CN110501436A - 替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法 - Google Patents

替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110501436A
CN110501436A CN201910804492.2A CN201910804492A CN110501436A CN 110501436 A CN110501436 A CN 110501436A CN 201910804492 A CN201910804492 A CN 201910804492A CN 110501436 A CN110501436 A CN 110501436A
Authority
CN
China
Prior art keywords
tinidazole
impurity
substance
pharmaceutical composition
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910804492.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110501436B (zh
Inventor
于娜娜
陈佳仪
陈东海
罗智敏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
LIVZON GROUP LIVZON PHARMACEUTICAL FACTORY
Original Assignee
LIVZON GROUP LIVZON PHARMACEUTICAL FACTORY
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by LIVZON GROUP LIVZON PHARMACEUTICAL FACTORY filed Critical LIVZON GROUP LIVZON PHARMACEUTICAL FACTORY
Priority to CN201910804492.2A priority Critical patent/CN110501436B/zh
Publication of CN110501436A publication Critical patent/CN110501436A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110501436B publication Critical patent/CN110501436B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及药物杂质分析领域，具体而言，涉及一种替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法。该替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法，采用高效液相色谱对替硝唑药物组合物中有关物质进行分析检测；其中，高效液相色谱分析检测包括：以水为流动相A，甲醇为流动相B，乙腈为流动相C，进行梯度洗脱。本发明通过上述设计得到的替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法，通过利用以水为流动相A，甲醇为流动相B，乙腈为流动相C，进行梯度洗脱能够提升杂质检出数量，且使得未知杂质与杂质I及杂质II的分离度均很好、并且各个杂质峰均能达到基线分离，继而有效鉴定未知杂质与杂质I及杂质II。

Description

替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法
技术领域
本发明涉及药物杂质分析领域，具体而言，涉及一种替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法。
背景技术
替硝唑是具有高疗效、高耐受性的抗滴虫和抗厌氧菌的硝基咪唑类衍生物药物。在工艺生产过程中会降解出杂质：杂质I(2-methyl-5-nitroimidazole)和杂质II(1-(2-ethyl-sulfonylethyl)-2-methyl-4-nitroimidazole))。根据杂质分析及本品稳定性研究情况，表明杂质I、杂质II在本品高温条件、碱性条件过程中通过降解途径产生，有增长的趋势，且BP2016版替硝唑质量标准中，将杂质I、杂质II作为已知杂质订入标准，但是检测灵敏度低、杂质检测数量少且检测效果仍然不佳。
发明内容
本发明提供了一种替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法，旨在改善现有检测方法中检测灵敏度低，杂质检出量少，检测效果差问题。
本发明是这样实现的：
一种替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法，采用高效液相色谱对替硝唑药物组合物中有关物质进行分析检测；其中，进行高效液相色谱分析检测包括：以水为流动相A，甲醇为流动相B，乙腈为流动相C，进行梯度洗脱。
本发明的有益效果是：本发明通过上述设计得到的替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法，通过利用以水为流动相A，甲醇为流动相B，乙腈为流动相C，进行梯度洗脱能够提升杂质检出数量，且使得未知杂质与杂质I及杂质II的分离度均很好、并且各个杂质峰均能达到基线分离，继而有效鉴定未知杂质与杂质I及杂质II。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施方式的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1是本发明实施1提供的检测图谱；
图2为本发明实施2提供的检测图谱；
图3为本发明实施3提供的检测图谱；
图4为本发明实施6提供的空白干扰试验的检测图谱；
图5为本发明实施6提供的未破坏试验的检测图谱；
图6为本发明实施6提供的高温破坏试验的检测图谱；
图7为本发明实施6提供的光破坏试验的检测图谱；
图8为本发明实施6提供的酸破坏试验的检测图谱；
图9为本发明实施6提供的碱破坏试验的检测图谱。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例提供一种替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法具体说明。
发明人研究发现，虽然现有药典中公开了杂质I、杂质II的检测方法，但是未知杂质与杂质I、杂质II重合，不能得到很好的分离效果，继而无法实现未知杂质与杂质I、杂质II的良好的鉴定，同时，其他未知杂质也干扰了杂质I和杂质II的检测，更不利于杂质I、杂质II的准确定量分析。基于此，发明人提出了一种新的替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法。
该方法包括的步骤如下：
采用高效液相色谱对替硝唑药物组合物中有关物质进行分析检测；其中，进行高效液相色谱分析检测包括：以水为流动相A，甲醇为流动相B，乙腈为流动相C，进行梯度洗脱；
优选地，所述有关物质包括替硝唑、2-甲基-5-硝基咪唑即为杂质I、1-(2-乙基-磺酰基乙基)-2-甲基-4-硝基咪唑也就是杂质II和未知杂质中的至少一种。
具体地，首先，利用混合溶剂将含有替硝唑药物的样品配制供试品溶液再进行所述分析检测；
优选地，混合溶剂为水、甲醇和乙腈混合形成的溶剂；
更优选地，混合溶剂中水：甲醇：乙腈的体积比为70:20:10。
采用上述混合溶剂能够保证后续各个杂质的分离效果，同时保证各个杂质峰均能达到基线分离，继而保证检测效果。
进一步地，供试品溶液中替硝唑的浓度≥1mg/ml；优选为1mg/ml；优选地，2-甲基-5-硝基咪唑的浓度≥0.04ug/mL、1-(2-乙基-磺酰基乙基)-2-甲基-4-硝基咪唑的浓度≥0.10ug/ml；未知杂质的浓度≥0.10ug/ml。采用上述检测范围，能够保证检测结果的准确性。
进一步地，供试品溶液配制包括称取样品后加入甲醇并超声溶解，而后加入混合溶剂稀释至刻度线，摇匀得到对应浓度的供试品。
进一步地，含有替硝唑药物的样品为替硝唑片剂、替硝唑分散片或替硝唑颗粒剂，优选替硝唑片剂。
而后进行高效液相色谱分析检测，采用的色谱柱为辛烷基硅烷键合硅胶柱，优选地，色谱柱为WelchXtimateC8，其规格为3.0×250mm，5μm。采用上述色谱柱主峰分离度符合要求，且主峰峰形、基线波动情况优异。
同时，以水为流动相A，甲醇为流动相B，乙腈为流动相C，进行梯度洗脱。
进一步地，梯度洗脱的方式包括0-10分钟流动相中水：甲醇：乙腈的体积比为88:7:5；
10-25分钟流动相中水：甲醇：乙腈的体积比为75:15:10；
25-40分钟流动相中水：甲醇：乙腈的体积比为88:7:5；
优选地，梯度洗脱方式如下：
采用上述梯度洗脱的方式能够有效提升未知杂质和杂质I、未知杂质和杂质II的分离效果，降低未知杂质、杂质I和杂质II的重合，有利于准确定量分析检测未知杂质、杂质I和杂质II。同时，采用该梯度洗脱，能够有效对各个物质进行分离，杂质检出数量增加，进一步提升了检测的准确性。
进一步地，进行高效液相色谱分析检测的条件为：流动相流速为0.5±0.1ml/min，检测波长为320±2nm，柱温为25±2℃。
以下结合具体实施例对本发明提供的一种替硝唑药物组合物中有关物质的检测方进行具体说明。
实施例1
精密称取替硝唑片剂样品71.5mg(样品来源：丽珠研究院，批号：151102，片剂按每片计,其具体成分如下：替硝唑500mg、硬脂酸镁5.2mg、微晶纤维素52.8mg、预胶化淀粉108.4mg和交联羧甲纤维素钠48.0mg)，研磨成细粉(细粉中替硝唑含量约为50mg)，置50ml量瓶中，加甲醇5ml，超声溶解，放冷，用混合溶剂(水：甲醇：乙腈＝70:20:10，下称“混合溶剂”)稀释至刻度，摇匀，滤过，配制成含替硝唑1mg/ml的供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置50ml量瓶中，用混合溶剂稀释至刻度，摇匀，再精密量取1ml，置20ml量瓶中，用混合溶剂稀释置刻度，摇匀，滤过，作为对照溶液。照高效液相色谱法(通则0512)试验，以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂(WelchXtimateC83.0×250mm，5μm)，以水为流动相A，甲醇为流动相B，乙腈为流动相C，按表1进行梯度洗脱，流速0.5ml/min；检测波长为320nm，柱温为25℃。精密量取样品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，如图1。按照自身对照法计算供试品中杂质含量，如表2。
表1流动相梯度
表2实施例1的检测结果
根据表2和图1可知，干扰情况：空白溶剂对供试品溶液中主峰及杂质峰检测均无干扰；(2)杂质峰检出个数：6；(3)杂质峰均能良好分离，特别是杂质II与未知杂质A达到很好的分离；(4)主峰峰形良好。
实施例2采用Ch.P2015药典方法的等度洗脱的实验
精密称取实施例1提供的替硝唑片剂样品适量(约相当于替硝唑50mg)，置50ml量瓶中，加甲醇5ml，超声溶解，放冷，用混合溶剂(水：甲醇：乙腈＝70:20:10)稀释至刻度，摇匀，滤过，配制成含替硝唑1mg/ml的供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置50ml量瓶中，用混合溶剂稀释至刻度，摇匀，再精密量取1ml，置20ml量瓶中，用混合溶剂稀释置刻度，摇匀，滤过，作为对照溶液。照高效液相色谱法(通则0512)试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(phenomenexLunaC184.6×250mm，5μm)，以0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH3.5)-甲醇(80:20)为流动相，流速1.0ml/min；检测波长为310nm，柱温为25℃。精密量取样品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，如图2所示。按照自身对照法计算供试品中杂质含量，如表3所示。
表3 Ch.P2015药典方法的检测结果
结果如附图2以及表3所示，(1)干扰情况：空白溶剂对供试品溶液中主峰及杂质峰检测均无干扰；(2)杂质峰个数：3；(3)杂质峰未能达到基线分离；(4)主峰严重拖尾、鼓包、基线不平稳。
实施例3采用BP2016药典方法的等度洗脱的实验
精密称取实施例1提供的替硝唑片剂样品适量(约相当于替硝唑50mg)，置50ml量瓶中，加甲醇5ml，超声溶解，放冷，用混合溶剂(水：甲醇：乙腈＝70:20:10)稀释至刻度，摇匀，滤过，配制成含替硝唑1mg/ml的供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置50ml量瓶中，用混合溶剂稀释至刻度，摇匀，再精密量取1ml，置20ml量瓶中，用混合溶剂稀释置刻度，摇匀，滤过，作为对照溶液。照高效液相色谱法(通则0512)试验，以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂(WelchXtimateC83.0×250mm，5μm)，以乙腈：甲醇：水＝10:20:70为流动相，流速0.5ml/min；检测波长为320nm，柱温为25℃。精密量取样品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱。记录色谱图，如图3。按照自身对照法计算供试品中杂质含量，如表4所示。
结果如附图3以及表4所示，(1)干扰情况：空白溶剂对供试品溶液中主峰及杂质峰检测均无干扰；(2)杂质峰个数：3；(3)杂质峰未能达到基线分离。
表4 BP2016药典方法的检测结果
实施例4色谱柱的筛选
照实施例3的检测方法，仅改变其中的色谱柱，所选色谱柱如表5所示，对不同的色谱柱进行了筛选，结果如表5所示。
表5不同色谱柱的检测结果
结论：色谱柱选用WelchXtimateC83.0×250mm，5μm时，虽然杂质I、II与未知杂质合并，但主峰分离度符合要求，且主峰峰形、基线波动情况均优于其他色谱柱。故选择WelchXtimateC83.0×250mm，5μm，进行流动相梯度洗脱优化杂质I、II与未知杂质的分离度。
实施例5不同洗脱条件的筛选
(1)优化梯度1
照实施例1的检测方法，其中洗脱梯度如表6。
表6洗脱梯度1
时间(min) 水％ 甲醇％ 乙腈％
0 80 10 10
6 80 10 10
8 75 20 5
10 75 20 5
15 80 10 10
30 80 10 10
表7洗脱梯度1的检测结果
结果如表7所示，(1)杂质峰个数：5；(2)各个杂质峰基本能达到基线分离，最小分离度为1.113。(3)主峰拖尾严重(拖尾因子0.691)，且未能与后面的杂质峰分离。
(2)优化梯度2
照实施例1的检测方法，洗脱梯度选择如表8所示。
表8洗脱梯度2
时间(min) 水％ 甲醇％ 乙腈％
0 80 0 12
6 76 0 24
8 76 0 24
10 88 0 12
30 88 0 12
0 80 0 12
表9洗脱梯度2的检测结果
结果如表9所示，(1)杂质峰个数：5；(2)大部分杂质峰能达到基线分离，最小分离度为1.725。(3)主峰拖尾严重(拖尾因子0.690)，且未能与后面的杂质峰分离。
(3)优化梯度3
照实施例1的检测方法，洗脱梯度选择如表10。
表10洗脱梯度3
时间(min) 水％ 甲醇％ 乙腈％
0 88 7 5
10 88 7 5
15 75 15 10
25 75 15 10
30 88 7 5
40 88 7 5
结果如图1以及表3所示，(1)干扰情况：空白溶剂对供试品溶液中主峰及杂质峰检测均无干扰；(2)杂质峰个数：6；(3)各个杂质峰均能达到基线分离，最小分离度为1.577。(4)主峰拖尾有所改善，且与后面的杂质峰能很好的分离开来(拖尾因子0.734，后面杂质峰分离度为2.228)。
实施例6专属性实验
1.1空白干扰试验
空白溶剂(即混合溶剂)是水：甲醇：乙腈＝70:20:10
空白辅料溶液配制：精密称取空白辅料23.6mg，置于50ml容量瓶中，加混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得，其中，空白辅料为实施例1提供的替硝唑片剂使用的辅料。
供试品储备液配制：取实施例1提供的替硝唑片剂适量(约相当于替硝唑1000mg)，置100ml量瓶中，加甲醇10ml，超声室溶解，放至室温，用混合溶剂稀释至刻度，摇匀。
供试品溶液配制：精密移取供试品储备液1ml置10ml量瓶中，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
精密量取空白溶剂、空白辅料与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，进行测定。检测结果参见图4。
结果表明，扣除3-4min的溶剂峰，结合降解试验在3-4min中无杂质峰产生，故空白辅料对供试品溶液的检测无干扰。
1.2强降解试验
(1)未破坏试验
空白辅料储备液：精密称取空白辅料4.7g置于1000ml容量瓶中，加混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
空白辅料溶液：精密移取空白辅料储备液5ml，置50ml容量瓶，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
自制制剂储备液：取实施例1提供的替硝唑片剂适量(约相当于替硝唑1000mg)，置100ml量瓶中，加甲醇10ml，超声使溶解，放至室温，用混合溶剂稀释至刻度，摇匀。
自制制剂未破坏溶液：精密移取自制制剂储备液5ml，置50ml容量瓶，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
参比制剂未破坏溶液：与自制制剂未破坏溶液同法操作，结果参见图5。
(2)高温破坏试验
空白辅料：取(1)未破坏试验项下精密移取空白辅料储备液5ml，置50ml容量瓶，置于90℃水浴锅放置5h后，取出，放冷，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
自制制剂高温破坏溶液：精密移取(1)未破坏试验项下供试品储备液5ml置50ml容量瓶，加混合溶剂稀释至刻度，置于90℃水浴锅放置5h后，取出，放冷，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
参比制剂高温破坏溶液：与自制制剂高温破坏溶液同法操作，结果参见图6。
(3)光破坏试验
空白辅料：取(1)未破坏试验项下精密移取空白辅料储备液5ml，置50ml容量瓶，25±2℃、4500±500LX光照下放置5天，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
自制制剂光破坏溶液：精密移取(1)未破坏试验项下供试品储备液5ml置50ml容量瓶，加混合溶剂稀释至刻度，于25±2℃、4500±500LX光照下放置5天，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
参比制剂光破坏溶液：与自制制剂光破坏溶液同法操作，结果参见图7。
(4)酸破坏试验
空白辅料：取(1)未破坏试验项下精密移取空白辅料储备液5ml，置50ml容量瓶，加1ml浓度为1mol/L的盐酸溶液，摇匀，于室温放置24小时，加入0.9ml浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
自制制剂酸破坏溶液：精密移取(1)未破坏试验项下供试品储备液5ml置50ml容量瓶，加1ml浓度为1mol/L的盐酸溶液，摇匀，于室温放置24小时，加入0.9ml浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
参比制剂酸破坏溶液：与自制制剂光破坏溶液同法操作，结果参见图7。
(5)碱破坏试验
空白辅料：取(1)未破坏试验项下精密移取空白辅料储备液5ml，置50ml容量瓶，加1ml浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液，摇匀，于室温放置24小时，加入0.9ml浓度为1mol/L的盐酸溶液，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
自制制剂碱破坏溶液：精密移取(1)未破坏试验项下供试品储备液5ml置50ml容量瓶，加1ml浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液，摇匀，于室温放置24小时，加入0.9ml浓度为1mol/L的盐酸溶液，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
参比制剂碱破坏溶液：与自制制剂光破坏溶液同法操作，结果参见图8。
(6)氧化破坏试验
空白辅料：取(1)未破坏试验项下精密移取空白辅料储备液5ml，置50ml容量瓶，加1ml浓度为10％的双氧水溶液，摇匀，于室温放置24小时，50℃超声15min，放至室温，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
自制制剂氧化破坏溶液：精密移取(1)未破坏试验项下供试品储备液5ml置50ml容量瓶，加1ml浓度为10％的双氧水溶液，摇匀，于室温放置24小时，50℃超声15min，放至室温，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
参比制剂碱破坏溶液：与自制制剂光破坏溶液同法操作，结果参见图9。
照优化后的检查方法试验，物料平衡结果见表11。
表11强降解试验结果表
注：1、校正因子为破坏后样品主成分与杂质含量之和除以未破坏样品主成分与杂质含量之和，乘以100；2、N.D表示未检出；3、主成分含量采用实施例1的检测方法进行测定。
根据表11可知，在有关物质与含量色谱条件下，破坏性试验物料平衡，均在94.4％～100.3％范围内，且主峰纯度角度均小于纯度阈值。
实施例7定量限检测
空白辅料溶液：精密称取空白辅料480mg置于1000ml容量瓶中，加混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
杂质I和II定量限溶液：精密称取杂质I对照品和杂质II对照品各10mg置于25ml容量瓶中，用空白辅料溶液稀释至刻度，制成浓度为0.4mg/ml的杂质对照品贮备液。取杂质对照品贮备液，加空白辅料溶液逐级稀释，作为杂质I和杂质II定量限测试溶液。
未知杂质定量限溶液：精密称取替硝唑对照品4mg置20ml容量瓶，加空白辅料溶液溶解并稀释至刻度，制成浓度为0.2mg/ml的未知杂质储备液。取该溶液继续用空白辅料溶液逐级稀释，作为未知杂质定量限测试溶液。
取各个定量限溶液20μl注入液相色谱仪。定量限结果见表5。将测出的信号与空白处信号(基线噪音)进行比较，以信噪比大于10:1时的最低浓度为定量限，并将该浓度溶液重复进样6次。计算信噪比以及峰面积的RSD。
表12定量限结果表
根据表12可知，杂质Ⅰ的定量限浓度为0.10μg/ml，相当于供试品溶液浓度的0.01％；杂质Ⅱ的定量限浓度为0.25μg/ml，相当于供试品溶液浓度的0.02％；未知杂质的定量限浓度为0.25μg/ml，相当于供试品溶液浓度的0.02％。
实施例8检测限
取杂质I、杂质II和未知杂质定量限溶液，用空白辅料溶液稀释2.5倍，取各个定量限溶液20μl注入液相色谱仪，记录图谱。将测出的信号与空白处信号(基线噪音)进行比较，以信噪比大于3:1时的最低浓度为定量限精密量取20μL注入液相色谱仪中，将测出的信号与空白处信号(基线噪音)进行比较，计算各杂质峰的信噪比。
实验结果表明：杂质I的检测限浓度为0.04μg/ml时，信噪比为4.4，相当于供试品溶液浓度的0.004％；杂质II的检测限浓度为0.10μg/ml时，信噪比为5.0，相当于供试品溶液浓度的0.01％；未知杂质的检测限浓度为0.10μg/ml时，信噪比为6.0，相当于供试品溶液浓度的0.01％。
实施例9校正因子
线性杂质储备液：分别精密量取杂质I、杂质II、替硝唑对照品适量，用空白辅料溶液稀释制成含杂质I、杂质II、替硝唑浓度分别为4μg/ml、4μg/ml、2μg/ml的溶液。
线性1：杂质I、杂质II、替硝唑的定量限溶液。
线性2：精密量取线性杂质贮备液2ml，置10ml容量瓶中，加实施例7定量限项下空白辅料溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
线性3：精密量取线性杂质贮备液4ml，置10ml容量瓶中，加实施例7定量限项下空白辅料溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
线性4：精密量取线性杂质贮备液5ml，置10ml容量瓶中，加实施例7定量限项下空白辅料溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
线性5：精密量取线性杂质贮备液8ml，置10ml容量瓶中，加实施例7定量限项下空白辅料溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
线性6：取线性杂质贮备液摇匀，滤过，取续滤液。
精密量取定量限溶液与各线性溶液20μL注入液相色谱仪，每份溶液各进样1次。以测得的各个杂质峰面积对浓度作图，用最小二乘法进行线性回归，作出线形图，并报告相关系数r以及线性回归方程。计算各个杂质的校正因子。
由不同分析人员采用在不同仪器重复线性试验，分别比较两个不同仪器的线性结果，计算平均校正因子。以相应浓度为C，替硝唑或各已知杂质峰面积为A，求得各线性曲线。操作人员A实验结果表见表13-15；操作人员B实验结果表见表16-18；校正因子结果见表19。
表13杂质I线性试验结果表(A)
表14杂质II线性试验结果表(A)
表15替硝唑试验结果表(A)
表16杂质I线性试验结果表(B)
表17杂质II线性试验结果表(B)
表18替硝唑线性试验结果表(B)
表19杂质的相对校正因子表
根据表13-19可知：以上采用不同人员与不同仪器分别对杂质I、杂质II的相对校正因子进行测定，杂质I的平均相对校正因子为0.7，杂质II的平均相对校正因子为1.3。
实施例10准确度
(1)杂质I与杂质II的准确度
杂质I与杂质II储备液：精密量取定量限项下杂质I与杂质II对照品贮备液(0.4mg/ml)1ml，置10ml容量瓶中，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得含杂质I和II浓度为40μg/ml的溶液。
分别精密量取杂质I与杂质II储备液2ml、2.5ml、3ml各三份于9个50ml容量瓶中，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，得到杂质限度浓度的80％、100％、120％的溶液。精密量取20μl，注入液相色谱仪，按有关物质分析方法测定，记录色谱图。计算杂质I与杂质II的回收率，结果见表20和表21。
表20杂质I准确度试验结果表
表21杂质II准确度试验结果表
(2)未知杂质的准确度
未知杂质储备液：精密量取定量限项下未知杂质对照贮备液(0.2mg/ml)1ml，置10ml容量瓶中，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得含替硝唑浓度为20μg/ml的溶液。
分别精密量取未知杂质储备液2ml、2.5ml、3ml各三份于9个50ml容量瓶中，加空白辅料溶液稀释至刻度，摇匀。精密量取20μl，注入液相色谱仪，按有关物质分析方法测定，记录色谱图。计算未知杂质的回收率，结果见表22。
表22未知杂质准确度试验结果表
根据表22可知，杂质I与杂质II、未知杂质的三个浓度的回收率的均在90.0％～110.0％之间，说明检测方法准确度良好。
实施例11精密度
(1)重复性
杂质贮备液：精密量取定量限项下杂质I与杂质II对照品贮备液(0.4mg/ml)5ml，置20ml容量瓶中，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得含杂质I和II浓度为0.1mg/ml的溶液。
供试品溶液：精密称取实施例1提供的替硝唑片剂适量(相当于替硝唑50mg)置50ml容量瓶中，加甲醇5ml，超声使溶解，加入杂质贮备液1ml，加混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
对照溶液：精密量取重复性试验供试品溶液1ml，置50ml量瓶中，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀；再取1ml上述溶液，至20ml容量瓶中，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
平行制备6份供试液及对照溶液，照有关物质分析方法测定，计算各个杂质和总杂平均值和RSD，结果见表23。
表23重复性试验结果表
根据表23可知，在有关物质色谱条件下，各杂质RSD≤10.0％，重复性试验结果良好。
(2)中间精密度
不同操作人员，不同日期，测定同一批号替硝唑片有关物质，照(1)重复性平行制备6份供试品溶液及对照溶液，进行测定，计算各个杂质和总杂平均值和RSD，并计算两位分析人员12份测定的中间精密度，结果见表24。
表24中间精密度试验结果表
根据表24可知，在有关物质色谱条件下，各杂质RSD≤15.0％，重复性试验结果良好。
实施例12溶液稳定性
取实施例1提供的替硝唑片剂适量(约相当于替硝唑50mg)，置50ml量瓶中，加甲醇5ml，超声使溶解，放冷，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，在25℃储存条件下，分别于0、6、12、24、48小时各取续虑液20μl，按照实施例1色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。考察样品溶液的稳定性，结果见表25。
表25溶液稳定性试验结果表
根据表25可知，本品在25℃48个小时内溶液稳定性良好。
实施例13耐用性
按照实施例1有关物质检测方法，采用不同流速、波长、柱温对6精密度项下实施例1提供的替硝唑片剂配置的供试品溶液与对照溶液进行检测，结果见表26。
表26耐用性试验结果表
根据表26可知，在该检测方法中，改变流速、波长、柱温，对样品测定结果基本没有影响，表明方法耐用性较好。
以上所述仅为本发明的优选实施方式而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱对替硝唑药物组合物中有关物质进行分析检测；其中，进行高效液相色谱分析检测包括：以水为流动相A，甲醇为流动相B，乙腈为流动相C，进行梯度洗脱；
优选地，所述有关物质包括替硝唑、2-甲基-5-硝基咪唑、1-(2-乙基-磺酰基乙基)-2-甲基-4-硝基咪唑和未知杂质中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法，其特征在于，梯度洗脱的方式包括0-10分钟流动相中采用水：甲醇：乙腈的体积比为88:7:5；
10-25分钟流动相中采用水：甲醇：乙腈的体积比为75:15:10；
25-40分钟流动相中采用水：甲醇：乙腈的体积比为88:7:5；
优选地，梯度洗脱方式如下：
3.根据权利要求1所述的替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法，其特征在于，进行高效液相色谱分析检测时采用的色谱柱为辛烷基硅烷键合硅胶柱；
优选地，色谱柱为WelchXtimateC8；
优选地，色谱柱的型号规格为：3.0×250mm，5μm。
4.根据权利要求1所述的替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法，其特征在于，进行高效液相色谱分析检测还包括：利用混合溶剂将含有替硝唑药物的样品配制成供试品溶液再进行所述分析检测；
优选地，混合溶剂为水、甲醇和乙腈混合形成的溶剂；
更优选地，混合溶剂中水：甲醇：乙腈的体积比为70:20:10。
5.根据权利要求4所述的替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法，其特征在于，供试品溶液中替硝唑的浓度≥1mg/ml；优选为1mg/ml；
优选地，2-甲基-5-硝基咪唑的浓度≥0.04ug/mL；1-(2-乙基-磺酰基乙基)-2-甲基-4-硝基咪唑的浓度≥0.10ug/ml；未知杂质的浓度≥0.10ug/ml。
6.根据权利要求5所述的替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法，其特征在于，供试品溶液配制包括称取样品后加入甲醇并超声溶解，而后加入混合溶剂稀释至刻度线，摇匀得到对应浓度的供试品。
7.根据权利要求5所述的替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法，其特征在于，进行高效液相色谱分析检测的条件为：流动相流速为0.5±0.1ml/min，检测波长为320±2nm，柱温为25±2℃。
8.根据权利要求1所述的替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法，其特征在于，含有替硝唑药物的样品为替硝唑片剂、替硝唑分散片或替硝唑颗粒剂，优选替硝唑片剂。
9.根据权利要求1所述的替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法，其特征在于，进行高效液相色谱分析检测未知杂质A与杂质I、未知杂质A与杂质II的最小分离度均大于1.568。
10.根据权利要求5所述的替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法，其特征在于，对照溶液理论板数按替硝唑峰计算不低于5000，且替硝唑的信噪比应大于10。
CN201910804492.2A 2019-08-28 2019-08-28 替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法 Active CN110501436B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910804492.2A CN110501436B (zh) 2019-08-28 2019-08-28 替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910804492.2A CN110501436B (zh) 2019-08-28 2019-08-28 替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110501436A true CN110501436A (zh) 2019-11-26
CN110501436B CN110501436B (zh) 2023-10-03

Family

ID=68590193

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910804492.2A Active CN110501436B (zh) 2019-08-28 2019-08-28 替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110501436B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112730639A (zh) * 2020-11-25 2021-04-30 海南海力制药有限公司 一种替硝唑片一致性评价方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
尼珍等: "替硝唑有关物质检查方法改进", 《中国药业》 *
贾飞等: "探讨替硝唑及其注射液有关物质中杂质的控制", 《中国药品标准》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112730639A (zh) * 2020-11-25 2021-04-30 海南海力制药有限公司 一种替硝唑片一致性评价方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN110501436B (zh) 2023-10-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106018586A (zh) 同时检测7种睡眠类化学药品的检测方法
CN107543872A (zh) 通过手性高效液相色谱法分离测定甲苯磺酸依度沙班水合物与其异构体杂质的方法
CN110455944A (zh) 一种同时检测长春西汀中阿朴长春胺酸与长春胺酸的方法
CN110514758A (zh) 一种坎地沙坦酯有关物质的检测方法
CN105510482B (zh) 一种替格瑞洛原料中异构体杂质含量的检测方法
CN109765313A (zh) 一种非诺贝特胆碱的检测方法
CN110501436A (zh) 替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法
CN107991415B (zh) 用液相色谱法同时分离测定复方氨基酸注射液18aa中焦谷氨酸和蛋氨酸亚砜杂质的方法
CN106706789A (zh) 用高效液相色谱法测定盐酸屈他维林注射液中有关物质的方法
CN104215480A (zh) 快速检测制品中丙嗪类物质的方法
CN107870209A (zh) 测定利格列汀原料药中杂质含量的方法
CN106525994A (zh) 一种氨酚曲马多胶囊有关物质的测定方法
CN105004803B (zh) 一种分离测定托伐普坦中多个杂质的液相色谱方法
CN108802206A (zh) 一种同时测定注射用头孢噻肟钠他唑巴坦钠中主要成分和主要杂质的含量的方法
CN104597157B (zh) 一种脂溶性铂配合物及其制剂有关物质的测定方法
CN110967431A (zh) 一种高效液相色谱法测定卡托普利片中d-卡托普利和卡托普利有关物质8的方法
CN104535690B (zh) 一种测定桂利嗪固体制剂中桂利嗪含量的方法
CN110514759A (zh) 一种坎地沙坦酯中叠氮化合物的检测方法
El-Khateeb et al. Determination of metformin hydrochloride in tablets by nuclear magnetic resonance spectrometry
CN104101678A (zh) 一种复方α-酮酸片中五种钙盐的含量测定方法
CN103543231B (zh) 一种盐酸美克洛嗪中氯仿残留量的分离分析方法
CN101762662A (zh) 一种高效液相色谱-荧光法同时测定色氨酸和5-羟色胺的方法
Bhatia et al. Spectrophotometric estimation of ambroxol hydrochloride and cetirizine hydrochloride in tablets
Aziz et al. Development and validation of a RP-HPLC method for determination of cyclosporine in capsule
CN104897833B (zh) 一种马西替坦中间体的检测方法及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant