CN110615848A - 一种包含EB病毒膜表面糖蛋白gp350优势表位肽的嵌合颗粒及其编码基因和应用 - Google Patents

一种包含EB病毒膜表面糖蛋白gp350优势表位肽的嵌合颗粒及其编码基因和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种包含EB病毒膜表面糖蛋白gp350优势表位肽的嵌合颗粒及其编码基因和应用。本发明首次发现对多个优势表位按照一定的顺序组合后再进行颗粒化展示，可以显著地提高多肽表位的免疫原性，通过免疫小鼠表明所诱导血清的总抗滴度、血清中中和抗体的滴度以及血清在细胞水平阻断病毒感染的效率都获得了显著地提高。本发明提供了一种可用于研发预防EB病毒感染的候选疫苗形式，对于预防EB病毒相关疾病具有重要的现实及理论意义和应用前景。

Description

一种包含EB病毒膜表面糖蛋白gp350优势表位肽的嵌合颗粒 及其编码基因和应用
技术领域
本发明涉及基因工程技术领域，具体地，涉及一种包含EB病毒膜表面糖蛋白gp350优势表位肽的嵌合颗粒及其编码基因和应用。
背景技术
EB病毒在全球人群中广泛感染，据报道约有90％的成年人感染过EBV。在青少年时期感染EBV容易引发单核细胞增多症，一般可以自愈；感染过EBV的人群一般为病毒终身携带者。EB病毒是第一种被证实感染后可诱发肿瘤的病毒，越来越多的证据表明EB 病毒与多种淋巴肿瘤(包括霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、NK/T细胞淋巴瘤等)和上皮肿瘤(包括鼻咽癌、胃癌等)的发生发展有着密切的关系，但是截至目前为止针对EBV 所诱发的癌症等疾病尚未有好的治疗手段，而且市面上也没有有效的针对EB病毒感染的预防性疫苗可用，因此研发预防EBV感染的疫苗尤为重要。
gp350是EBV表达的包膜糖蛋白，通过与CD21(CR2)的结合，使EBV得以进入 CD21+细胞，并因在体内及体外有广泛的生物活性而受到关注。通过设计重组多表位嵌合肽(chimeric peptide，CP)及其编码基因，构建重组表达载体并在生物体内进行表达，可为预防EBV感染的疫苗设计提供新思路。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种包含EB病毒膜表面糖蛋白 gp350优势表位肽的嵌合颗粒，其在制备EB病毒预防性疫苗方面具有很好的应用潜力，对于EB病毒感染的预防具有重要的现实和理论意义。
本发明的另一目的在于提供一种编码上述嵌合颗粒的基因。
本发明的另一目的在于提供一种含有上述基因的重组载体。
本发明的另一目的在于提供一种含有上述重组载体的重组宿主菌。
本发明的另一目的在于提供上述嵌合颗粒在制备EB病毒预防性疫苗中的应用。
本发明的另一目的在于提供上述基因、重组载体和/或重组宿主菌在制备EB病毒预防性疫苗中的应用。
本发明的另一目的在于提供一种预防EB病毒感染的疫苗制剂。
为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：
本发明通过研究发现，EB病毒膜表面糖蛋白gp350的优势表位肽经过颗粒化展示后，在小鼠体内的免疫原性得到了显著地提高，检测结果表明嵌合颗粒所诱导的小鼠血清总滴度、血清特异性中和抗体滴度以及血清的体外中和阻断效率均显著高于单体形式的对照蛋白，具有成为或制备EB病毒预防性疫苗的潜力，对于EB病毒相关疾病的预防具有重要的现实和理论意义及应用前景。
因此，本发明请求保护一种包含EB病毒膜表面糖蛋白gp350优势表位肽的嵌合颗粒，所述嵌合颗粒的氨基酸序列为SEQ ID:1～SEQ ID:5中的任意一条。
其中，嵌合颗粒(即融合蛋白)149-3A的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；149-3B的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；149-3C的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；149-3D 的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；149-3E的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。
本发明还请求保护一种编码上述嵌合颗粒的基因，所述基因的核苷酸序列为SEQID:6～SEQ ID:10中的任意一条。
其中，融合蛋白149-3A的编码基因核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；149-3B的编码基因核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；149-3C的编码基因核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；149-3D的编码基因核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；149-3E的编码基因核苷酸序列如SEQID NO:10所示。
本发明还请求保护一种重组载体，所述重组载体含有上述基因的核苷酸序列。
本发明还请求保护一种重组宿主菌，所述重组宿主菌含有上述重组载体。
本发明还请求保护所述嵌合颗粒在制备EB病毒预防性疫苗中的应用。
本发明还请求保护所述基因、重组载体和/或重组宿主菌在制备EB病毒预防性疫苗中的应用。
本发明还请求保护一种预防EB病毒感染的疫苗制剂，所述疫苗制剂包含上述嵌合颗粒以及药学上可接受的载体。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明首次发现，将EB病毒膜表面糖蛋白的多个优势表位按照一定的顺序组合后再进行颗粒化展示，其在小鼠体内的免疫原性获得了显著性提高，并且免疫小鼠血清的总抗体滴度、血清中特异性中和抗体滴度以及血清在细胞水平的阻断病毒感染效率均显著高于用作对照的非颗粒化单体糖蛋白。本发明提供了一种可用于研发预防EB病毒感染的候选免疫原形式，对于预防EB病毒相关疾病具有重要的现实及理论意义和应用前景。
附图说明
图1为重组蛋白构建示意图。
图2为重组蛋白表达纯化后的SDS-PAGE分析结果。
图3为重组蛋白的免疫反应性验证结果。
图4为重组蛋白的颗粒性。
图5为重组蛋白的免疫原性。
图6为小鼠免疫血清与72A1的体外竞争活性。
图7为小鼠免疫血清在细胞水平阻断病毒感染的效率。
具体实施方式
下面结合说明书附图及具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1重组表达载体的构建及融合蛋白的表达
1、实验材料
(1)本发明选用乙肝核心蛋白HBc149作为颗粒化展示载体，对载体进行改造，将HBc149 79-81位氨基酸替换为“GGGGSGGGGTGSEFGGGGSGGGGS”并引入BamH I和 EcoR I双酶切位点(GS/EF)，方便后续表位通过酶切连接的方法插入构建重组表达载体。
(2)试剂与耗材：均为市购常用试剂与耗材。
(3)宿主菌体：BL21DE3。
2、步骤
(1)为了充分考察优势表位诱导体液免疫应答的能力，对所选的gp350优势表位肽进行了随机地组合，将其插入到颗粒化载体中，构建表达载体；
(2)将上述载体转化至大肠杆菌BL21DE3表达菌株中，并通过抗性筛选鉴定阳性转化子菌；
(3)将阳性转化菌扩大培养后利用化学诱导剂异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达；
(4)收集菌体，通过超声破菌收集表达上清，然后通过热沉淀和饱和硫酸铵沉淀获得纯度在85％以上的粗蛋白，最后通过分子筛层析对粗纯蛋白进行精细纯化获得纯度在95％以上的目的蛋白，目的蛋白的纯度经过SDS-PAGE验证，测定浓度后分装冻存于-80 度备用。
其中，所述gp350优势表位肽氨基酸序列、优势表位肽不同组合之间的柔性Linker氨基酸序列、颗粒化展示载体氨基酸序列如下表1所示。
表1氨基酸序列表
所述gp350优势表位肽的编码基因核苷酸序列、优势表位肽不同组合之间的柔性Linker的编码基因核苷酸序列、颗粒化展示载体的编码基因核苷酸序列如下表2所示。
表2核苷酸序列表
因此，所得优势表位肽的组合可以为：I-L-II-L-III、I-L-III-L-II、II-L-I-L-III、II-L-III-L-I、 III-L-II-L-I。
将上述不同组合的优势表位肽虚列插入到颗粒化展示载体中所得到的融合蛋白为： 149-3A(即P-I-L-II-L-III)，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；149-3B(即P-I-L-III-L-II)，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；149-3C(即P-II-L-I-L-III)，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；149-3D(即P-II-L-III-L-I)，其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；149-3E(即 P-III-L-II-L-I)，其氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。
编码上述融合蛋白的基因依次分别为：编码149-3A的基因(即P’-I’-L’-II’-L’-III’)，其核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；编码149-3B的基因(即P’-I’-L’-III’-L’-II’)，其核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；编码149-3C的基因(即P’-II’-L’-I’-L’-III’)，其核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；编码149-3D的基因(即P’-II’-L’-III’-L’-I’)，其核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；编码149-3E的基因(即P’-III’-L’-II’-L’-I’)，其核苷酸序列如SEQID NO:10所示。
3、结果
嵌合颗粒(即融合蛋白)的构建如图1所示并且构建成功，纯化后的蛋白经过 SDS-PAGE验证纯度均达到90％以上(图2)。
实施例2重组蛋白的免疫反应性验证
1、实验材料
(1)试剂与耗材：均为市购常用试剂与耗材。
(2)抗体：HBc149特异性抗体11H10为厦门大学夏宁邵教授友情馈赠；抗gp350ECD123多抗血清为本室通过免疫小鼠自己制备多抗血清。
2、实验步骤
(1)重组蛋白进行SDS-PAGE电泳；
(2)电泳完成后将蛋白转膜于PVDF膜；
(3)转膜完成后PVDF膜用5％的脱脂奶进行封闭，然后进行一抗和辣根过氧化物酶标记的二抗孵育，最终利用辣根过氧化物酶的底物进行显色。
3、实验结果
如图3所示，所表达纯化的重组目的蛋白于HBc149特异性抗体及gp350ECD123特异性多抗血清均有很好的反应活性。
实施例3重组蛋白的颗粒性
1、实验材料
(1)试剂与耗材：均为市购常用试剂与耗材。
(2)仪器：透射电镜；安捷伦高效液相色谱分析仪；分子筛G5000PWxl。
2、实验步骤
(1)将纯化后的蛋白进行磷酸钨染色；
(2)染色后进行透射电镜检测。
(3)纯化后的蛋白稀释到0.5mg/mL后进行利用高效液相色谱分析仪进行分子筛检测。
3、实验结果
如图4A所示，透射电镜检测结果表明所有重组蛋白均形成了均一的颗粒；另外图4B 利用分子筛检测，结果也显示与对照蛋白野生型HBc149相比，所有重组蛋白也都形成了均一的颗粒形式。
实施例4重组蛋白的免疫原性
1、实验材料
(1)小鼠：雌性6-8周的BalB/C小鼠。
(2)佐剂：市售Thermo公司Imject Al佐剂。
(3)其他试剂耗材均为市售常规试剂耗材。
2、实验步骤
(1)将纯化后的蛋白与佐剂混匀后采取皮下免疫的方式免疫小鼠；
(2)按照0,1,2,3,4,5,6,8,10,14周采集小鼠眼眶血分离收集血清；
(3)利用间接酶联免疫吸附试验检测小鼠血清的总抗滴度。
3、实验结果
完整的免疫及采血程序如图5A所示；图5B显示了重组蛋白嵌合颗粒的免疫原性检测情况，结果显示其中149-3A和149-3B免疫小鼠后的血清总抗滴度均比对照蛋白高0.5-1个Log值；结果表明这两种多肽的组合经过颗粒化展示后很好的提高了多肽的免疫原性。
实施例5小鼠免疫血清与72A1的体外竞争活性比较
1、实验材料
(1)试剂与耗材：均为市购常用试剂与耗材。
2、实验步骤
(1)将gp350ECD123按照100ng/孔包被ELISA96孔板；
(2)将2倍稀释的72A1-HRP加入到96孔板中进行显色检测其OD450读值，选择 OD450读值为1.0的稀释度(1:25600)用于后续实验；
(3)将小鼠血清从1:5开始按照2倍倍稀稀释八个梯度，然后加入到包被好的ELISA板中，37度孵育反应半小时后洗板5次，然后将1:25600稀释的72A1-HRP加入到板中， 37度反应半小时后进行洗板显色，检测OD450读值，计算小鼠血清对72A1的阻断效率。
3、实验结果
如图6所示，结果表明149-3A和149-3B免疫小鼠诱导的多抗血清能够较好地阻断72A1与gp350的结合；而且在5倍稀释和10倍稀释的浓度下对72A1的阻断率均在50％以上。
实施例6小鼠免疫血清对病毒感染效率的影响
1、实验材料
(1)试剂与耗材：均为市购常用试剂与耗材。
(2)细胞株：CNE2-EBV，AKATA-neg。
(3)病毒：CNE2-EBV-GFP由细胞株CNE2-EBV诱导产生。
2、实验步骤
(1)利用化学诱导剂佛波酯和丁酸钠诱导细胞株CNE2-EBV生产EB病毒 CNE2-EBV-GFP；
(2)将小鼠血清从1:2开始按照2倍倍稀稀释八个梯度，先将稀释好的血清与病毒混匀置于37度孵育2小时；
(3)然后将血清与病毒的混合物加入到被感染的细胞AKATA-neg中，置于37℃二氧化碳培养箱孵育3小时；
(4)3小时后将细胞离心去除病毒和血清上清，然后用完全培养基重悬后转移到96孔板中培养，48小时后利用流式细胞仪检测病毒的感染效率；定义所检测到的GFP阳性细胞数占总检测细胞数的比例为病毒的感染效率。
3、实验结果
如图7所示，结果表明149-3A和149-3B免疫小鼠诱导的多抗血清能够较好地在细胞水平阻断EB病毒感染；小鼠血清稀释10倍的浓度下对EB病毒的感染效率均在50％以上。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。
序列表
<110> 中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所）
<120> 一种包含EB病毒膜表面糖蛋白gp350优势表位肽的嵌合颗粒及其编码基因和应用
<160> 10
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 230
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Synthetic sequence)
<400> 1
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1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
Ser Pro His His Thr Ala Leu Arg Gln Ala Ile Leu Cys Trp Gly Glu
50 55 60
Leu Met Asn Leu Ala Thr Trp Val Gly Ser Asn Leu Glu Asp Gly Gly
65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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Gly Ser Arg Glu Leu Val Val Ser Tyr Val Asn Val Asn Met Gly Leu
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100 105 110
Gly Gly Ser Tyr Ser Gly Asn Gly Pro Lys Ala Ser Gly Gly Asp Tyr
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser His Leu Thr Gly Glu Asp
130 135 140
Pro Gly Phe Phe Asn Val Glu Phe Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Arg Glu Leu Val Val Ser Tyr Val Asn Val Asn Met Gly Leu
165 170 175
Lys Ile Arg Gln Leu Leu Trp Phe His Ile Ser Cys Leu Thr Phe Gly
180 185 190
Arg Glu Thr Val Leu Glu Tyr Leu Val Ser Phe Gly Val Trp Ile Arg
195 200 205
Thr Pro Pro Ala Tyr Arg Pro Gln Asn Ala Pro Ile Leu Ser Thr Leu
210 215 220
Pro Glu Thr Thr Val Val
225 230
<210> 5
<211> 230
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Synthetic sequence)
<400> 5
Met Asp Ile Asp Pro Tyr Lys Glu Phe Gly Ala Ser Val Glu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Phe Leu Pro Ser Asp Phe Phe Pro Ser Ile Arg Asp Leu Leu Asp
20 25 30
Thr Ala Ser Ala Leu Tyr Arg Glu Ala Leu Glu Ser Pro Glu His Cys
35 40 45
Ser Pro His His Thr Ala Leu Arg Gln Ala Ile Leu Cys Trp Gly Glu
50 55 60
Leu Met Asn Leu Ala Thr Trp Val Gly Ser Asn Leu Glu Asp Gly Gly
65 70 75 80
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Thr Gly Ser Tyr Ser Gly Asn Gly Pro
85 90 95
Lys Ala Ser Gly Gly Asp Tyr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
100 105 110
Ser Gln Asn Pro Val Tyr Leu Ile Pro Glu Thr Val Pro Tyr Ile Lys
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser His Leu Thr Gly Glu Asp
130 135 140
Pro Gly Phe Phe Asn Val Glu Phe Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Arg Glu Leu Val Val Ser Tyr Val Asn Val Asn Met Gly Leu
165 170 175
Lys Ile Arg Gln Leu Leu Trp Phe His Ile Ser Cys Leu Thr Phe Gly
180 185 190
Arg Glu Thr Val Leu Glu Tyr Leu Val Ser Phe Gly Val Trp Ile Arg
195 200 205
Thr Pro Pro Ala Tyr Arg Pro Gln Asn Ala Pro Ile Leu Ser Thr Leu
210 215 220
Pro Glu Thr Thr Val Val
225 230
<210> 6
<211> 693
<212> DNA
<213> 人工合成序列(Synthetic sequence)
<400> 6
atggacattg acccttataa agaatttgga gcttctgtgg agttactctc ttttttgcct 60
tccgacttct ttccttctat tcgagatctc ctcgacaccg cctctgctct gtatcgggag 120
gccttagagt ctccggaaca ttgttcacct caccatacgg cactcaggca agctattctg 180
tgttggggtg agttgatgaa tctagccacc tgggtgggaa gtaatttgga agatggtgga 240
ggtggttctg gaggtggtgg tactggatcc catctcacgg gtgaagatcc tggttttttc 300
aatgttggtg gcggtggcag cggtggcggt ggcagccaaa accccgtgta cctgatacca 360
gaaacagtgc catacataaa gggtggcggt ggcagcggtg gcggtggcag ctactctggg 420
aatggaccga aggcgagcgg gggagattac gaattcggtg gtggaggttc aggaggaggt 480
ggttccaggg aactagtagt cagctatgtc aacgttaata tgggcctaaa aatcagacaa 540
ctattgtggt ttcacatttc ctgtcttact tttgggagag aaactgttct tgaatatttg 600
gtgtcttttg gagtgtggat tcgcactcct cctgcatata gaccacaaaa tgcccctatc 660
ttatcaacac ttccggaaac tactgttgtt tag 693
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<211> 693
<212> DNA
<213> 人工合成序列(Synthetic sequence)
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atggacattg acccttataa agaatttgga gcttctgtgg agttactctc ttttttgcct 60
tccgacttct ttccttctat tcgagatctc ctcgacaccg cctctgctct gtatcgggag 120
gccttagagt ctccggaaca ttgttcacct caccatacgg cactcaggca agctattctg 180
tgttggggtg agttgatgaa tctagccacc tgggtgggaa gtaatttgga agatggtgga 240
ggtggttctg gaggtggtgg tactggatcc catctcacgg gtgaagatcc tggttttttc 300
aatgttggtg gcggtggcag cggtggcggt ggcagctact ctgggaatgg accgaaggcg 360
agcgggggag attacggtgg cggtggcagc ggtggcggtg gcagccaaaa ccccgtgtac 420
ctgataccag aaacagtgcc atacataaag gaattcggtg gtggaggttc aggaggaggt 480
ggttccaggg aactagtagt cagctatgtc aacgttaata tgggcctaaa aatcagacaa 540
ctattgtggt ttcacatttc ctgtcttact tttgggagag aaactgttct tgaatatttg 600
gtgtcttttg gagtgtggat tcgcactcct cctgcatata gaccacaaaa tgcccctatc 660
ttatcaacac ttccggaaac tactgttgtt tag 693
<210> 8
<211> 693
<212> DNA
<213> 人工合成序列(Synthetic sequence)
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atggacattg acccttataa agaatttgga gcttctgtgg agttactctc ttttttgcct 60
tccgacttct ttccttctat tcgagatctc ctcgacaccg cctctgctct gtatcgggag 120
gccttagagt ctccggaaca ttgttcacct caccatacgg cactcaggca agctattctg 180
tgttggggtg agttgatgaa tctagccacc tgggtgggaa gtaatttgga agatggtgga 240
ggtggttctg gaggtggtgg tactggatcc caaaaccccg tgtacctgat accagaaaca 300
gtgccataca taaagggtgg cggtggcagc ggtggcggtg gcagccatct cacgggtgaa 360
gatcctggtt ttttcaatgt tggtggcggt ggcagcggtg gcggtggcag ctactctggg 420
aatggaccga aggcgagcgg gggagattac gaattcggtg gtggaggttc aggaggaggt 480
ggttccaggg aactagtagt cagctatgtc aacgttaata tgggcctaaa aatcagacaa 540
ctattgtggt ttcacatttc ctgtcttact tttgggagag aaactgttct tgaatatttg 600
gtgtcttttg gagtgtggat tcgcactcct cctgcatata gaccacaaaa tgcccctatc 660
ttatcaacac ttccggaaac tactgttgtt tag 693
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tccgacttct ttccttctat tcgagatctc ctcgacaccg cctctgctct gtatcgggag 120
gccttagagt ctccggaaca ttgttcacct caccatacgg cactcaggca agctattctg 180
tgttggggtg agttgatgaa tctagccacc tgggtgggaa gtaatttgga agatggtgga 240
ggtggttctg gaggtggtgg tactggatcc caaaaccccg tgtacctgat accagaaaca 300
gtgccataca taaagggtgg cggtggcagc ggtggcggtg gcagctactc tgggaatgga 360
ccgaaggcga gcgggggaga ttacggtggc ggtggcagcg gtggcggtgg cagccatctc 420
acgggtgaag atcctggttt tttcaatgtt gaattcggtg gtggaggttc aggaggaggt 480
ggttccaggg aactagtagt cagctatgtc aacgttaata tgggcctaaa aatcagacaa 540
ctattgtggt ttcacatttc ctgtcttact tttgggagag aaactgttct tgaatatttg 600
gtgtcttttg gagtgtggat tcgcactcct cctgcatata gaccacaaaa tgcccctatc 660
ttatcaacac ttccggaaac tactgttgtt tag 693
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<211> 693
<212> DNA
<213> 人工合成序列(Synthetic sequence)
<400> 10
atggacattg acccttataa agaatttgga gcttctgtgg agttactctc ttttttgcct 60
tccgacttct ttccttctat tcgagatctc ctcgacaccg cctctgctct gtatcgggag 120
gccttagagt ctccggaaca ttgttcacct caccatacgg cactcaggca agctattctg 180
tgttggggtg agttgatgaa tctagccacc tgggtgggaa gtaatttgga agatggtgga 240
ggtggttctg gaggtggtgg tactggatcc tactctggga atggaccgaa ggcgagcggg 300
ggagattacg gtggcggtgg cagcggtggc ggtggcagcc aaaaccccgt gtacctgata 360
ccagaaacag tgccatacat aaagggtggc ggtggcagcg gtggcggtgg cagccatctc 420
acgggtgaag atcctggttt tttcaatgtt gaattcggtg gtggaggttc aggaggaggt 480
ggttccaggg aactagtagt cagctatgtc aacgttaata tgggcctaaa aatcagacaa 540
ctattgtggt ttcacatttc ctgtcttact tttgggagag aaactgttct tgaatatttg 600
gtgtcttttg gagtgtggat tcgcactcct cctgcatata gaccacaaaa tgcccctatc 660
ttatcaacac ttccggaaac tactgttgtt tag 693

Claims (7)

1.一种包含EB病毒膜表面糖蛋白gp350优势表位肽的嵌合颗粒，其特征在于，所述嵌合颗粒的氨基酸序列为SEQ ID:1～SEQ ID:5中的任意一条。
2.一种编码权利要求1所述嵌合颗粒的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列为SEQ ID:6～SEQ ID:10中的任意一条。
3.一种重组载体，其特征在于，含有权利要求2所述基因的核苷酸序列。
4.一种重组宿主菌，其特征在于，含有权利要求3所述重组载体。
5.权利要求1所述嵌合颗粒在制备EB病毒预防性疫苗中的应用。
6.权利要求2所述基因、权利要求3所述重组载体和/或权利要求4所述重组宿主菌在制备EB病毒预防性疫苗中的应用。
7.一种预防EB病毒感染的疫苗制剂，其特征在于，所述疫苗制剂包含权利要求1所述嵌合颗粒以及药学上可接受的载体。
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