CN110551851A - 一种用于扩增asfv的camp引物组及试剂盒和应用 - Google Patents

一种用于扩增asfv的camp引物组及试剂盒和应用 Download PDF

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CN110551851A CN201910842469.2A CN201910842469A CN110551851A CN 110551851 A CN110551851 A CN 110551851A CN 201910842469 A CN201910842469 A CN 201910842469A CN 110551851 A CN110551851 A CN 110551851A
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杜昱光
毛瑞
梁祖源
王倬
冯翠
张毓宸
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Institute of Process Engineering of CAS
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    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
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Abstract

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于扩增非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)的CAMP引物组及试剂盒和应用。该引物组包括以下三组引物组中的一组或几组：针对ASFV的P72区片段的三个不同区间扩增的三组引物组。本发明还提供了用于检测ASFV病毒的试剂盒。本发明利用人造DNA作为对照检测的过程中，无假阳性现象产生。本发明提供的引物灵敏度和特异性皆很高，所提供的可视化试剂盒将为现场检测提供极大便利，将其制备成为试剂盒可实现对ASFV快速准确的检测。

Description

一种用于扩增ASFV的CAMP引物组及试剂盒和应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于扩增非洲猪瘟病毒(ASFV)的CAMP引物组及试剂盒。
背景技术
非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种热性、急性、高度接触性传染病，病程短，死亡率高达90％-100％。其对养猪业危害极大，是最为严重的疫病，被世界动物卫生组织(OIE)列为法定报告疫病，也被我国列为一类传染病。临床表现为高热、皮肤发绀和各脏器的出血。传染性极强，可以通过活猪、死猪、家禽及猪肉制品等多种途径传播。此外ASFV具有高度环境抗性，也可以通过受污染的饲料和受污染的器具传播。
因目前尚无疫苗和特效治疗药物，对于该疾病的防控显得极为重要，而对于该病毒的快速、特异、高灵敏的诊断则为防控中的重要一环。世界动物卫生组织(OIE)推荐用于检测ASFV的方法，包括基于RT-PCR的针对病毒基因组特异性核酸序列的扩增信号的检测。天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心已成功研制出一种可有效诊断ASFV的TaqMan水解探针诊断试剂。但应用RT-PCR方法，需要在标准生化分析实验室中使用精密的实时荧光PCR仪，并需要试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的试验区，不适合于用于现场快速筛查。而免疫检测技术所制成的试纸条具有简便快捷的优势，但该方法误检率高、灵敏度低，难于检测处于潜伏期的ASFV携带者，可能造成疫情的扩散。因此，面向现场的快速、灵敏、高特异性核酸标志物检测技术研发将为ASFV的防控提供强有力的保障。
基于竞争性互补配对的核酸恒温扩增技术(Competitive annealing mediatedamplification of nucleic acids，CAMP)是替代PCR的核酸等温扩增方法(见CN107446919A)。该方法主要利用2至6种不同的特异性引物识别靶基因的特定区域，在等温条件进行扩增反应。与常规基因检测手段(如PCR等)相比，CAMP反应在恒温水浴箱便可完成，仪器设备要求低，较传统PCR和培养法操作简单许多，不需要专业人士也可准确完成，适合基层医疗机构及地方检验检疫部门的应用。并且，CAMP还可以大大缩短操作时间，减少样品污染机会，适合应用于ASFV的快速诊断。
目前，关于ASFV的保守位点的CAMP检测技术还未见报道。
发明内容
本发明主要解决的技术问题在于提供一种用于扩增ASFV五段保守序列的CAMP引物组及试剂盒与应用，本发明提供的引物灵敏度和特异性皆很高，将其制备成为试剂盒可实现对ASFV快速准确的检测。
本发明的用于扩增ASFV的CAMP引物组，所述CAMP引物组包括以下三组引物组中的一组或几组：针对ASFV的P72区片段(例如，GenBank：AE014613,其核苷酸序列如SEQ IDNO.19所示)的三个不同区间扩增的三组引物组；所述针对ASFV的P72区片段扩增的第一组引物组包括三对引物中的一对或两对以上，三对引物分别为：P72a-NF：其核苷酸序列如SEQID NO.1所示，P72a-NR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；P72a-LF：其核苷酸序列如SEQID NO.3所示，P72a-LR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，以及，P72a-F2其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，P72a-R2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；
所述针对ASFV的P72区片段扩增的第二组引物组包括三对引物中的一对或两对以上，三对引物分别为：P72b-NF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，P72b-NR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；P72b-LF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，P72b-LR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，以及，P72b-F2其核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，P72b-R2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；
所述针对ASFV的P72区片段扩增的第三组引物组包括三对引物中的一对或两对以上，三对引物分别为：P72c-NF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，P72c-NR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；P72c-LF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，P72c-LR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示，以及，P72c-F2其核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，P72c-R2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示。
进一步优选地，本发明的用于扩增ASFV的CAMP引物组包括，针对ASFV的P72区片段的三段不同区间扩增的三组引物组。
本发明提供的CAMP引物组针对ASFV的特异保守区域(靶基因)，由上述的各自所针对的6条引物组成，包括序列主引物(NF/NR)一组、外引物(F2/R2)一组、内引物(LF/LR)一组。其中，NF/NR为CAMP的主要引物，NF由靶基因中段的N区的互补片段Nc与5’端的F1区连接而成，NR由靶基因中段的N区和3’端的R1c区的互补片段R1连接而成，F2/R2分别为上下游外部引物，F2与靶基因F2区域相同，R2与靶基因的R2 c区域互补，LF/LR分别为上下游内部引物，LF区与靶基因LF区相同，LR区与靶基因LRc区域互补。具体核苷酸序列如下表1所示：
表1引物序列
本发明的用于检测ASFV的试剂盒，包括上述的CAMP引物组。优选可以将CAMP引物组放入超纯水中制成工作液。所述引物组的工作液可以为含1～20μM的F2、R2、LF、LR引物及5～80μM的NF、NR引物的混合液。
根据本发明所述的试剂盒，其中，还包括CAMP反应液和CAMP显色液。进一步地，所述CAMP反应液包括：Bst聚合酶、CAMP反应缓冲液和超纯水。其中，CAMP反应缓冲液包括Tris-HCl、KCl、(NH4)2SO4、MgSO4和Triton X-100。
具体地，所述CAMP反应液体系中各组分如下：
CAMP反应液(25μL体系)：
0～80mM Tris-HCl pH8.8；
0～50mM KCl；
0～50mM(NH4)2SO4；
2～20mM MgSO4；
0.1～0.5％Triton X-100；
0.2～1M甜菜碱；
1～1.6mM dNTP；
5～10U Bst DNA聚合酶(NEW ENGLAND Biolabs)；
CAMP显色液可优选Sybr green I，Eva green，羟基萘酚蓝(HNB)和铬黑T(EBT)等中的一种。
在进行检测时，例如可以使用10～15μL的引物组工作液与CAMP反应液组成25μL的检测混合液。CAMP显色液加入量可以是100～150μmol/L检测混合液。
本发明还提供了非疾病诊断目的ASFV病毒检测方法，包括以下步骤：
1)取核酸样本、所述CAMP引物组的工作液与CAMP反应液、超纯水、CAMP密封液混合，制得扩增反应液；
2)取制得的扩增反应液，60～65℃反应20～80min，优选63℃反应60min，根据显色结果判断样品是否含有ASFV病毒。
根据本发明所述的检测方法，其中，所述CAMP引物组的工作液中，引物P72a-NF与P72a-NR的浓度均为1～2μM，引物P72a-LF与P72a-LR的浓度均为1～2μM，引物P72a-F2与P72a-R2的引物浓度均为0.2～0.4μM；
所述引物P72b-NF与P72b-NR的浓度均为1～2μM，引物P72b-LF与P72b-LR的浓度均为1～2μM，引物P72b-F2与P72b-R2的引物浓度为0.2～0.4μM；
所述引物P72c-NF与P72c-NR的浓度均为1～2μM，引物P72c-LF与P72c-LR的浓度均为1～2μM，引物P72c-F2与P72c-R2的引物浓度为0.2～0.4μM；
本发明还提供了上述CAMP引物组以及试剂盒在非疾病诊断目的的ASFV病毒检测中的应用。
本发明基于CAMP技术，针对ASFV的3个特异保守区域分别设计6条引物。本发明提供的引物组敏感性高、特异性强，由其制成的试剂盒能够快速、准确的检测到待测样品中含有的ASFV。并且，由于本发明提供的引物组具有极高的特异性，在CAMP扩增所需时间短，进一步缩短了检测的时间，简化了操作。由于本发明提供的方法或试剂盒无需昂贵的仪器、也无需复杂的操作就可完成对ASFV的快速准确检测，因此，适用于ASFV爆发时，专业程度不高的海关、口岸、养殖场、屠宰场等地的现场快速检测。本发明所提供的可视化试剂盒将为现场检测提供极大便利，将其制备成为试剂盒可实现对ASFV快速准确的检测。
附图说明
图1为本发明实施例1中的荧光强度随反应时间变化的曲线图。
图2为本发明实施例2中的荧光强度随反应时间变化的曲线图。
图3为本发明实施例3中的荧光强度随反应时间变化的曲线图。
图4为本发明实施例4中的凝胶电泳图。
图5为本发明实施例5中的单独基因检测结果示意图。
具体实施方式
本说明书中公开的任一特征，除非特别叙述，均可被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换。除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或者类似特征中的一个例子而已。所述仅仅是为了帮助理解本发明，不应该视为对本发明的具体限制。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，具体可参照《分子克隆实验指南》(第三版)J.萨姆布鲁克一书中所列的具体方法进行，或者按照试剂盒和产品说明书进行；下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1应用Eva Green验证对ASFV P72a的扩增反应
Eva Green同SYBR Green I类似，是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料，其对PCR等核酸扩增反应的抑制远小于后者。在游离状态下，EvaGreen发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。因此，Eva Green的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，可以根据荧光信号检测出核酸扩增体系存在的双链DNA数量。
反应溶液组合(25μL)：
20mM Tris-HCl pH8.8；
10mM KCl；
10mM(NH4)2SO4；
14mM MgSO4；
0.1％Triton X-100；
1M甜菜碱；
1.25mM dNTP；
8U Bst DNA 聚合酶(NEW ENGLAND Biolabs)；
1X Eva Green(Biotum)；
引物：
1600nM P72a-NF/SEQ ID NO.l；
1600nM P72a-NR/SEQ ID NO.2；
800nM P72a-LF/SEQ ID NO.3；
800nM P72a-LR/SEQ ID NO.4；
200nM P72a-F2/SEQ ID NO.5；
200nM P72a-R2/SEQ ID NO.6；
靶:ASFV-P72 dsDNA/SEQ ID NO.19；
同时设置无靶的对照组。
设置ABI StepOne real time PCR反应温度恒定为63℃，反应时间为60min。荧光强度随反应时间变化的曲线如图1所示。将荧光检测应用于其中可实现实时监测的目的，通过实时扩增曲线可提前判断结果。
实施例2应用Eva Green验证对ASFV P72b的扩增反应
Eva Green同SYBR Green I类似，是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料，其对PCR等核酸扩增反应的抑制远小于后者。在游离状态下，EvaGreen发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。因此，EvaGreen的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，可以根据荧光信号检测出核酸扩增体系存在的双链DNA数量。
反应溶液组合(25μL)：
20mM Tris-HCl pH8.8；
10mM KCl；
10mM(NH4)2SO4；
14mM MgSO4；
0.1％Triton X-100；
1M甜菜碱；
1.25mM dNTP；
8U Bst DNA 聚合酶(NEW ENGLAND Biolabs)；
1X Eva Green(Biotum)；
引物：
1600nM P72b-NF/SEQ ID NO.7；
1600nM P72b-NR/SEQ ID NO.8；
800nM P72b-LF/SEQ ID NO.9；
800nM P72b-LR/SEQ ID NO.10；
200nM P72b-F2/SEQ ID NO.11；
200nM P72b-R2/SEQ ID NO.12；
靶:ASFV-P72 dsDNA/SEQ ID NO.19；
同时设置无靶的对照组。
设置ABI StepOne real time PCR反应温度恒定为63℃，反应时间为60min。荧光强度随反应时间变化的曲线如图2所示。将荧光检测应用于其中可实现实时监测的目的，通过实时扩增曲线可提前判断结果。
实施例3应用Eva Green验证对ASFV P72c的扩增反应
EvaGreen同SYBR Green I类似，是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料，其对PCR等核酸扩增反应的抑制远小于后者。在游离状态下，EvaGreen发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。因此，EvaGreen的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，可以根据荧光信号检测出核酸扩增体系存在的双链DNA数量。
反应溶液组合(25μL)：
20mM Tris-HCl pH8.8；
10mM KCl；
10mM(NH4)2SO4；
14mM MgSO4；
0.1％Triton X-100；
1M甜菜碱；
1.25mM dNTP；
8U Bst DNA聚合酶(NEW ENGLAND Biolabs)；
1X Eva Green(Biotum)；
引物：
1600nM P72c-NF/SEQ ID NO.13；
1600nM P72c-NR/SEQ ID NO.14；
800nM P72c-LF/SEQ ID NO.15；
800nM P72c-LR/SEQ ID NO.16；
200nM P72c-F2/SEQ ID NO.17；
200nM P72c-R2/SEQ ID NO.18；
靶:ASFV-P72 dsDNA/SEQ ID NO.19；
同时设置无靶的对照组。
设置ABI StepOne real time PCR反应温度恒定为63℃，反应时间为60min。荧光强度随反应时间变化的曲线如图3所示。将荧光检测应用于其中可实现实时监测的目的，通过实时扩增曲线可提前判断结果。
实施例4 ASFV基因目标片段扩增产物的凝胶电泳检测
将实施例1～3中获得的扩增产物经过回收之后进行凝胶电游检测进一步确定。样品于90mV在GelRed预染的(Biotum)1％琼脂糖凝胶(TAE溶解)电泳1小时。结果在图4中显示，各泳道的标记数字分别对应样品如下：
1：ASFV P72a的CAMP扩增产物。
2：ASFV P72b的CAMP扩增产物。
3：ASFV P72c的CAMP扩增产物。
实施例5 ASFV基因目标片段人造DNA片段的可视化检测
因ASFV为烈性DNA病毒，具有极强危害性，对于该病毒的研究必须在生物安全四级实验室中进行，故对于该病毒检测技术及产品的研发一般采用无害的人造DNA片段进行模拟。故本发明亦使用人造DNA片段，应用所可视化试剂进行DNA检测研究。
羟基萘酚蓝(HNB)是应用于CAMP技术中可视化检测的指示剂。其原理为：当发生核酸体外扩增反应时会产生大量不溶副产物焦磷酸镁，从而导致镁离子减少，而HNB为镁离子指示剂，故可监测有无扩增反应发生。当CAMP未发生扩增反应时，体系中镁离子浓度高，反应液呈紫色；当CAMP发生扩增反应时，体系中镁离子浓度低，反应液呈蓝色。
通过这些引物和可视化试剂进行ASFV病毒DNA检测的反应溶液的组合在下面所示。
反应溶液组合(25μL)：
20mM Tris-HCl pH8.8；
10mM KCl；
10mM(NH4)2SO4；
14mM MgSO4；
0.1％Triton X-100；
1M甜菜碱；
1.25mM dNTP；
8U Bst DNA聚合酶(NEW ENGLAND Biolabs)；
120μM HNB；
以上为可视化检测的所共用的试剂，下述为针对各DNA片段所使用的引物及靶序列：
1)ASFV P72a DNA检测引物：
1600nM P72a-NF/SEQ ID NO.l；
1600nM P72a-NR/SEQ ID NO.2；
800nM P72a-LF/SEQ ID NO.3；
800nM P72a-LR/SEQ ID NO.4；
200nM P72a-F2/SEQ ID NO.5；
200nM P72a-R2/SEQ ID NO.6；
靶:ASFV-P72 dsDNA/SEQ ID NO.19；
同时设置无靶的对照组。
2)ASFV P72b DNA检测引物：
1600nM P72b-NF/SEQ ID NO.7；
1600nM P72b-NR/SEQ ID NO.8；
800nM P72b-LF/SEQ ID NO.9；
800nM P72b-LR/SEQ ID NO.10；
200nM P72b-F2/SEQ ID NO.11；
200nM P72b-R2/SEQ ID NO.12；
靶:ASFV-P72 dsDNA/SEQ ID NO.19；
同时设置无靶的对照组。
3)ASFV P72c DNA检测引物：
1600nM P72c-NF/SEQ ID NO.13；
1600nM P72c-NR/SEQ ID NO.14；
800nM P72c-LF/SEQ ID NO.15；
800nM P72c-LR/SEQ ID NO.16；
200nM P72c-F2/SEQ ID NO.17；
200nM P72c-R2/SEQ ID NO.18；
靶:ASFV-P72 dsDNA/SEQ ID NO.19；
同时设置无靶的对照组。
结果判断：蓝色为阳性，紫色为阴性。结果在图5中显示，各反应管的标记数字分别对应样品如下：
1：ASFV P72a DNA检测的阳性结果
2：ASFV P72a DNA检测的阴性结果。
3：ASFV P72b DNA检测的阳性结果。
4：ASFV P72b DNA检测的阴性结果。
5：ASFV P72c DNA检测的阳性结果。
6：ASFV P72c DNA检测的阴性结果。
本发明的工艺参数(如温度、时间等)区间上下限取值以及区间值都能实现本法，在此不一一列举实施例。
本发明未详细说明的内容均可采用本领域的常规技术知识。
最后所应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制。尽管参照实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应该理解，对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，都不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
序列表
<110> 中国科学院过程工程研究所
<120> 一种用于扩增ASFV的CAMP引物组及试剂盒和应用
<160> 19
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tgtcccagtc atatccgtta ggatgctccg attcagg 37
<210> 2
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
aacggatatg actgggacac gggtacaata ggtcttc 37
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ccatggtcag cttcaaacg 19
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
ggtcttccaa agggatctac 20
<210> 5
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
gtgcatgtca ttcgtcctg 19
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
ccaagtttcg gtacgcattc 20
<210> 7
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
cataaggctt aaaatgcgca ccccgaaccc actttgagt 39
<210> 8
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
gcgcatttta agccttatgc cgtatgcggg cgtacttta 39
<210> 9
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
cgaagaaaca catttgg 17
<210> 10
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
gtattcaaac cctactgg 18
<210> 11
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
gaacaaaagt tatgggaaac ccg 23
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
ccaaaggtaa gcttgtttcc 20
<210> 13
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
taagaatagg tttgctttgg aggtatcggt ggagggaa 38
<210> 14
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
caaagcaaac ctattcttag ggaaaatgtt gtgaaagg 38
<210> 15
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
gtggccctct cctatgcaac 20
<210> 16
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
gttggtatgg ctgcacgttc g 21
<210> 17
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
ctggatataa gcacttggtc g 21
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
cctgctgttt ggatattgtg 20
<210> 19
<211> 979
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
tgtcttattg ctaacgatgg gaaggccgac aagattatat tggcccaaga cttgcttaat 60
agcaggattt ctaacattaa aaatgtgaac aaaagttatg ggaaacccga ccccgaaccc 120
actttgagtc aaatcgaaga aacacatttg gttcatttta atgcgcattt taagccttat 180
gttccagtag ggtttgaata caataaagta cgcccgcata cgggtacccc caccttggga 240
aacaagctta cctttggtat tccccagtac ggagactttt tccatgatat ggtgggccac 300
catatattgg gtgcatgtca ttcgtcctgg caggatgctc cgattcaggg cacggcccag 360
atgggggccc atggtcagct tcaaacgttt cctcgcaacg gatatgactg ggacaaccaa 420
acacctttag agggcgccgt ttacacgctt gtagatccct ttggaagacc tattgtaccc 480
ggcacaaaga atgcgtaccg aaacttggtt tactactgcg aataccccgg agaacgactt 540
tatgaaaacg taagattcga tgtaaatgga aattccctgg acgaatatag ttcggatgtc 600
acaacgcttg tgcgcaaatt ttgcatccca ggggataaaa tgactggata taagcacttg 660
gtcggccagg aggtatcggt ggagggaact agtggccctc tcctatgcaa cattcatgat 720
ttgcacaagc cgcaccaaag caaacctatt cttaccgatg aaaatgatac gcagcgaacg 780
tgcagccata ccaacccgaa attcctttca caacattttc ccgagaactc tcacaatatc 840
caaacagcag gtaaacaaga tattactcct attacggacg caacgtatct ggacataaga 900
cgtaatgttc attacagctg taatggacct caaaccccta aatactatca gccccctctt 960
gcgctctgga ttaagctgc 979

Claims (9)

1.一种用于扩增ASFV的CAMP引物组，其特征在于，所述CAMP引物组包括以下针对ASFV的P72区片段扩增的3组引物组中的一组或两组以上：
针对ASFV的P72区片段扩增的第一组引物组包括三对引物中的一对或两对以上，三对引物分别为：P72a-NF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，P72a-NR：其核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示；P72a-LF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，P72a-LR：其核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示，以及，P72a-F2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，P72a-R2：其核苷酸序列如SEQID NO.6所示；
针对ASFV的P72区片段扩增的第二组引物组包括三对引物中的一对或两对以上，三对引物分别为：P72b-NF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，P72b-NR：其核苷酸序列如SEQ IDNO.8所示；P72b-LF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，P72b-LR：其核苷酸序列如SEQ IDNO.10所示，以及，P72b-F2其核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，P72b-R2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；
针对ASFV的P72区片段扩增的第三组引物组包括三对引物中的一对或两对以上，三对引物分别为：P72c-NF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，P72c-NR：其核苷酸序列如SEQID NO.14所示；P72c-LF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，P72c-LR：其核苷酸序列如SEQID NO.16所示，以及，P72c-F2其核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，P72c-R2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示。
2.根据权利要求1所述的CAMP引物组，其特征在于，所述CAMP引物组包括针对ASFV的P72区片段扩增的三组引物组。
3.一种用于检测ASFV的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的CAMP引物组。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括CAMP反应液和CAMP显色液。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述CAMP反应液包括：Bst聚合酶、CAMP反应缓冲液和超纯水。
6.一种非疾病诊断目的ASFV病毒检测方法，包括以下步骤：
1)取核酸样本、权利要求1或2所述CAMP引物组的工作液与CAMP反应液、超纯水、CAMP密封液混合，制得扩增反应液；
2)取制得的扩增反应液，60～65℃反应20～80min，根据显色结果判断样品是否含有ASFV病毒。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述CAMP引物组的工作液中，引物P72a-NF与P72a-NR的浓度均为1～2μM，引物P72a-LF与P72a-LR的浓度均为1～2μM，引物P72a-F2与P72a-R2的引物浓度均为0.2～0.4μM；
所述引物P72b-NF与P72b-NR的浓度均为1～2μM，引物P72b-LF与P72b-LR的浓度均为1～2μM，引物P72b-F2与P72b-R2的引物浓度为0.2～0.4μM；
所述引物P72c-NF与P72c-NR的浓度均为1～2μM，引物P72c-LF与P72c-LR的浓度均为1～2μM，引物P72c-F2与P72c-R2的引物浓度为0.2～0.4μM。
8.权利要求1或2所述CAMP引物组在非疾病诊断目的的ASFV病毒检测中的应用。
9.权利要求3-5任一项所述试剂盒在非疾病诊断目的的ASFV病毒检测中的应用。
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