CN110583827A - 一种抗衰老黄芩茶的制备方法及用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于保健食品技术领域，为了解决目前市场上黄芩茶口感、色泽与功效等都无法得到固定，效果不理想的问题，提供了一种抗衰老黄芩茶的制备方法及用途。以5‑8月份采摘的黄芩叶为原料进行抽风失水、杀青、揉捻和干燥，制备抗衰老黄芩茶。并采用LC‑MS的方法对黄芩茶及其原料黄芩叶进行成分比较，找到9个最主要的差异成分且在黄芩茶中含量高。所制备的黄芩茶能够延缓衰老，原料成本低廉易获得，无毒副作用，黄芩茶制备工艺简单、安全性高，具有显著的保健功效。有很好的市场开发应用前景。

Description

一种抗衰老黄芩茶的制备方法及用途

技术领域

本发明属于保健食品技术领域，具体涉及一种抗衰老黄芩茶的制备方法及用途

背景技术

衰老是机体组织、器官功能随年龄增长而发生的退行性变化，是体内外许多因素共同作用的结果。目前，我国面临着老龄人口总量大、增速快的发展趋势，老年人群健康、慢性疾病防控等成为当前社会最突出的问题。随着对中医药理论的不断挖掘以及人们健康意识的提高，抗衰老越来越受到人们的关注，人们开始开发饮料或保健品，用来调理身体以达到保健和预防、治疗疾病的功效。因此，研究开发能够延缓衰老，改善衰老所致记忆功能障碍的中药保健食品具有重要意义。

黄芩茶是由唇形科黄芩属植物黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）的叶子。5~8月采收，加工制成。研究者对黄芩叶的化学成分和药理作用进行部分研究，化学成分方面：黄芩叶中主要含有黄酮类、有机酸类、二萜类、挥发油类、多糖类、无机元素类等。药理作用方面：黄芩叶具有保护心肌缺血-再灌注损伤、心血管保护作用、肝保护作用、解热镇痛作用、抗菌、抗病毒作用、抗炎作用、抗氧化作用、免疫增强作用、中枢神经保护作用、降糖作用、降血脂作用、抗肿瘤作用等多种药理活性。但是对于黄芩茶的抗衰老作用方面尚未见文献报道。

山西黄芩资源丰富，占全国产量的40%以上，由于黄芩为多年生宿根草本，因此黄芩茶原料黄芩叶有相当大的储量。目前，市场上的黄芩茶多是地上部分混合制成，口感，色泽与功效等方面均不理想。

发明内容

本发明为了解决目前市场上黄芩茶口感、色泽与功效等都无法得到固定，效果不理想的问题，提供了一种抗衰老黄芩茶及其制备方法和抗衰老活性成分检测分析方法。以黄芩叶为原料制备抗衰老黄芩茶，并采用LC-MS的方法对黄芩茶及其原料黄芩叶（自然阴干）进行成分比较，找到9个最主要的差异成分且在黄芩茶中含量高。所制备的黄芩茶能够延缓衰老，原料成本低廉易获得，无毒副作用，黄芩茶制备工艺简单、安全性高，具有显著的保健功效。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种抗衰老黄芩茶，以5-8月份采摘的黄芩叶为原料进行抽风失水、杀青、揉捻和干燥，制备抗衰老黄芩茶。

具体制备方法为：

（1）采摘：选取5至8月份无病虫害的黄芩叶，去除杂质作为原料备用；

（2）抽风失水：将所选黄芩叶用风干机在110℃~150℃处理3~5min，之后进行杀青；

（3）杀青：将步骤（2）得到的黄芩叶采用700W微波杀青，杀青时间为60s，之后进行护色；

（4）揉捻：将步骤（3）得到的黄芩叶用45型揉捻机进行揉捻，首先进行空压3~5min，接着轻压20~25min，之后重压5~10min，最后松压2min，随后进行干燥；

（5）干燥：将步骤（4）所得干燥黄芩采用微波700W干燥，干燥时间为10~20s，即为抗衰老黄芩茶。

所述的抗衰老黄芩茶中抗衰老活性成分检测分析方法，通过LC-MS对黄芩茶水提取物与黄芩叶水提取物中化学成分进行成分分析，获得9个主要差异成分：黄芩茶中红花素-7-O-葡萄糖醛酸苷、黄芩苷、汉黄芩苷、异红花素-7-O-葡萄糖醛酸苷、异黄芩苷-7-O-葡萄糖醛酸苷、黄芩素、野黄芩苷、白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷、5，6，7，3'，4'五羟基黄烷酮-7-O-葡萄糖醛酸苷，其含量分别高于黄芩叶中相应含量。

所述抗衰老黄芩茶显著提高果蝇的平均寿命、中位生存时间和最高寿命，p <0.05，所述抗衰老黄芩茶在延长寿命、延缓衰老中的应用。

具体分析方法为：

（1）黄芩茶水提取物与黄芩叶水提取物的获得：黄芩茶水提取物：称取黄芩茶，在水温为89℃下进行两次提取；第一次加黄芩茶质量15倍的水提取1h，过滤，第二次加黄芩茶质量10倍的水提取1h，过滤，合并滤液采用旋转蒸发仪浓缩；所得浓缩液进行真空冷冻干燥从而获得黄芩茶提取物；

黄芩叶水提取物：称取黄芩叶，在水温为80-100℃下进行两次提取；第一次加黄芩叶质量15倍的水提取1h，过滤，第二次加黄芩叶质量10倍的水提取1h，过滤，合并滤液采用旋转蒸发仪浓缩；所得浓缩液进行真空冷冻干燥从而获得黄芩叶提取物；

（2）用LC-MS对黄芩茶水提取物及黄芩叶水提取物进行成分分析：

样品制备：分别精密称取黄芩茶水提取物和黄芩叶水提取物各150 mg 置于具塞锥形瓶中，加入70%乙醇 50 mL，称重，80℃超声提取1 h，称重，用70%乙醇补足减失重量，静置，过滤；取滤液，用0.22μm 微孔滤膜过滤，即可；

所有检测样品均平行备样6份；QC (quality control)样本由所有待测样品各取等量混合而成；QC样本每8 针样品进样结束后进一次样，检测仪器的稳定性；

对比黄芩茶水提取物和黄芩叶水提物的总离子流图，通过多元统计获得差异成分。

所述LC-MS的色谱条件为：流动相：A为乙腈，B为0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱程序：0～3 min，15%～23% A；3～7min，23%～25% A；7～9 min，25%～27% A；9～11min，27%～50%A；11～14 min，50%～52% A；14～15min，52%～90% A；15～17 min，90% A；17～17.5 min，90%～15% A；17.5～20 min，15% A；流速为0.30mL·min−1，柱温40℃，样品池温度为15℃，进样体积为3μL；

质谱条件为采用ESI正负离子检测模式，雾化气体为N2，碰撞气体为He，采用质谱全扫描和二级扫描，质量扫描范围：100~1500 m/z，正负离子模式下毛细管电压分别为3.5KV、2.5KV，脱溶剂气体温度均为300℃，毛细管温度320℃。

经检测，与对照组相比，制备的黄芩茶可显著改善果蝇的寿命情况(p < 0.01)，能够显著提高果蝇的平均寿命、中位寿命与最高寿命(p < 0.05)，具有抗衰老的作用。

所述的黄芩茶在制备抗衰老药物中的应用。所述的黄芩茶在制备抗衰老保健品中的应用。

本发明采用天然中药为原料，更加确切的选择黄芩叶为制备黄芩茶的原料，成本低廉易获得，无毒副作用，黄芩茶的制备工艺简单易操作，经动物实验证明，制备得到的黄芩茶与其原料黄芩叶成分含量上存在差异。制备得到的黄芩茶能够显著延长果蝇寿命，功效确切。充分说明本发明所制备的抗衰老黄芩茶能够充分发挥抗衰老作用。

附图说明

图1为黄芩叶水提取物和黄芩茶水提取物的UHPLC-ESI^--MS/MS总离子流图，图中：A为黄芩叶水提取物；B为黄芩茶水提取物；

图2为黄芩不同生长部位化学成分的多元统计分析；图中：A为PCA Scatter plot；B为PLS-DA Scatter plot；C为PLS-DA permutation test；D为S-plot；

图3为黄芩叶水提取物和黄芩茶水提物部分差异成分的相对含量（n=6）；

图4为自然衰老模型雄性果蝇寿命曲线图。

具体实施方式

结合具体实施例，进一步阐述本发明，使得本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白。但这些实例仅限于说明本发明，而不用于限制本发明的范围。

实施例1：一种抗衰老黄芩茶，以5-8月份采摘的黄芩叶为原料进行抽风失水、杀青、揉捻和干燥，制备抗衰老黄芩茶。

具体制备方法为：

（1）原料选取：在五至八月份选择无病虫害的黄芩叶，去除杂质作为黄芩茶原料备用；

（2）抽风失水：将所选黄芩叶用风干机在110℃~150℃处理3~5min，之后进行杀青；

（3）将步骤（2）得到的黄芩叶采用700W微波杀青，杀青时间为60s，之后进行护色；

（4）揉捻：将步骤（3）得到的黄芩叶进行三次揉捻，用45型揉捻机进行揉捻，首先进行空压3~5min，接着轻压20~25min，之后重压5~10min，最后松压2min，随后进行干燥；

（5）干燥：将步骤（4）所得干燥黄芩采用微波700W干燥，干燥时间为10~20s，即为抗衰老黄芩茶。

实施例2：黄芩茶与黄芩叶水提取物的获得：

黄芩茶与黄芩叶水提取物的获得：黄芩茶水提取物：称取黄芩茶，在水温为89℃下进行两次提取；第一次加黄芩茶质量15倍的水提取1h，过滤，第二次加黄芩茶质量10倍的水提取1h，过滤，合并滤液采用旋转蒸发仪浓缩；所得浓缩液进行真空冷冻干燥从而获得黄芩茶提取物；

黄芩叶水提取物：称取黄芩叶，在水温为80-100℃下进行两次提取；第一次加黄芩叶质量15倍的水提取1h，过滤，第二次加黄芩叶质量10倍的水提取1h，过滤，合并滤液浓缩；所得浓缩液冷冻干燥从而获得黄芩叶提取物；

实施例3：用LC-MS对黄芩茶水提取物及黄芩叶水提取物进行成分分析：

样品制备：分别精密称取黄芩茶水提取物和黄芩叶水提取物各150 mg 置于具塞锥形瓶中，加入70%乙醇 50 mL，称重，80℃超声提取1 h，称重，用70%乙醇补足减失重量，静置，过滤；取滤液，用0.22μm 微孔滤膜过滤，即可；

所有检测样品均平行备样6份；QC (quality control)样本由所有待测样品各取等量混合而成；QC 样本是具有代表性的平均样本，每8针样品进样结束后进一次样，检测仪器的稳定性；

色谱条件：流动相: A 为乙腈， B 为0.1%甲酸水溶液， 梯度洗脱程序:

0～3 min， 15%～23% A; 3～7min， 23%～25% A;7～9 min， 25%～27% A; 9～11min，27%～50% A; 11～14 min， 50%～52% A; 14～15min， 52%～90% A; 15～17 min， 90% A;17～17.5 min，90%～15% A; 17.5～20 min， 15% A; 流速为0.30mL·min−1， 柱温40 ℃，样品池温度为15 ℃， 进样体积为3μL。

质谱条件：采用ESI正负离子检测模式，雾化气体为N2，碰撞气体为He，采用质谱全扫描和二级扫描，质量扫描范围：100~1500 m/z，正负离子模式下毛细管电压分别为3.5KV、2.5KV，脱溶剂气体温度均为300℃，毛细管温度320℃。

LC-MS图谱处理指认与多元统计分析：黄芩茶和叶水提物的总离子流图如图1所示，由图中直观发现，黄芩茶及其原料黄芩叶之间成分种类相近，后续数据处理共指认出36个黄酮类成分。

通过多元统计得到的结果如图2所示，寻找本发明制备的黄芩茶及其原料黄芩叶的差异成分，由图2C可知模型拟合有效。如图3所示，共找到9个最主要的差异成分，与原料黄芩叶相比，制备的黄芩茶中红花素-7-O-葡萄糖醛酸苷、黄芩苷、汉黄芩苷、异红花素-7-O-葡萄糖醛酸苷、异黄芩苷-7-O-葡萄糖醛酸苷、黄芩素、野黄芩苷、白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷、5，6，7，3'，4'五羟基黄烷酮-7-O-葡萄糖醛酸苷含量增高。

实施例4：制备黄芩茶的原料为自然阴干的黄芩叶。通过 LC-MS分析技术比较黄芩叶与黄芩其它地上部分茎和花的化学成分，得到五种差异成分，在黄芩叶中红花素-7-O-葡萄糖醛酸苷、野黄芩苷、异红花素-7-O-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷的比例分别为85.22%、58.21%、74.55%、94.57%、99.58%；在黄芩茎中这五种物质分别得比例依次为：13.89%、18.25%、8%、5.43%、0.42%；而在黄芩花中着五种物质的比例依次为0.89%、23.55%、17.45%、0、0。由此得出黄芩叶中的这五种化合物的含量远高于黄芩其它地上部分茎和花。因此对黄芩茶的制备原料进行选择，制备黄芩茶的原料选择黄芩叶，原料成本低廉易获得，无毒副作用，且只获取和减少对其他生长部位的损害，对黄芩资源的利用更加充沛。

实施例5：本发明制备的黄芩茶延长自然衰老果蝇的寿命实验

果蝇寿命与繁殖力的实验仪器与试剂：黄芩叶购自山西佳辰中药材开发有限公司，经山西大学秦雪梅教授鉴定为黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的叶，并保存于山西大学中医药现代研究中心，采用本发明所述方法制备成抗衰老黄芩茶。玉米粉(市售)；琼脂(分析纯)购自北京索莱宝科技有限公司；酵母粉(食品级)购自安琪酵母股份有限公司；蔗糖、丙酸均购自天津市风船化学试剂科技有限公司。

实验动物：野生型黑腹果蝇 W1118 品系(山西大学应用生物学研究所)。

空白培养基的配制：琼脂10g、玉米粉85g、蔗糖70g、酵母粉18g、水1L加热煮沸，最后加入丙酸5mL制成空白培养基。最后装入干净灭菌的果蝇管中，每管加入5 mL。

剂量组培养基的配制：在空白培养基的温度降到60℃左右，加入黄芩茶水提取物，充分搅拌，配制成含不同剂量的培养基。实验设置分组为1g/L、3g/L。

收集同一批次3d (day) 内羽化的雄果蝇成虫，随机分为3组，即空白组（control）和给药组，每组250只。空白组果蝇以空白培养基喂养，给药组果蝇以添加不同浓度黄芩茶（1g/L、3g/L）的果蝇培养基喂养。统计分析。

实验结果：本发明对自然衰老果蝇寿命实验的影响结果见表1。

表1 各组对自然衰老果蝇寿命实验的影响

注:*p < 0.05与空白对照组相比

如表1、图4所示，研究结果表明与对照组相比，本发明制备的黄芩茶1g/L、3g/L能够显著提高果蝇的平均寿命、中位生存时间和最高寿命(p < 0.05)，具有抗衰老的作用。

本发明按照原料选取、抽风失水、杀青、揉捻及干燥制得，原料成本低廉易获得，无毒副作用，黄芩茶的制备工艺简单易操作，有利于工业化生产。黄芩茶和黄芩叶成分含量上存在较大的差别，与原料黄芩叶相比，制备得到的黄芩茶中红花素-7-O-葡萄糖醛酸苷、黄芩苷、汉黄芩苷、异红花素-7-O-葡萄糖醛酸苷、异黄芩苷-7-O-葡萄糖醛酸苷、黄芩素、野黄芩苷、白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷、5，6，7，3'，4'五羟基黄烷酮-7-O-葡萄糖醛酸苷含量增高，说明本发明所制备黄芩茶有研究价值。本发明黄芩茶能显著提高果蝇的平均寿命和最高寿命，说明本发明制备得到的黄芩茶具有延缓衰老作用。

上述所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (7)

1.一种抗衰老黄芩茶，其特征在于：以5-8月份采摘的黄芩叶为原料进行抽风失水、杀青、揉捻和干燥，制备抗衰老黄芩茶。

2.根据权利要求1所述的一种抗衰老黄芩茶，其特征在于：具体制备方法为：

（1）采摘：选取5至8月份无病虫害的黄芩叶，去除杂质作为原料备用；

（2）抽风失水：将所选黄芩叶用风干机在110℃~150℃处理3~5min，之后进行杀青；

（3）杀青：将步骤（2）得到的黄芩叶采用700W微波杀青，杀青时间为60s，之后进行护色；

（4）揉捻：将步骤（3）得到的黄芩叶用45型揉捻机进行揉捻，首先进行空压3~5min，接着轻压20~25min，之后重压5~10min，最后松压2min，随后进行干燥；

（5）干燥：将步骤（4）的所得干燥黄芩采用微波700W干燥，干燥时间为10~20s，即为抗衰老黄芩茶。

3.权利要求1或2所述的抗衰老黄芩茶中抗衰老活性成分检测分析方法，其特征在于：通过LC-MS对黄芩茶水提取物与自然阴干黄芩叶水提取物中化学成分进行成分分析，获得9个主要差异成分：黄芩茶中红花素-7-O-葡萄糖醛酸苷、黄芩苷、汉黄芩苷、异红花素-7-O-葡萄糖醛酸苷、异黄芩苷-7-O-葡萄糖醛酸苷、黄芩素、野黄芩苷、白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷、5，6，7，3'，4'五羟基黄烷酮-7-O-葡萄糖醛酸苷，其含量分别高于黄芩叶中相应含量。

4.权利要求1或2所述的抗衰老黄芩茶的用途，其特征在于：所述抗衰老黄芩茶显著提高果蝇的平均寿命、中位生存时间和最高寿命，p < 0.05，所述抗衰老黄芩茶在延长寿命、延缓衰老中的应用。

5.根据权利要求3所述的抗衰老黄芩茶中抗衰老活性成分检测分析方法，其特征在于：具体方法为：

（1）黄芩茶水提取物与黄芩叶水提取物的获得：黄芩茶水提取物：称取黄芩茶，在水温为80-100℃下进行两次提取；第一次加黄芩茶质量15倍的水提取1h，过滤，第二次加黄芩茶质量10倍的水提取1h，过滤，合并滤液采用旋转蒸发仪浓缩；所得浓缩液进行真空冷冻干燥从而获得黄芩茶提取物；

（2）黄芩叶水提取物：称取黄芩叶，在水温为89℃下进行两次提取；第一次加黄芩叶质量15倍的水提取1h，过滤，第二次加黄芩叶质量10倍的水提取1h，过滤，合并滤液采用旋转蒸发仪浓缩；所得浓缩液进行真空冷冻干燥从而获得黄芩叶提取物；

（2）用LC-MS对黄芩茶水提取物及黄芩叶水提取物进行成分分析：

样品制备：分别精密称取黄芩茶水提取物和黄芩叶水提取物各150 mg 置于具塞锥形瓶中，加入70%乙醇 50 mL，称重，80℃超声提取1 h，称重，用70%乙醇补足减失重量，静置，过滤；取滤液，用0.22μm 微孔滤膜过滤，即可；

所有检测样品均平行备样6份；QC (quality control)样本由所有待测样品各取等量混合而成；QC样本每8 针样品进样结束后进一次样，检测仪器的稳定性；

对比黄芩茶水提取物和黄芩叶水提物的总离子流图，通过多元统计获得差异成分。

6.权利要求1或2所述的黄芩茶在制备抗衰老药物中的应用。

7.权利要求1或2所述的黄芩茶在制备抗衰老保健品中的应用。