CN110551192B - 一种丝肽素蛋白的提取方法 - Google Patents

一种丝肽素蛋白的提取方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110551192B
CN110551192B CN201910872402.3A CN201910872402A CN110551192B CN 110551192 B CN110551192 B CN 110551192B CN 201910872402 A CN201910872402 A CN 201910872402A CN 110551192 B CN110551192 B CN 110551192B
Authority
CN
China
Prior art keywords
substances
silk
extracting
silk peptide
water
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201910872402.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110551192A (zh
Inventor
姚建林
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN201910872402.3A priority Critical patent/CN110551192B/zh
Publication of CN110551192A publication Critical patent/CN110551192A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110551192B publication Critical patent/CN110551192B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
    • C07K14/43563—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from insects
    • C07K14/43586—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from insects from silkworms

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及一种丝肽素蛋白的提取方法，包括以下步骤：S1：消毒清洗；S2：提取水溶性混合物；S3：提取丝胶；S4：提取丝素；S5：提取丝肽；S6：脱重金属；S7：脱农残；S8：提纯；S9：灭菌；S10：防腐防馊处理；S11：制蛋白粉。本发明的丝肽素蛋白的提取方法具有以下优势：1、无需添加剂，工艺简单，所需人工少，成本较低；2、单种成分提取最少只要2小时，提取效率高；3、获得的物质纯度高，能够达到98％以上；4、可以从桑蚕茧中提取出四种物质原料，便于提升产量，推广使用。

Description

一种丝肽素蛋白的提取方法
技术领域
本发明涉及生物科技技术领域，特别涉及一种丝肽素蛋白的提取方法。
背景技术
蚕丝是纯天然绿色高品质生命蛋白质，富含氨基酸。蚕丝是由丝素和丝胶构成，其组成中98％是蛋白质，其中丝素占70％-80％，丝胶占20％-30％，将蚕丝脱胶后的丝素，经过处理获得的丝素蛋白、丝素肽、氨基酸，对人体具有特殊的营养保健功能，可以为食品工业、医药工业、化妆品生产提供了天然高档原料来源。现有技术中公开了一些丝素、丝胶的提取方法，例如公开号为CN109320595A、CN107937460A等专利公开的提取方法工艺较复杂，需要使用多种添加剂进行提取，成本较高；此外，其提取时间较长，效率较低。
发明内容
本发明为了解决现有技术的问题，提供了一种成本较低，效率高，纯度高的丝肽素蛋白的提取方法。
具体技术方案如下：一种丝肽素蛋白的提取方法，包括以下步骤：
S1：消毒清洗，将桑蚕茧浸泡在双氧水和软水的混合溶液中，去除污垢杂质后取出，桑蚕茧和水溶性混合物的质量比为1:1.5；
S2：提取水溶性混合物，将步骤S1的混合溶液放入高压反应锅中，温度控制在100℃-120℃，压力为0.5-1.5atm，反应时间2h-4h，获得水溶性混合物；
S3：提取丝胶，将水溶性混合物放入另一高压反应锅，高压反应锅中温度控制在100℃-120℃，压力为0.5-1.5atm，反应时间2h-4h，使水溶性混合物脱出丝胶；
S4：提取丝素，将脱出丝胶后的混合物放入另一高压反应锅中，高压反应锅中温度控制在100℃-130℃，压力为0.5-1.5atm，反应时间2h-4h，使得混合物中脱出丝素；
S5：提取丝肽，将脱出丝素后的混合物放入另一高压反应锅中，高压反应锅中温度控制在120℃-160℃，压力为0.5-1.5atm，反应时间2h-4h，使得混合物中脱出丝肽；
S6：脱重金属，将步骤S2-S4中获得的丝胶、丝素和丝肽三种物质分别放入重金属分离器，将三种物质中含有的重金属分离出；
S7：脱农残，将三种物质分别放入农残分离器，将三种物质中含有的农药残留物分离出去；
S8：提纯，将三种物质分别放入压缩机中，使水分分离，提升三种物质的纯度；
S9：灭菌，将三种物质放入无菌房中灭菌，减少细菌，避免过敏；
S10：防腐防馊处理，将三种物质进行防腐防馊处理，使其不易腐坏；
S11：制蛋白粉，经过步骤S2后剩余的蚕茧干品烘干并通过纤维碾磨机制成蛋白粉并通过纤维碾磨机制成蛋白粉。
通过上述技术方案，能够在无需添加剂，只需要水进行提取，成本较低；效率较高，能够将在2小时左右完成提取，此外，获得的丝肽素蛋白纯度较高，能够获得纯度在98％以上的丝肽素蛋白。
上述技术方案中，水溶性混合物经过加工后可获得液态丝胶、液态丝素、液态丝肽所占的质量百分比分别为45％、35％、20％，液态丝胶、液态丝素、液态丝肽中丝胶、丝素和丝肽三种物质干品占桑蚕茧的质量百分比为32％-40％，干品蛋白粉占桑蚕茧的质量比为60％-68％。
进一步的，所述桑蚕茧为削口桑蚕茧，从而去除蚕茧内的蚕蛹。
进一步的，所述高压反应锅采用陶瓷内壁的高压反应锅，从而避免反应过程中引入其他金属杂质。
进一步的，在步骤S1中，桑蚕茧和混合溶液的质量比为1:6。
进一步的，所述蚕茧干品经过八篮烘箱烘干24h。
进一步的，水溶性混合物经过加工后可获得液态丝胶、液态丝素、液态丝肽所占的质量百分比分别为45％、35％、20％。
进一步的，干品蛋白粉占桑蚕茧的质量百分比60％-68％。
本发明的技术效果：本发明的丝肽素蛋白的提取方法具有以下优势：1、无需添加剂，工艺简单，所需人工少，成本较低；2、单种成分提取最少只要2小时，提取效率高；3、获得的物质纯度高，能够达到98％以上；4、可以从桑蚕茧中提取出四种物质原料，便于提升产量，推广使用。
具体实施方式
下面，结合实例对本发明的实质性特点和优势作进一步的说明，但本发明并不局限于所列的实施例。
实施例1
一种丝肽素蛋白的提取方法，包括以下步骤：
S1：消毒清洗，将1kg桑蚕茧浸泡在6kg双氧水和软水的混合溶液中，去除污垢杂质后，得到7kg混合溶液；
S2：提取水溶性混合物，将步骤S1的混合溶液放入高压反应锅中，温度控制在100℃，压力为1.5atm，反应时间2h，获得1.5kg水溶性混合物
S3：提取丝胶，将水溶性混合物放入高压反应锅，高压反应锅中温度控制在100℃，压力为1.5atm，反应时间2h，使水溶性混合物脱出液态丝胶0.66kg；
S4：提取丝素，将脱出丝胶后的混合物放入另一高压反应锅中，高压反应锅中温度控制在100℃，压力为1.5atm，反应时间2h，使得混合物中脱出液态丝素0.52kg；
S5：提取丝肽，将脱出丝素后的混合物放入另一高压反应锅中，高压反应锅中温度控制在120℃，压力为0.5atm，反应时间2h，使得混合物中脱出液态丝肽0.29kg；
S6：脱重金属，将步骤S2-S4中获得的丝胶、丝素和丝肽三种物质分别放入重金属分离器，将三种物质中含有的重金属分离出；
S7：脱农残，将三种物质分别放入农残分离器，将三种物质中含有的农药残留物分离出去；
S8：提纯，将三种物质分别放入压缩机中，使水分分离，提升三种物质的纯度，丝胶纯度98.3％，丝素纯度98.1％，丝肽浓度98.4％；
S9：灭菌，将三种物质放入无菌房中灭菌，减少细菌，避免过敏，无菌房中采用紫外线灭菌，无菌房等级为10万等级无菌房；
S10：防腐防馊处理，采用植物防腐方法将三种物质进行防腐防馊处理，使其不易腐坏；
S11：制蛋白粉，经过步骤S2后剩余的蚕茧干品经过八篮烘箱烘干24h，并通过纤维碾磨机制成蛋白粉，得到0.68kg蛋白粉。
实施例2
一种丝肽素蛋白的提取方法，包括以下步骤：
S1：消毒清洗，将5kg桑蚕茧浸泡在30kg双氧水和软水的混合溶液中，去除污垢杂质后，得到35kg混合溶液；
S2：提取水溶性混合物，将步骤S1的混合溶液放入高压反应锅中，温度控制在120℃，压力为0.5atm，反应时间2h，获得7.5kg水溶性混合物
S3：提取丝胶，将水溶性混合物放入高压反应锅，高压反应锅中温度控制在120℃，压力为0.5atm，反应时间2h，使水溶性混合物脱出液态丝胶3.38kg；
S4：提取丝素，将脱出丝胶后的混合物放入另一高压反应锅中，高压反应锅中温度控制在130℃，压力为0.5atm，反应时间4h，使得混合物中脱出液态丝素2.62kg；
S5：提取丝肽，将脱出丝素后的混合物放入另一高压反应锅中，高压反应锅中温度控制在160℃，压力为1.5atm，反应时间4h，使得混合物中脱出液态丝肽1.49kg；
S6：脱重金属，将步骤S2-S4中获得的丝胶、丝素和丝肽三种物质分别放入重金属分离器，将三种物质中含有的重金属分离出；
S7：脱农残，将三种物质分别放入农残分离器，将三种物质中含有的农药残留物分离出去；
S8：提纯，将三种物质分别放入压缩机中，使水分分离，提升三种物质的纯度，丝胶纯度99.1％，丝素纯度98.2％，丝肽浓度98.5％；
S9：灭菌，将三种物质放入无菌房中灭菌，减少细菌，避免过敏，无菌房中采用紫外线灭菌，无菌房等级为10万等级无菌房；
S10：防腐防馊处理，采用植物防腐方法将三种物质进行防腐防馊处理，使其不易腐坏；
S11：制蛋白粉，经过步骤S4后剩余的蚕茧干品经过八篮烘箱烘干24h，并通过纤维碾磨机制成蛋白粉，得到3.0kg蛋白粉。
实施例3
一种丝肽素蛋白的提取方法，包括以下步骤：
S1：消毒清洗，将100kg桑蚕茧浸泡在600kg双氧水和软水的混合溶液中，去除污垢杂质后，得到150kg水溶性混合物；
S2：提取水溶性混合物，将步骤S1的混合溶液放入高压反应锅中，温度控制在110℃，压力为1atm，反应时间2h，获得150kg水溶性混合物
S3：提取丝胶，将水溶性混合物放入另一高压反应锅，高压反应锅中温度控制在110℃，压力为1atm，反应时间3h，使水溶性混合物脱出液态丝胶67.20kg；
S4：提取丝素，将脱出丝胶后的混合物放入另一高压反应锅中，高压反应锅中温度控制在120℃，压力为1atm，反应时间3h，使得混合物中脱出液态丝素52.60kg；
S5：提取丝肽，将脱出丝素后的混合物放入另一高压反应锅中，高压反应锅中温度控制在140℃，压力为1atm，反应时间2h，使得混合物中脱出丝肽30.10kg；
S6：脱重金属，将步骤S2-S4中获得的丝胶、丝素和丝肽三种物质分别放入重金属分离器，将三种物质中含有的重金属分离出；
S7：脱农残，将三种物质分别放入农残分离器，将三种物质中含有的农药残留物分离出去；
S8：提纯，将三种物质分别放入压缩机中，使水分分离，提升三种物质的纯度，丝胶纯度98.9％，丝素纯度98.3％，丝肽浓度98.6％；
S9：灭菌，将三种物质放入无菌房中灭菌，减少细菌，避免过敏，无菌房中采用紫外线灭菌，无菌房等级为10万等级无菌房；
S10：防腐防馊处理，采用植物防腐方法将三种物质进行防腐防馊处理，使其不易腐坏；
S11：制蛋白粉，经过步骤S4后剩余的蚕茧干品经过八篮烘箱烘干24h，并通过纤维碾磨机制成蛋白粉，得到65kg蛋白粉。
上述实施例1至3中，步骤S5和S6可调换，即可先进行脱农残，再进行脱重金属。上述步骤S10制蛋白粉可以在步骤S4之后进行。步骤S5中，脱去的重金属包括砷、锗等桑蚕茧中含有的重金属。当丝胶、丝素、丝肽和蛋白粉四种物质制备完成后，通过检测、分装、包装后即可销售。
上述实施例1至3中，优选的，所述双氧水和软水的比例是1:10，即若1kg双氧水，则用10kg软水混合形成混合溶液。软水的pH控制在6.7内。
下表是上述实施例中获得的丝胶、丝素、丝肽的纯度和最短反应时间记录。
检测指标 实施例1 实施例2 实施例3
丝胶纯度 98.3％ 99.1％ 98.9％
丝素纯度 98.1％ 98.2％ 98.3％
丝肽纯度 98.4％ 98.5％ 98.6％
最短提取时间 2h 2h 2h
需要指出的是，上述较佳实施例仅为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种丝肽素蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：消毒清洗，将桑蚕茧浸泡在双氧水和软水的混合溶液中，桑蚕茧和混合溶液的质量比为1:6，干品蛋白粉占桑蚕茧的质量百分比60％-68％，去除污垢杂质后取出，桑蚕茧和水溶性混合物的质量比为1:1.5；
S2：提取水溶性混合物，将步骤S1的混合溶液放入高压反应锅中，温度控制在100℃-120℃，压力为0.5-1.5atm，反应时间2h-4h，获得水溶性混合物；
S3：提取丝胶，将水溶性混合物放入另一高压反应锅，高压反应锅中温度控制在100℃-120℃，压力为0.5-1.5atm，反应时间2h-4h，使水溶性混合物脱出丝胶；
S4：提取丝素，将脱出丝胶后的混合物放入另一高压反应锅中，高压反应锅中温度控制在100℃-130℃，压力为0.5-1.5atm，反应时间2h-4h，使得混合物中脱出丝素；
S5：提取丝肽，将脱出丝素后的混合物放入另一高压反应锅中，高压反应锅中温度控制在120℃-160℃，压力为0.5-1.5atm，反应时间2h-4h，使得混合物中脱出丝肽；
S6：脱重金属，将步骤S2-S4中获得的丝胶、丝素和丝肽三种物质分别放入重金属分离器，将三种物质中含有的重金属分离出；
S7：脱农残，将三种物质分别放入农残分离器，将三种物质中含有的农药残留物分离出去；
S8：提纯，将三种物质分别放入压缩机中，使水分分离，提升三种物质的纯度；
S9：灭菌，将三种物质放入无菌房中灭菌，减少细菌，避免过敏；
S10：防腐防馊处理，将三种物质进行防腐防馊处理，使其不易腐坏；
S11：制蛋白粉，经过步骤S2后剩余的蚕茧干品烘干并通过纤维碾磨机制成蛋白粉并通过纤维碾磨机制成蛋白粉；
水溶性混合物经过加工后可获得液态丝胶、液态丝素、液态丝肽所占的质量百分比分别为45％、35％、20％。
2.根据权利要求1所述的丝肽素蛋白的提取方法，其特征在于，所述桑蚕茧为削口桑蚕茧。
3.根据权利要求1所述的丝肽素蛋白的提取方法，其特征在于，所述高压反应锅采用陶瓷内壁的高压反应锅。
4.根据权利要求1所述的丝肽素蛋白的提取方法，其特征在于，所述蚕茧干品经过八篮烘箱烘干24h。
CN201910872402.3A 2019-09-16 2019-09-16 一种丝肽素蛋白的提取方法 Active CN110551192B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910872402.3A CN110551192B (zh) 2019-09-16 2019-09-16 一种丝肽素蛋白的提取方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910872402.3A CN110551192B (zh) 2019-09-16 2019-09-16 一种丝肽素蛋白的提取方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110551192A CN110551192A (zh) 2019-12-10
CN110551192B true CN110551192B (zh) 2023-06-16

Family

ID=68740379

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910872402.3A Active CN110551192B (zh) 2019-09-16 2019-09-16 一种丝肽素蛋白的提取方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110551192B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112409469B (zh) * 2020-11-04 2023-09-26 付俊 一种丝肽的提取方法

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2014200398A1 (en) * 2007-05-29 2014-02-13 Trustees Of Tufts College Method for silk fibroin gelation using sonication
CN103613652A (zh) * 2013-11-15 2014-03-05 苏州大学 一种丝素蛋白的提纯方法
CN104693297A (zh) * 2015-02-15 2015-06-10 浙江大学 一种栗蚕再生丝素蛋白的制备方法
CN104693298A (zh) * 2015-02-16 2015-06-10 李志强 一种可产业化、批量采集众多蚕绢丝腺内蚕丝液的技术
CN106905424A (zh) * 2017-01-19 2017-06-30 大连豪翔生物酶工程有限公司 一种以蚕茧脱胶液和废蚕茧为原料生产低聚肽的方法
KR101881586B1 (ko) * 2017-09-27 2018-07-24 주식회사 극동중앙연구소 수용성 실크피브로인 제조방법
CN109320595A (zh) * 2018-10-22 2019-02-12 宜宾屏山辉瑞油脂有限公司 一种弱碱微波水解蚕茧的方法
CN110184321A (zh) * 2019-06-26 2019-08-30 湖州珍露生物制品有限公司 一种丝肽粉的制备方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN86107142A (zh) * 1986-10-11 1988-04-20 山东省烟台桑蚕原种场 一种从桑蚕削口茧中提取丝素蛋白粉的方法
KR100354960B1 (ko) * 1999-10-23 2002-10-05 대한민국 겔 여과법에 의한 고순도 실크 펩타이드 제조방법
CN1209395C (zh) * 2003-07-09 2005-07-06 苏州大学 水溶性丝胶蛋白的制造方法
CN103290085A (zh) * 2013-05-13 2013-09-11 湖州新天丝生物技术有限公司 一种蚕丝蛋白粉及其制备方法
CN103739691B (zh) * 2013-12-11 2016-04-20 浙江大学 一种绿色环保制备丝素蛋白粉末的方法
CN105385728A (zh) * 2015-12-21 2016-03-09 湖州新天丝生物技术有限公司 一种联产分子量分布均匀丝素多肽和丝胶多肽及其制备方法

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2014200398A1 (en) * 2007-05-29 2014-02-13 Trustees Of Tufts College Method for silk fibroin gelation using sonication
CN103613652A (zh) * 2013-11-15 2014-03-05 苏州大学 一种丝素蛋白的提纯方法
CN104693297A (zh) * 2015-02-15 2015-06-10 浙江大学 一种栗蚕再生丝素蛋白的制备方法
CN104693298A (zh) * 2015-02-16 2015-06-10 李志强 一种可产业化、批量采集众多蚕绢丝腺内蚕丝液的技术
CN106905424A (zh) * 2017-01-19 2017-06-30 大连豪翔生物酶工程有限公司 一种以蚕茧脱胶液和废蚕茧为原料生产低聚肽的方法
KR101881586B1 (ko) * 2017-09-27 2018-07-24 주식회사 극동중앙연구소 수용성 실크피브로인 제조방법
CN109320595A (zh) * 2018-10-22 2019-02-12 宜宾屏山辉瑞油脂有限公司 一种弱碱微波水解蚕茧的方法
CN110184321A (zh) * 2019-06-26 2019-08-30 湖州珍露生物制品有限公司 一种丝肽粉的制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN110551192A (zh) 2019-12-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110551192B (zh) 一种丝肽素蛋白的提取方法
CN102517141A (zh) 一种纯物理低温制取山茶油的方法
CN108866137A (zh) 鱼皮/鱼鳞胶原蛋白肽的制备方法
CN101744090B (zh) 一种甲鱼小分子多肽的制造方法
CN104982893A (zh) 一种厚朴茶酱油的制备方法
CN112062834A (zh) 一种深海鱼鱼皮胶原蛋白肽及其提取制备方法
CN103651953A (zh) 一种具有益气补肾功效的米糠油
CN110183539B (zh) 一种玉米浸泡新工艺制备食品级玉米淀粉的方法
CN1313056A (zh) 一种植物蛋白饮料及其制备方法
CN102504949A (zh) 小麦胚芽油的生产方法
CN103636821B (zh) 一种具有平肝清火调节内分泌功效的米糠油
CN109054982A (zh) 一种茶籽加工方法
CN101381398A (zh) 超临界co2提取大豆植物甾醇物质的方法
CN107287026B (zh) 一种牡丹籽油脱酸提取方法
CN100363378C (zh) 一种生产植物甾醇和维生素e混合物的方法
CN111333747A (zh) 一种香菇多糖的制备方法
CN104957282A (zh) 一种牡丹籽油与油菜籽油调和食用油的制备方法
CN102124911B (zh) 一种长寿花软摘心后促进伤口愈合的方法
CN114196474A (zh) 一种同步精炼油茶籽油和制备脂质体的方法
CN102188027A (zh) 一种桑椹果汁的制取方法
CN101948420A (zh) 一种从白刺果汁中分离纯化色氨酸单体的制备方法
CN1711869A (zh) 一种大麦青苗茶的制备工艺
CN111748599A (zh) 一种鱼鳞胶原蛋白肽的制备方法
CN109627157A (zh) 一种亚麻籽油中提纯α-亚麻酸的方法
CN113527456A (zh) 一种桑蚕丝胶蛋白的提取工艺

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant