CN110592040A - 一种用于生产upd糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺 - Google Patents

一种用于生产upd糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，以UPD为原材料生产出UPD糖基，然后加入产酶促进剂，再与活性酶相融合生产出UPD‑转移酶；以重组枯草芽孢杆菌为出发菌株，将培养基优化和发酵过程优化，得出重组枯草芽孢杆菌样本；将重组枯草芽孢杆菌接入种子培养基后，手动摇床培养到对数生长期，然后将其优化成为种子培养液；加入UDP‑糖基转移酶；然后测试初始的酶活性参数；然后将融合在一起的材料放到10~40℃记录生产的速度。调节不同的温度，从而可以调节酶的活性，从而使其效率更快，通过设置多个种子培养液样本和UDP‑糖基转移酶的样本，从而可以缩短其对比的时间，从而可以在最短的时间内找出最佳的方案。

Description

一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺
技术领域
本发明涉及生物研究技术领域，具体为一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺。
背景技术
枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种，单个细胞0.7~0.8×2~3微米，着色均匀，无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6~0.9×1.0~1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，然而现有的枯草芽孢杆菌大多发酵的速度比较的慢，所以针对此问题，可以设计出一种发酵速度更快的枯草芽孢杆菌的工艺。
发明内容
（一）解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，具备发酵速度更快等优点，解决了发酵速度比较慢问题。
（二）技术方案
为实现上述发酵速度更快目的，本发明提供如下技术方案：一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，包括以下步骤：以UPD为原材料生产出UPD糖基，然后加入产酶促进剂，再与活性酶相融合生产出UPD-转移酶；以重组枯草芽孢杆菌为出发菌株，将培养基优化和发酵过程优化，得出重组枯草芽孢杆菌样本；将重组枯草芽孢杆菌接入种子培养基后，手动摇床培养到对数生长期，然后将其优化成为种子培养液；然后接种一定量的种子液到调整后的发酵培养基中，用发酵罐进行发酵培养，加入UDP-糖基转移酶；然后测试初始的酶活性参数；然后将融合在一起的材料放到10~40℃记录生产的速度。
优选的，所述将-20℃液氮管保存的重组枯草芽孢杆菌菌种接入到培养基中，然后使用手动摇床，其转速为20-40rpm/s，培养温度为10~40℃，培养5h，得到种子液样本，然后分成若干份放在低温下备用。
优选的，所述UDP-糖基转移酶培养分成若干份，放在低温箱中待用。
优选的，所述发酵培养基为可溶性蛋白粉10g、二浸油菜粨15g、酵母粉14g、零度甘油2mL、pH值为8.9的磷酸氢二钾水溶液4.5g/L、溶于乙醇的氯化钴0.8mmol/L，用高度纯净水配制。
优选的，所述种子培养基为羟乙基淀粉130/0.4氯化钠溶液、氢氧化钠8.8g/L、胰蛋白溶液10g/L、酵母浸膏3g/L、加入适量琼脂。
优选的，所述产酶促进剂包括植酸钙镁(菲汀)、聚山梨酯-80(吐温-80)、乙二胺四乙酸(EDTA)、洗净剂LS(脂肪酰胺磺酸钠)、聚乙烯醇等。
优选的，所述UDP-糖基转移酶离心后取上清夜，测定酶活性，然后确定产酶促进剂加入的种类和用量。
优选的，所述发酵培养基的底部注入一层0℃的乙酰氨基葡萄糖，然后再放入其他的培养材料。
优选的，所述种子培养基的底部注入一层2℃的乙酰氨基葡萄糖，然后再放入其他的培养材料。
优选的，所述UDP-糖基转移酶培养基和种子培养液培养基的规格相同。
（三）有益效果
与现有技术相比，本发明提供了一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，具备以下有益效果：
1、该一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，通过调节不同的温度，从而可以调节酶的活性，从而使其效率更快，使UDP-糖基转移酶的活性更高，从而使其生产工艺效率更高，从而提高生产效率，从而使其发酵的速度更快，缩短生产的时间。
2、该一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，通过设置多个种子培养液样本和UDP-糖基转移酶的样本，从而可以在生产的时候同时进行，从而可以缩短其对比的时间，从而可以在最短的时间内找出最佳的方案。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一：一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，包括包括以下步骤：
（1）以UPD为原材料生产出UPD糖基，然后加入产酶促进剂，再与活性酶相融合生产出UPD-转移酶；产酶促进剂包括植酸钙镁(菲汀)、聚山梨酯-80(吐温-80)、乙二胺四乙酸(EDTA)、洗净剂LS(脂肪酰胺磺酸钠)、聚乙烯醇等。
（2）以重组枯草芽孢杆菌为出发菌株，将培养基优化和发酵过程优化，得出重组枯草芽孢杆菌样本；将-20℃液氮管保存的重组枯草芽孢杆菌菌种接入到培养基中，然后使用手动摇床，其转速为20-40rpm/s，培养温度为10~40℃，培养5h，得到种子液样本，然后分成若干份放在低温下备用。
（3）将重组枯草芽孢杆菌接入种子培养基后，手动摇床培养到对数生长期，然后将其优化成为种子培养液；种子培养基为羟乙基淀粉130/0.4氯化钠溶液、氢氧化钠8.8g/L、胰蛋白溶液10g/L、酵母浸膏3g/L、加入适量琼脂。
（4）然后接种一定量的种子液到调整后的发酵培养基中，用发酵罐进行发酵培养，加入UDP-糖基转移酶；UDP-糖基转移酶离心后取上清夜，测定酶活性，然后确定产酶促进剂加入的种类和用量。
（5）然后测试初始的酶活性参数；
（6）然后将融合在一起的材料放到10~40℃记录生产的速度；
（7）UDP-糖基转移酶培养分成若干份，放在低温箱中待用。
（8）发酵培养基为可溶性蛋白粉10g、二浸油菜粨15g、酵母粉14g、零度甘油2mL、pH值为8.9的磷酸氢二钾水溶液4.5g/L、溶于乙醇的氯化钴0.8mmol/L，用高度纯净水配制。
（9）发酵培养基的底部注入一层0℃的乙酰氨基葡萄糖，然后再放入其他的培养材料；种子培养基的底部注入一层2℃的乙酰氨基葡萄糖，然后再放入其他的培养材料。
（10）UDP-糖基转移酶培养基和种子培养液培养基的规格相同。
（11）然后将种子培养液和UDP-糖基转移酶放入一个培养基，然后放入温度控制室内，然后调节温度范围10℃，然后记录数据。
实施例二：一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，包括以下步骤：
（1）以UPD为原材料生产出UPD糖基，然后加入产酶促进剂，再与活性酶相融合生产出UPD-转移酶；产酶促进剂包括植酸钙镁(菲汀)、聚山梨酯-80(吐温-80)、乙二胺四乙酸(EDTA)、洗净剂LS(脂肪酰胺磺酸钠)、聚乙烯醇等。
（2）以重组枯草芽孢杆菌为出发菌株，将培养基优化和发酵过程优化，得出重组枯草芽孢杆菌样本；将-20℃液氮管保存的重组枯草芽孢杆菌菌种接入到培养基中，然后使用手动摇床，其转速为20-40rpm/s，培养温度为10~40℃，培养5h，得到种子液样本，然后分成若干份放在低温下备用。
（3）将重组枯草芽孢杆菌接入种子培养基后，手动摇床培养到对数生长期，然后将其优化成为种子培养液；种子培养基为羟乙基淀粉130/0.4氯化钠溶液、氢氧化钠8.8g/L、胰蛋白溶液10g/L、酵母浸膏3g/L、加入适量琼脂。
（4）然后接种一定量的种子液到调整后的发酵培养基中，用发酵罐进行发酵培养，加入UDP-糖基转移酶；UDP-糖基转移酶离心后取上清夜，测定酶活性，然后确定产酶促进剂加入的种类和用量。
（5）然后测试初始的酶活性参数；
（6）然后将融合在一起的材料放到10~40℃记录生产的速度；
（7）UDP-糖基转移酶培养分成若干份，放在低温箱中待用。
（8）发酵培养基为可溶性蛋白粉10g、二浸油菜粨15g、酵母粉14g、零度甘油2mL、pH值为8.9的磷酸氢二钾水溶液4.5g/L、溶于乙醇的氯化钴0.8mmol/L，用高度纯净水配制。
（9）发酵培养基的底部注入一层0℃的乙酰氨基葡萄糖，然后再放入其他的培养材料；种子培养基的底部注入一层2℃的乙酰氨基葡萄糖，然后再放入其他的培养材料。
（10）UDP-糖基转移酶培养基和种子培养液培养基的规格相同。
（11）然后将种子培养液和UDP-糖基转移酶放入一个培养基，然后放入温度控制室内，然后调节温度范围20℃，然后记录数据。
实施例三：一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，包括以下步骤：
（1）以UPD为原材料生产出UPD糖基，然后加入产酶促进剂，再与活性酶相融合生产出UPD-转移酶；产酶促进剂包括植酸钙镁(菲汀)、聚山梨酯-80(吐温-80)、乙二胺四乙酸(EDTA)、洗净剂LS(脂肪酰胺磺酸钠)、聚乙烯醇等。
（2）以重组枯草芽孢杆菌为出发菌株，将培养基优化和发酵过程优化，得出重组枯草芽孢杆菌样本；将-20℃液氮管保存的重组枯草芽孢杆菌菌种接入到培养基中，然后使用手动摇床，其转速为20-40rpm/s，培养温度为10~40℃，培养5h，得到种子液样本，然后分成若干份放在低温下备用。
（3）将重组枯草芽孢杆菌接入种子培养基后，手动摇床培养到对数生长期，然后将其优化成为种子培养液；种子培养基为羟乙基淀粉130/0.4氯化钠溶液、氢氧化钠8.8g/L、胰蛋白溶液10g/L、酵母浸膏3g/L、加入适量琼脂。
（4）然后接种一定量的种子液到调整后的发酵培养基中，用发酵罐进行发酵培养，加入UDP-糖基转移酶；UDP-糖基转移酶离心后取上清夜，测定酶活性，然后确定产酶促进剂加入的种类和用量。
（5）然后测试初始的酶活性参数；
（6）然后将融合在一起的材料放到10~40℃记录生产的速度；
（7）UDP-糖基转移酶培养分成若干份，放在低温箱中待用。
（8）发酵培养基为可溶性蛋白粉10g、二浸油菜粨15g、酵母粉14g、零度甘油2mL、pH值为8.9的磷酸氢二钾水溶液4.5g/L、溶于乙醇的氯化钴0.8mmol/L，用高度纯净水配制。
（9）发酵培养基的底部注入一层0℃的乙酰氨基葡萄糖，然后再放入其他的培养材料；种子培养基的底部注入一层2℃的乙酰氨基葡萄糖，然后再放入其他的培养材料。
（10）UDP-糖基转移酶培养基和种子培养液培养基的规格相同。
（11）然后将种子培养液和UDP-糖基转移酶放入一个培养基，然后放入温度控制室内，然后调节温度范围30℃，然后记录数据。
本发明的有益效果是：调节不同的温度，从而可以调节酶的活性，从而使其效率更快，使UDP-糖基转移酶的活性更高，从而使其生产工艺效率更高，从而提高生产效率，从而使其发酵的速度更快，缩短生产的时间，通过设置多个种子培养液样本和UDP-糖基转移酶的样本，从而可以在生产的时候同时进行，从而可以缩短其对比的时间，从而可以在最短的时间内找出最佳的方案。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，其特征在于，包括以下步骤：（1）以UPD为原材料生产出UPD糖基，然后加入产酶促进剂，再与活性酶相融合生产出UPD-转移酶；（2）以重组枯草芽孢杆菌为出发菌株，将培养基优化和发酵过程优化，得出重组枯草芽孢杆菌样本；（3）将重组枯草芽孢杆菌接入种子培养基后，手动摇床培养到对数生长期，然后将其优化成为种子培养液；（4）然后接种一定量的种子液到调整后的发酵培养基中，用发酵罐进行发酵培养，加入UDP-糖基转移酶；（5）然后测试初始的酶活性参数；（6）然后将融合在一起的材料放到10~40℃记录生产的速度。
2.根据权利要求1所述的一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，其特征在于，所述将-20℃液氮管保存的重组枯草芽孢杆菌菌种接入到培养基中，然后使用手动摇床，其转速为20-40rpm/s，培养温度为10~40℃，培养5h，得到种子液样本，然后分成若干份放在低温下备用。
3.根据权利要求1所述的一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，其特征在于，所述UDP-糖基转移酶培养分成若干份，放在低温箱中待用。
4.根据权利要求1所述的一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，其特征在于，包括以下重量份数配比的原料：所述发酵培养基为可溶性蛋白粉10g、二浸油菜粨15g、酵母粉14g、零度甘油2mL、pH值为8.9的磷酸氢二钾水溶液4.5g/L、溶于乙醇的氯化钴0.8mmol/L，用高度纯净水配制。
5.根据权利要求1所述的一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，其特征在于，所述种子培养基为羟乙基淀粉130/0.4氯化钠溶液、氢氧化钠8.8g/L、胰蛋白溶液10g/L、酵母浸膏3g/L、加入适量琼脂。
6.一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，其特征在于：所述产酶促进剂包括植酸钙镁(菲汀)、聚山梨酯-80(吐温-80)、乙二胺四乙酸(EDTA)、洗净剂LS(脂肪酰胺磺酸钠)、聚乙烯醇等。
7.一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，其特征在于：所述UDP-糖基转移酶离心后取上清夜，测定酶活性，然后确定产酶促进剂加入的种类和用量。
8.一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，其特征在于：所述发酵培养基的底部注入一层0℃的乙酰氨基葡萄糖，然后再放入其他的培养材料。
9.一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，其特征在于：所述种子培养基的底部注入一层2℃的乙酰氨基葡萄糖，然后再放入其他的培养材料。
10.一种用于生产UPD糖基转移酶的重组枯草芽孢杆菌的工艺，其特征在于：所述UDP-糖基转移酶培养基和种子培养液培养基的规格相同。
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