CN110596372A - 一种钾离子检测试剂盒 - Google Patents

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甘宜梧
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Abstract

本发明公开了一种钾离子检测试剂盒，涉及生物技术领域。所述钾离子检测试剂盒由试剂R1和试剂R2组成，所述试剂R1的成分如下：缓冲液、穴合剂、烯醇式丙酮酸磷酸、二磷酸腺苷、α‑酮戊二酸、还原性辅酶Ⅰ、氯化镁、丙二醇‑单甲醚、4‑甲基苯硼酸、所述试剂R2的成分如下：缓冲液、谷氨酸脱氢酶、丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶、牛血清白蛋白、氯化钙、丙二醇‑单甲醚。本发明在不影响准确度和分析灵敏度的前提下能够提高其稳定性。

Description

一种钾离子检测试剂盒
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种血清钾离子检测试剂盒。
背景技术
人体内的钾主要来源于食物，食物中的钾90％以上短时间内在肠道被吸收，吸收入血液的钾在4h内即有90％从肾排出体外。钾离子大部分(98％) 存在于细胞内，少量存在于细胞外液，且浓度恒定。组织细胞中平均含 K+150mmol/L，红细胞内含K+约105mmol/L，血清中含K+约4～5mmol/L。体内的钾离子经常不断地在细胞内与体液之间相互交换，以保持动态平衡。钾是维持细胞生理活动的主要阳离子，在保持机体的正常渗透压及酸碱平衡、参与糖及蛋白代谢、保证神经肌肉的正常功能等方面具有重要作用。
2.临床意义
(1)血清钾降低：①如严重感染、慢性消耗疾病等长期食欲不振以及手术后禁食时间过长而又未注意补钾者；②肾上腺皮质功能亢进或长期大量使用肾上腺皮质激素；许多利尿剂的长期使用；急性肾功能衰竭由尿闭期转入多尿期；碱中毒；③糖尿病患者使用胰岛素治疗时或以胰岛素加葡萄糖作为能量合剂使用；④大量输入无钾液体致血浆稀释，使血清钾降低。
(2)血清钾升高：①急性肾功能衰竭、尿中毒症时钾排出障碍；②肾上腺皮质功能减退；③各种原因引的呼吸性酸中毒和代谢性酸中毒；④重度溶血、大量输入库存血、挤压综合征、灼伤等；⑤大量使用含钾药物；⑥高渗性脱水。
3.检测方法
目前血清钾测定常用的方法有火焰光度计法(FAES，或FP)、离子选择电极法(ISE)、酶动力学法。
(1)火焰光度计法
原理：火焰光度分析是一种发射光谱分析，样品中的钾原子受火焰热能作用而被激发出于激发态，激发态的原子不稳定迅速回到基态，放出能量，发射出元素特有波长的辐射谱线。钾发射光一般在766nm处，用相应波长的滤波片将谱线分离，然后通过光电管或光电池转换成电信号，经放大后进行测量。
评价：该方法检测血清钾具有良好的准确度，但抗干扰能力较差，线性范围窄，检测条件要求高等缺点。
(2)离子选择电极法
原理：离子选择去电极分析法是以测量电池的电动势为基础的定量分析方法，将离子选择去电极和一个参比电极连接起来，置于待测的电解质溶液中构成原电池，参比电极为负极，离子选择性电极为正极，此电池的电动势(E)与被测离子活度对数符合能斯特(Nernst)方程。
E＝E0+2.303RT/nF·logαx·fx
E＝离子选择去电极在测量溶液中的点位；E0＝离子选择去电极的标准电极电位；n＝被测离子的电荷数；R＝气体常数(8.314J/K·mol)；T＝绝对温度(273+t℃)；F＝法拉第常数(96487C/mol)；αx＝被测离子的活度；fx＝被测离子的活度系数。
(3)酶动力学法
原理：磷酸烯醇式丙酮酸和二磷酸腺苷(ADP)在钾—依赖性丙酮酸激酶作用下生成丙酮酸和三磷酸腺苷(ATP)，生成的丙酮酸和还原性辅酶 I(NADH)在乳酸脱氢酶的作用下生成L-乳酸和氧化性辅酶I。NADH的下降速率与样本中的钾离子浓度成正比，在340nm处检测NADH吸光度的变化，可以计算出钾离子的含量。
评价：该方法操作简便，具有良好的线性、重复性、分析灵敏度和抗干扰能力，适合全自动生化分析仪，但现有市场上用来测定钾离子的试剂盒长期保存后稳定性会变得较差，最终导致检测的结果不准确。
发明内容
本发明提供一种在不影响准确度和分析灵敏度的前提下能够提高其稳定性的钾离子检测试剂盒。
为解决上述技术问题，本发明提供技术方案如下：
本发明提供一种钾离子检测试剂盒，由试剂R1和试剂R2组成，其中：
所述试剂R1的成分和含量如下：
所述试剂R2的成分和含量如下：
进一步的，所述缓冲液为PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液中的一种或多种组合，所述试剂R1中缓冲液的PH值为9.2，所述试剂R2 中缓冲液的PH值为6.2。
进一步的，所述试剂R1和试剂R2的体积比为试剂R1：试剂R2＝3:1。
进一步的，所述试剂R1的成分和含量如下：
所述试剂R2的成分和含量如下：
进一步的，所述试剂R1的成分和含量如下：
所述试剂R2的成分和含量如下：
本发明的试剂盒在具有双试剂功能的全自动生化分析仪上进行，其具体使用方法如图5所示。
本发明所使用的校准品为英国朗道公司生产的复合校准品。
本发明所使用的质控品为英国朗道公司生产的复合质控品
分别加入纯化水、样本或校准品各5μl，之后再加入R1试剂180μl 预孵育5min后加入60μl的试剂R2，30秒后开始记录吸光度值A1，反应5min后，读取吸光度A2，并计算ΔA/min。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明的钾离子检测试剂盒通过分别在试剂R1中添加适宜浓度的氯化镁和丙二醇-单甲醚，在试剂R2中添加适宜浓度的氯化钙和丙二醇-单甲醚作为酶稳定剂，使钾离子检测试剂盒在37℃条件下也能稳定12天以上，同时不会对试剂盒的准确度和相关性产生影响，有利于在市场中进一步的推广。
此外，本发明的试剂盒通过试剂R1中加入4-甲基苯硼酸作为催化剂，提高了试剂盒的灵敏度。
附图说明
图1为本发明的钾离子检测试剂盒中实施例1的试剂盒的相关性曲线图；
图2为本发明的钾离子检测试剂盒中实施例2的试剂盒的相关性曲线图；
图3为本发明的钾离子检测试剂盒的开瓶稳定性试验曲线图；
图4为本发明的钾离子检测试剂盒的热稳定性试验曲线图；
图5为本发明的钾离子检测试剂盒在全自动生化分析仪上的操作方法。
具体实施方式
为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例及附图进行详细描述。
实施例1：
本发明的钾离子检测试剂盒由试剂R1和试剂R2组成，其中：
试剂R1的成分和含量如下：
试剂R2的成分和含量如下：
实施例1的试剂盒试验所用校准品和质控品分别为：
校准品：RANDOX926血清钾的含量为4.22mmol/L。
质控品：RANDOX1005血清钾的靶值为4.22mmol/L，靶值范围： 3.88～4.56mmol/L。
实施例2：
所述试剂R2的成分和含量如下：
实施例2的试剂盒试验所用校准品和质控品分别为：
校准品：RANDOX926血清钾的含量为4.22mmol/L。
质控品：RANDOX1005血清钾的靶值为4.22mmol/L，靶值范围： 3.88～4.56mmol/L。
上述实施例1和实施例2的试剂盒在使用时，其测定方法是采用具有双试剂功能的日立7180全自动分析仪等，利用速率法进行测定，操作如下：
加入纯化水、样本或校准品5μl，之后再加入180μl的R1试剂预孵育5min后加入60μl的试剂R2，30秒后开始记录吸光度值A1，反应5min 后，读取吸光度A2，并计算ΔA/min。
干扰性试验：
取新鲜混合血清，分成2等份，然后将每等份再分成5等份，加入不同的干扰物质，使其在血清中的浓度达到表2的要求。然后分别用实施例 1所得试剂和实施2所得试剂，与市场常见并认可的血清钾试剂同时对比测定血清钾的含量，对照组测定结果与加入不同干扰物质后各组的测定结果见表1和表2。相对偏差(％)＝(干扰样本的测定均值－无干扰样本的测定均值)/无干扰样本的测定均值×100％。
表1实施例1试剂盒干扰性试验
表2实施例2试剂盒干扰性试验
由表1和表2可以看出，在胆红素≤50μmol/L、肌酐≤200μmol/L、血红蛋白≤200mg/L、甘油三酯≤15mmol/L、胆固醇≤50μmol/L干扰物的存在下，实施例1和2的试剂对测试结果没有明显干扰。与对照结果相比，本发明试剂抗干扰能力较好，说明实施例1和2的试剂在准确度和抗干扰能力上达标。
灵敏度试验：
选取12个已知不同浓度的钾样本(如表3)，然后将12个不同的样本分别使用本实施例1和实施例2中的配方配置的试剂与对照试剂进行检测，检测结果如下：
表3 12个不同低浓度梯度的钾样本检测结果对比情况
从表3可以看出，实施例1和实施例2的试剂与对照试剂同时检测由高到低不同浓度的样本，检测结果相近，针对于非常低的样本，实施例1 和实施例2可以检测出，且准确度较好，而对照试剂对于非常规样本则无法检测出，说明本实施例1和实施例2都具有良好的分析灵敏度。
相关性试验：
利用实施例1和2的配方分别配制试剂，与市场常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的血清钾(酶法)试剂盒进行对照检测，同时检测了40个临床血清样本，检测结果如表4和表5所示。并获得了两种试剂的相关性曲线(如图1和图2所示)，
表4实施例1试剂相关性试验
表5实施例2相关性试验
由表4和表5可以看出，实施例1和2的试剂盒与对照试剂盒的相关系数为0.999以上，说明实施例1和2与对照试剂盒有极大的相关性。
稳定性试验：
将本发明实施例1和2中所得检测试剂作为试验组，取一种市售血清钾(酶法)检测试剂盒作为对照组，试验组与对照组试剂每组各自取相同的两份，一份做15天开瓶稳定性试验，将试剂开瓶放置在仪器的2-8℃冷藏箱中(15天不取出)，作为15天开瓶稳定性检测，检测结果如图3所示；另一份做37℃热稳定性检测试验，封闭放置在37℃恒温水浴锅中(每天仅在检测的时候取出，检测完毕后，依然封口放回37℃水浴锅中，连续 12天)，作为37℃热稳定性验证。将三个试剂盒同时在日立7180全自动生化分析仪器上进行检测，并在仪器上建立标准曲线。取冻干粉质控品，溶解均匀后，平均分成15份，-20℃储存，每天质控一个，并且跟踪检测结果，检测结果如图4所示。
从图3可以看出，实施例1在开瓶稳定性实验中，15天时的稳定性仅下降4.26％，实施例2的试剂盒下降5.45％，远低于市场上现有试剂盒，说明本发明的试剂盒在开瓶稳定性实验中性能指标良好。
从图4可以看出，实施例1在37℃热稳定性实验中，12天时的稳定性仅下降5.44％，实施例2的试剂盒下降7.82％，远低于市场上现有试剂盒，说明本发明的试剂盒在37℃热稳定性实验中性能指标良好。
综上所述，本发明的稳定的钾离子检测试剂盒在不影响准确度和相关性的基础上，提高了试剂盒的稳定性和灵敏性。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种钾离子检测试剂盒，其特征在于，由试剂R1和试剂R2组成，其中：
所述试剂R1的成分和含量如下：
所述试剂R2的成分和含量如下：
2.根据权利要求1所述的钾离子检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液中的一种或多种组合，所述试剂R1中缓冲液的PH值为9.2，所述试剂R2中缓冲液的PH值为6.2。
3.根据权利要求1所述的钾离子检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2的体积比为试剂R1：试剂R2＝3:1。
4.根据权利要求1-3中任一所述的钾离子检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的成分和含量如下：
所述试剂R2的成分和含量如下：
5.根据权利要求1-3中任一所述的钾离子检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的成分和含量如下：
所述试剂R2的成分和含量如下：
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