CN110604716A - 一种光防护植物组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种光防护植物组合物及其制备方法和应用，所述植物组合物的制备原料包括：牡丹花、腊梅花、藏红花、积雪草、桂枝和可可籽。本发明所述光防护植物组合物各活性成分相互配合，具有协同增效作用，防护范围覆盖UVB、UVA和HEV波长区域。本发明的组合物不仅可以通过吸收紫外线来进行光防护，还能清除蓝光诱导下产生的大量活性氧自由基，通过提高皮肤本身的抵抗力和修复力来提高对外界有害光线的抵御能力。

Description

一种光防护植物组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于化妆品领域，具体涉及一种植物组合物及其制备方法和应用，尤其涉及一种光防护植物组合物及其制备方法和应用。
背景技术
高能蓝光High Energy Visible(HEV)是波长介于400-500nm的区域，来源于日光、电子产品、人造光源灯等。现代社会人们对电子产品，包括手机、电脑等的使用频率越来越高，蓝光污染问题日益严重，随着光对皮肤损害的深入研究，人们逐步认识到不仅紫外线会对人的皮肤产生伤害，而且高能蓝光(HEV)也会对人的皮肤造成损害，科学研究表明蓝光会激发活性氧自由基的生成，从而引起细胞损伤。防晒从对阳光的防护，发展到现代对阳光、电子产品(电脑、手机)以及人造光源的防护。
日光中紫外线光谱的波长范围为200-400nm，含有波长为290-320nm的中波紫外线(UVB)和波长为320-400nm的长波紫外线(UVA)。其中，UVA具有很强的穿透力，可以直达肌肤的真皮层，破坏弹性纤维和胶原蛋白纤维，将皮肤晒黑并产生皱纹；UVB对人体具有红斑作用，长期或过量照射会使皮肤晒黑，并引起红肿脱皮。化妆品中的紫外线吸收剂可分为两类，针对UVB和UVA进行防护，一类为化学紫外线吸收剂，它本身对紫外线有较强的吸收能力，可减少或完全吸收紫外线，使人体皮肤免受伤害，但近年来发现不少成分存在光敏性，干扰内分泌，用量大时易导致皮肤过敏，存在不安全因素和对UVA区紫外线的吸收防护不够完全等问题。另一类为无机的紫外线散射剂，如纳米级的二氧化钛、氧化锌，它根据反射或散射的原理，屏蔽紫外线对人体皮肤的接触，达到防止紫外线对皮肤的侵害，但这类防晒剂存在易堵塞毛孔、光催化活性、刺激性等问题，物理防晒剂也有容易脱落导致效果减弱等缺点，使其应用受到了限制。近年来科学研究发现传统防晒剂对环境有一定潜在的负面影响，例如，人们在海边使用的防晒产品中的防晒剂对海洋生物的影响。
CN106726975A公开了一种蓝光防护组合物，由以下按照重量百分比的原料组成：叶黄素5-11％、可可籽提取物13-22％、黑玫瑰提取物7-15％、玫瑰果油45-70％和木糖醇5-7％。该发明所述组合物具有吸收蓝光的功效，但是对于吸收紫外线效果较差，对光照射受损皮肤修护能力较弱。
CN108785214A公开了一种抗蓝光损伤的复合物，所述复合物的活性成分是由中药竹叶、黄柏、槐花、葡萄籽、虎杖、甘草和积雪草复合制备而成。该发明提供的复合物抗蓝光效果较为显著，但是同样存在吸收紫外线效果差的问题。
CN103349628A公开了一种具有美白作用的护肤组合物，按重量计包括下述组份：金缕梅1-10份、玫瑰花1-10份、牡丹花1-10份、海棠花1-10份、茉莉花1-10份、芍药花1-10份、梅花1-10份、迎春花1-10份、凌霄花1-10份。该发明能够吸收紫外线，但是应用在化妆品中的防晒效果较差，对于蓝光的吸收效果也较弱。
综上所述，目前已有的天然植物防晒护肤品，功效均具有局限性，有的仅着重于紫外线的防护上，或是仅具有防蓝光和防晒增效的功效，而且对于提高皮肤本身的修复和抵抗能力的效果较差。
因此，开发寻找安全高效、环境友好、各波段下具有一定防护性能的天然防晒剂，已经成为目前化妆品行业防晒剂研究的热点之一。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种植物组合物及其制备方法和应用，特别是提供一种光防护植物组合物及其制备方法和应用，所述光防护植物组合物防护范围覆盖UVB、UVA和HEV波长区域，提高皮肤本身的抵抗力和修复力。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种光防护植物组合物，所述植物组合物的制备原料包括：牡丹花、腊梅花、藏红花、积雪草、桂枝和可可籽。
在本发明中，牡丹花性微寒，味辛，无毒，入心、肝、肾三经，主治活血调经，用于皮肤上能显著改善皮肤微循环，加快血流速度，提高氧含量，使肌肤水分充盈；其含有的挥发油、花色苷等成分，能够有效抑制皮肤中黑色素的生成达到美白肌肤的效果，同时具有很好的清除自由基的能力，减少自由基对肌肤的损伤，延缓肌肤衰老。
在本发明中，腊梅花味甘，微苦，无毒，腊梅花挥发油具有较强的抗脂质过氧化物的能力，对常见的6种革兰氏阳性细菌和3种革兰氏阴性细菌均有抑制作用，具有很好的抗菌消炎作用。
在本发明中，藏红花，味甘微酸，性平温，无毒。藏红花所含成分藏红花素是天然色素，它能有效抑制由UVA辐射诱导的细胞死亡、活性氧产生、氧化应激，进而保护我们的皮肤。
在本发明中，积雪草性寒，味苦、辛，清热利湿，解毒抗炎。其含有的积雪草苷、积雪草酸等成分具有抗敏、修复、抗氧化等功效。
在本发明中，桂枝味辛、甘，性温。归膀胱经，心经，肺经，有一定的抗菌、抗病毒作用。桂枝内的挥发油，可抑制血清免疫球蛋白E(IgE)所致肥大细胞颗粒反应。降低补体活性，有消炎抗过敏作用。
在本发明中，可可籽提取物富含分子肽、多糖以及多酚，能够有效的减少蓝光压力下肌肤产生的活性氧自由基(ROS)，抵御蓝光对肌肤的伤害；同时，实验数据表明可可籽提取物能有效的提高细胞胶原蛋白的含量，缓解肌肤因过度暴露在蓝光下导致的老化问题。
植物在光合过程中，承受着过量的热及潜在的光照伤害，产生并积累紫外线吸收物质是其重要的光照胁迫适应机制之一。根据这一机制，本发明所述光防护植物组合物，安全高效、环境友好、各波段下具有一定防护性，对有害光具有吸收、反射、散射作用，对人体晒后具有修护功能；此外还具有晒后修护功能，即减少活性氧自由基、抗炎、消除红肿及提升人体皮肤屏障的功能。在本发明中，所述植物组合物各活性成分相互配合，具有协同增效作用，防护范围覆盖UVB、UVA和HEV波长区域。并且，本发明的组合物不仅可以通过吸收紫外线来进行光防护，还能清除蓝光诱导下产生的大量活性氧自由基，通过提高皮肤本身的抵抗力和修复力来提高对外界有害光线的抵御能力。
优选地，所述植物组合物的制备原料按质量百分比包括：牡丹花10-40％、腊梅花5-35％、藏红花5-35％、积雪草5-30％、桂枝5-30％和可可籽5-30％。
在本发明中，牡丹花的含量为10-40％，例如可以是10％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、26％、28％、30％、32％、34％、36％、38％、40％。
在本发明中，腊梅花的含量为5-35％，例如可以是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、26％、28％、30％、31％、33％、35％。
在本发明中，藏红花的含量为5-35％，例如可以是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、26％、28％、30％、31％、33％、35％。
在本发明中，积雪草的含量为5-30％，例如可以是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、26％、28％、30％。
在本发明中，桂枝的含量为5-30％，例如可以是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、26％、28％、30％。
在本发明中，可可籽的含量为5-30％，例如可以是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、26％、28％、30％。
优选地，所述植物组合物的制备原料按质量百分比包括：牡丹花15-35％、腊梅花15-30％、藏红花15-30％、积雪草5-20％、桂枝5-20％和可可籽10-20％。
第二方面，本发明提供了一种如第一方面所述的光防护植物组合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将植物组合物各组分原料干燥、粉碎、过筛，得到植物粗粉；
(2)将步骤(1)得到的植物粗粉用生物酶解法处理后，再加入提取溶剂提取，得到提取液；
(3)将步骤(2)得到的提取液分离、过滤、浓缩、干燥，得到光防护植物组合物。
本发明所述制备方法步骤(2)将生物酶解法和溶剂提取法相结合，通过生物酶的酶解催化作用，降低了细胞壁的屏障作用，从而有效的将植物中的重要成分提取出来，而且在植物提取中应用酶解法可以大大提高植物成分的纯度，体现了酶解法的专一性。将生物酶解法结合溶剂提取法相结合，得到的植物提取液的纯度较高，并且可以在最大程度上保留植物成分的药效。
优选地，步骤(1)所述过筛的目数为80-200目，例如可以是80目、90目、100目、110目、120目、130目、140目、150目、160目、170目、180目、190目、200目，优选为100目。
优选地，步骤(2)所述生物酶解法具体步骤为：将步骤(1)得到的植物粗粉与酶解溶剂混合，调节体系pH后，加入生物酶进行酶解。
优选地，所述酶解溶剂和植物粗粉的质量比为(4-8):1，例如可以是4:1、5:1、6:1、7:1、8:1，优选为5:1；
优选地，所述酶解溶剂为去离子水；
优选地，所述调节体系pH为4-6，例如可以是4、4.2、4.4、4.6、4.8、5、5.2、5.4、5.6、5.8、6。
优选地，所述生物酶为纤维素酶和果胶酶的混合物。
优选地，所述纤维素酶和果胶酶的质量比为(0.5-6):1，例如可以是0.5:1、0.6:1、0.7:1、0.8:1、0.9:1、1:1、1.1:1、1.2:1、1.3:1、1.4:1、1.5:1、1.6:1、1.7:1、1.8:1、1.9:1、2:1、2.5:1、3:1、3.5:1、4:1、4.5:1、5:1、5.5:1、6:1，优选为2.5:1。
优选地，所述纤维素酶的添加浓度为0.1-0.3mg/mL，例如可以是0.1mg/mL、0.12mg/mL、0.14mg/mL、0.16mg/mL、0.18mg/mL、0.2mg/mL、0.22mg/mL、0.24mg/mL、0.26mg/mL、0.28mg/mL、0.3mg/mL，优选为0.2mg/mL。
优选地，所述果胶酶的添加浓度为0.05-0.2mg/mL，例如可以是0.05mg/mL、0.06mg/mL、0.07mg/mL、0.08mg/mL、0.09mg/mL、0.1mg/mL、0.11mg/mL、0.12mg/mL、0.13mg/mL、0.14mg/mL、0.15mg/mL、0.16mg/mL、0.17mg/mL、0.18mg/mL、0.19mg/mL、0.2mg/mL，优选为0.08mg/mL。
优选地，所述酶解温度为40-60℃，例如可以是40℃、42℃、44℃、46℃、48℃、50℃、52℃、54℃、56℃、58℃、60℃，优选为50℃。
优选地，所述酶解时间为1-3h，例如可以是1h、1.2h、1.4h、1.6h、1.8h、2h、2.2h、2.4h、2.6h、2.8h、3h，优选为2h。
优选地，步骤(2)所述提取溶剂为乙醇和/或水。
优选地，步骤(2)所述提取的时间为1-4h，例如可以是1h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h、4h，优选为2.5h。
优选地，步骤(2)所述提取次数为1-4次，例如可以是1次、2次、3次、4次，优选为2次。
优选地，第1次提取的提取溶剂为乙醇。
优选地，所述乙醇与酶解溶剂的质量比为(0.5-2):1，例如可以是0.5:1、0.6:1、0.7:1、0.8:1、0.9:1、1:1、1.1:1、1.2:1、1.3:1、1.4:1、1.5:1、1.6:1、1.7:1、1.8:1、1.9:1、2:1，优选为1:1。
优选地，第2-4次提取的溶剂为乙醇水溶液。
优选地，所述乙醇水溶液的质量浓度为40-60％，例如可以是40％、42％、44％、46％、48％、50％、52％、54％、56％、58％、60％，优选为50％。
优选地，所述乙醇水溶液与植物粗粉的质量比为(8-12):1，例如可以是8:1、9:1、10:1、11:1、12:1，优选为10:1。
优选地，步骤(3)所述分离为离心分离。
优选地，步骤(3)所述过滤为采用微滤膜过滤。
优选地，所述微滤膜的孔径为0.1-0.45μm，例如可以是0.1μm、0.12μm、0.14μm、0.16μm、0.18μm、0.2μm、0.22μm、0.24μm、0.26μm、0.28μm、0.3μm、0.34μm、0.38μm、0.4μm、0.41μm、0.43μm、0.45μm，优选为0.22μm。
优选地，步骤(3)所述干燥为冷冻干燥。
优选地，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将植物组合物各组分原料干燥、粉碎、过筛，得到80-120目的植物粗粉；
(2)向步骤(1)得到的植物粗粉中加入酶解溶剂，调节体系pH为4-6，再加入纤维素酶和果胶酶的混合物进行酶解，所述纤维素酶和果胶酶的质量比为(0.5-2):1，所述酶解温度为40-60℃，酶解时间为1-3h；加入乙醇提取1次，所述乙醇与酶解溶剂的质量比为(0.5-2):1，再加入乙醇水溶液再提取1-3次，所述乙醇水溶液与植物粗粉的质量比为(8-12):1，得到提取液；
(3)将步骤(2)得到的提取液离心分离，采用微滤膜过滤，所述微滤膜的孔径为0.1-0.45μm，浓缩、冷冻干燥，得到光防护植物组合物。
第三方面，本发明提供一种如第一方面所述的光防护植物组合物在制备化妆品中的应用。
第四方面，本发明提供一种化妆品，所述化妆品包括如第一方面所述的光防护植物组合物。
优选地，所述光防护植物组合物的添加量为化妆品总重量的2-50％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％。
优选地，所述化妆品包括乳霜、防晒霜、柔肤水、面膜、精华液、化妆水或BB霜。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
1、本发明所述的光防护植物组合物利用牡丹花、腊梅花、藏红花、积雪草、桂枝和可可籽的协同增效作用，使防护范围覆盖UVB、UVA和HEV波长区域，通过吸收紫外线来进行光防护，还能清除蓝光诱导下产生的大量活性氧自由基，通过提高皮肤本身的抵抗力和修复力来提高对外界有害光线的抵御能力，同时本发明所述的光防护植物组合物还具有良好的抗氧化、抗衰老和抗过敏的功效。
2、本发明所述的光防护植物组合物，对于紫外线具有很强的吸收作用，UVB区平均吸光度值ā在2.02以上，UVA区平均吸光度值ā在1.55以上；对于蓝光引起的色素沉着有很好的抑制效果，蓝光诱导的色素沉着抑制率在91.6％以上；对DPPH自由基有显著的清除功效，DPPH自由基清除率在91.7％以上；对透明质酸酶抑制率在90.5％以上，具有良好的抗过敏功效。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
本实施例提供一种光防护植物组合物，所述植物组合物的制备原料按质量百分比包括：牡丹花35％、腊梅花20％、藏红花15％、积雪草10％、桂枝10％和可可籽10％。
其制备方法包括以下步骤：
(1)分别称取牡丹花3.5g、腊梅花2.0g、藏红花1.5g、积雪草1.0g、桂枝1.0g和可可籽1.0g，进行干燥、粉碎、过筛，目数为100目，得到植物粗粉；
(2)加去离子水到粗粉中，用量为粗粉质量的5倍，搅拌均匀后调节pH值为4.5，再加入终浓度为0.2mg/mL的纤维素酶和0.08mg/mL的果胶酶，摇匀后放入50℃恒温水浴锅中酶解2h；之后加入50g乙醇溶液，70℃密闭浸泡提取2次，第二次提取溶剂为50％的乙醇溶液100g，每次提取2.5h，合并得到提取液；
(3)将步骤(2)得到的提取液离心分离后，收集上清液用0.22μm微滤膜过滤后，进行旋转蒸发浓缩，将浓缩液冷冻干燥，得到所述光防护植物组合物。
实施例2
本实施例提供一种光防护植物组合物，所述植物组合物的制备原料按质量百分比包括：牡丹花20％、腊梅花30％、藏红花20％、积雪草5％、桂枝10％和可可籽15％。
其制备方法包括以下步骤：
(1)分别称取牡丹花2.0g、腊梅花3.0g、藏红花2.0g、积雪草0.5g、桂枝1.0g和可可籽1.5g，进行干燥过筛，目数为80目，得到植物粗粉；
(2)加去离子水到粗粉中，用量为粗粉质量的6倍，搅拌均匀后调节pH值为5.0，再加入终浓度为0.25mg/mL的纤维素酶和0.1mg/mL的果胶酶，摇匀后放入40℃恒温水浴锅中酶解3h；之后加入50g乙醇溶液，75℃密闭浸泡提取3次，第二次和第三次的提取溶剂为45％的乙醇溶液80g，每次提取1.5h，合并得到提取液；
(3)将步骤(2)得到的提取液离心分离后，收集上清液用0.10μm微滤膜过滤后，进行旋转蒸发浓缩，将浓缩液冷冻干燥，得到所述光防护植物组合物。
实施例3
本实施例提供一种光防护植物组合物，所述植物组合物的制备原料按质量百分比包括：牡丹花15％、腊梅花20％、藏红花30％、积雪草10％、桂枝15％和可可籽10％。
其制备方法包括以下步骤：
(1)分别称取牡丹花1.5g、腊梅花2.0g、藏红花3.0g、积雪草1.0g、桂枝1.5g和可可籽1.0g，进行干燥过筛，目数为120目，得到植物粗粉；
(2)加去离子水到粗粉中，用量为粗粉质量的7倍，搅拌均匀后调节pH值为4.0，再加入终浓度为0.3mg/mL的纤维素酶和0.15mg/mL的果胶酶，摇匀后放入55℃恒温水浴锅中酶解1h，之后加入35g乙醇溶液，80℃密闭浸泡提取2次，第二次提取溶剂为55％的乙醇溶液120g，每次提取3h，合并得到提取液；
(3)将步骤(2)得到的提取液离心分离后，收集上清液用0.45μm微滤膜过滤后，进行旋转蒸发浓缩，将浓缩液冷冻干燥，得到所述光防护植物组合物。
实施例4
本实施例提供一种光防护植物组合物，所述植物组合物的制备原料按质量百分比包括：牡丹花20％、腊梅花15％、藏红花20％、积雪草20％、桂枝15％和可可籽10％。
其制备方法包括以下步骤：
(1)分别称取牡丹花2.0g、腊梅花1.5g、藏红花2.0g、积雪草2.0g、桂枝1.5g和可可籽1.0g，进行干燥过筛，目数为140目，得到植物粗粉；
(2)加去离子水到粗粉中，用量为粗粉质量的4倍，搅拌均匀后调节pH值为5.5，再加入终浓度为0.1mg/mL的纤维素酶和0.2mg/mL的果胶酶，摇匀后放入45℃恒温水浴锅中酶解2.5h；之后加入80g乙醇溶液，90℃密闭浸泡提取2次，第二次提取溶剂为60％的乙醇溶液90g，每次提取2h，合并得到提取液；
(3)将步骤(2)得到的提取液离心分离后，收集上清液用0.22μm微滤膜过滤后，进行旋转蒸发浓缩，将浓缩液冷冻干燥，得到植物组合物。
实施例5
本实施例提供一种光防护植物组合物，所述植物组合物的制备原料按质量百分比包括：牡丹花20％、腊梅花20％、藏红花15％、积雪草10％、桂枝20％和可可籽15％。
其制备方法包括以下步骤：
(1)分别称取牡丹花2.0g、腊梅花2.0g、藏红花1.5g、积雪草1.0g、桂枝2.0g和可可籽1.5g，进行干燥过筛，目数为170目，得到植物粗粉；
(2)加去离子水到粗粉中，用量为粗粉质量的8倍，搅拌均匀后调节pH值为6.0，再加入终浓度为0.15mg/mL的纤维素酶和0.05mg/mL的果胶酶，摇匀后放入60℃恒温水浴锅中酶解1h，之后加入50g乙醇溶液，60℃密闭浸泡提取4次，第二、三、四次提取溶剂为40％的乙醇溶液110g，每次提取1h，合并得到提取液；
(3)将步骤(2)得到的提取液离心分离后，收集上清液用0.10μm微滤膜过滤后，进行旋转蒸发浓缩，将浓缩液冷冻干燥，得到所述光防护植物组合物。
实施例6
本实施例提供一种光防护植物组合物，所述植物组合物的制备原料按质量百分比包括：牡丹花20％、腊梅花20％、藏红花20％、积雪草15％、桂枝5％和可可籽20％。
其制备方法包括以下步骤：
(1)分别称取牡丹花2.0g、腊梅花2.0g、藏红花2.0g、积雪草1.5g、桂枝0.5g和可可籽2.0g，进行干燥过筛，目数为200目，得到植物粗粉；
(2)加去离子水到粗粉中，用量为粗粉质量的5倍，搅拌均匀后调节pH值为5.5，再加入终浓度为0.25mg/mL的纤维素酶和0.15mg/mL的果胶酶，摇匀后放入45℃恒温水浴锅中酶解1.5h，之后加入75g乙醇溶液，65℃密闭浸泡提取1次，提取时间为4h，得到的提取液；
(3)将步骤(2)得到的提取液离心分离后，收集上清液用0.22μm微滤膜过滤后，进行旋转蒸发浓缩，将浓缩液冷冻干燥，得到所述光防护植物组合物。
实施例7
本实施例提供一种光防护植物组合物，所述植物组合物的制备原料按质量百分比包括：牡丹花40％、腊梅花10％、藏红花10％、积雪草10％、桂枝20％和可可籽10％。
其制备方法包括以下步骤：
(1)分别称取牡丹花4g、腊梅花1g、藏红花1g、积雪草1g、桂枝2g和可可籽1g，进行干燥、粉碎、过筛，目数为100目，得到植物粗粉；
(2)加去离子水到粗粉中，用量为粗粉质量的5倍，搅拌均匀后调节pH值为4.5，再加入终浓度为0.2mg/mL的纤维素酶和0.08mg/mL的果胶酶，摇匀后放入50℃恒温水浴锅中酶解2h；之后加入50g乙醇溶液，70℃密闭浸泡提取2次，第二次提取溶剂为50％的乙醇溶液100g，每次提取2.5h，合并得到提取液；
(3)将步骤(2)得到的提取液离心分离后，收集上清液用0.22μm微滤膜过滤后，进行旋转蒸发浓缩，将浓缩液冷冻干燥，得到所述光防护植物组合物。
实施例8
本实施例提供一种光防护植物组合物，所述植物组合物的制备原料按质量百分比包括：牡丹花10％、腊梅花35％、藏红花35％、积雪草5％、桂枝10％和可可籽5％。
其制备方法包括以下步骤：
(1)分别称取牡丹花1g、腊梅花3.5g、藏红花3.5g、积雪草0.5g、桂枝1g和可可籽0.5g，进行干燥、粉碎、过筛，目数为100目，得到植物粗粉；
(2)加去离子水到粗粉中，用量为粗粉质量的5倍，搅拌均匀后调节pH值为4.5，再加入终浓度为0.2mg/mL的纤维素酶和0.12mg/mL的果胶酶，摇匀后放入50℃恒温水浴锅中酶解2h；之后加入50g乙醇溶液，70℃密闭浸泡提取2次，第二次提取溶剂为50％的乙醇溶液100g，每次提取2.5h，合并得到提取液；
(3)将步骤(2)得到的提取液离心分离后，收集上清液用0.22μm微滤膜过滤后，进行旋转蒸发浓缩，将浓缩液冷冻干燥，得到所述光防护植物组合物。
对比例1-12
本对比例1-12的植物组合物，由表1所示质量(g)的组分原料制成。(表1中数字代表对应原料的质量，例如10代表10g，0代表不含该组分原料。)
表1
对比例1-12的植物组合物的制备方法为：分别称取对应配方重量的各植物，进行干燥粉碎过筛，目数为100目，得到粗粉。加去离子水到粗粉中，用量为粗粉质量的5倍，再加入50g乙醇溶液，70℃密闭浸泡提取2次，第二次提取溶剂为50％的乙醇溶液100g，每次提取2.5h，合并收集得到的提取液离心后，收集上清液用0.22μm微滤膜过滤后进行旋转蒸发浓缩，将浓缩液冷冻干燥，得到植物组合物。
试验例1
红细胞溶血实验
红细胞溶血实验是兔眼刺激性实验(Draize test)替代方法之一，基本原理是通过测定血红蛋白溶出量及变性程度来评价化学品对眼组织细胞的损伤。国际上主要将RBC实验用于评价化妆品及原料等化学品的眼刺激性研究。
对实施例1-8制备的光防护植物组合物和对比例1-12制备的植物组合物进行红细胞溶血实验，本实验依照欧洲替代方法验证中心(ECVAM)的RBC实验测试方法及分级标准。实施例1-8制备的光防护植物组合物和对比例1-12制备的植物组合物的红细胞溶血实验结果如表2所示，其中，L/D为HD50与DI的比值，其中HD50为50％红细胞发生溶血时的样品浓度，DI为蛋白质变性指数。
表2
由表2的红细胞溶血实验结果可知，本发明实施例1-8所制备的光防护植物组合物刺激性分级为无刺激，说明本发明所述的光防护植物组合物均具有温和无刺激的特点；而在对比例中，对比例1-12制备的植物组合物刺激性分级均为微刺激性，对比可知本发明所述光防护植物组合物的活性成分相互配合，协同增效后能够显著降低植物组合物毒副作用和刺激性，以达到减弱细胞溶血程度和蛋白质变性的目的。
试验例2
紫外线吸光度测试
分别称取实施例1-8制备的光防护植物组合物和对比例1-12制备的植物组合物0.5g，用50％的乙醇1g溶解均匀后稀释100倍，以50％的乙醇作为空白对照，用紫外分光光度计测定样品在UVB区(280-320nm)和UVA区(320-400nm)的吸光度A，每隔10nm测定1次，求出各区的平均吸光度值ā，紫外线吸光度具体测试结果见表3。
表3
由表3的测试结果可知，实施例1-8制备的光防护植物组合物对于UVA和UVB都有良好的吸收效果，UVB区平均吸光度值ā在2.02以上，UVA区平均吸光度值ā在1.55以上；而对比例1-6仅含有单一植物组分和对比例7-12缺少任一植物组分，其UVA区和UVB区的吸光度值ā比本发明制备的光防护植物组合物低，这说明本发明所述牡丹花、腊梅花、藏红花、积雪草、桂枝和可可籽，按照一定复配比例并用合适的制备方法得到的光防护植物组合物，各组分之间具有协同增效的作用，对UVB区和UVB区的紫外线吸收效果均显著。
试验例3
蓝光诱导的色素沉着抑制率实验
使用3D人造皮肤模型进行蓝光诱导的色沉抑制试验，准备实施例1-8制备的光防护植物组合物和对比例1-12制备的植物组合物作为测试样品，测试样品制备方法：称取植物组合物0.5g，用50％的乙醇1g溶解均匀后用超纯水稀释100倍。每种测试样品使用2个孔进行重复试验，每天将皮肤模型用LED(476nm，1000lux)蓝光持续照射1h，并持续进行7天。使用1mol/L的NaOH(含10％DMSO)溶液萃取出模型中的黑色素，80℃水浴锅中水浴0.5h，使黑色素颗粒完全溶解后离心，取上清液在波长405nm处读取光密度OD值，通过黑色素的标准曲线计算出模型中的黑色素含量。以植物组合物的溶剂为空白对照，以空白对照为参照，计算抑制率，蓝光诱导的色素沉着抑制率实验结果如表4所示。
表4
由表4的测试结果可以看出，实施例1-8制备的光防护植物组合物对于蓝光引起的色素沉着均有很好的抑制效果，蓝光诱导的色素沉着抑制率在91.6％以上，而对比例1-12制备的植物组合物对于蓝光诱导的色素沉着抑制效果远不及本申请所述光防护植物组合物。这说明本发明所述光防护植物组合物中的牡丹花、腊梅花、藏红花、积雪草、桂枝和可可籽之间相互配合，具有协同增效作用，对于蓝光引起的皮肤色素沉着有良好的防护效果。
试验例4
DPPH自由基清除实验
准备实施例1-8制备的光防护植物组合物和对比例1-12制备的植物组合物作为测试样品，测试样品制备方法：称取植物组合物0.5g，用50％的乙醇1g溶解均匀后用无水乙醇稀释100倍。取2mL测试样品，与用2mL无水乙醇配制的2×10-4mol/L的DPPH溶液加入到具塞比色管内充分混合，30min后在517nm处测定吸光度，得A1，并测定2mL样品溶液与2mL无水乙醇混合液的吸光度A2以及2mL DPPH溶液与2mL无水乙醇混合液的吸光度A0，按下式计算DPPH自由基清除率：DPPH自由基清除率＝[1-(A1-A2)/A0]×100％，具体测试结果如表5所示。
表5
研究表明细胞在蓝光诱导下，可以产生大量活性氧自由基，引发细胞损伤。由表5的测试结果可以看出，实施例1-8制备的光防护植物组合物对DPPH自由基有显著的清除功效，DPPH自由基清除率在91.7％以上，能有效抑制蓝光带来的皮肤伤害，以达到抗氧化、抗衰老的功效，而对比例1-12制备的植物组合物DPPH自由基清除率远不及本申请所述光防护植物组合物，这说明本发明所述光防护植物组合物各组分相互配合，具有协同增效作用，能有效抑制蓝光引起的自由基生成，从而抑制蓝光带来的皮肤伤害，以达到抗氧化、抗衰老的功效。
试验例5
透明质酸酶体外抑制试验
测试样品：实施例1-8制备的光防护植物组合物和对比例1-12制备的植物组合物。测试样品制备方法：称取植物组合物0.5g，用50％的乙醇1g溶解均匀后用去离子水稀释100倍。
试剂配制：量取1155μL冰乙酸稀释至100mL，取4.8mL为A溶液，称取2.72g乙酸钠结晶加水溶解定容至100mL，取45.2mL为B溶液，混合溶液A与B并以水定容至100mL，制成pH＝5.6的醋酸缓冲液；用配制好的醋酸缓冲液作为溶剂配制透明质酸酶溶液和透明质酸钠溶液(两种溶液的最终工作浓度为1250u/mL和0.5mg/mL)；氯化钙溶液的浓度配制为0.25mmol/L；氢氧化钠溶液浓度配制为0.4mol/L；碳酸钠溶液浓度配制为1.0mol/L，在50mL碳酸钠溶液中加入3.5mL乙酰丙酮配制成乙酰丙酮溶液；最后称取0.8g对-二甲氨基苯甲醛溶于15mL浓盐酸和15mL无水乙醇中配制成埃尔利希试剂。
试验步骤：采用透明质酸酶体外抑制试验法进行，取0.1mL氯化钙溶液和透明质酸酶溶液保温培养20min；加入样品液0.5mL，继续37℃保温培养20min；加入0.5mL透明质酸钠溶液保温30min，常温放置5min；加入0.1mL 0.4mol/L NaOH溶液和0.5mL乙酰丙酮溶液，置沸水浴中加热15min后立即用冰水冷却5min；加入埃尔利希试剂1.0mL并用3.0mL无水乙醇进行稀释，放置20min显色，用分光光度计测定其吸光度值。
透明质酸酶抑制率按下式计算：
透明质酸酶抑制率＝{(A－B)－(C－D)}/(C－D)×100％
式中：A为对照溶液吸光度(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液)，B为对照空白溶液吸光度(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液及酶液)，C为试样溶液吸光度值，D为试样空白溶液吸光度(用醋酸缓冲溶液代替酶液)。试验时先对对照组试样进行波长扫描，以确定最大吸收波长，然后以去离子水作为参比，在该最大吸收波长处分别进行吸光度测定，透明质酸酶体外抑制率测试结果如表6所示：
表6
透明质酸酶是透明质酸的水解酶，它与炎症、过敏的发生存在着密切的联系。透明质酸酶抑制剂可有效调节透明质酸和透明质酸酶之间的平衡关系，对抗敏起相应的作用。由表6的测试结果可以看出，实施例1-8制备的光防护植物组合物对透明质酸酶活性有显著的抑制作用，透明质酸酶抑制率均在90.5％以上，而对比例1-12制备的植物组合物对于透明质酸酶活性抑制效果则要低得多，这说明本发明所述光防护植物组合物中的牡丹花、腊梅花、藏红花、积雪草、桂枝和可可籽之间相互配合，协同增效后能够有效抑制透明质酸酶的活性，具有良好的抗过敏功效。
应用实施例1
采用本发明所述实施例1制备的光防护植物组合物制备的乳霜，由表7所示质量百分含量的组分制成，(即表中数字代表质量百分含量，例如1代表1％)。
表7
本应用实施例的制备方法为：
(1)将对羟基苯乙酮预先用适量1,3-丁二醇溶解均匀，将黄原胶和透明质酸钠用甘油和剩余的1,3-丁二醇预分散，将卡波姆用适量去离子水预分散，将实施例1制备的光防护植物组合物用适量去离子水预分散；
(2)将EDTA二钠、泛醇、去离子水和经步骤(1)预分散好的原料加热至80℃搅拌溶解均匀；
(3)将C12-15醇苯甲酸酯、甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯以及辛酸/癸酸甘油三酯加热至80℃搅拌溶解均匀，乳化前加入环五聚二甲基硅氧烷搅拌均匀；
(4)将油相缓慢加入水相，均质降温至40℃后，加入氨甲基丙醇、植物组合物及苯氧乙醇继续均质，抽真空脱泡，制备完成。
应用实施例2
同应用实施例1，区别仅在于，将实施例1制备的光防护植物组合物替换为实施例2制备的光防护植物组合物，其他组分含量及制备方法不变。
应用实施例3
同应用实施例1，区别仅在于，将实施例1制备的光防护植物组合物替换为实施例3制备的光防护植物组合物，其他组分含量及制备方法不变。
应用实施例4
同应用实施例1，区别仅在于，将实施例1制备的光防护植物组合物替换为实施例4制备的光防护植物组合物，其他组分含量及制备方法不变。
应用实施例5
同应用实施例1，区别仅在于，将实施例1制备的光防护植物组合物替换为实施例5制备的光防护植物组合物，其他组分含量及制备方法不变。
应用实施例6
同应用实施例1，区别仅在于，将实施例1制备的光防护植物组合物替换为实施例6制备的光防护植物组合物，其他组分含量及制备方法不变。
应用实施例7
同应用实施例1，区别仅在于，将实施例1制备的光防护植物组合物替换为实施例7制备的光防护植物组合物，其他组分含量及制备方法不变。
应用实施例8
同应用实施例1，区别仅在于，将实施例1制备的光防护植物组合物替换为实施例8制备的光防护植物组合物，其他组分含量及制备方法不变。
应用实施例9
采用本发明所述实施例1制备的光防护植物组合物制备的水剂，由表8所示质量百分含量的组分制成，(即表中数字代表质量百分含量，例如3代表3％)。
表8
成分 质量百分含量(％)
去离子水 余量
1,3-丁二醇 6
甘油 3
EDTA二钠 0.05
黄原胶 0.12
实施例1制备的光防护植物组合物 5
苯氧乙醇 0.5
本应用实施例的制备方法包括以下步骤：
(1)将黄原胶用甘油预分散，将实施例1制备的光防护植物组合用适量去离子水预分散；
(2)将EDTA二钠、1,3-丁二醇、去离子水和经步骤(1)预分散好的原料加热至80℃搅拌溶解均匀；
(3)降温至45℃后，加入植物组合物及苯氧乙醇继续搅拌均匀，抽真空脱泡，制备完成。
应用实施例10
同应用实施例9，区别仅在于，将实施例1制备的光防护植物组合物替换为实施例2制备的光防护植物组合物，其他组分含量及制备方法不变。
应用实施例11
同应用实施例9，区别仅在于，将实施例1制备的光防护植物组合物替换为实施例3制备的光防护植物组合物，其他组分含量及制备方法不变。
应用实施例12
同应用实施例9，区别仅在于，将实施例1制备的光防护植物组合物替换为实施例4制备的光防护植物组合物，其他组分含量及制备方法不变。
应用实施例13
同应用实施例9，区别仅在于，将实施例1制备的光防护植物组合物替换为实施例5制备的光防护植物组合物，其他组分含量及制备方法不变。
应用实施例14
同应用实施例9，区别仅在于，将实施例1制备的光防护植物组合物替换为实施例6制备的光防护植物组合物，其他组分含量及制备方法不变。
应用实施例15
同应用实施例9，区别仅在于，将实施例1制备的光防护植物组合物替换为实施例7制备的光防护植物组合物，其他组分含量及制备方法不变。
应用实施例16
同应用实施例9，区别仅在于，将实施例1制备的光防护植物组合物替换为实施例8制备的光防护植物组合物，其他组分含量及制备方法不变。
应用对比例1-12
同应用实施例1，区别仅在于，将实施例1制备的光防护植物组合物对应替换对比例1-12制备的植物组合物(例如，应用对比例1为将实施例1制备的光防护植物组合物替换对比例1制备的植物组合物)，其他组分含量及制备方法不变。
应用对比例13-24
同应用实施例9，区别仅在于，将实施例1制备的光防护植物组合物对应替换对比例1-12制备的植物组合物(例如，应用对比例13为将实施例1制备的光防护植物组合物替换对比例1制备的植物组合物)，其他组分含量及制备方法不变。
试验例6
防晒效果人体测试
(1)防晒指数(SPF)：也称为日光防护系数，SPF指数适用于评价对UVB的防护效果。表明防晒用品所能发挥的防晒效能的高低。SPF值越大，防晒效果越好。它是根据皮肤的最低红斑剂量(MED)来确定的。使用防晒用品后，皮肤的最低红斑剂量会增长，那么该防晒用品的防晒系数SPF则为：
(2)防晒化妆品长波紫外线防护指数(PFA值)：也称UVA防护指数。日光中UVA照射到皮肤，主要产生皮肤黑化的生理学效应，该效应以最小持续性黑化量(MPPD)来量度。MPPD是辐照后2-4h在整个照射部位皮肤上产生轻微黑化所需的最小紫外线辐照剂量或最短辐照时间。
选取应用实施例1-8制备的光防护植物组合物和应用对比例1-12制备的植物组合物，按照《化妆品安全技术规范》(2015版)防晒化妆品防晒指数测试方法(人体法)测试产品防晒效果，测试结果见表9。
表9
由表9的测试结果可以看出，添加本发明所述光防护植物组合物的应用实施例1-8制备的乳霜具有良好的防晒功效，防晒系数SPF在16.3以上，紫外线防护指数PFA在5.1以上，而应用对比例1-12制备的乳霜的防晒效果则要低得多。这说明本发明所述光防护植物组合物中的牡丹花、腊梅花、藏红花、积雪草、桂枝和可可籽之间相互配合，具有协同增效作用，将本发明所述光防护植物组合物应用在化妆品中防晒效果显著。
试验例6
蓝光诱导的色素沉着抑制率实验
使用3D人造皮肤模型进行蓝光诱导的色沉抑制试验，对应用实施例9-16制备的水剂和应用对比例13-24制备的水剂进行测试，每种测试样品使用2个孔进行重复试验，每天将皮肤模型用LED(476nm，1000lux)蓝光持续照射1h，并持续进行7天。使用1mol/L的NaOH(含10％DMSO)溶液萃取出模型中的黑色素，80℃水浴锅中水浴0.5h，使黑色素颗粒完全溶解后离心，取上清液在波长405nm处读取OD值，通过黑色素的标准曲线计算出模型中的黑色素含量。以不含植物组合物的空白基质产品为空白对照，以空白对照为参照，计算抑制率，实验结果如表10所示。
表10
由表10测试结果可以看出，应用实施例9-16制备的水剂对于蓝光引起的色素沉着有很好的抑制效果，蓝光诱导的色素沉着抑制率在90.2％以上，而应用对比例测试效果则要差得多。这说明本发明所述光防护植物组合物中的牡丹花、腊梅花、藏红花、积雪草、桂枝和可可籽之间相互配合，具有协同增效作用，对于蓝光引起的皮肤色素沉着有良好的防护效果。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的光防护植物组合物及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种光防护植物组合物，其特征在于，所述植物组合物的制备原料包括：牡丹花、腊梅花、藏红花、积雪草、桂枝和可可籽。
2.根据权利要求1所述的光防护植物组合物，其特征在于，所述植物组合物的制备原料按质量百分比包括：牡丹花10-40％、腊梅花5-35％、藏红花5-35％、积雪草5-30％、桂枝5-30％和可可籽5-30％。
3.根据权利要求1或2所述的光防护植物组合物，其特征在于，所述植物组合物的制备原料按质量百分比包括：牡丹花15-35％、腊梅花15-30％、藏红花15-30％、积雪草5-20％、桂枝5-20％和可可籽10-20％。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的光防护植物组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将植物组合物各组分原料干燥、粉碎、过筛，得到植物粗粉；
(2)将步骤(1)得到的植物粗粉用生物酶解法处理后，再加入提取溶剂提取，得到提取液；
(3)将步骤(2)得到的提取液分离、过滤、浓缩、干燥，得到所述光防护植物组合物。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述过筛的目数为80-200目，优选为100目。
6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述生物酶解法具体步骤为：将步骤(1)得到的植物粗粉与酶解溶剂混合，调节体系pH后，加入生物酶进行酶解；
优选地，所述酶解溶剂和植物粗粉的质量比为(4-8):1，优选为5:1；
优选地，所述酶解溶剂为去离子水；
优选地，所述调节体系pH为4-6；
优选地，所述生物酶为纤维素酶和果胶酶的混合物；
优选地，所述纤维素酶和果胶酶的质量比为(0.5-6):1，优选为2.5:1；
优选地，所述纤维素酶的添加浓度为0.1-0.3mg/mL，优选为0.2mg/mL；
优选地，所述果胶酶的添加浓度为0.05-0.2mg/mL，优选为0.08mg/mL；
优选地，所述酶解温度为40-60℃，优选为50℃；
优选地，所述酶解时间为1-3h，优选为2h；
优选地，步骤(2)所述提取溶剂为乙醇和/或水；
优选地，步骤(2)所述提取的时间为1-4h，优选为2.5h；
优选地，步骤(2)所述提取次数为1-4次，优选为2次；
优选地，第1次提取的提取溶剂为乙醇；
优选地，所述乙醇与酶解溶剂的质量比为(0.5-2):1，优选为1:1；
优选地，第2-4次提取的溶剂为乙醇水溶液；
优选地，所述乙醇水溶液的质量浓度为40-60％，优选为50％；
优选地，所述乙醇水溶液与植物粗粉的质量比为(8-12):1，优选为10:1。
7.根据权利要求4-6中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述分离为离心分离；
优选地，步骤(3)所述过滤为采用微滤膜过滤；
优选地，所述微滤膜的孔径为0.1-0.45μm，优选为0.22μm；
优选地，步骤(3)所述干燥为冷冻干燥。
8.根据权利要求4-7中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将植物组合物各组分原料干燥、粉碎、过筛，得到80-120目的植物粗粉；
(2)向步骤(1)得到的植物粗粉中加入酶解溶剂，调节体系pH为4-6，再加入纤维素酶和果胶酶的混合物进行酶解，所述纤维素酶和果胶酶的质量比为(0.5-6):1，所述酶解温度为40-60℃，酶解时间为1-3h；加入乙醇提取1次，所述乙醇与酶解溶剂的质量比为(0.5-2):1，再加入乙醇水溶液再提取1-3次，所述乙醇水溶液与植物粗粉的质量比为(8-12):1，得到提取液；
(3)将步骤(2)得到的提取液离心分离，采用微滤膜过滤，所述微滤膜的孔径为0.1-0.45μm，浓缩、冷冻干燥，得到光防护植物组合物。
9.一种如权利要求1-3中任一项所述的光防护植物组合物在制备化妆品中的应用。
10.一种化妆品，其特征在于，所述化妆品包括如权利要求1-3中任一项所述的光防护植物组合物；
优选地，所述光防护植物组合物的添加量为化妆品总重量的2-50％；
优选地，所述化妆品包括乳霜、防晒霜、柔肤水、面膜、精华液、化妆水或BB霜。
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