CN110551835A - 一种检测牛源奇异变形杆菌特异性引物及方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种检测牛源奇异变形杆菌特异性引物及方法，引物包括正向引物和反向引物，具体为：正向引物F：5’‑ATGCGCACACTGACCCAATTA‑3’；反向引物R：5’‑CTGATCGCGTCCTTCAAGCC‑3’；所述的特异性引物如SEQ ID NO.1～2所示。检测方法包括以下步骤：S1、提取待测样品基因组DNA；S2、使用检测牛源奇异变形杆菌特异性引物对待测样品基因组DNA进行PCR扩增；S3、进行凝胶电泳检测，于凝胶成像系统下拍照检测，若存在306bp的DNA特异性条带则确定样品中含有奇异变形杆菌，否则判定样品中不含奇异变形杆菌。本发明提供的引物可用于奇异变形杆菌的PCR检测，具有检测时间短、成本低的特点，检测结果特异性高，结果易判读，实用性强。本发明建立的检测方法利用了PCR技术，具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性强等特点。

Description

一种检测牛源奇异变形杆菌特异性引物及方法
技术领域
本发明属于微生物技术领域，特别涉及一种检测牛源奇异变形杆菌特异性引物及方法。
背景技术
奇异变形杆菌(Proteus)为肠杆菌科变形杆菌属的成员，是一种无荚膜、无芽孢、有鞭毛的革兰氏阴性杆菌，以其特有的周期性群集运动而闻名，显微镜观察呈现多形性，杆状居多，球状偏少。奇异变形杆菌在自然界中分布广泛，主要存在于污水、土壤、粪便中，该菌是常见的人畜共患病致病菌，主要定植于人和动物的消化道、呼吸道、泌尿生殖道，感染可引起肠炎、肺炎、膀胱炎、肾结石等疾病，且已成为引起复杂尿路感染(CAUTI)的主要原因。随着近年来全国肉牛养殖规模和密度的不断扩大，饲养环境恶化、长途运输等因素常导致牛群机体抵抗力下降，致使多种疾病频发，其中急性牛呼吸道疾病常见于应激与断奶后，其原因之一是牛感染奇异变形杆菌后，对溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、牛支原体等病原的易感性增加，造成疾病的产生。目前，奇异变形杆菌在中国的分布十分广泛，其多重耐药性的产生，给临床治疗带来极大困难，成为威胁牛养殖业的重要病原。因此，临床上迫切需要一种快速、精准的检测手段，辨明牛呼吸道疾病的病原，针对防治。
传统上的细菌鉴定方法主要是通过细菌生理生化特性进行分类，需要大量的时间进行生理生化反应的结果判读，不利于及时诊断病因，查找病原，控制病情蔓延。而16SrRNA通用引物扩增后，还需要测序确定细菌种属，不适用常规检测。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种可用于奇异变形杆菌的PCR检测，具有检测时间短、成本低的特点，检测结果特异性高，结果易判读，实用性强检测牛源奇异变形杆菌特异性引物及检测方法和检测试剂。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种检测牛源奇异变形杆菌特异性引物，，包括正向引物和反向引物，具体为：
正向引物F：5’-ATGCGCACACTGACCCAATTA-3’；
反向引物R：5’-CTGATCGCGTCCTTCAAGCC-3’；
所述的特异性引物如SEQ ID NO.1～2所示。
一种检测牛源奇异变形杆菌的方法，包括以下步骤：
S1、提取待测样品基因组DNA；
S2、使用检测牛源奇异变形杆菌特异性引物对待测样品基因组DNA进行PCR扩增；
S3、进行凝胶电泳检测，于凝胶成像系统下拍照检测，若存在306bp的DNA特异性条带则确定样品中含有奇异变形杆菌，否则判定样品中不含奇异变形杆菌。
进一步地，所述步骤S1包括以下子步骤：
S11、取100～200μL 37℃恒温培养箱培养24h的待测样品基液，加入1.5mL离心管中，室温12000g离心1min，弃上清液；向离心管中加入100μL Qlysis-G Reagent，充分振荡使沉淀悬浮，再加入10μL Proteinase K溶液，震荡混匀；在65℃水浴5min至细胞完全裂解；
S12、95℃水浴3min，然后向离心管中加入100μL Buffer NST，充分颠倒混匀；
S13、16000g室温离心5min，取上清液作为模板4℃保存。
进一步地，所述的PCR扩增反应体系包括5μL 2×Taq PCR Master Mix(blue)、1μL检测牛源奇异变形杆菌特异性引物、1μL待测样品基因组DNA和3μL双蒸水。
进一步地，所述的PCR扩增反应包括以下子步骤：
S21、95℃预变性5min；
S22、进入以下循环：95℃变性30s、58℃退火30s、72℃延伸30s，共进行35个循环；
S24、72℃延伸10min，然后12℃保存。
进一步地，所述步骤S11和步骤S12的水浴过程中，每1分钟颠倒混匀一次。
一种用于检测牛源奇异变形杆菌的试剂盒，所述的试剂盒包含上述的特异性引物。
本发明的有益效果是：
1、本发明提供一种牛源奇异变形杆菌PCR检测引物，该引物可用于奇异变形杆菌的PCR检测，具有检测时间短、成本低的特点，检测结果特异性高，结果易判读，实用性强。
2、本发明建立的检测方法利用了PCR技术，具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性强等特点，可为临床上奇异变形杆菌快速诊断和流行病学调查提供技术支撑。
3、本发明避免了采用传统鉴定方法操作繁琐、耗时长、准确性低、检出率低等缺点，同时本发明检测靶点具有单一特异性，检测结果特异，易于判定，相对于16S rRNA测序的方法又节约了时间。
附图说明
图1为本发明的一种检测牛源奇异变形杆菌的方法的流程图；
图2为实施例中奇异变形杆菌特异性引物的PCR反应条件优化；M：50bp DNALadder Marker；1：阴性对照；2～7退火温度分别为55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃；
图3为实施例中PCR检测方法特异性评估试验凝胶电泳结果图；M：50bp DNALadder Marker；1：阴性对照；2：约翰逊不动杆菌；3：多杀性巴氏杆菌；4：志贺氏菌；5：奈瑟菌；6：深红沙雷氏菌；7：鲍曼不动杆菌；8：皮特不动杆菌；9：摩根菌；10：大肠杆菌；11：肺炎克雷伯氏菌；12：柯氏柠檬酸杆菌；13：铜绿假单胞菌；14：普通变形杆菌；15：卡式变形杆菌；16：奇异变形杆菌；
图4为实施例中PCR检测方法灵敏度评价试验凝胶电泳结果图；M：50bp DNALadder Marker；1：683.5ng/μL；2：683.5×10-1ng/μL；3：683.5×10-2ng/μL；4：683.5×10- 3ng/μL；5：683.5×10-4ng/μL；6：683.5×10-5ng/μL；7：阴性对照；
图5为实施例中临床样品检测凝胶电泳结果图，M：50bp DNA Ladder Marker；1：阴性对照；2：奇异变形杆菌阳性对照；3-20为疑似菌株。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例进一步说明本发明的技术方案。
本实施例针对奇异变形杆菌的毒力蛋白基因(rsbA基因)，设计出对奇异变形杆菌具有特异性强且灵敏性高的一种检测牛源奇异变形杆菌特异性引物，，包括正向引物和反向引物，具体为：
正向引物F：5’-ATGCGCACACTGACCCAATTA-3’；
反向引物R：5’-CTGATCGCGTCCTTCAAGCC-3’；
所述的特异性引物如SEQ ID NO.1～2所示。
如图1所示，本发明的一种检测牛源奇异变形杆菌的方法，包括以下步骤：
S1、提取待测样品基因组DNA；包括以下子步骤：
S11、取100～200μL 37℃恒温培养箱培养24h的待测样品基液，加入1.5mL离心管中，室温12000g离心1min，弃上清液；向离心管中加入100μL Qlysis-G Reagent，充分振荡使沉淀悬浮，再加入10μL Proteinase K溶液，震荡混匀；在65℃水浴5min至细胞完全裂解；
S12、95℃水浴3min，然后向离心管中加入100μL Buffer NST，充分颠倒混匀；
S13、16000g室温离心5min，取上清液作为模板4℃保存。
S2、使用检测牛源奇异变形杆菌特异性引物对待测样品基因组DNA进行PCR扩增；
所述的PCR扩增反应体系包括5μL 2×Taq PCR Master Mix(blue)、1μL检测牛源奇异变形杆菌特异性引物、1μL待测样品基因组DNA和3μL双蒸水。
所述的PCR扩增反应包括以下子步骤：
S21、95℃预变性5min；
S22、进入以下循环：95℃变性30s、58℃退火30s、72℃延伸30s，共进行35个循环；牛源奇异变形杆菌特异性引物最佳退火温度的探索：分别以奇异变形杆菌的菌液为模板做PCR扩增，并将目的引物的退火温度分别设置为55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃。PCR扩增产物在1.2％琼脂糖1×TAE缓冲系统中电泳，每孔加样5μL，用全自动凝胶成像分析系统检测电泳结果，根据PCR后的凝胶电泳结果确定为奇异变形杆菌特异性引物的最佳退火温度。由图2可见，温度55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃下均出现扩增条带，根据PCR基本原则，58℃电泳凝胶条带最为明显，58℃前后温度PCR后条带效果逐渐降低，故确定最佳退火温度为58℃。
S24、72℃延伸10min，然后12℃保存。
S3、进行凝胶电泳检测，于凝胶成像系统下拍照检测，若存在306bp的DNA特异性条带则确定样品中含有奇异变形杆菌，否则判定样品中不含奇异变形杆菌。
判断具体为：PCR扩增产物在1.2％琼脂糖1×TAE缓冲系统中电泳，每孔加样5μL，用全自动凝胶成像分析系统检测电泳结果，如果出现306bp的单一扩增条带，则说明样品中含有奇异变形杆菌；反之，则样品中不含奇异变形杆菌。
进一步地，所述步骤S11和步骤S12的水浴过程中，每1分钟颠倒混匀一次，促进细胞充分裂解。
一种用于检测牛源奇异变形杆菌的试剂盒，所述的试剂盒包含前述检测牛源奇异变形杆菌特异性引物。
下面通过实验对本发明的检测方法性能进行进一步验证。
1、特异性评估试验
按本发明的DNA模板制备与PCR检测方法，对本实验室保存的约翰逊不动杆菌，多杀性巴氏杆菌，志贺氏菌，奈瑟菌，深红沙雷氏菌，鲍曼不动杆菌，皮特不动杆菌，摩根菌，大肠杆菌，肺炎克雷伯氏菌，柯氏柠檬酸杆菌，铜绿假单胞菌，普通变形杆菌，卡式变形杆菌以及奇异变形杆菌进行PCR扩增反应。其结果如图3所示，电泳结果为只有奇异变形杆菌在306bp处出现特异性条带，而其他菌种未出现特异性条带。
2、灵敏度评价试验
接种奇异变形杆菌于1mL营养肉汤液体培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24h增菌后，用灭菌营养肉汤液体培养基10倍梯度稀释后，NanoDropTM One超微量紫外分光光度计计数得到基因组DNA浓度为683.5ng/μL，取1mL菌液按本发明的方法提取基因组DNA，用灭菌双蒸水按10～105进行10倍梯度稀释基因组DNA，以6个梯度稀释液为模板进行PCR扩增，凝胶电泳检测扩增产物，紫外灯光下观察凝胶电泳结果。
如图4所示，在泳道5可以看到清晰条带，相对应检测细菌最低浓度为683.5×10- 4ng/μL，本法具有较好的灵敏度。
3、临床疑似菌株检测
利用奇异变形杆菌特异性PCR检测方法对从肉牛口腔和鼻腔中采集到的18份原样扩培菌液进行检测。检测结果见图5，可知样品扩培菌液中无阳性结果。
本领域的普通技术人员将会意识到，这里所述的实施例是为了帮助读者理解本发明的原理，应被理解为本发明的保护范围并不局限于这样的特别陈述和实施例。本领域的普通技术人员可以根据本发明公开的这些技术启示做出各种不脱离本发明实质的其它各种具体变形和组合，这些变形和组合仍然在本发明的保护范围内。

Claims (7)

1.一种检测牛源奇异变形杆菌特异性引物，其特征在于，包括正向引物和反向引物，具体为：
正向引物F：5’-ATGCGCACACTGACCCAATTA-3’；
反向引物R：5’-CTGATCGCGTCCTTCAAGCC-3’；
所述的特异性引物如SEQ ID NO.1～2所示。
2.一种检测牛源奇异变形杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、提取待测样品基因组DNA；
S2、使用检测牛源奇异变形杆菌特异性引物对待测样品基因组DNA进行PCR扩增；
S3、进行凝胶电泳检测，于凝胶成像系统下拍照检测，若存在306bp的DNA特异性条带则确定样品中含有奇异变形杆菌，否则判定样品中不含奇异变形杆菌。
3.根据权利要求2所述的一种检测牛源奇异变形杆菌的方法，其特征在于，所述步骤S1包括以下子步骤：
S11、取100～200μL 37℃恒温培养箱培养24h的待测样品基液，加入1.5mL离心管中，室温12000g离心1min，弃上清液；向离心管中加入100μL Qlysis-G Reagent，充分振荡使沉淀悬浮，再加入10μL Proteinase K溶液，震荡混匀；在65℃水浴5min至细胞完全裂解；
S12、95℃水浴3min，然后向离心管中加入100μL Buffer NST，充分颠倒混匀；
S13、16000g室温离心5min，取上清液作为模板4℃保存。
4.根据权利要求2所述的一种检测牛源奇异变形杆菌的方法，其特征在于，所述的PCR扩增反应体系包括5μL2×Taq PCR Master Mix(blue)、1μL检测牛源奇异变形杆菌特异性引物、1μL待测样品基因组DNA和3μL双蒸水。
5.根据权利要求2所述的一种检测牛源奇异变形杆菌的方法，其特征在于，所述的PCR扩增反应包括以下子步骤：
S21、95℃预变性5min；
S22、进入以下循环：95℃变性30s、58℃退火30s、72℃延伸30s，共进行35个循环；
S24、72℃延伸10min，然后12℃保存。
6.根据权利要求3所述的一种检测牛源奇异变形杆菌的方法，其特征在于，所述步骤S11和步骤S12的水浴过程中，每1分钟颠倒混匀一次。
7.一种用于检测牛源奇异变形杆菌的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含权利要求1所述的特异性引物。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007039319A2 (en) * 2005-09-29 2007-04-12 Univ Koeln Dna microarray for rapid identification of candida albicans in blood cultures
CN102559863A (zh) * 2011-09-23 2012-07-11 中国科学院烟台海岸带研究所 一种检测奇异变形杆菌的特异的核酸标识序列及其应用
CN108179209A (zh) * 2018-03-13 2018-06-19 苏州百源基因技术有限公司 用于检测奇异变形杆菌的特异性引物和探针以及实时荧光定量pcr试剂盒
CN110257540A (zh) * 2019-07-23 2019-09-20 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 检测变形杆菌属及奇异变形杆菌的pcr引物、引物组、探针及其试剂盒和检测方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007039319A2 (en) * 2005-09-29 2007-04-12 Univ Koeln Dna microarray for rapid identification of candida albicans in blood cultures
CN102559863A (zh) * 2011-09-23 2012-07-11 中国科学院烟台海岸带研究所 一种检测奇异变形杆菌的特异的核酸标识序列及其应用
CN108179209A (zh) * 2018-03-13 2018-06-19 苏州百源基因技术有限公司 用于检测奇异变形杆菌的特异性引物和探针以及实时荧光定量pcr试剂盒
CN110257540A (zh) * 2019-07-23 2019-09-20 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 检测变形杆菌属及奇异变形杆菌的pcr引物、引物组、探针及其试剂盒和检测方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
M. S. M. MANSY ER AL.: ""Amplification of Proteus mirabilis chromosomal DNA using the polymerase chain reaction"", 《MOLECULAR AND CELLULAR PROBES》 *
WEIWEI ZHANG ET AL.: ""Quick identification and quantification of Proteus mirabilis by polymerase chain reaction (PCR) assays"", 《ANN MICROBIOL》 *
尹有勤等: ""不同来源奇异变形杆菌对小鼠致病力及其毒力基因携带情况的比较"", 《中国生物制品学杂志》 *
曾邦权等: ""牛奇异变形杆菌的分离鉴定及16SrRNA基因系统发育分析"", 《中国畜牧兽医文摘》 *
杨巧玲等: ""犬源性奇异变形杆菌的毒力试验"", 《中国兽医杂志》 *

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