CN106338606A - 一种稳定的磷脂氧化酶法检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种稳定的磷脂氧化酶法检测试剂盒，属于临床体外检测试剂技术领域。本发明试剂盒包括试剂R1和试剂R2。通过在试剂R1与试剂R2中添加聚乙二醇6000，提高了试剂的稳定性，线性相关性较好，试剂的准确度也较好，有利于在市场中进一步推广使用。

Description

一种稳定的磷脂氧化酶法检测试剂盒

本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种稳定的磷脂氧化酶法检测试剂盒。

背景技术

磷脂在细胞生长和代谢过程中具有重要作用，真核生物细胞膜中60%的脂质为磷脂，磷脂的细小变化将会改变膜的性质和细胞功能，磷脂在医药工业中常作为药物的载体。另外，磷脂在食品工业、化学工业等领域也有非常广泛的作用。 因此，磷脂检测的进步会极大推动磷脂研究的深人，从而促进制药学、代谢调控学和蛋白质组学等多学科的发展，并进一步开拓磷脂更广泛的临床应用。

磷脂几乎存在于所有机体细胞中，在动植物体重要组织中都含有较多磷脂。动物磷脂主要来源于蛋黄、牛奶、动物体脑组织、肝脏、肾脏及肌肉组织部分。植物磷脂主要存在于油料种子，且大部分存在于胶体相内，并与蛋白质、糖类、脂肪酸、菌醇、维生素等物质以结合状态存在，是一类重要的油脂伴随物。磷脂是一项临床检测的重要指标，血清磷脂的增高见于糖尿病、肾病综合症、慢性出血性贫血、肝硬化、肝坏死、胆道阻塞、甲状腺功能减退、原发性高血压等；减退见于甲状腺功能亢进、急性感染性发热、营养不良性肝硬化等。

本发明提供的磷脂检测试剂盒是在氧化酶法的基础上，优化反应体系，选用柠檬酸缓冲液并添加聚乙二醇6000，显著改善了试剂的稳定性，发现了一种更稳定的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶检测试剂。

发明内容

本发明旨在提供一种稳定的用于检测磷脂的试剂盒，该试剂盒采用氧化酶法进行检测。该试剂盒与常规的试剂盒相比，稳定性、线性相关性比常规的检测试剂盒好，有利于试剂在临床上的推广应用。

基本原理：

磷脂在磷脂酶D的作用水解生成胆碱和磷脂酸，胆碱被胆碱氧化酶氧化生成过氧化氢，过氧化氢与4-氨基安替比林、DAOS反应生成蓝色染料。此染料在600nm有最大吸收峰，吸收强度与血清中磷脂含量成正比。

本发明是通过以下步骤得到的：

一种稳定的磷脂氧化酶法检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1和试剂R2。试剂R1组成为：200mmol/L pH为7.4柠檬酸缓冲液、0.6U/mL磷脂酶D、1.2U/mL抗坏血酸酶、2mmol/LDAOS（N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3'5-二甲氧基苯胺钠盐）、1% TRITON X-100、2%聚乙二醇6000、10mmol/L叠氮钠；试剂R2组成为：200mmol/L pH为7.4柠檬酸缓冲液、14.5U/L过氧化物酶、6.4U/L胆碱氧化酶、0.8mmol/L 4-氨基安替吡啉、1% TRITON X-100、2%聚乙二醇6000、10mmol/L叠氮钠。

所述的磷脂氧化酶法检测试剂盒，其特征在于试剂R1缓冲液为25℃，pH为7.4的柠檬酸缓冲液。

所述的磷脂氧化酶法检测试剂盒，其特征在于试剂R2缓冲液为25℃，pH为7.4的柠檬酸缓冲液。

所述的磷脂氧化酶法检测试剂盒，其特征在于所述表面活性剂为TRITON X-100。

所述的磷脂氧化酶法检测试剂盒，其特征在于所述稳定剂为聚乙二醇6000。

所述的磷脂氧化酶法检测试剂盒，其特征在于，使用全自动生化分析仪采用终点法进行测定，检测主波长为600nm。

所述的磷脂氧化酶法检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2使用时的比例为R1: R2=200: 50。

本发明的试剂盒在具有双试剂功能的全自动生化分析仪上进行，其具体使用方法如下：

加入生理盐水、样本或校准品2μl，再加入200μl 的R1试剂，预孵育3min后读取吸光度A1，再加入50μl的R2试剂，反应5min后读取吸光度A2，并计算ΔA。

本发明的有益效果：

1）试剂R1与试剂R2中添加聚乙二醇6000，增强了试剂的稳定性，而且不会对试剂的准确度产生影响；

2）试剂的准确度和稳定性良好，价格便宜，使用方便，有利于该试剂在市场中进一步推广。

附图说明

图1为实施例1试剂与市场认可的磷脂检测试剂盒的相关性曲线图；

图2为实施例1试剂与市场认可的磷脂检测试剂效期稳定性曲线图；

图3 为实施例1试剂与市场认可的磷脂检测试剂盒对比检测结果；

图4 为实施例1试剂与市场认可的磷脂检测试剂线性相关验证实验检测结果；

图5 为实施例1试剂与市场认可的磷脂检测试剂稳定性验证实验检测结果。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明：

实施例1

一种稳定的磷脂检测试剂盒，它包括试剂R1和试剂R2。

其中试剂R1组成为：

pH 7.4的柠檬酸缓冲液 200mmol/L

磷脂酶D 0.6U/mL

抗坏血酸酶 1.2U/mL

DAOS 2mmol/L

TRITON X-100 1%

聚乙二醇6000 2%

叠氮钠 10mmol/L

试剂R2组成为：

pH 7.4的柠檬酸缓冲液 200mmol/L

过氧化物酶 14.5U/L

胆碱氧化酶 6.4U/L

4-氨基安替吡啉 0.8mmol/L

TRITON X-100 1%

聚乙二醇6000 2%

叠氮钠 10mmol/L。

本实施例所述试剂R1和试剂R2，配置时需先加入缓冲物质，调到适当pH值后，再添加其它物质。本实施例所述试剂盒，在使用时，其测定方法是采用具有双试剂功能的迈瑞800全自动生化分析仪，利用终点法进行测定，检测主波长为600nm，操作如下：

加入生理盐水、样本或校准品2μl，再加入200μl 的R1试剂，预孵育3min后读取吸光度A1，再加入50μl的R2试剂，反应5min后读取吸光度A2，并计算ΔA。

ΔA＝A2- A1

磷脂含量（mg/dL）＝（∆A测定÷∆A标准）×C标准。

测定：检测样本吸光度变化 ∆A标准：标准品吸光度变化

实施例2

准确度验证试验：将实施例1的磷脂检测试剂作为实验组，市场上获得认可的一种准确度好、稳定性好的磷脂检测试剂盒作为对照组进行检测，对20个临床尿液样本进行检测，检测结果如图3所示。获得了两种试剂的相关性曲线（如图1所示），结果表明，两组试剂盒的相关系数为0.9967，说明两者相关性比较好。证明本发明试剂盒添加及更改的组分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的准确度。

实施例3

线性相关性验证试验：选取磷脂含量为1000 mg/dL的高值样本，用生理盐水进行系列稀释，配制6个不同浓度的样本，浓度依次为1000 mg/dL、800 mg/dL、600 mg/dL、400 mg/dL、200 mg/dL、0 mg/dL。分别利用实施例1试剂及对照组试剂进行检测，每个浓度的样本分别测定三次，分别取平均值，检测结果如图4所示。

如上表所示，实施例1与对照组试剂检测结果相关系数均大于0.990，且实施例1试剂检测结果的相关系数略大于对照组试剂检测结果的相关系数，这表明本发明试剂具有更好的线性相关性。

实施例4

稳定性验证实验：在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂，检测实施例1及对照组试剂的稳定性。两组试剂每月选取同一样本测定高值样本，测定三次取平均值，检测数据如图5所示。

实验结果如图2显示，实施例1试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存15个月稳定，而对照组试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存10个月后开始不稳定，说明本发明试剂添加聚乙二醇6000后稳定性增强。

综上所述，本发明提供的磷脂氧化酶法检测试剂盒，试剂R1与试剂R2中添加聚乙二醇6000，提高了试剂的稳定性，线性相关性较好，试剂的准确度也较好。因此，本发明提供的磷脂氧化酶法检测试剂盒有利于在市场中进一步的推广使用。

Claims (8)

1.一种稳定的磷脂氧化酶法检测试剂盒，其特征在于它包含试剂R1和试剂R2。

2.根据权利要求1所述的磷脂氧化酶法检测试剂盒，其特征在于试剂R1组成为：200mmol/L pH为7.4柠檬酸缓冲液、0.6U/mL磷脂酶D、1.2U/mL抗坏血酸酶、2mmol/L DAOS（N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3'5-二甲氧基苯胺钠盐）、1% TRITON X-100、2%聚乙二醇6000、10mmol/L叠氮钠；试剂R2组成为：200mmol/L pH为7.4柠檬酸缓冲液、14.5U/L过氧化物酶、6.4U/L胆碱氧化酶、0.8mmol/L 4-氨基安替吡啉、1% TRITON X-100、2%聚乙二醇6000、10mmol/L叠氮钠。

3.根据权利要求1所述的磷脂氧化酶法检测试剂盒，其特征在于试剂R1缓冲液为25℃，pH为7.4的柠檬酸缓冲液。

4.根据权利要求1所述的磷脂氧化酶法检测试剂盒，其特征在于试剂R2缓冲液为25℃，pH为7.4的柠檬酸缓冲液。

5.根据权利要求1所述的磷脂氧化酶法检测试剂盒，其特征在于所述表面活性剂为TRITON X-100。

6.根据权利要求1所述的磷脂氧化酶法检测试剂盒，其特征在于所述稳定剂为聚乙二醇6000。

7.根据权利要求1所述的磷脂氧化酶法检测试剂盒，其特征在于，使用全自动生化分析仪采用终点法进行测定，检测主波长为600nm。

8.根据权利要求1所述的磷脂氧化酶法检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2使用时的比例为R1: R2=200: 50。