CN110591972B - 一种硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1及其应用 - Google Patents

一种硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物工程技术领域，公开了一种正十六烷降解菌YJ1及其应用。本发明分离筛选得到一株以正十六烷为碳源的降解菌株，根据菌株形态、生理特征、革兰氏染色反应、16S rDNA基因测序分析及系统发育分析，鉴定该菌株为硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans，并将其命名为YJ1。该菌株已于2019年8月保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.18418，该菌能够利用正十六烷作为唯一碳源并且很快地将其降解：在正十六烷初始浓度为10mg/L环境下培养15天后，降解率可达66.7％。该菌株的最适生长条件为30℃、pH＝7、接种量10％。本发明的菌株对正十六烷具有较好的降解特性，并且不会对环境造成二次污染。

Description

一种硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1及 其应用
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，具体为提供了一种硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1及其应用。
背景技术
随着全球工业化的迅速发展，石油产品已然成为工业生产和日常生活中的主要能源来源。与此同时，因石油使用量的快速增加、长期不科学使用以及运输开采过程中泄漏等，使得部分毒性强、高残留、难降解、致癌、致畸等烃类物质进入土壤和地下水，对环境造成污染并严重危害人类健康。
石油中所含的各种烃类，从最简单的化合物至复杂的几十个碳原子的固体残渣，只要条件合适，大多数都能被微生物代谢降解，但难易程度和降解速度不同。一般来说，C8～C18范围的直链化合物较易分解，烯烃最易分解，烷烃次之，芳烃较难，脂环烃类对微生物作用最不敏感，至今只发现个别菌株能利用它。在石油烃中，烷烃作为其主要成分，含量高达50％～95％，同时也是石油污染物中的主要成分。石油中的烷烃一般分为正构烷烃和异构烷烃，常见的正构烷烃为C1～C45，而异构烷烃碳链长度则多小于10。短链烷烃，如甲烷等，多为气态，易挥发，因此对环境的影响较小；中长链烷烃，如正十六烷，相对较难在环境中降解，易对周围环境造成危害，是石油污染中最常见的污染源。如何有效的减少或消除石油烃污染，已成为人们广泛关注的重点问题。目前治理石油污染的方法主要包括物理修复法、化学修复法和生物修复法，其中生物修复法相比于其他两种修复方法，具有高效、无二次污染、易操作和成本低等优点，已成为石油污染修复的重要方法。
目前，已报道的石油烃降解微生物有约100属，200多种，包括细菌、放线菌、霉菌、酵母以及藻类等。常见的石油降解微生物主要有：无色杆菌属(Achromobacter)、假单孢菌属(Pseudomonas)、黄杆菌属(Flavobacterium)、节杆菌属(Archrobactar)、产碱杆菌属(Alcaligenes)、微球菌属(Mictococcus)、不动杆菌属(Acinetobacter)、红球菌属(Rhodococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、棒杆菌属(Coryneforms)、诺卡氏菌属(Nocardia)、微杆菌属(Microbacterium)、分枝杆菌属(Mycobacterium)、迪茨氏菌属(Dietzia)等。但国内外对正十六烷的降解菌株研究领域较少，仅专利CN 106242072A涉及了一种非脱竣勒克菌降解正十六烷的应用，因此找寻可降解正十六烷的菌株成为本领域的技术问题之一。
发明内容
本发明针对上述技术存在的不足，提供了一种正十六烷降解菌，该菌株可用于降解正十六烷生物修复过程中的应用。
为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案得以实现的：
一株硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1，其保藏号为CGMCCNO.18418。
所述的硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1的16SrDNA序列如SEQ NO.1所示。
所述的硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1在BP琼脂培养基上的菌落呈淡黄色，凸起，边缘齐整，表面湿润；菌体呈直杆状，革兰氏染色阳性；菌株溶血性为阴性。
用于降解正十六烷的菌剂，其特征在于，包括所说的硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1。
所述的菌剂还包括，制备菌剂常用的辅料；优选地，所述制备菌剂常用的辅料选自：所述硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1的培养基，或，其它菌剂常用辅料。
所述硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1的培养基选自：牛肉膏蛋白胨培养基，和/或，含正十六烷无机盐培养基；
所述牛肉膏蛋白胨培养基包括：蛋白胨10g/L，牛肉膏5g/L，NaCl10g/L，其余为水，pH 7.2；
所述含正十六烷无机盐培养基包括：正十六烷2～20mL/L，K2HPO4·3H2O 1.0g/L，KH2PO4 1.0g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，NH4NO3 1.0g/L，CaCl2 0.02g/L，Fe2(SO4)3 0.02g/L，其余为水，pH 7.0～7.2。
上述培养基中的正十六烷浓度范围涉及实验例2中不同正十六烷底物浓度对菌株生长量的影响，故有多个浓度。
上述培养基，均为液体培养基，如果要制成固体培养基，仅需在原有培养基配方的基础上增添质量体积比1.2～2％的琼脂粉。
所述的硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1，和/或，所述的菌剂在生物降解、生物修复领域方面的应用。
所述生物降解、生物修复指，降解正十六烷，和/或，修复土壤中的正十六烷污染。
用于降解正十六烷的方法，其特征在于，包括用保藏号为CGMCC NO.18418的硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1处理正十六烷。
所述处理正十六烷的条件为30℃、pH＝7、接种量10％。
本发明提供一株可降解正十六烷的菌株，其特征在于：该降解菌株为硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans，菌株代号为YJ1，于2019年8月23日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC保藏，生物保藏编号为CGMCC NO.18418。
该菌株YJ1在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中菌落呈淡黄色，凸起，边缘齐整，表面湿润，不易挑起；显微镜下菌体呈直杆状，革兰氏染色阳性；菌株血琼脂平板培养溶血性实验，菌落周边未出现水解圈，菌株溶血性为阴性。
所述降解菌株可应用于正十六烷的生物修复中，所述化合物为正十六烷。
正十六烷降解菌株对于正十六烷的降解，适宜降解条件为30℃、pH＝7、接种量10％。
将降解菌株YJ1活化后接入正十六烷初始浓度为10mL/L无机盐培养基中，其降解效果可达66.7％。
所述的牛肉膏蛋白胨培养基(Beef extract peptone，BP)为：蛋白胨10g/L，牛肉膏5g/L，NaCl10g/L，蒸馏水定容至1L，调节pH值为7.2。
所述无机盐培养基为：K2HPO4·3H2O 1.0g/L，KH2PO4 1.0g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，NH4NO3 1.0g/L，CaCl2 0.02g/L，Fe2(SO4)3 0.02g/L，蒸馏水，pH 7.0～7.2，121℃灭菌20min。
所述含有正十六烷的无机盐培养基为：正十六烷浓度为2～20mL/L的无机盐培养基。
所述的各琼脂培养基，仅需在原有培养基配方的基础上增添1.2～2％的琼脂粉。
所述菌株具有以正十六烷为唯一碳源和能源进行生长的能力。
所述菌株的16SrDNA序列如SEQ NO.1所示。
所述菌株在正十六烷污染生物修复中的应用。
本发明的正十六烷降解菌YJ1，所述菌株在BP琼脂培养基中菌落呈淡黄色，凸起，边缘齐整，表面湿润，不易挑起；显微镜下菌体呈直杆状，革兰氏染色阳性；血琼脂平板培养基溶血性为阴性；经系统发育进化树分析结果，其与Genbank发布的多株短芽孢杆菌(Brevibacillus sp.)多个菌株序列的同源性较高，序列相似度达到79％，经中国微生物菌种保藏管理委员普通微生物中心(CGMCC)鉴定为硝化短芽孢杆菌Brevibacillusnitrificans。
所述正十六烷降解菌的筛选方法，可按如下步骤依次实施：
(1)取某已搬迁动力配件厂油库及其周边油料污染的表层0～12cm土壤样品，作为菌源进行自然富集培养。将10g土壤样品加入含有正十六烷的90mL无机盐液体培养基的250mL锥形瓶中，置于30℃、180r/min的恒温振荡培养器上培养5天，取5mL混合液装进新鲜的含有正十六烷的95mL无机盐培养基中。重复多次上述过程，完成正十六烷降解菌株的富集。
所述无机盐培养基为：K2HPO4·3H2O 1.0g/L，KH2PO4 1.0g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，NH4NO3 1.0g/L，CaCl2 0.02g/L，Fe2(SO4)3 0.02g/L，蒸馏水，pH 7.0～7.2，121℃灭菌20min。
所述的含有正十六烷的无机盐培养基为：正十六烷浓度为2～20mL/L的上述无机盐培养基。
所述的各琼脂培养基，仅需在原有培养基配方的基础上增添1.2～2％的琼脂粉。
(2)取(1)中所述富集培养液稀释涂布于含有正十六烷的无机盐琼脂培养基上，平板静止30min后，倒扣置于30℃恒温培养箱中培养，培养期间多次观察，待平板表面生成形态不同的菌落。
(3)将(2)中筛选出的菌株转移到不含有正十六烷的无机盐琼脂培养基上，去除可以在不含有正十六烷的无机盐琼脂培养基上生长的菌株，以去除自养生物和可利用琼脂的细菌。重复上述划线分离过程，直至筛选出能在正十六烷无机盐培养基上明显生长的单一菌落，将菌株编号为YJ1。
本发明YJ1菌株在BP培养基中菌落呈淡黄色，凸起，边缘齐整，表面湿润，不易挑起；显微镜下菌体呈直杆状，革兰氏染色阳性；菌株血琼脂平板培养溶血性实验，菌落周边未出现水解圈，菌株溶血性为阴性；接触酶实验呈阳性，氧化酶、明胶、3-甲基-D-葡萄糖、柠檬酸、甘油、蔗糖实验呈阴性。
所述菌株YJ1的应用，其特征在于：所述正十六烷降解菌株可应用于正十六烷污染生物修复中，所述化合物为正十六烷。
所述菌株YJ1的应用，其特征在于：YJ1菌株对于正十六烷的降解，适宜降解条件为30℃、pH＝7、接种量10％。
所述的正十六烷降解菌株YJ1的应用，其特征在于：将菌株YJ1活化后接入正十六烷初始浓度为10mL/L无机盐培养基中进行培养，降解效果可达66.7％。
本发明的菌株对正十六烷具有较好的降解特性，并且不会对环境造成二次污染，可将其应用于降解正十六烷及正十六烷污染土壤的生物降解及生物修复等领域。
本发明的硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1的保藏信息如下：
命名：YJ1
分类名称：硝化短芽孢杆菌
拉丁名称：Brevibacillus nitrificans
保藏号：CGMCCNo.18418
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员普通微生物中心；
保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所；
保藏日期：2019年8月23日。
附图说明
图1(a)为菌株YJ1在BP培养基上生长情况，(b)为菌株YJ1溶血性试验。
图2为菌株YJ1在光学显微镜下的形态。
图3为菌株YJ1的生长曲线。其中，温度为30℃，转速为180r/min。
图4为不同生长条件对YJ1生长的影响。其中(a)为pH，(b)为接种量，(c)为培养温度，(d)为底物浓度。
图5为菌株YJ1在含正十六烷浓度10mL/L的无机盐培养基中正十六烷降解情况。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容做进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围，除特殊说明外，下述实施例中均采用常规现有技术完成。
第1组实施例、本发明的硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1
本组实施例提供一株硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1，其保藏号为CGMCC NO.18418。
在一些实施例中，所述硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1的16SrDNA序列如SEQ NO.1所示。
在具体的实施例中，所述硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1的菌落呈淡黄色，凸起，边缘齐整，表面湿润；菌体呈直杆状，革兰氏染色阳性；菌株溶血性为阴性。
第2组实施例、本发明的菌剂
本组实施例提供一种用于降解正十六烷的菌剂，其特征在于，包括第1组实施例任一所提供的硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1。
在进一步的实施例中，所述的菌剂还包括，制备菌剂常用的辅料；优选地，所述制备菌剂常用的辅料选自：所述硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1的培养基，或，其它菌剂常用辅料。
在具体的实施例中，所述硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1的培养基选自：牛肉膏蛋白胨培养基，或，含正十六烷的无机盐培养基；所述牛肉膏蛋白胨培养基包括：蛋白胨10g/L，牛肉膏5g/L，NaCl10g/L，pH＝7.2；所述含正十六烷的无机盐培养基包括：正十六烷浓度为2～20mL/L，K2HPO4·3H2O 1.0g/L，KH2PO4 1.0g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，NH4NO3 1.0g/L，CaCl2 0.02g/L，Fe2(SO4)3 0.02g/L，蒸馏水，pH 7.0～7.2。若实验需要配制相应的琼脂培养基，仅需在原有培养基配方的基础上增添1.2～2％的琼脂粉。
所述含正十六烷的无机盐培养基是YJ1菌株选择培养基，筛选机理为：YJ1菌株以无机盐培养基中添加的正十六烷为生长碳源和能源。BP培养基为一种应用广泛的细菌培养基，非菌株YJ1的筛选培养基，实验过程中采用BP培养基作为筛选出YJ1菌株后的增菌培养。
所述其它菌剂常用辅料选自：载体、赋形剂、溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂等。
第3组实施例、本发明YJ1菌株的应用
本组实施例提供第1组实施例任一所述的硝化短芽孢杆菌Brevibacillusnitrificans菌株YJ1，和/或，第2组实施例任一所述的菌剂在生物降解、生物修复领域方面的应用。
在一些实施例中，所述生物降解、生物修复指，降解正十六烷，和/或，修复土壤中的正十六烷污染。
第4组实施例、本发明的降解正十六烷的方法
本组实施例提供一种用于降解正十六烷的方法，其特征在于，包括用保藏号为CGMCC NO.18418的硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1处理正十六烷。
在优选的实施例中，所述处理正十六烷的条件为30℃、pH＝7、接种量10％。
以下实施例所用培养基配方为：
所述无机盐培养基为：K2HPO4·3H2O 1.0g/L，KH2PO4 1.0g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，NH4NO3 1.0g/L，CaCl2 0.02g/L，Fe2(SO4)3 0.02g/L，蒸馏水，pH 7.0～7.2，121℃灭菌20min。
所述含有正十六烷的无机盐培养基为：正十六烷浓度为2～20mL/L的正十六烷降解菌无机盐培养基。
所述牛肉膏蛋白胨培养基(Beef extract peptone，BP)为：蛋白胨10g/L，牛肉膏5g/L，NaCl10g/L，蒸馏水定容至1L，调节pH值为7.2。
所述的各琼脂培养基，仅需在原有培养基配方的基础上增添1.2～2％的琼脂粉。
以下实施例所用本发明菌株硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans简称YJ1菌。
实验例1：菌株的分离筛选与纯化
富集培养：
取某已搬迁动力配件厂油库及其周边油料污染的表层0～12cm土壤样品。在无机盐培养基中添加10mL/L的正十六烷作为唯一的碳源和能源，将10g土壤样品加入含有正十六烷的90mL无机盐液体培养基的250mL锥形瓶中，置于30℃、180r/min的恒温振荡培养器上培养5天，取5mL混合液装进新鲜的含有正十六烷的95mL无机盐培养基中。重复多次上述过程，完成正十六烷降解菌株的富集。
菌株筛选：取出一定量最后一次富集培养液稀释涂布于含有正十六烷的无机盐琼脂培养基上，平板静止30min后，倒扣置于30℃恒温培养箱中培养，培养基期间多次观察，待平板表面生成形态不同的菌落。
菌株分离纯化：将上述菌株筛选过程中筛选出的菌株转移到不含有正十六烷的无机盐琼脂培养基上，去除可以在不含有正十六烷的无机盐琼脂培养基上生长的菌株，以去除自养生物和利用琼脂的细菌。重复上述划线分离过程，直至筛选出能在正十六烷无机盐培养基上明显生长的菌落，菌株编号为YJ1。
该菌株YJ1在BP培养基中菌落形态如图1(a)，呈淡黄色，凸起，边缘齐整，表面湿润，不易挑起；显微镜下菌体呈直杆状，革兰氏染色阳性(见图2)；菌株血琼脂平板培养溶血性实验结果见图1(b)，YJ1菌落周边未出现水解圈，菌株溶血性为阴性；接触酶实验呈阳性，氧化酶、明胶、3-甲基-D-葡萄糖、柠檬酸、甘油、蔗糖实验呈阴性。
菌株保存：将筛选出的YJ1菌株转接至相应的斜面培养基30℃恒温箱培养48h后，于4℃冰箱进行短期保存；或挑取纯化后的YJ1单菌落到相应液体培养基中培养至对数期，按1:1(V/V)的量在菌液中加入无菌甘油(甘油终浓度为30％)，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管(1～2mL/管)，置于-80℃冰箱保存。
发明人对所述菌株进行了16SrDNA测序，采用16S rDNA基因序列分析细菌：平板划线得到降解菌单菌落，挑取单菌落进行菌落PCR扩增，引物27F(5'-AGAGTT TGATCMTGGCTCAG-3')、1492R(5'-TACGGY TACCTT GTTACG ACTT-3')。PCR反应条件：94℃预变性5min；进入热循环，94℃变性1min，55℃退火1min，72℃延伸2min，共30个循环；最后72℃延伸5min，保持10℃。在1％琼脂糖凝胶上进行电泳检测。菌株的测序工作由上海生工生物技术有限公司完成。
菌株YJ1核苷酸序列见序列表所示，该序列为菌株的16SrDNA的全序列，菌株经CGMCC鉴定为硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans。鉴定单位信息：中国微生物菌种保藏管理委员普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所。
因此发明人将其菌株代码命名为YJ1，并对其进行了生物保藏，其生物保藏编号为CGMCCNO.18418，其分类名为硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans。
实验例2：菌株YJ1的生长曲线与生长条件测定
生长曲线的测定：用接种环挑取一环筛选到的菌株并用适量的0.85％生理盐水稀释至OD600＝0.1制成菌悬液，吸取1mL菌悬液接入99mL BP液体培养基中30℃、180r/min下振荡培养，每2小时取一次样，由于菌液在固定波长内生物量与光吸收值(OD)呈正比对应关系，用分光光度计处测定OD600值，以OD600表示该菌株的生长量，做3个重复。试验测定了正十六烷降解菌株YJ1在BP培养基中62小时内的生长量，结果表明，0～10小时为菌株的延缓期，在培养的10～32小时，为菌株的对数生长期，32～42小时之间进入生长稳定期，从44小时开始进入衰亡期，见图3。
初始pH值对菌株生长量的测定：配制正十六烷浓度为10mL/L，不同初始pH值的无机盐液体培养基，然后分别按4％的接种量接入培养至对数生长期的菌液，于30℃、180r/min条件下，振荡培养7天，培养期间每天观察菌株生长情况，最后用分光光度计测定OD600值，每组设3个平行。设置的pH如下：5.0、6.0、7.0、8.0、9.0。结果如图4(a)所示，菌株YJ1能够在pH条件为5.0～9.0的环境下均可生长，最适生长pH为7.0。
培养温度对菌株生长量的影响：配制正十六烷浓度为10mL/L，pH＝7.0的的无机盐液体培养基，然后分别按4％的接种量接入培养至对数生长期的菌液，分别于不同培养温度、180r/min条件下，振荡培养7天，培养期间每天观察菌株生长情况，最后用分光光度计测定OD600值，每组设3个平行。设置的菌株生长温度分别为：20℃、25℃、30℃、35℃、40℃。结果图4(b)所示，菌株YJ1能够20℃～40℃的温度条件下生长，最适生长温度为30℃。
接种量对菌株生长量的影响：配制正十六烷浓度为10mL/L，pH＝7.0时的无机盐液体培养基，然后分别按不同接种量接入培养至对数生长期的菌液，于30℃、180r/min条件下，振荡培养7天，培养期间每天观察菌株生长情况，最后用分光光度计测定OD600值，每组设3个平行。设置的接种量分别为：2％、4％、6％、8％、10％。结果如图4(c)所示，菌株YJ1在接种量2％～10％的条件下生长，其中最佳接种量为10％。
底物浓度对菌株生长量的影响：配制不同正十六烷浓度的无机盐液体培养基，调节pH＝7.0，然后分别按4％的接种量接入培养至对数生长期的菌液，于30℃、180r/min条件下，振荡培养7天，培养期间每天观察菌株生长情况，最后用分光光度计测定OD600值，每组设3个平行。设置的正十六烷浓度如下：2mL/L、5mL/L、10mL/L、15mL/L、20mL/L。结果如图4(d)所示，菌株YJ1能够在正十六烷浓度2～20mL/L的条件下生长，其最佳底物浓度为10mL/L。
实验例3：菌株YJ1的降解能力分析
根据以上试验结果，确定菌株的最佳生长条件为温度30℃、pH为7.0，将筛选得到的细菌分别接种于相应的BP液体培养基中。30℃、180r/min恒温振荡培养24h。平板计数，细菌数为1.0×108CFU/mL左右，备用。
菌株降解正十六烷实验：以各添加浓度为10mL/L正十六烷为碳源的液体无机盐培养基(pH＝7)为基础，分别将对数生长期的菌按10％的接种量接入培养基中，30℃、180r/min下恒温振荡培养，以不加任何菌株作为对照，恒温振荡培养5天、10天、15天。
正十六烷浓度采用紫外分光光度法测定，即整瓶提取培养液，用石油醚振荡分液漏斗萃取3次，萃取液经定容后用紫外分光光度计分析，检测对应波长(正十六烷-石油醚特征峰波长：256nm)下的吸光值，计算其降解率，取样分析正十六烷残留量，每组设3个平行。
筛选出的菌株YJ1以正十六烷为唯一碳源进行代谢活动，不断消耗培养基内的碳源，在正十六烷浓度为10mL/L的培养基中分别培养到5、10、15天时，运用紫外分光光度法测定降解后溶液中所剩正十六烷含量，结果表明(图5)，菌株YJ1对正十六烷的降解率最高可达66.7％。
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<110> 湖南恒凯环保科技投资有限公司
<120> 一种硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1及其应用
<130> P190793/KHB
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1402
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans
<400> 1
cggcggctgg ctccttgcgg ttacctcacc gacttcgggt gttgcaaact cccgtggtgt 60
gacgggcggt gtgtacaagg cccgggaacg tattcaccgc ggcatgctga tccgcgatta 120
ctagcgattc cgacttcatg taggcgagtt gcagcctaca atccgaactg agattggttt 180
taagagattg gcgtcctctc gcgaggtagc atcccgttgt accaaccatt gtagcacgtg 240
tgtagcccag gtcataaggg gcatgatgat ttgacgtcat ccccgccttc ctccgtcttg 300
tcgacggcag tctctctaga gtgcccaact gaatgctggc aactagaaat aagggttgcg 360
ctcgttgcgg gacttaaccc aacatctcac gacacgagct gacgacaacc atgcaccacc 420
tgtcaccgct gccccgaagg gaagctctgt ctccagagcg gtcagcggga tgtcaagacc 480
tggtaaggtt cttcgcgttg cttcgaatta aaccacatgc tccaccgctt gtgcgggccc 540
ccgtcaattc ctttgagttt cactcttgcg agcgtactcc ccaggcggag tgcttattgc 600
gttagctgcg gcactgaggg tattgaaacc cccaacacct agcactcatc gtttacggcg 660
tggactacca gggtatctaa tcctgtttgc tccccacgct ttcgcgcctc agcgtcagtt 720
acagaccaga aagccgcctt cgccactggt gttcctccac atctctacgc atttcaccgc 780
tacacgtgga ataccgcttt cctcttctgc actcaagcta cacagtttcc gatgcgaacc 840
ggagttgagc tccgggcttt aacaccagac ttacatagcc gcctgcgcgc gctttacgcc 900
caataaatcc ggacaacgct tgccacctac gtattaccgc ggctgctggc acgtagttag 960
ccgtggcttt ctcgtcaggt accgtcaagg taccgcccta ttcgaacggt acttgttcgt 1020
ccctaacaac agaactttac aatccgaaga ccttcatcgt tcacgcggcg ttgctccatc 1080
agactttcgt ccattgtgga aaattcccta ctgctgcctc ccgtaggagt ctgggccgtg 1140
tctcagtccc agtgtggccg gtcaccctct caggtcggct acgcatcgtc gccttggtag 1200
gccattaccc caccaactag ctaatgcgcc gcaggcccat ctcccagtga cagcttaaag 1260
ccgccttttc ttttcggatc atgcgatcca aaaacctatc cggtattagc ataagtttcc 1320
ctatgttatc ccagtctgag aggcaggttg cctacgtgtt actcacccgt ccgccgctag 1380
cctccgaaga gactcgctcg ac 1402

Claims (8)

1.一株硝化短芽孢杆菌（Brevibacillus nitrificans）菌株YJ1，其保藏号为CGMCCNO.18418。
2.用于降解正十六烷的菌剂，其特征在于，包括权利要求1所述的硝化短芽孢杆菌菌株YJ1。
3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于，还包括，制备菌剂常用的辅料。
4.根据权利要求3所述的菌剂，所述制备菌剂常用的辅料选自：所述硝化短芽孢杆菌菌株YJ1的培养基。
5.根据权利要求4所述的菌剂，其特征在于，所述硝化短芽孢杆菌菌株YJ1的培养基选自：牛肉膏蛋白胨培养基，和/或，含正十六烷无机盐培养基；
所述牛肉膏蛋白胨培养基包括：蛋白胨10 g/L，牛肉膏5 g/L，NaCl 10 g/L，其余为水，pH7.2；所述含正十六烷无机盐培养基包括：正十六烷 2~20 mL/L，K2HPO4·3H2O 1.0 g/L，KH2PO4 1.0 g/L，MgSO4·7H2O 0.5 g/L，NH4NO3 1.0 g/L，CaCl2 0.02 g/L，Fe2(SO4)3 0.02g/L，其余为水，pH 7.0~7.2。
6.权利要求1所述的硝化短芽孢杆菌菌株YJ1，和/或，权利要求2-5任一所述的菌剂在生物降解、生物修复领域方面的应用；
所述生物降解指，降解正十六烷，所述生物修复指，修复土壤中的正十六烷污染。
7.用于降解正十六烷的方法，其特征在于，包括用保藏号为CGMCC NO.18418的硝化短芽孢杆菌菌株YJ1处理正十六烷。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述处理正十六烷的最适条件为30℃、pH=7、接种量10%。
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