂洗，除去多余药物，添加1～2ml 4％多聚甲醛固定液(上海源叶)，处理30min，用于染色。

(4)将Caco-2细胞进行PI染色，30min(PI是荧光染料，碘化丙啶)，吸出PI，用PBS漂洗，用于CLSM成像。

(5)在488nm处激发PI和CBD，并且分别在630nm和310nm处捕获CLSM图像。

(6)分别在0小时、1小时、4小时、12小时进行CLSM成像，通过荧光强度来评估游离CBD和实施例1的CBD纳米乳的缓释效果。

3.测试结果见图1。从图1可见，在0小时，没有摄取，仅有Caco-2细胞的成像。从图1的下半部分可见，游离CBD在1～4小时之间吸收达到最大值后(以荧光强度判断)，逐步在细胞内吸收代谢，在12小时时基本已吸收代谢完全。从图1的上半部分可见，实例CBD(即实施例1的CBD纳米乳)在4h时吸收达到最大值(以荧光强度判断)，在12小时仍具有一定荧光强度，说明此时细胞内仍有CBD，说明经过纳米包裹的CBD具有缓释效果，可持续更长时间发挥药物活性。

以上所述仅是本发明的优选实施例而已，并非对本发明做任何形式上的限制，虽然本发明已以优选实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案的范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (10)

1.一种大麻二酚高稳定性制剂，其特征在于，由下列重量比的原料制成：

所述乳化剂为：卵磷脂、聚甘油-10硬脂酸酯、聚甘油-10油酸酯、聚甘油-10月桂酸酯中的一种或几种；

所述助乳化剂为：中链甘油三酯、1，2-丙二醇、甘油中的一种或几种；

其他辅料包括：γ环糊精、羟丙基β环糊精、果胶、蔗糖、卡波姆中的一种或几种。

2.根据权利要求1所述的大麻二酚高稳定性制剂，其特征在于，所述卵磷脂为大豆卵磷脂。

3.根据权利要求1所述的大麻二酚高稳定性制剂，其特征在于，由下列重量比的原料制成：

4.根据权利要求1～3中任一项所述的大麻二酚高稳定性制剂，其特征在于，由下列重量比的原料制成：

5.一种如权利要求1～4中任一项所述大麻二酚高稳定性制剂的制备方法，其特征在于，包括下列各步骤：

S1、将大豆卯磷脂、聚甘油-10硬脂酸酯和中链甘油三酯混合，于65±5℃和500rpm～5000rpm条件下搅拌加热1h，得到油状液体，为第一混合油相；

S2、将大麻二酚加入到第一混合油相，继续于65±5℃和500rpm～5000rpm条件下搅拌加热15min，在氮气保护下使其充分混合，得到油状液体，为第二混合油相；

S3、将γ环糊精、甘油和蒸馏水按重量比称量，然后在40±5℃和500rpm～5000rpm条件下充分混合，得到澄清水溶液，为水相；

S4、将第二混合油相逐滴分散到水相中，直至分散完全，然后用高剪切得到浅黄色至乳白色的不透明乳液，为大麻二酚粗乳液；

S5、将大麻二酚粗乳液在10000rpm～30000rpm下进行高压匀质，得到浅黄色至乳白色半透明乳液，为大麻二酚水包油型纳米乳液。

6.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将大豆卵磷脂、聚甘油-10硬脂酸酯和中链甘油三酯混合，于65±5℃和5000rpm条件下搅拌加热1h，得到油状液体，为第一混合油相；

S2、将大麻二酚加入到第一混合油相，继续于65±5℃和5000rpm条件下搅拌加热15min，在氮气保护下使其充分混合，得到油状液体，为第二混合油相；

S3、将γ环糊精、甘油和蒸馏水按重量比称量，然后在40±5℃和5000rpm条件下充分混合，得到澄清水溶液，为水相；

S4、将第二混合油相逐滴分散到水相中，直至分散完全，然后用高剪切得到浅黄色至乳白色的不透明乳液，为大麻二酚粗乳液；

S5、将大麻二酚粗乳液在20000rpm下进行高压匀质，得到浅黄色至乳白色半透明乳液，为大麻二酚水包油型纳米乳液。

7.根据权利要求1～4中任一项所述的大麻二酚高稳定性制剂，其特征在于，所述制剂为纳米乳。

8.根据权利要求7所述的大麻二酚高稳定性制剂，其特征在于，所述纳米乳为外用制剂或口服制剂。

9.根据权利要求8所述的大麻二酚高稳定性制剂，其特征在于，所述外用制剂为乳膏、软膏或乳液。

10.根据权利要求9所述的大麻二酚高稳定性制剂，其特征在于，所述口服制剂为口服液、软胶囊、片剂、颗粒剂、硬胶囊。

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