CN110522825B

CN110522825B - 香蕉雄蕊萃取物于制备促进毛发生长医药组成物的用途

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Publication number: CN110522825B
Application number: CN201810741809.8A
Authority: CN
Inventors: 林咏翔; 林于婷
Original assignee: TCI Co Ltd
Current assignee: TCI Co Ltd
Priority date: 2018-05-25
Filing date: 2018-07-05
Publication date: 2021-12-03
Anticipated expiration: 2038-07-05
Also published as: US20190358284A1; TWI699209B; CN110522825A; US10588932B2; TW202003008A

Abstract

本发明是关于一种香蕉雄蕊萃取物的用途，尤其是关于一种将香蕉雄蕊萃取物用于制备促进毛发生长医药组成物的用途。藉由本发明用于制备医药组成物的香蕉雄蕊萃取物，可促进VEGF与IGF1基因的表现，而大幅提升毛囊细胞的增生数量，使毛发生长地更为浓密。此外，本发明的香蕉雄蕊萃取物，亦可抑制掉发基因SRD5A1、SRD5A2或AR的表现，或促进毛发生长基因KROX20的表现，使毛发的生长显着增加。

Description

香蕉雄蕊萃取物于制备促进毛发生长医药组成物的用途

技术领域

本发明是关于一种香蕉雄蕊萃取物的用途，尤其是关于一种将香蕉雄蕊萃取物用于制备促进毛发生长医药组成物的用途。

背景技术

除了遗传因素外，有诸多原因也会造成头发稀疏或过量脱落，例如怀孕期间、经历重大手术、减肥减重、身体贺尔蒙、铁质的改变或身心压力沉重时都是常见的影响因素，此外，整发过度或头皮不健康也是其中原因之一。头发稀疏或严重脱落，使得头发分布不均、外观上坍塌，还会形成不同形式的秃发，严重影响个人的美观，也可能连带波及个人的自信心，是现代人常见的问题之一。

为解决前述毛发稀疏或严重脱落的问题，针对不同的形成原因，坊间有诸多的解决偏方或号称有效的治疗方式，但似乎都无法达成较佳的改善效果。毛发中虽有约百分九十处于成长期，但有百分十左右处于休止期，因此若欲有效改善毛发生长，除了要促使生长期的毛发健康成长与延长成长期间外，也要适当调节休止期的比例与时期，避免同一时期或大量毛发进入休止期。因此，若有同时具备延长生长期、促进毛发成长，以及抑制掉发功效的产品，将可使发量维持在相当的数目，减少毛发稀疏或秃头的现象产生。若能进一步让毛囊细胞的数量增加，将更能提升毛发生长的数量，对于促进毛发的生长有着更佳而完全的改善效果。

然而，目前关于毛发稀疏的改善方法，主要在于维护毛囊乳突细胞的健康，或刺激毛囊细胞本身，来促进毛发的成长，并不能有效、全面的解决发量减少的问题，而且许多用药有其副作用。

香蕉是人们经常食用的水果之一，其所开的花包含最前端的雄花，以及中性花与雌花，只有雌花才可结成果实，雄花一般皆割弃而不用，但后来研究发现，香蕉花雄蕊含有丰富的花青素，且含有矢车菊素，可抑制二氢睪固酮而利用于摄护腺的保健。然而，关于香蕉雄蕊是否可调控相关掉发、生发基因，或促进毛囊细胞增生的功效，目前尚未有相关的研究。

发明内容

本发明目的之一在于提供一种香蕉雄蕊萃取物于制备促进毛发生长医药组成物的应用，藉由香蕉雄蕊萃取物的作用，增加毛囊细胞的增生，使毛发数量增加，提升毛发生长的浓密度。

此外，本发明的另一目的亦在藉由香蕉雄蕊萃取物抑制掉发以及促进毛发生成的作用，使毛发的生长更为旺盛，而能够全面的改善毛发稀疏或脱落的问题。

在本发明的一实施例中，该香蕉雄蕊萃取物可以水萃取所获得。在一态样中，该香蕉雄蕊萃取物可于35-55℃下萃取30～90分钟所获得。

在本发明的一实施例中，该香蕉雄蕊萃取物是用以促进毛囊细胞的增生，而提升毛发生长的数量与浓密度。

在本发明的一态样中，该香蕉雄蕊萃取物可用以促进基因VEGF或IGF1 的表现，而促进毛囊细胞的增生。

在本发明的一态样中，该香蕉雄蕊萃取物的剂量是0.05～0.15mg/ml，较佳为0.06～0.13mg/ml，更佳为0.0625～0.125mg/ml。

在本发明的另一实施例中，该香蕉雄蕊萃取物是用以抑制基因SRD5A1、 SRD5A2或AR的表现，或降低活性氧化物质，而减少掉发的发生。

在本发明的另一实施例中，该香蕉雄蕊萃取物是用以促进基因KROX20 的表现，而提升毛发的生成。

在本发明的再一实施例中，该促进毛发生长医药组成物可进一步添加于食品、保健食品或膳食补充品中。

在本发明的有一实施例中，该促进毛发生长医药组成物可进一步添加于毛发清洁品或毛发保养品中。

以下将进一步说明本发明的实施方式，下述所列举的实施例是用以阐明本发明，并非用以限定本发明的范围，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本发明的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。

附图说明

图1是本发明实施例的香蕉雄蕊萃取物对于与掉发相关基因(SRD5A1、 SRD5A2、AR)表现影响的结果图；

图2是本发明实施例的香蕉雄蕊萃取物对于与生发相关基因(KROX20) 表现影响的结果图；

图3是本发明实施例的香蕉雄蕊萃取物对于与人类毛囊真皮乳突细胞血管增生相关基因(VEGF、IGF1)表现影响的结果图；

图4是本发明实施例的香蕉雄蕊萃取物对于人类毛囊真皮乳突细胞增生影响的比较结果图；

图5是本发明实施例的香蕉雄蕊萃取物对于人类毛囊真皮乳突细胞所诱发ROS作用的结果比较图。

具体实施方式

实施例1香蕉雄蕊萃取物的制备。

首先，以人工或机器的方式采集香蕉花的雄蕊，并将香蕉花的雄蕊以清水冲洗后备用。本发明实施例所使用的香蕉可包括但不限于香蕉(Musa sapientum L.)、吕宋蕉(Musa spp.AAB Silk)、粉蕉(Musa spp.ABB Bluggoe)、仙人蕉(Musa spp.AAA Robusta)、及蜜蕉(Musa spp.AAB Bluggoe)等，较佳为香蕉(Musa paradisiacal)。接着将香蕉雄蕊与水以1～5：4～20的质量体积比混合后，利用低温超音波(cold-sonication)，于35～55℃下萃取30～90分钟，以获得香蕉雄蕊粗萃物。较佳的香蕉雄蕊与水的比例为1：4，较佳的萃取温度有35～50℃或 40～55℃，较佳的萃取时间约为30分钟。之后将香蕉雄蕊粗萃物进行离心，离心后以300目筛网过滤，即可获得本发明实施例的香蕉花萃取物。

实施例2掉发相关基因表现的检测

准备人类毛囊真皮乳突细胞(HFDPC，PromoCell公司)，培养于毛囊真皮乳突细胞培养液(PromoCell)中。于6孔盘每孔中加入2ml细胞培养液，使每孔具有1.5x10⁵个细胞，之后将样本分为三组，其中，A组为控制组，B与C 组则为反应6小时与24小时的试验组。试验组B与C分别加入由前述实施例 1所制备的香蕉雄蕊萃取液0.125mg/ml后，于37℃下分别培养6小时与24 小时，之后进行与掉发相关基因表现状况的分析。

将上述各组细胞回收，以RNA萃取套组(Geneaid公司)萃取其RNA，并以反转录酶(SuperScript III Reverse Transcripatase,Invitrogen)将该些RNA反转录为cDNA。之后利用实时聚合酶链锁反应系统(ABI Step One Plus Real-Time PCR system)，分别利用表1所列引物进行qPCR(KAPA CYBR FAST qPCR Kits， KAPA Biosystems)，以定量以下基因的表现：SRD5A1、SRD5A2、AR。实时聚合酶链锁反应过程中，分析其解离曲线(melting curve)。基因表现相对定量分析系采用2^-ΔΔCt法。表现改变的倍数利用Excel软件的STDEV公式计算标准偏差，并在Excel软件中以单尾Student t-test分析是否具有统计上显著性(* 的p值<0.05；**的p值<0.01；***的p值<0.001)。前述基因表现改变的结果如图1所示。

表1

由图1的结果可知，在含有本发明实施例的香蕉雄蕊萃取物的情况下，可将毛囊真皮乳突细胞SRD5A1基因表现的相对值大幅降低约57％，将SRD5A2 基因表现的相对值显着降低约70～88％，而将AR基因表现的相对值降低 23～53％。其中，反应24小时的结果相较于反应6小时，对于抑制基因表现的效果较佳。由于SRD5A1、SRD5A2与AR基因与毛发的脱落代谢有关，因此，该等与掉发相关基因的表现若能被抑制，则可减少掉发，而维持较多的发量。

实施例3生发相关基因表现的检测

准备人类毛囊真皮乳突细胞(HFDPC，PromoCell公司)，培养于毛囊真皮乳突细胞培养液(PromoCell)中。于6孔盘每孔中加入2ml细胞培养液，使每孔具有1.5x10⁵个细胞，之后将样本分为三组，其中，A组为控制组，B与C 组则为反应6小时与24小时的试验组。试验组B与C分别加入由前述实施例 1所制备的香蕉雄蕊萃取液0.125mg/ml后，于37℃下分别培养6小时与24 小时，之后进行与生发相关基因表现状况的分析。

将上述各组细胞回收，以RNA萃取套组(Geneaid公司)萃取其RNA，并以反转录酶(SuperScript III Reverse Transcripatase,Invitrogen)将该些RNA反转录为cDNA。之后利用实时聚合酶链锁反应系统(ABI Step One Plus Real-Time PCR system)，分别利用表2所列引物进行qPCR(KAPA CYBR FAST qPCR Kits， KAPA Biosystems)，以定量以下基因的表现：KROX20。实时聚合酶链锁反应过程中，分析其解离曲线(melting curve)。基因表现相对定量分析系采用2^-ΔΔCt法。表现改变的倍数利用Excel软件的STDEV公式计算标准偏差，并在Excel 软件中以单尾Student t-test分析是否具有统计上显著性(*的p值<0.05；**的p值<0.01；***的p值<0.001)。前述基因表现改变的结果如图2所示。

表2

由图2的结果可知，在含有本发明实施例的香蕉雄蕊萃取物的情况下，可将毛囊真皮乳突细胞KROX20基因表现的相对值提升约28％(即1.28倍)，无论是反应6小时或24小时，对于基因表现的促进效果相当。由于KROX20基因与毛发的生长有关，因此，藉由本发明的香蕉雄蕊萃取物可促进毛发的增生。

实施例4毛囊细胞增生相关基因表现的检测

准备人类毛囊真皮乳突细胞(HFDPC，PromoCell公司)，培养于毛囊真皮乳突细胞培养液(PromoCell)中。于6孔盘每孔中加入2ml细胞培养液，使每孔具有1.5x10⁵个细胞，之后将样本分为三组，其中，A组为控制组，B与C 组则为反应6小时与24小时的试验组。试验组B与C分别加入由前述实施例1所制备的香蕉雄蕊萃取液0.125mg/ml后，于37℃下分别培养6小时与24 小时，之后进行与毛囊细胞增生相关基因表现状况的分析。

将上述各组细胞回收，以RNA萃取套组(Geneaid公司)萃取其RNA，并以反转录酶(SuperScript III Reverse Transcripatase,Invitrogen)将该些RNA反转录为cDNA。之后利用实时聚合酶链锁反应系统(ABI Step One Plus Real-Time PCR system)，分别利用表3所列引物进行qPCR(KAPA CYBR FAST qPCR Kits， KAPA Biosystems)，以定量以下基因的表现：VEGF、IGF1。实时聚合酶链锁反应过程中，分析其解离曲线(melting curve)。基因表现相对定量分析是采用 2^-ΔΔCt法。表现改变的倍数利用Excel软件的STDEV公式计算标准偏差，并在 Excel软件中以单尾Student t-test分析是否具有统计上显著性(*的p值<0.05；** 的p值<0.01；***的p值<0.001)。前述基因表现改变的结果如图3所示。

表3

由图3的结果可知，在含有本发明实施例的香蕉雄蕊萃取物的情况下，可将毛囊真皮乳突细胞VEGF基因表现的相对值提升36％(即1.36倍)，而将IGF1 基因表现的相对值大幅提升197％(即2.97倍)。由于VEGF基因与血管新生有关，而IGF1则与细胞的生长有关，因此VEGF与IGF1基因表现的增加，对于细胞的生长有着促进的作用，因此本发明实施例的香蕉雄蕊萃取物可藉由 VEGF与IGF1基因表现的增加，进一步促进毛囊细胞的生长。

实施例5毛囊细胞增生测试分析

准备人类毛囊真皮乳突细胞(HFDPC，PromoCell公司)，培养于毛囊真皮乳突细胞培养液(PromoCell)中。于96孔盘上每孔中植入5000个细胞，于37℃下培养2小时后进行试验分析。

本分析系以BrdU Cell proliferation ELISA组套(Roche，11647229001)进行测试。首先将样本分为三组，其中，A组为空白对照组，B组为控制组，C组则为试验组。于控制组中加入100μl FBS，于试验组中则加入100μl由前述实施例1所制备的香蕉雄蕊萃取液(0.0625mg/ml以及0.125mg/ml)。每组并加入 10μl的BrdU(100μM)后，于37℃下分别培养24小时。

之后移除上清液，于每孔中加入200μl的FixDeant溶液，再于室温下反应30分钟。接着将FixDeant溶液移除，以1x PBS清洗一次，之后于每孔加入100μl的anti-BrdU-POD抗体反应溶液，于室温下反应90分钟。反应后移除未反应的前述抗体反应溶液，并以200至300μl的清洗溶液清洗每一孔。之后再将清洗溶液移除，并于每孔加入100μl的受质溶液，于室温中反应5至 30分钟。最后再于每孔中加入25μl 1M的硫酸，于300rpm摇晃下反应约1 分钟。反应后测量每孔溶液于450nm波长下的吸光值。将数值以微软EXCEL 软件，利用Studentt检定分析数值间的统计显著性，其结果如图4所示(*的p 值<0.05；**的p值<0.01；***的p值<0.001)。

由图4的结果可知，在含有本发明实施例的香蕉雄蕊萃取物的情况下，无论剂量为0.0625mg/ml或0.125mg/ml，所观察到毛囊细胞的数量皆明显增加，相较于空白对照组，可大幅提高至约20％的数量。因此，藉由本发明实施例的香蕉雄蕊萃取物，确实可提升毛囊细胞数量的生长，进而可使毛发生长的密度增加。

实施例6过氧化氢所诱发ROS生成的检测

准备人类毛囊真皮乳突细胞(HFDPC，PromoCell公司)，培养于毛囊真皮乳突细胞培养液(PromoCell)中。于6孔盘每孔中加入2ml细胞培养液，使每孔具有1x10⁵个细胞，于37℃下培养24小时后，移除培养液。

将样本分为三组，其中，A组为空白对照组，B组为加入1mM过氧化氢 (H₂O₂)的控制组，C组则为试验组，加入1mM过氧化氢(H₂O₂)以及由前述实施例1所制备的香蕉雄蕊萃取液0.0625mg/ml与0.125mg/ml，每组有2样本。各组先置于37℃下培养1小时。

之后，分别于每孔中加入5μg/ml的DCFH-DA，并置于37℃下培养15 分钟。接者以过氧化氢同样于37℃下处理反应1小时，之后以1ml的1X PBS 清洗每孔2次。之后加入200μl胰蛋白酶(trypsin)，置于黑暗中反应5分钟。再将含有细胞的培养液吸出转移至1.5ml离心管，于400xg下离心10分钟。离心后将上清液移除，并以1X PBS清洗离心沉淀物1次。再次于400xg下离心10分钟，将上清液移除后，以1ml的1X PBS回溶离心沉淀物。接着，以流式细胞仪(Beckman)，分别于激发波长450-490nm、发射波长510-550nm的条件下，侦测DCFH-DA的荧光讯号值。最后将样本间的差异值以微软EXCEL 软件，利用Student t检定分析其统计显著性(*的p值<0.05；**的p值<0.01；*** 的p值<0.001)，其结果如图5所示。

由图5的结果可知，在含有本发明实施例的香蕉雄蕊萃取物的作用下，可将过氧化氢所诱发的活性氧化物质(ROS)大幅减少至几乎消失，其结果与空白对照组相当。显见，本发明实施例的香蕉雄蕊萃取物具有相当优秀的抗氧化能力，而可改善掉发的发生。

藉由上述试验可知，本发明实施例的香蕉雄蕊萃取物除了可促进毛发的生成，亦具有抑制掉发的功效，在维持并增加发量的同时，可再藉由毛囊细胞的增生，让毛发的数量提升，增加毛发的浓密度，因而可全面改善头发稀疏或脱落的问题，并达成毛发浓密生长的目的。

此外，本发明实施例的香蕉雄蕊萃取物，亦可进一步添加于食品、保健食品或膳食补充品中，或进一步应用于毛发清洁品或毛发保养品等产品中。将本发明实施例的香蕉雄蕊萃取物制备为医药组成物时，该医药组成物亦可进一步加入所属技术领域所熟知的载剂或其他辅剂。医药组成物的剂型，可为但不限于溶液、胶囊、或锭剂。

Claims

1.一种香蕉雄蕊萃取物于制备促进毛囊细胞的增生，而提升毛发生长的浓密度的医药组成物的用途，所述香蕉雄蕊萃取物是以水萃取所获得，并且于35～55℃下萃取所获得。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述香蕉雄蕊萃取物的浓度是0.05～0.15mg/ml。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述香蕉雄蕊萃取物是用以促进基因VEGF或IGF1的表现。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述香蕉雄蕊萃取物是用以抑制基因SRD5A1、SRD5A2或AR的表现，或降低活性氧化物质，而减少掉发的发生。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述香蕉雄蕊萃取物是用以促进基因KROX20的表现，而提升毛发的生长。

6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述医药组成物进一步添加于食品、保健食品或膳食补充品中。

7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述医药组成物进一步添加于毛发清洁品或毛发保养品中。