CN110499269A - 一种指导微生物配伍的“相似相容”原则及其提高外源投加微生物功能与效率的配伍方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种指导微生物的配伍的“相似相容”原则及其微生物的配伍的“相似相容”原则以及提高外源投加微生物功能与效率的配伍方法。本发明提出的“相似相容”配伍方法如下：首先是对目标环境中的群落结构进行解析，筛选出其中的主要优势种群；然后结合生物激活的分析结果，筛选出相对丰度明显增长、即竞争占优势的细菌类群；最后以16SrDNA序列为参照，从菌株资源库中筛选若干同时具有较强功能、又与目标本源优势种群或激活中竞争优势种群系统发育相似的菌株进行配伍，然后将这些微生物培养后混合投加到目标环境中。本发明对于石油污染治理有重要意义。

Description

一种指导微生物配伍的“相似相容”原则及其提高外源投加微 生物功能与效率的配伍方法

技术领域

本发明涉及一种指导微生物配伍的“相似相容”原则及其提高外源投加微生物功能与效率的配伍方法。

背景技术

微生物在自然界中不是以个体，而是以群落的形式存在的。自然环境，包括土壤环境(动物、微生物共存)、水环境(动物、植物、微生物共存)和油藏环境(油层环境本身就很复杂，同时原油本身也是由烷烃、芳香烃、非烃和沥青质组成的混合物)等都具有复杂多样的特点。在这些环境中单一种类的微生物很难适应。同时，由于微生物对碳源的选择有着很强的偏好性，单一微生物难以对于复杂的有机混合污染物进行高效稳定地降解。对外源投加的微生物尤其如此。只有外源微生物在目标环境稳定生存并且与同内源微生物竞争中取得优势才能高效、稳定长久地发挥作用。在外源投加微生物时，通常认为多种微生物的作用要优于投加单一微生物。在选择和投加多种微生物时，需要考虑这些微生物的配伍性：只有很好配伍的微生物才能更好地发挥作用。目前，通常采用的配伍方法是将微生物菌株进行随机组合，对于菌株的筛选和组合完全是一个随机的过程，忽略了外源微生物之间的功能关系以及它们与目标环境中内源微生物可能存在的拮抗作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种指导微生物的配伍的“相似相容”原则及其提高外源投加微生物功能与效率的配伍方法。

本发明首先提供了用于降解目标土壤中原油的菌株组合配伍方法，包括如下步骤：

(a1)参照方法A和方法B筛选菌株；

(a2)将1-3种方法A筛选的菌株和1-3种方法B筛选的菌株进行组合，得到用于降解目标土壤中原油的菌株组合；

方法A包括如下步骤：从候选菌株中筛选与目标土壤中优势菌种相似度大于88％的菌株；

方法B包括如下步骤：从候选菌株中筛选与经过生物激活的目标土壤中竞争优势菌种相似度大于88％的菌株；

所述候选菌株为具有原油利用能力的菌株。

在本发明的实施例中，从方法A中选择2种菌株，从方法B中选择3种菌株进行混合。

所述方法A和方法B中，筛选的菌株可为在满足相似度的情况下原油利用能力最强的菌株。

方法A包括如下(b1)-(b3)所述的步骤：

(b1)利用T-RFLP分析目标土壤中微生物菌落结构，筛选丰度最高的n种T-RFs；

(b2)获得步骤(b1)筛选的n种T-RFs代表的细菌16S rDNA作为参照序列；

(b3)在候选菌株中筛选16S rDNA与步骤(a2)中的任一种参照序列相似度大于88％的菌株；

方法B包括如下(c1)-(c3)所示的步骤：

(c1)利用T-RFLP分析经过生物激活的目标土壤中微生物菌落结构，筛选激活前后丰度增长最多的n种T-RFs；

(c2)获得步骤(c1)筛选的n种T-RFs对应的细菌16S rDNA作为参照序列；

(c3)在候选菌株中筛选16S rDNA与步骤(a2)中的任一种参照序列相似度大于88％的菌株；

n为1-10中任意自然数。

所述(b2)或(c2)中，所述T-RFs代表的细菌16S rDNA的获得方式如下：将待测土壤菌落16S rDNA文库导入大肠杆菌并通过蓝白斑筛选阳性克隆，利用T-RFLP对阳性克隆进行分析，将T-RFs与步骤(b1)或(c1)中筛选的T-RFs相同的阳性克隆的16S rDNA片段测序获得所述T-RFs代表的细菌16S rDNA。

所述具有原油利用能力的菌株筛选方法如下：将菌株接种于含有10g/L原油的培养基中，使培养体系初始OD600＝0.1，然后30度、150rpm培养7天，在培养结束后检测培养体系OD600，筛选OD600值大于20的菌株。

所述培养基具体可为无机盐培养基。无机盐培养基(1L)：NH₄NO₃4 g；KH₂PO₄，4g；Na₂HPO₄，5.68g；CaCl₂，0.78mg；MgSO₄·6H₂O，197.18mg；FeSO₄，1.112mg；微量元素溶液TES，0.1mL；补充去离子水至1L；调节pH 7.0。

所述生物激活方法如下：向目标土壤中加入氮和磷，在25±1℃温度下运行60天，控制土壤含水率在20±3％；所述氮和磷与土壤中总有机碳的质量比为：10:1:200。

所述氮具体可以通过硝酸钠的形式加入。所述磷具体可以通过磷酸二氢钠的形式加入。

在生物激活过程中，每隔3天对反应器土壤进行翻动充氧并适时喷洒灭菌水控制土壤含水率在20±3％。

所述目标土壤为将原始土壤放入通风橱风干后破碎后过50目金属网筛得到的干土。

所述目标土壤中还加入表面活性剂吐温80(1.5mL/kg干土)和5％土壤质量百分含量的锯屑。

所述生物激活具体可在生物反应器中进行。

本发明还保护以上任一所述方法在降解原油或原油污染治理中的应用。

本发明还保护以上任一所述方法得到的菌株组合。

本发明还保护菌株组合，由如下(A)-(E)的菌株组成；

(A)在中国普通微生物菌种保藏管理中心的菌种编号为1.6444的胜利盐单胞菌Halomonas shengliensis；

(B)在中国普通微生物菌种保藏管理中心的菌种编号为1.6294的孤岛海杆状菌Marinobacter gudaonensis；

(C)在中国普通微生物菌种保藏管理中心的菌种编号为1.10267的浅黄海洋杆菌Pelagibacterium luteolum；

(D)在德国微生物菌种保藏中心的菌种编号为16503的粪产碱菌粪亚种Alcaligenes faecalis subsp.phenolicus；

(E)在中国普通微生物菌种保藏管理中心的菌种编号为1.9108的海神鲁杰氏菌Ruegeria marina。

以上任一所述菌株组合中，每种菌株的菌量可相等。

本发明还保护以上任一所述菌株组合在下述任一中的应用：

1)降解原油；

2)制备降解原产品；

3)消除或降低原油污染；

4)制备消除或降低原油污染产品；

5)消除或降低土壤原油污染；

6)制备消除或降低土壤原油污染产品。

本发明还保护土壤中原油降解方法，包括如下步骤：将以上任一所述的菌株组合加至目标土壤中进行培养，实现土壤中的原油降解。

所述菌株组合中，每种菌株的菌量可相等。

所述培养具体可在25±1℃下进行。培养的时间以满足石油降解为准，在本发明的一个实施例中，培养时间为45天。所述培养可在生物反应器中进行，每隔3天对反应器土壤进行翻动充氧并适时喷洒灭菌水控制土壤含水率在20±3％。

以上任一所述生物反应器具体可采用有机玻璃制成，有效尺寸为70cm(长)×60cm(宽)×25cm(高)。反应器的底部设置多孔板，多孔板上面铺设一层70目的金属网筛，网筛上面再铺设约5cm厚度碎石层。

基因序列或系统分类地位上越相似的菌株间具有越相近的代谢特点和适应环境与参与种间竞争的能力，本发明提出的“相似相容”配伍方法如下：首先是对目标环境中的群落结构进行解析，筛选出其中的主要优势种群；然后结合生物激活的分析结果，筛选出相对丰度明显增长、即竞争占优势的细菌类群；最后以16S rDNA序列为参照，从菌株资源库中筛选若干同时具有较强功能、又与目标本源优势种群或激活中竞争优势种群系统发育相似的菌株进行配伍，然后将这些微生物培养后混合投加到目标环境中。本发明对于石油污染治理有重要意义。

附图说明

图1为参照序列获得方法路线示意图。

图2为生物反应器示意图。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

LB培养基(1L)：氯化钠10g,蛋白胨10g,酵母粉5g，加水至1L，调节PH值为7.4。

无机盐培养基(1L)：NH₄NO₃4 g；KH₂PO₄，4g；Na₂HPO₄，5.68g；CaCl₂，0.78mg；MgSO₄·6H₂O，197.18mg；FeSO₄，1.112mg；微量元素溶液TES，0.1mL；补充去离子水至1L；调节pH 7.0。

微量元素溶液TES(1L)：ZnSO₄·7H₂O，2.32g；MnSO₄·4H₂O，1.78g；H₃BO₃，0.56g；CuSO₄·5H₂O，0.78g；Na₂MoO₄·2H₂O，0.39g；CoCl₂·6H₂O，0.42g；EDTA，0.10g；NiCl₂·6H₂O，0.004g；KI，0.66g。

实施例1、“相似相容”配伍方法的建立

一、目标环境中的群落结构分析筛选主要优势种群

分析方法流程如图1所示。

1、选取胜利油田油泥罐中的石油污染的土壤，经过预处理(去除表面杂物然后铲取表层5cm以上的土壤)，将土壤装在无菌袋存储于4℃保温箱至实验室，提取土壤基因组DNA。

2、以步骤1得到的土壤基因组DNA为模板，分别进行PCR扩增得到古菌菌落16SrDNA和细菌菌落16S rDNA。古菌16S rDNA的扩增体系和热循环程序见表1。细菌16S rDNA扩增体系和热循环程序见表2。

表1古菌16S rDNA的扩增体系和热循环程序

古菌PCR反应体系(50μl)	古菌热循环程序
		10×PCR缓冲液:8μl	①预变性：94℃，5min
dNTPMixture:1μl	②变性：94℃，1min
		109F:1μl(10μM)	③退火：50℃，45s
915R:1μl(10μM)	④延伸：72℃，1.5min
		Taq酶：0.3μl	⑤回到②，30循环
无菌水：33.7μl	⑥保持4℃
		DNA模板：2μl	⑦结束

表2细菌16S rDNA扩增体系和热循环程序

细菌PCR反应体系(50μl)	细菌热循环程序
		10×PCR缓冲液:8μl	①预变性：94℃，5min
dNTPMixture:4μl	②变性：94℃，1min
		8F-FAM:1μl(10μM)	③退火：51℃，1min
1492R:1μl(10μM)	④延伸：72℃，2min
		Taq酶：0.3μl	⑤回到②，30循环
无菌水：33.7μl	⑥保持4℃，保温
		DNA模板：2μl	⑦结束

109F:5’-ACKGCTCAGTAACACGT-3’

915R:5’-GTGCTCCCCCGCCAATTCCT-3’

8F-FAM:5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’

1492R:5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’

引物915R和引物-FAM的5’端采用羧基荧光素(6-carboxyfluorescein,FAM)标记。10×PCR缓冲液：宝日医生物技术(北京)有限公司，货号：9151AM。

3、取步骤2得到的古菌菌落PCR扩增产物和细菌菌落PCR扩增产物，采用常规试剂盒纯化、脱盐后进行酶切处理。酶切体系组成如表3所示。古菌菌落于37℃孵育酶切6小时，细菌菌落于65℃孵育酶切6小时。

表3酶切体系组成

10×PCR缓冲液：宝日医生物技术(北京)有限公司，货号：9151AM。

TaqI内切酶：生工生物工程(上海)股份有限公司，货号：B600244-0001Rs。

RsaI内切酶：生工生物工程(上海)股份有限公司，货号：B600224-0200。

4、完成步骤3后，分别将古菌和细菌的酶切产物脱盐干燥后用20μl超纯去离子甲酰胺溶解，4℃放置2小时后，取其中10μl与0.5μl的Liz500内标(国药集团化学试剂北京有限公司货号：ZA4322682)及4.5μl甲酰胺混合均匀，95℃变性5min，迅速转移到冰上冷却3min，然后上样到96孔板进行毛细管电泳和检测。电泳条件：毛细管进样电压为3.0kv；进样持续时间为30sec。峰高检测阈值为50RFU，片段长度检测范围50-900bp，对得到峰面积数据进行标准化处理，获得微生物群落T-RFLP谱图。

5、按照步骤2进行操作(其中，引物不采用荧光基团标记)，将扩增产物插入pGEM-Teasy载体(Promega,USA)中并转化大肠杆菌DH5α菌株，经过蓝白斑筛选含有目的基因的白斑转化子；将白斑转化子进行T7/SP6扩增验证和筛选阳性克隆，筛选方法如下：以转化子菌悬液为模板采用采用空载体中两端的两段序列T7(5’-TAATACGACTCACTATAGGG-3’)和SP6(5’-GATTTAGGTGACACTATAG-3’)作为引物进行PCR扩增，若克隆菌中插入目标DNA片段则扩增片段的大小等于目标DNA大小和在两个引物中间的载体的自身大小(126bp)，否则扩增片段仅为两个引物中间的载体的自身大小(126bp)。目标片段为细菌16S rRNA基因(1.5kb)时，扩增片段为1.6k左右为阳性克隆。

6、提取步骤5的阳性克隆基因组DNA，按照步骤2-4进行操作(使用细菌的扩增和酶切体系)，得到阳性克隆的特征T-RFs。根据阳性克隆的特征T-RFs片段长度将克隆分类，将不同长度特征T-RFs片段对应的阳性克隆进行16S rDNA片段测序。所有阳性克隆分类汇总如表4所示。

表4细菌文库所有阳性克隆分类汇总表

综合步骤4得到的微生物群落T-RFLP分析结果和步骤6得到的阳性克隆特征T-RFs分析结果，选择二者共同含有且丰度最高的8种T-RFs，具体为168bp、463bp、309bp、305bp、315bp、79bp、417bp和468bp，并找出其对应的阳性克隆的16S rDNA片段测序结果，作为土壤内源优势类群参照序列。168bp、463bp、309bp、305bp、315bp、79bp、417bp和468bp对应的参照序列依次如序列表的序列1-8所示。

二、结合生物激活的分析结果，筛选出竞争占优势的细菌类群

生物激活实验在生物反应器中进行。反应器采用有机玻璃制成，有效尺寸为70cm(长)×60cm(宽)×25cm(高)，基本结构如图2所示。反应器的底部设置多孔板，多孔板上面铺设一层70目的金属网筛，网筛上面再铺设约5cm厚度碎石层。实际应用中，也可采用其他可进行生物激活实验的生物反应器或装置替代。

实验组：加入来自目标环境的土壤(步骤一种油田油泥罐中的石油污染的土壤)干土(干土是将原始土壤放入通风橱风干后破碎后过50目金属网筛得到的，经检测，干土中总石油烃含量为137.85g/kg)、硝酸钠和磷酸二氢钠(土壤中总有机碳和氮磷质量比为200:10:1)、表面活性剂吐温80(1.5mL/kg干土)和5％土壤质量百分含量的锯屑，混匀。

对照组：只加入与实验组相同的干土。

实验组和对照组反应器运行60天，在此期间温度维持在25±1℃。每隔3天对反应器土壤进行翻动充氧并适时喷洒灭菌水控制土壤含水率在20±3％。分别在实验的第0天、第10天、第20天、第30天、第40天和第60天参照步骤一的方法测定实验组和对照组土壤的微生物群落T-RFLP和阳性克隆特征T-RFs。

综合微生物群落T-RFLP分析结果和阳性克隆特征T-RFs分析结果，选择二者共同含有且60天内丰度增长最多的7种T-RFs，具体为115bp,125bp,309bp,315bp,429bp,468bp,768bp，并找出其对应的阳性克隆的16S rDNA片段测序结果，作为竞争优势类群参照序列。115bp,125bp,309bp,315bp,429bp,468bp和768bp对应的参照序列依次如序列表的序列9-15所示。

表5反应器实验组和对照组中细菌主要类群动态变化的对比

三、筛选优势种群系统发育相似的菌株和配伍

1、从现有的菌种保藏中心中挑选50株可利用原油的菌株，将每一菌株的16S rDNA序列与步骤一和步骤二中确定的参照序列比对相似度。

所述可利用原油的菌株可通过如下方法筛选：(1)将菌株接种于LB液体培养基中培养至对数中期，将培养体系8000rpm离心10min，收集菌体沉淀；用无机盐培养基洗沉淀三次后重悬得到种子液。(2)将步骤1得到的种子液接种于含有10g/L原油的无机盐培养基中(菌液初始OD600＝0.1)，30度、150rpm培养7天，在培养结束后监测培养液的OD600数值。OD600值越高，菌株对于原油的利用能力越高。选择OD600值大于20的菌株作为候选菌株。

2、实验菌株挑选标准与结果

(1)在与步骤一确定的参照序列进行相似度比对的结果当中，选择与步骤一确定的任一参照序列相似度大于88％且原油利用能力最高的两个菌株(菌株H1和菌株M2)。

菌株H1为胜利盐单胞菌(Halomonas shengliensis)，在中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)的菌种编号为1.6444，菌株H1的16S rDNA序列(序列表的序列16)与79bp对应的参照序列(序列表的序列6)相似度为88.90％。

菌株M2为孤岛海杆状菌(Marinobacter gudaonensis)，在中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)的菌种编号为1.6294，菌株M2的16S rDNA序列(序列表的序列17)与168bp对应的参照序列(序列表的序列1)相似度为96.94％。

(2)在与步骤二确定的参照序列进行相似度比对的结果当中，选择与步骤二确定的任一参照序列相似度大于88％且原油利用能力最高的三个菌株(菌株P1、菌株A2和菌株R1)。

菌株P1为浅黄海洋杆菌(Pelagibacterium luteolum)，在中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)的菌种编号为1.10267，菌株P1的16S rDNA序列(序列表的序列18)与115bp对应的参照序列(序列表的序列9)相似度为95.17％。

菌株A2为粪产碱菌粪亚种(Alcaligenes faecalis subsp.phenolicus)，在德国微生物菌种保藏中心(DSMZ)的菌种编号为16503，菌株A2的16S rDNA序列(序列表的序列19)与125bp对应的参照序列(序列表的序列10)相似度为95.35％。

菌株R1为海神鲁杰氏菌(Ruegeria marina)，在中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)的菌种编号为1.9108，菌株R1的16S rDNA序列(序列表的序列20)与768bp对应的参照序列(序列表的序列15)相似度为92.41％。

3、对照菌株挑选标准与结果

(1)在与步骤一确定的参照序列进行相似度比对的结果当中，选择与步骤一确定的所有参照序列相似度都小于88％且原油利用能力最高的两个菌株(菌株F7和菌株BC6)。

菌株F7为施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)，在中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)的菌种编号为1.17096，菌株F7的16S rDNA序列如序列表的序列21所示。

菌株BC6为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)，在中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)的菌种编号为1.17094，菌株BC6的16S rDNA序列如序列表的序列22所示。

(2)在与步骤二确定的参照序列进行相似度比对的结果当中，选择与步骤二确定的所有参照序列相似度都小于88％且原油利用能力最高的三个菌株(菌株C1A、菌株BC9和菌株6S2)。

菌株C1A为赤红球菌(Rhodococcus ruber)，在中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)的菌种编号为1.17096，菌株C1A的16S rDNA序列如序列表的序列23所示。

菌株BC9为鲁氏不动杆菌(Acinetobacter lwoffii)，中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)的菌种编号为1.17092，菌株BC9的16S rDNA序列如序列表的序列24所示。

菌株6S2为松嫩假单胞菌(Pseudomonas songnenensis)，在中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)的菌种编号为1.17095，菌株6S2的16S rDNA序列如序列表的序列25所示。

上述菌株的原油利用能力检测结果见表6。

四、外源微生物投加效果检测

1、将菌株分别接种于LB液体培养基中培养至对数中期，将培养体系8000rpm离心10min，收集菌体沉淀；用无机盐培养基洗沉淀三次后重悬得到种子液。

2、将步骤1得到的种子液接种于含有10g/L原油(胜利油田)的无机盐培养基中(菌液初始OD600＝0.1)，30度、150rpm培养7天，在培养结束后监测培养液的OD600数值(表6)。

表6

编号	OD600值
		菌株H1	42.5
菌株M2	37.8
		菌株P1	53.2
菌株A2	42.7
		菌株R1	30.4
菌株F7	32.7
		菌株BC6	42.1
菌株C1A	39.2
		菌株BC9	35.6
菌株6S2	32.7

3、实验在生物反应器中进行。反应器采用有机玻璃制成，有效尺寸为70cm(长)×60cm(宽)×25cm(高)，基本结构如图2所示。反应器的底部设置多孔板，多孔板上面铺设一层70目的金属网筛，网筛上面再铺设约5cm厚度碎石层。

分为如下四组进行实验(每个反应器中含有实施例1中步骤一预处理后的土壤10公斤)

A组(空白对照组)：不添加任何微生物；

B组(实验组)：将步骤1得到的菌株H1、菌株M2、菌株P1、菌株A2和菌株R1的种子液离心后用400ml无机盐培养基洗沉淀三次后重悬并调整菌浓度得到菌液(每种菌株的菌悬液初始OD600为0.2)，将5种菌悬液等体积混合后加至含有原油污染土壤的生物反应器中；

C组(菌株对照组1)：将步骤1得到的菌株F7、菌株BC6、菌株C1A、菌株BC9和菌株6S2的种子液离心后用400ml无机盐培养基洗沉淀三次后重悬并调整菌浓度得到菌液(每种菌株的菌悬液初始OD600为0.2)，将5种菌悬液等体积混合后加至含有原油污染土壤的生物反应器中；

D组(菌株对照组2)：将步骤1得到的菌株H1、菌株M2、菌株C1A、菌株BC9和菌株6S2的种子液离心后用400ml无机盐培养基洗沉淀三次后重悬并调整菌浓度得到菌液(每种菌株的菌悬液初始OD600为0.2)，将5种菌悬液等体积混合后加至含有原油污染土壤的生物反应器中；

E组(菌株对照组3)：将步骤1得到的菌株F7、菌株BC6、菌株P1、菌株A2和菌株R1的种子液离心后用400ml无机盐培养基洗沉淀三次后重悬并调整菌浓度得到菌液(每种菌株的菌悬液初始OD600为0.2)，将5种菌悬液等体积混合后加至含有原油污染土壤的生物反应器中；

生物反应器置于室温下运行45天，在此期间温度维持在25±1℃。每隔3天对反应器土壤进行翻动充氧并适时喷洒灭菌水控制土壤含水率在20±3％。实验结束后按照中华人民共和国国家环境标准HJ783-2016土壤和沉积物有机物的提取加压流体萃取法对各组土壤的原油含油率进行测定。结果如表7所示。

表7

分组	含油率(％)	降解率(％)
			A组(空白对照组)	13.15	4.64
B组(实验组)	5.41	60.76
			C组(菌株对照组1)	10.32	25.16
D组(菌株对照组2)	9.75	29.30
			E组(菌株对照组3)	11.26	27.75

结果显示，采用本发明的利用“相似相容”配伍方法指导筛选的菌株组合、投加到目标环境石油污染土壤中，具有明显高于其他组合的原油降解率。

序列表

<110> 北京大学

<120> 一种指导微生物配伍的“相似相容”原则及其提高外源投加微生物功能与效率的配伍方法

<160> 25

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1499

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

agagtttgat cctggctcag attgaacgct ggcggcaggc ttaacacatg caagtcgagc 60

ggtaacaggg gtgcttgcac ccgctgacga gcggcggacg ggtgagtaat gcttaggaaa 120

ctgcccagta gtgggggata gcccggggaa acccggatta ataccgcgta cgcccttagg 180

gggaaagcag gggatcttcg gaccttgcgc tattggatgt gcctaagtcg gattagctag 240

ttggtggggt aaaggcctac caaggcgacg atccgtagct ggtctgagag gatgatcagc 300

cacatcggga ctgagacacg gcccgaactc ctacgggagg cagcagtggg gaatattgga 360

caatgggggc aaccctgagg cggccatgcc gcgtgtgtga agaaggcttt cgggttgtag 420

agcactttca gtgaggagga aggcttgaag gttaataccc ttcaggattg acgttactca 480

cagaagaagc accggctaac tccgtgccag cagccgcggt aatacggagg gtgcaagcgt 540

taatcggaat tactgggcgt aaagcgcgcg taggtggttt gataagcgag atgtgaaagc 600

cccgggctta acctgggaac ggcatttcga actgacaggc tagagtgtgg tagaggggtg 660

tggaatttcc tgtgtagcgg tgtaatgcgt agatatagga aggaacacca gtggcgaarg 720

cggcaccctg gaccaacact gacactgagg tgcgaaagcg tggggagcaa acaggattag 780

ataccctggt agtccacgcc gtaaacgatg tcaactagcc gttgggactc ttgaagtctt 840

agtggcgcag ctaacgcact aagttgaccg cctggggagt acggccgcaa ggttaaaact 900

caaatgaatt gacgggggcc cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt cgacgcaacg 960

cgaagaacct tacctggcct tgacatgctg agaatcctgc agagatgcgg gagtgccttc 1020

gggagctcag acacaggtgc tgcatggccg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt 1080

aagtcccgta acgagcgcaa cccctatccc tagttgctag cagttcggct gagaactcta 1140

gggagactgc cggtgacaaa ccggaggaag gtggggatga cgtcaggtca tcatggccct 1200

tacggccagg gctacacacg tgctacaatg gcgcgcacag agggctgcaa acccgcgagg 1260

gggagccaat ctcacaaaac gcgtcgtagt ccggatcgca gtctgcaact cgactgcgtg 1320

aagtcggaat cgctagtaat cgtgaatcag aatgtcacgg tgaatacgtt cccgggcctt 1380

gtacacaccg cccgtcacac catgggagtg gattgcacca gaagtggtta gtctaacctt 1440

cgggaggacg atcaccacgg tgtggttcat gactggggtg aagtcgtaac aaggtaacc 1499

<210> 2

<211> 1502

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

agagtttgat cctggctcag attgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc 60

ggaaacgatc ctagcttgct aggaggcgtc gagcggcgga cgggtgagta acgcgtgaga 120

atctgcccat ttgtggggga taactcgggg aaactcgagc taataccgca taatccctac 180

gggggaaagc aggggacctt cgggccttgt gcagatggat gagctcgcgt cggattagct 240

tgttggtgag gtaaaggctc accaaggcga cgatccgtag ctggtctgag aggatgatca 300

gccacaccgg gactgagaca cggcccggac tcctacggga ggcagcagtg gggaatcttg 360

gacaatgggg gcaaccctga tccagccatg ccgcgtgtgt gaagaaggcc ttcgggttgt 420

aaagcacttt cagtagggag gaaggcttac cgctaataac ggtgagtact tgacgttacc 480

tacagaagaa gcaccggcta atttcgtgcc agcagccgcg gtaatacgaa aggtgcgagc 540

gttaatcgga attactgggc gtaaagcgcg cgtaggcggt ttgttaagtc agatgtgaaa 600

gccccgggct caacctggga attgcatttg aaactggcag gctagagtgc agtagaggga 660

ggtggaattt ccggtgtagc ggtgaaatgc gtagagatcg gaaggaacac cagtggcgaa 720

rgcggcctcc tggactgaca ctgacgctga ggtgcgaaag cgtggggagc aaacaggatt 780

agataccctg gtagtccacg ccgtaaacga tgtctactag tcgttgggaa tcttagtatt 840

cttggtgacg aagttaacgc gataagtaga ccgcctgggg agtacggccg caaggttaaa 900

actcaaatga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgatgca 960

acgcgaagaa ccttaccagg ccttgacatc cttggaactt tctagagata gattggtgcc 1020

ttcgggagcc aagtgacagg tgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg 1080

gttaagtccc gtaacgagcg caacccttgt ccctagttgc cagcacttcg ggtgggaact 1140

ctagggagac tgccggtgac aaaccggagg aaggtgggga cgacgtcaag tcatcatggc 1200

ccttacggcc tgggctacac acgtgctaca atgggcagta cagagggccg cgaagtcgcg 1260

aggccaagca gatcccttaa aactgttcgt agtccggatt ggagtctgca actcgactcc 1320

atgaagtcgg aatcgctagt aatcgcgaat cagaatgtcg cggtgaatac gttcccgggc 1380

cttgtacaca ccgcccgtca caccatggga gtggattgca ccagaagtag ttagtctaac 1440

cttcgggagg acgattacca cggtgtggtt catgactggg gtgaagtcgt aacaaggtaa 1500

cc 1502

<210> 3

<211> 1484

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcggcaggc ttaacacatg caagtcgagg 60

ggcagcacgt cttcggatgg tggcgaccgg cgcacgggtg cgtaacgcgt atacaatcta 120

ccttttacag gggcatagcc cggggaaacc cggattaata tcccatggta tcatttagtg 180

gcatcacttg aatgattaaa gctttggcgg taaaagatga gtatgcgttc tattagctag 240

atggtaaggt aacggcttac catggctttg atagataggg gtcctgagag ggagatcccc 300

cacactggta ctgagacacg gaccagactc ctacgggagg cagcagtgag gaatattgga 360

caatgggcga gagcctgatc cagccatgcc gcgtgcagga agactgccct atgggttgta 420

aactgctttt atacgggaag aaacacctcc acgtgtggag gtttgacggt accgtacgaa 480

taaggatcgg ctaactccgt gccagcagcc gcggtaatac ggaggatcca agcgttatcc 540

ggaatcattg ggtttaaagg gtccgtaggc gggagagtca gtcagtggtg aaagtctgca 600

gctcaactgt agaactgcca ttgatactgc tttccttgag taattatgaa gtggttagaa 660

tatgtagtgt agcggtgaaa tgcatagata ttacatagaa taccgattgc gaaggcagat 720

cactaataat ttactgacgc cgatggacga aagcgtakgt agcgaacagg attagatacc 780

ctggtagtct acgccgtaaa cgatggttac tagctgttcg gctcgattaa gagctgagtg 840

gctaagcgaa agtgataagt aacccacctg gggagtacgt tcgcaagaat gaaactcaaa 900

ggaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgat gatacgcgag 960

gaaccttacc agggcttaaa tgtagtctga caggggtgga aacacctcct ccttcgggca 1020

gattacaagg tgctgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgccgt gaggtgtcag gttaagtcct 1080

ataacgagcg caacccctgt ggttagttgc cagcgagtca agtcgggaac tctagccaga 1140

ctgccggtgc aaaccgtgag gaaggtgggg atgacgtcaa atcatcacgg cccttacgtc 1200

ctgggccaca cacgtgctac aatggtaggg acagagagca gccactgggc gaccaggagc 1260

gaatctataa accctatcac agttcggatc ggagtctgca actcgactcc gtgaagctgg 1320

aatcgctagt aatcgcatat cagccatgat gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac 1380

accgcccgtc aagccatgga agctgggggt acctgaagtc ggtcaccgca aggagccgcc 1440

tagggtaaaa ctggtaactg gggctaagtc gtaacaaggt aacc 1484

<210> 4

<211> 1475

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcggcaggc ctaacacatg caagtcgagg 60

ggtagaaaga acttgctctt ttgagaccgg cgcacgggtg cgtaacgcgt atacaatctg 120

cctcttactg cgggatagcc cagagaaatt tggattaaca ccgcgtagta taattacttg 180

gcatcaagtt attattaaag gttacggtaa gagatgagta tgcgttctat tagctagatg 240

gagtggtaac ggcacaccat ggcaacgata gataggggcc ctgagagggg gatcccccac 300

actggtactg agacacggac cagactccta cgggaggcag cagcgaggaa tattggacaa 360

tgggggcaac cctgatccag ccatgccgcg tgcaggaaga ctgccctatg ggctgtaaac 420

tgcttttgta cgggaagaaa cactgccacg tgtggcagct tgacggtacc gtaagaataa 480

ggatcggcta actccgtgcc agcagccgcg gtaatacgga ggatccaagc gttatccgga 540

atcattgggt ttaaagggtc cgtaggtgga caattaagtc agaggtgaaa tcctgcagct 600

caactgtaga attgcctttg atactggttg tcttgaatca atgtgaagtg gttagaatat 660

gtagtgtagc ggtgaaatgc atagatatta catagaatac caattgcgaa ggcagatcac 720

taacattgca ttgacactga tggacgaaag cgtggggagc gaacaggatt agataccctg 780

gtagtccacg ccgtaaacga tggatactag ctgttcgggt ttacctgagt ggctaagcga 840

aagtgataag tatcccacct ggggagtacg ggcgcaagcc tgaaactcaa aggaattgac 900

gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga tgatacgcga ggaaccttac 960

cagggcttaa atgtaagttg cattagctgg agacagctat ttcttcggac cacttacaag 1020

gtgctgcatg gttgtcgtca gctcgtgccg tgaggtgtca ggttaagtcc tataacgagc 1080

gcaacccctg ttgttagttg ccagcgagtc aagtcgggaa ctctagcaag actgccagtg 1140

caaactgtga ggaaggtggg gatgacgtca aatcatcacg gcccttacgt cctgggctac 1200

acacgtgcta caatggtagg gacagagagc agccactggg cgaccaggag cgaatctaca 1260

aaccctatca cagttcggat cggagtctgc aactcgactc cgtgaagctg gaatcgctag 1320

taatcgcata tcagccatga tgcggtgaat acgttcccgg gccttgtaca caccgcccgt 1380

caagccatgg aagctgggag tgcctgaagt ccgtcaccgc aaggagcggc ctagggtaaa 1440

atcggtaact agggctaagt cgtaacaagg taacc 1475

<210> 5

<211> 1491

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcggcaggc ctaacacatg caagtcgaac 60

ggtaacagga attagcttgc taatttgctg acgagtggcg cacgggtgcg taacgcgtat 120

acaatctgcc tttaagcggg gaatagccca tggaaacgtg gattaatacc ccatagtata 180

tagacatctc ctgatgatta tattaaacat ttatggctta aagatgagta tgcgtcctat 240

tagttagttg gtaaggtaac ggcttaccaa gaccgcgata ggtaggggtc ctgagaggga 300

gatcccccac actggtactg agacacggac cagactccta cgggaggcag cagtgaggaa 360

tattggacaa tggaggcaac tctgatccag ccatgccgcg tgcaggaaga cggccctatg 420

ggttgtaaac tgcttttata cgggaagaac cactccgacg tgtcggagct tgacggtacc 480

gtatgaataa ggaccggcta actccgtgcc agcagccgcg gtaatacgga gggtccaagc 540

gttatccgga atcattgggt ttaaagggtc cgtaggcgga ataataagtc agtggtgaaa 600

gtctgcagct caactgtaga attgccattg atactgttgt tcttgaatta ttatgaagtg 660

gttggaaaga gtagtgtagc ggtgaaatgc atagatatta ctcagaacac ctattgcgaa 720

ggcagatcac taataatata ttgacgctga gggacgaaag cgtaggtagc gaacaggatt 780

agataccctg gtagtctacg ccgtaaacga tggttactag ctgtccggct cgattgagag 840

ctgggtggtt aagcgaaagt gataagtaac ccacctgggg agtacgttcg caagaatgaa 900

actcaaagga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgatgat 960

acgcgaggaa ccttaccagg gcttaaatgt agtctgacag gtctggaaac agacccttct 1020

tcggacagat tacaaggtgc tgcatggttg tcgtcagctc gtgccgtgag gtgtcaggtt 1080

aagtcctata acgagcgcaa cccctgtggt tagttgccag cgagtcatgt cgggaactct 1140

aaccagactg ccggtgcaaa ccgcgaggaa ggtggggatg acgtcaaatc atcacggccc 1200

ttacgtcctg ggccacacac gtgctacaat ggtagggaca gagggcagct accccgcgag 1260

gggatgcgaa tcttcaaacc ctatcacagt tcggatcgca gtctgcaact cgactgcgtg 1320

aagctggaat cgctagtaat cgcatatcag ccatgatgcg gtgaatacgt tcccgggcct 1380

tgtacacacc gcccgtcaag ccatggaagc cgggggtacc tgaagtccgt caccgtaagg 1440

agcggcctag ggtagaactg gtaactgggg ctaagtcgta acaaggtaac c 1491

<210> 6

<211> 1495

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

agagtttgat cctggctcag attgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc 60

gagaaaggtc ttcggaccga gtacagcggc ggacgggtga gtaacgcgta ggaatttgcc 120

cagtagtggg ggacaactcg gggaaacccg agctaatacc gcatacgccc tacgggggaa 180

agcaggggat cttcggacct tgcgctattg gataagcctg cgtcggatta gctagttggt 240

agggtaaggg cctaccaagg cgacgatccg tagctggtct gagaggatga tcagccacac 300

tgggactgag acacggccca gactcctacg ggaggcagca gtggggaata ttggacaatg 360

ggggaaaccc tgatccagcc atgccgcgtg tgtgaagaag gctctagggt tgtaaagcac 420

tttcagcagg gaggaaaggt taacggttaa tacccgttag ctgtgacgtt acctgcacaa 480

gaagcaccgg caaactccgt gccagcagcc gcggtaatac ggagggtgca agcgttaatc 540

ggaattactg ggcgtaaagc gcgcgtaggc ggtttggtaa gctggatgtg aaatccccgg 600

gctcaacctg ggaactgcat tcagaactgc caggctagag tacagtagag gatagtggaa 660

tttccggtgt agcggtgaaa tgcgtagaga tcggaaggaa catcagtggc gaaggcggct 720

atctggactg atactgacgc tgaggtgcga aagcgtgggg agcaaacagg attagatacc 780

ctggtagtcc acgctgtaaa cgatgtcaac tagccgttgg ggggcttgtc cccttagtgg 840

cgcagctaac gcgataagtt gaccgcctgg ggagtacggc cgcaaggtta aaactcaaat 900

gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgatg caacgcgaag 960

aaccttacca ggtcttgaca tcctcggaac tttccagaga tggattggtg ccttcgggaa 1020

ccgagtgaca ggtgctgcat ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc 1080

ccgtaacgag cgcaaccctt gtccttagtt gccagcacgt aatggtggga actctaagga 1140

gactgccggt gacaaaccgg aggaaggtgg ggacgacgtc aagtcatcat ggcccttacg 1200

acctgggcta cacacgtgct acaatggccg gtacaaaggg ttgccaagcc gcgaggtgga 1260

gctaatccca gaaaaccgtt cgtagtccgg attggagtct gcaactcgac tccatgaagt 1320

cggaatcgct agtaatcgcg aatcagaatg tcgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac 1380

acaccgcccg tcacaccatg ggagtgggtt gcaaaagaag tgggtagact aaccctcggg 1440

aggtcgctca ccactttgtg attcatgact ggggtgaagt cgtaacaagg taacc 1495

<210> 7

<211> 1422

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

agagtttgat cctggctcag gatgaacgct ggcggcgtgg ataaggcatg caagtcaagg 60

ggtccttcgg gacaccggca aacggggtag taacaggtag gaacataccc agaagtcagg 120

aatagctcat cgaaaggtgg ggtaatactt gatagtctcg taagagtaaa gcttcggcgc 180

ttctggaatg gcctgcttcg tatcagcttg ttggtgaggt aaaagctcac caaggctatg 240

acgcgtaggg gaggtgagag cctgaccccc accattggca ctgagacact ggccaaacac 300

ctacgggtgg ctgcagtcga gaatcttccg caatgcacga gagtgtgacg gagcgacgcc 360

gcgtgatcga tgaagcactt cggtgtgtaa aggtctttta taggggaaga agtttattga 420

cggtacctta tgaataaggg gttcctaaac tcgtgccagc aggagcggta atacgagtgc 480

cccaagcgtt atccggaatt attgggcgta aagggtgcgt aggcggttgt gttagtctct 540

gttaaaatct ttcggcttaa ccgagagtcc ggcagagaaa cggcacgact tgaggatgtg 600

agaggtgtgt ggaactcacg gtgtaggggt gaaatccgtt gatatcgtgg ggaacgccaa 660

aggcgaaggc agcacactgg cacattcctg acgctgaggc acgaaagcca gggtagcgaa 720

gcggattaga tacccgcgta gtcctggccc taaacgttgt ccgctagctt ttgggagtat 780

cgaccctctc agaggcgaag ctaacgcgtt aagcggaccg cctgggtagt acgagcgcaa 840

gcttaaaact caaaggaata gacgggggct cgcacaagcg gtggagcgtg tggtttaatt 900

cgacgctaag cgaagaacct caccaaggct agacatctag acgaactctc tgagaaacca 960

gaggggtctt cggacggcta gacaggtgat gcatggctgt cgtcagttcg tggcttgacc 1020

tgttccctta agtggggtaa cgaacgcaac ccttatcgtg tgttacaagt gtcacacgag 1080

actgctgtct cacgacagag gaaggtgagg atgacgccaa gtcagcatgt cccttgatgc 1140

ctttggctac acacgcgcta caatggtaca tacagtgggt cgcgacgggg taaccctgag 1200

ctaatcctcc aaagtgtgcc tcagttcgga tagaggtctg caactcgacc tcttgaagtt 1260

ggaatcgcta gtaatcgtgg gtcagcacac cacggtgaat acgttctcga gccttgtact 1320

caccgcccgt cacgtcaagg gagttggggg tacccgaagt tcggccctcg ggccggccga 1380

aggtaaattc aatgacaggg acgaagtcgt aacaaggtaa cc 1422

<210> 8

<211> 1481

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcggcaggc ctaatacatg caagtcgaac 60

ggtaagtagt gtgcttgcac attacacgag tggcgcacgg gtgcgtaacg cgtatgcaac 120

ctacctttaa ctgggggata gcccggagaa attcggatta ataccccata gtatcataga 180

ttcgcatgat gaaatgatta aagatttatt ggttaaagat gggcatgcgt ctgattagtt 240

agtaggtagt gtaacggact acctaggcga tgatcagtag gggttctgag aggattatcc 300

cccacactgg cactgagata cgggccagac tcctacggga ggcagcagta gggaatattg 360

gtcaatgggc gagagcctga accagccatg ccgcgtgcag gaagacggcc ttctgggttg 420

taaactgctt ttatcaggga acaaaatggc catgcgtggc aaattgcgtg tacctgagga 480

atgagcaccg gctaactccg tgccagcagc cgcggtaata cggagggtgc aagcgttgtc 540

cggatttatt gggtttaaag ggtgcgtagg tggctaatta agtcagtggt gaaagtctgt 600

agcttaacta tagaattgcc attgatactg gttagcttga gtatagacga ggtaggcgga 660

attcatggtg tagcggtgaa atgcatagat accatgaaga acaccgatag cgaaggcagc 720

ttactaggct ataactgaca ctgaggcacg aaagcgtggg gagcgaacag gattagatac 780

cctggtagtc cacgctgtaa acgatgctca ctcgatgttt gcgatacaca gtatgcgtcc 840

aagcgaaagc gttaagtgag ccacctgggg agtacgctcg caagagtgaa actcaaagga 900

attgacgggg gtccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgatgat acgcgaggaa 960

ccttacctgg gctagaatgt gagcgcaatc cccagagatg gggagttctt cggacgtgaa 1020

acaaggtgct gcatggctgt cgtcagctcg tgccgtgagg tgttgggtta agtcccgcaa 1080

cgagcgcaac ccctatgttt agttgccagc atgtaatgat ggggactcta aacagactgc 1140

ctgcgcaagc agagaggaag gaggggatga cgtcaagtca tcatggccct tacgcccagg 1200

gctacacacg tgctacaatg gcgtatatag agggtagcta cacggtaacg tgatgccaat 1260

ctcaaaaagt acgtctcagt tcggattgag gtctgcaact cgacctcatg aagtcggaat 1320

cgctagtaat cgcgtatcag caatgacgcg gtgaatacgt tcccggacct tgtacacacc 1380

gcccgtcaag ccatggaagt tgggaggacc tgaagacagt tgccgcaagg cgttgtttag 1440

ggttatacca gtaactaggg ctaagtcgta acaaggtaac c 1481

<210> 9

<211> 1446

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

agagtttgat cctggctcag aacgaacgct ggcggcaggc ttaacacatg caagtcgaac 60

gatctcttcg gagatagtgg cagacgggtg agtaacgcgt gggaacctac cttgtagtac 120

ggaatagcct cgggaaactg ggattaatac cgtatacgcc cttaggggga aagatttatc 180

gctataagat gggcccgcgt ttgattagct agttggtggg gtaatggcct accaaggcga 240

cgatcaatag ctggtctgag aggatgatca gccacactgg gactgagaca cggcccagac 300

tcctacggga ggcagcagtg gggaatattg gacaatgggc gcaagcctga tccagccatg 360

ccgcgtgagt gatgaaggcc ctagggttgt aaagctcttt cagcagggat gataatgaca 420

gtacctgcag aagaagcccc ggctaacttc gtgccagcag ccgcggtaat acgaaggggg 480

ctagcgttgt tcggaattac tgggcgtaaa gcgcacgtag gcggactatt aagtcagagg 540

tgaaatcccg gggctcaact ccggaactgc ctttgatact ggtagtcttg agtccgagag 600

aggcgagtgg aactcctagt gtagaggtgg aattcgtaga tattaggaag aacaccagtg 660

gcgaaggcgg ctcactggct cggtactgac gctgaggtgc gaaagcgtgg ggagcaaaca 720

ggattagata ccctggtagt ccacgccgta aactatggaa gctagccgtt gggggattta 780

tccttcagtg gcgcagctaa cgcattaagc ttcccgcctg gggagtacgg tcgcaagatt 840

aaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa 900

gcaacgcgaa gaaccttacc agcccttgac atcccggtcg cgatttccag agatggattt 960

tttcagttcg gctggaccgg tgacaggtgc tgcatggctg tcgtcagctc gtgtcgtgag 1020

atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa ccctcgccct tagttgccat catttagttg 1080

ggcactctag ggggactgcc ggtgataagc cggaggaagg tggggatgac gtcaagtcat 1140

catggccctt acgggctggg ctacacacgt gctacaatgg cggtgacaga gggcagccac 1200

tccgcgagga ggagctaatc cctaaaaacc gtctcagttc ggattgcact ctgcaactcg 1260

ggtgcatgaa gttggaatcg ctagtaatcg cagatcagca tgctgcggtg aatacgttcc 1320

cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca tgggagttgg ttctacccga agccggtgcg 1380

ctaactttta gaggcagccg accacggtag ggtcagcgac tggggtgaag tcgtaacaag 1440

gtaacc 1446

<210> 10

<211> 1502

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

agagtttgat cctggctcag attgaacgct agcgggatgc tttacacatg caagtcgaac 60

ggcagcgcga ggtaagcttg cttactttgg cggcgagtgg cgaacgggtg agtaatgtat 120

cggaacgtac ccagtagcgg gggataacta cgcgaaagcg tggctaatac cgcatacgcc 180

ctacggggga aaggggggga ttcttcggaa cctctcacta ttggagcggc cgatatcgga 240

ttagctagtt ggtgaggtaa aggctcacca aggctgcgat ccgtagctgg tttgagagga 300

cgaccagcca cactgggact gagacacggc ccagactcct acgggaggca gcagtgggga 360

attttggaca atgggggcaa ccctgatcca gccatcccgc gtgtgcgatg aaggccttcg 420

ggttgtaaag cacttttggc agggaagaaa gggcgctggt taatacctgg cgttgatgac 480

ggtacctgca gaataagcac cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtagggt 540

gcaagcgtta atcggaatta ctgggcgtaa agggtgcgtc ggcggtttgg caagaaaggt 600

gtgaaatccc agggcttaac cttggaactg cacttttaac tgccaggcta gagtacgtca 660

gaggggggta gaattccacg tgtagcagtg aaatgcgtag agatgtggag gaataccgat 720

ggcgaaggca gccccctggg atgatactga cgctcaggca cgaaagcgtg gggagcaaac 780

aggattagat accctggtag tccacgccct aaacgatgtc aactagctgt tggggccgtt 840

aggctttagt agcgcagcta acgcgtgaag ttgaccgcct ggggagtacg gtcgcaagat 900

taaaactcaa aggaattgac ggggacccgc acaagcggtg gatgatgtgg attaattcga 960

tgcaacgcga aaaaccttac ctacccttga catgtctgga aggccgaaga gatttggctg 1020

tgctcgcaag agaaccggaa cacaggtgct gcatggctgt cgtcagctcg tgtcgtgaga 1080

tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac ccttgtcatt agttgctacg aaagggcact 1140

ctagtgagac tgccggtgac aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcaag tcctcatggc 1200

ccttatgggt agggcttcac acgtcataca atggtcggga cagagggttg ccaacccgcg 1260

agggggagcc aatctcagaa acccgatcgt agtccggatt gcaggctgca actcgcctgc 1320

atgaagtcgg aatcgctagt aatcgcggat cagcatgtcg cggtgaatac gttcccgggt 1380

cttgtacaca ccgcccgtca caccatgaga gtgggtttca ccagaagtag gtagcctaac 1440

cttacggggg gcgatcacca cggtgtggtt catgactggg gtgaagtcgt aacaaggtaa 1500

cc 1502

<210> 11

<211> 1481

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcggcaggc ctaacacatg caagtcgagg 60

ggtatagttt agcttgctaa actagagacc ggcgcacggg tgagtaacgc gtatgcaacc 120

taccttttac agagggatag cccggagaaa tccggattaa taccttatag tattaagatt 180

cagcattgaa ttttgattaa agctacggtg gtaaaagatg ggcatgcgtc ctattagcta 240

gatggtttgg taacggcaga ccatggctac gataggtagg ggtcctgaga gggagatccc 300

ccacactggt actgagacac ggaccagact cctacgggag gcagcagtga ggaatattgg 360

acaatggtcg caagactgat ccagccatgc cgcgtgcagg aagacggccc tatgggttgt 420

aaactgcttt tatacgggaa gaataagagc tacgtgtagc ttgatgacgg taccgtaaga 480

ataagcatcg gctaactccg tgccagcagc cgcggtaata cggaggatgc aagcgttatc 540

cggaatcatt gggtttaaag ggtccgtagg cgggccagta agtcagtggt gaaagtctgc 600

agcttaactg tagaattgcc tttgatactg ctggtcttga atgtgtacga agtggctgga 660

atgagtgggg tagcggtgaa atgcatagag atcactcaga acaccaattg cgaaggcagg 720

tcactactac atcattgacg ctgatggacg aaagcgtggg gagcgaacag gattagatac 780

cctggtagtc cacgccgtaa acgatggata ctagctgttg gattttcgga ttcagtggct 840

aagcgaaagt gataagtatc ccacctgggg agtacgttcg caagaatgaa actcaaagga 900

attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgatgat acgcgaggaa 960

ccttaccagg gcttaaatgg gagtcgacag gggtggaaac accttttcct tcgggcgact 1020

ctcaaggtgc tgcatggttg tcgtcagctc gtgccgtgag gtgtcaggtt aagtcctata 1080

acgagcgcaa cccctgccgt tagttaccag catgtaaaga tggggactct aacgggactg 1140

ccggtgcaaa ccgcgaggaa ggtggggatg acgtcaaatc atcacggccc ttacgtcctg 1200

ggccacacac gtgctacaat ggccggtaca gagagcagcc agtgggtgac cacgagcgaa 1260

tctataaaac cggtcacagt tcggatcgga gtctgcaact cgactccgtg aagctggaat 1320

cgctagtaat cggatatcag ccatgatccg gtgaatacgt tcccgggcct tgtacacacc 1380

gcccgtcaag ccatggaagc tgggggtacc tgaagtcggt gaccgcaagg agctgcctag 1440

ggtaaaactg gtaactgggg ctaagtcgta acaaggtaac c 1481

<210> 12

<211> 1491

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcggcaggc ctaacacatg caagtcgagg 60

ggtaacaggg aagagcttgc tctttcgctg acgaccggcg cacgggtgcg taacgcgtat 120

acaacctacc ttttggaggg gaatagccca gggaaacttg gattaatgcc ccatagtatg 180

ggaatatctc ctgatatttt cattaaacat ttatggccat tagatgggta tgcgtcctat 240

tagttagttg gtaaggtaac ggcttaccaa ggcagcgata ggtaggggtc ctgagaggga 300

gatcccccac actggtactg agacacggac cagactccta cgggaggcag cagtgaggaa 360

tattggacaa tgggcgagag cctgatccag ccatgccgcg tgcaggaaga ctgccctatg 420

ggttgtaaac tgcttttaca gaggaagaac cactcccacg tgtgggagtt tgacggtact 480

ctgcgaataa ggataggcta actccgtgcc agcagccgcg gtaatacgga ggatccaagc 540

gttatccgga atcattgggt ttaaagggtc cgtaggcggg cagttaagtc agtggtgaaa 600

gtcttccgct caacgggaga actgccattg atactgattg tcttgagtta ttatgaagtg 660

gttagaatga gtagtgtagc ggtgaaatgc atagatatta ctcagaatac cgattgcgaa 720

ggcagatcac taataatata ctgacgctga tggacgaaag cgtaggtagc gaacaggatt 780

agataccctg gtagtctacg ccgtaaacga tggttactag ctgttcggcc cgattaaggg 840

ctgagtggtt aagcgaaagt gataagtaac ccacctgggg agtacgttcg caagaatgaa 900

actcaaagga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgatgat 960

acgcgaggaa ccttaccagg gcttaaatgt agtctgacag gagtggaaac acttttttct 1020

tcggacagat tacaaggtgc tgcatggttg tcgtcagctc gtgccgtgag gtgtcaggtt 1080

aagtcctata acgagcgcaa cccctgtggt tagttgccag cgagtaatgt cgggaactct 1140

agccagactg ccggtgcaaa ccgtgaggaa ggtggggatg acgtcaaatc atcacggccc 1200

ttacgtcctg ggccacacac gtgctacaat ggtagggaca gagagcagcc acttcgcgag 1260

aaggagcgaa tctacaaacc ctatcacagt tcggatcgca gtctgcaact cgactgcgtg 1320

aagctggaat cgctagtaat cgcatatcag ccatgatgcg gtgaatacgt tcccgggcct 1380

tgtacacacc gcccgtcaag ccatggaagc cgggggtacc tgaagtcggt caccgcaagg 1440

agccgcctag ggtaaaactg gtaactgggg ctaagtcgta acaaggtaac c 1491

<210> 13

<211> 1422

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

agagtttgat cctggctcag ggtgaacgct ggcggcgtgg atgaggcatg caagtcgaat 60

gagtttatac tcatggcaga cgaggtagga acacgtaggt tacgtacccc aaagtcaggg 120

ataacccggt gaaaatcgga gtaatacttg atagtctctt cggagtaaag atttatcgct 180

ttgggaacgg cctgcggtct atcagcttgt tggtaaggta acggcttacc aaggctacga 240

cggatagggg aggtgagagc ctgaccccca ccgagggcac tgcgacacgg gccctactcc 300

tacgggaggc cgcagtcgag aatcttccgc aatggacgaa agtctgacgg agcgacgccg 360

cgtggttgat gaagtcctta gggacgtaaa aaccttttat gagggaggaa gtttattgac 420

gttacctcat gaataagggg ctcccaattc tgtgccagca ggagcggtaa tacagaagcc 480

tcgagcgtta cccggaatca ctgggcgtaa agggtgcgta ggcggtcata ttagtcggat 540

gttaaatctt ggggctcaac ctcaaaatcg cattcgaaac ggtatgacta ggaggagtga 600

gaggtgtgcg gaactcaagg tgtaggggtg aaatccgttg atatcttggg gaacaccaaa 660

tgcgaaggca gcacactggc actctctcga cgctgaggca cgaaagcgtg ggtagcgaat 720

gggattagat accccagtag tccacgccct aaacgctgtc aactggcttt ttggagtatc 780

gaccctccaa gaggcgaagc taacgcgtta agttgaccgc ctgggtagta cgagcgcaag 840

cttaaaactc aaaggaatag acggggaccc gcacaagcgg tggagcgcga ggcttaattc 900

gtcgctaagc gaaaaacctt accgaggcta gaaatccagc tgcacgctct gggaaaccag 960

agaagctttc gaaggtgctg gacaggtgat gcatggctgt cgtcagttcg tggcttgagc 1020

tgttccctta agtggggaaa cgaacgcaac cctcgttgcc tgttatacgt gtcaggcgag 1080

actgctccct cacgggagag gaaggtgagg atgatgccaa gtcagcatgt cccttgatgc 1140

ctcgggccgc actcacgcta caatggtacg cacaacggga cgcaataccg taaggtggag 1200

caaatcctta taaaacgtgc cccagttcgg attgtggtct gcaactcgac cacatgaagt 1260

cggaatcgct agtaatcgcg gatcagcatg ccgcggtgaa tacgttctcg ggtcttgtac 1320

tcaccgcccg tcaactcaag ggagccggga gtgcccgaag tactgtctag agcagtccta 1380

cggtaagttc ggtaacaggg agtaagtcgt aacaaggtaa cc 1422

<210> 14

<211> 1488

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

agagtttgat cctggctcag gacgaacgct ggcggcgggc ttaacacatg caagtcgcgg 60

gagaaggggt ccttcggggc cctggagacc ggcggatggg tgagtaacgc gtaggtaatc 120

tgccgttagg ccggggataa catcgcgaaa gcggtgctaa taccggatga tgcagcggcc 180

ccgcatgggg acagttgtta aacccttcgg gggcctaacg atgaacctgc gtgccattag 240

ctggttggta gggtaacggc ctaccaaggc gatgatggct agggggtctg agaggatgat 300

cccccacact gggactgaga cacggcccag actcctacgg gaggcagcag tgaggaatct 360

tgcgcaatgg gggcaaccct gacgcagcca cgccgcgtgc tggaagacgg ccctatgggt 420

tgtaaacagc ttttggtcgg gaagaacccc ggagtttcga ctctggctga cggtaccgat 480

tgaataagca ccggctaact ccgtgccagc agccgcggta atacggaggg tgcaagcgtt 540

aatcggaatt actgggcgta aagcgcgcgt aggtggtttg ataagcgaga tgtgaaagcc 600

ccgggctcaa cctgggaacg gcatttcgaa ctgtcaggct agagtgtggt agagggtagt 660

ggaatttcct gtgtagcggt gaaatgcgta gatataggaa ggaacaccag tggcgaasgc 720

ggctaccagg accaacactg acactgaggt gcgaaagcgt ggggagcaaa caggattaga 780

taccctggta gtscacgctg taaacgatgt caactagccg ttgggactct tgaagtctta 840

gtggcgcagc taacgcacta agttgaccgc ctggggagta cggccgcaag gttaaaactc 900

aaatgaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc gacgcaacgc 960

gaagaacctt acctggcctt gacatgccga gaatcctgca gagatgcggg agtgccttcg 1020

ggaactcgga cacaggtgct gcatggccgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta 1080

agtcccgcaa cgagcgcaac ccctgtggtt agttaccagc acgtaaaggt ggggactcta 1140

gccagactgc ctacgcaagt agtgaggaag gtggggacga cgtcaagtca tcatggccct 1200

tacgtccagg gctgcacacg tgctacaatg gatggtacaa tgggtcgcca cccagcgatg 1260

gggagcaaat ccacaaagcc attctcagtt cggattggag tctgcaactc gactccatga 1320

aggtggaatc gctagtaatc gcgtatcagc aatgacgcgg tgaatacgtt cccgggcctt 1380

gtacacaccg cccgtcaagc gatggaagtc aggagtacct gatgtcgccc cttcaagggg 1440

tgcctagggt aagcctggta actggcgcta agtcgtaaca aggtaacc 1488

<210> 15

<211> 1447

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

agagtttgat cctggctcag aacgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc 60

gcgcccttcg gggtgagcgg cggacgggtg agtaacgcgt gggaacgtgc cctcttctgc 120

ggaatagcca ctggaaacgg tgagtaatac cgcatacgcc cttttgggga aagatttatc 180

ggaggaggat cggcccgcgt tggattaggt agttggtggg gtaatggcct accaagccta 240

cgatccatag ctggttttag aggatgatca gccacactgg gactgagaca cggcccagac 300

tcctacggga ggcagcagtg gggaatctta gacaatgggc gcaagcctga tctagccatg 360

ccgcgtgagt gacgaaggcc ctagggtcgt aaagctcttt cgcctgtgat gataatgaca 420

gtagcaggta aagaaacccc ggctaactcc gtgccagcag ccgcggtaat acggaggggg 480

ttagcgttgt tcggaattac tgggcgtaaa gcgcgcgtag gcggattgga aagtatgggg 540

tgaaatcccg gggctcaacc ccggaactgc ctcataaact tccagtctgg agttcgagag 600

aggtgagtgg aattccgagt gtagaggtga aattcgtaga tattcggagg aacaccagtg 660

gcgaaggcgg ctcactggct cgatactgac gctgaggtgc gaaagtgtgg ggagcaaaca 720

ggattagata ccctggtagt ccacaccgta aacgatgaat gccagtcgtc ggcaagcatg 780

cttgtcggtg acacacctaa cggattaagc attccgcctg gggagtacgg ccgcaaggtt 840

aaaactcaaa ggaattgacg ggggcctgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgac 900

gcaacgcgca gaaccttacc agcgtttgac atccttatcg cggattccag agatggtttc 960

cttcagctcg gctggataag tgacaggtgc tgcatggctg tcgtcagctc gtgtcgtgag 1020

atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccctatctt tagttgctac catttagttg 1080

ggcactctaa agagaccgcc ggtgataagc cggaggaagg tggggatgac gtcaagtcct 1140

catggccctt acacgctggg ctacacacgt gctacaatgg cggtgacaga gggcagctac 1200

ttggcgacaa gatgctaatc cctaaaagcc gtctcagttc ggattgcact ctgcaactcg 1260

ggtgcatgaa gttggaatcg ctagtaatcg cagatcagca tgctgcggtg aatacgttcc 1320

cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca tgggagttgg ttctacccga agccggtgcg 1380

ctaacctttt ggaggcagcc gaccacggta gggtcagcga ctggggtgaa gtcgtaacaa 1440

ggtaacc 1447

<210> 16

<211> 1460

<212> DNA

<213> 胜利盐单胞菌(Halomonas shengliensis)

<400> 16

attgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc ggaaacgatc ctagcttgct 60

aggaggcgtc gagcggcgga cgggtgagta acgcatagga atctgcccgg tagtggggga 120

taacctgggg aaacccaggc taataccgca tacgtcctac gggagaaagc aggggatctt 180

cggaccttgc gctatcggat gagcctatgt cggattagct ggttggtgag gtaatggctc 240

accaaggcga cgatccgtag ctggtctgag aggatgatca gccacatcgg gactgagaca 300

cggcccgaac tcctacggga ggcagcagtg gggaatattg gacaatgggc gcaagcctga 360

tccagccatg ccgcgtgtgt gaagaaggcc ttcgggttgt aaagcacttt cagtggggaa 420

gaaatcctcg gggctaatac cctcgaggga ggacatcacc cacagaagaa gcaccggcta 480

actccgtgcc agcagccgcg gtaatacgga gggtgcgagc gttaatcgga attactgggc 540

gtaaagcgcg cgtaggcggc ctgataagcc ggttgtgaaa gccccgggct caacctggga 600

acggcatccg gaactgtcag gctagagtgc aggagaggaa ggtagaattc ccggtgtagc 660

ggtgaaatgc gtagagatcg ggaggaatac cagtggcgaa ggcggccttc tggactgaca 720

ctgacgctga ggtgcgaaag cgtgggtagc aaacaggatt agataccctg gtagtccacg 780

ccgtaaacga tgtcgactag ccgttggggt ccttgagacc tttgtggcgc agttaacgcg 840

ataagtcgac cgcctgggga gtacggccgc aaggttaaaa ctcaaatgaa ttgacggggg 900

cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgatgcaa cgcgaagaac cttacctacc 960

cttgacatcg agagaacttg gcagagatgc cttggtgcct tcgggaactc tcagacaggt 1020

gctgcatggc cgtcgtcagc tcgtgttgtg aaatgttggg ttaagtcccg taacgagcgc 1080

aatccttgtc cctatttgcc agcgattcgg tcgggaactc tagggagact gccggtgaca 1140

aaccggagga aggtggggac gacgtcaggt catcatggcc cttacgggta gggctacaca 1200

cgtgctacaa tggccggtac aaagggttgc gaagccgcga ggtggagcca atcccgaaaa 1260

gccggtctca gtccggatcg gagtctgcaa ctcgactccg tgaagtcgga atcgctagta 1320

atcgtgaatc agaatgtcac ggtgaatacg ttcccgggcc ttgtacacac cgcccgtcac 1380

accatgggag tggactgcac cagaagtggt tagcctaact tcggagggcg atcaccacgg 1440

tgtggttcat gactggggtg 1460

<210> 17

<211> 1501

<212> DNA

<213> 孤岛海杆状菌(Marinobacter gudaonensis)

<400> 17

agagtttgat cctggctcag attgaacgct ggcggcaggc ttaacacatg caagtcgagc 60

ggtaacaggg ggagcttgct ccctgctgac gagcggcgga cgggtgagta atgcatagga 120

atctgcccag tagtggggga tagcccgggg aaacccggat taataccgca tacgcccttt 180

gggggaaagc aggggatctt cggaccttgc gctattggat gagcctatgt cggattagct 240

agttggtggg gtaaaggccc accaaggcga cgatccgtag ctggtctgag aggatgatca 300

gccacatcgg gactgagaca cggcccgaac tcctacggga ggcagcagtg gggaatattg 360

gacaatgggg gcaaccctga tccagccatg ccgcgtgtgt gaagaaggct ttcgggttgt 420

aaagcacttt cagtgaggag gaaaaccttc tggttaatac ccaggaggct tgacgttact 480

cacagaagaa gcaccggcta actccgtgcc agcagccgcg gtaatacgga gggtgcaagc 540

gttaatcgga attactgggc gtaaagcgcg cgtaggtggt ttgataagcg agatgtgaaa 600

gccccgggct taacctggga acggcatttc gaactgtcag gctagagtgt ggtagagggt 660

agtggaattt cctgtgtagc ggtgaaatgc gtagatatag gaaggaacac cagtggcgaa 720

ggcggctacc tggaccaaca ctgacactga ggtgcgaaag cgtggggagc aaacaggatt 780

agataccctg gtagtccacg ccgtaaacga tgtcaactag ccgttgggac tcttgaagtc 840

ttagtggcgc agctaacgca ctaagttgac cgcctgggga gtacggccgc aaggttaaaa 900

ctcaaatgaa ttgacggggg cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgacgcaa 960

cgcgaagaac cttacctggc cttgacatgt tgggaacttt ccagagatgg attggtgcct 1020

tcgggaaccc aaacacaggt gctgcatggc cgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg 1080

ttaagtcccg taacgagcgc aacccctatc cctagttgct agcagttcgg ctgagaactc 1140

tagggagact gccggtgaca aaccggagga aggtggggat gacgtcaggt catcatggcc 1200

cttacggcca gggctacaca cgtgctacaa tggcgcgcac agagggctgc aaacccgcga 1260

gggggagcca atctcacaaa acgcgtcgta gtccggatcg cagtctgcaa ctcgactgcg 1320

tgaagtcgga atcgctagta atcgtgaatc agaatgtcac ggtgaatacg ttcccgggcc 1380

ttgtacacac cgcccgtcac accatgggag tggattgcac cagaagtggt tagtctaacc 1440

ttcgggagga cgatcaccac ggtgtggttc atgactgggg tgaagtcgta acaaggtaac 1500

c 1501

<210> 18

<211> 1408

<212> DNA

<213> 浅黄海洋杆菌(Pelagibacterium luteolum)

<400> 18

aacgaacgct ggcggcaggc ttaacacatg caagtcgaac gcactcttcg gagtgagtgg 60

cagacgggtg agtaacgcgt gggaatctac ccagtccttc ggaatagctc ctggaaacgg 120

gaattaatac cggatacgcc cttttgggga aagatttatc gggattggat gagcccgcgt 180

aagattagct agttggtggg gtaatggcct accaaggcga cgatctttag ctggtctgag 240

aggatgatca gccacactgg gactgagaca cggcccagac tcctacggga ggcagcagtg 300

gggaatattg gacaatgggc gcaagcctga tccagccatg ccgcgtgagt gatgaaggcc 360

ttagggttgt aaagctcttt caccggtgaa gataatgacg gtaaccggag aagaagcccc 420

ggctaacttc gtgccagcag ccgcggtaat acgaaggggg ctagcgttgt tcggaattac 480

tgggcgtaaa gcgcacgtag gcggattggt cagttagggg tgaaatcccg gagctcaact 540

ccggaactgc ctttaatact gccagtctag agaccgagag aggtaagtgg aactcctagt 600

gtagaggtgg aattcgtaga tattaggaag aacaccagtg gcgaaggcgg cttactggct 660

cggaactgac gctgaggtgc gaaagcgtgg ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt 720

ccacgccgta aactatggaa gctagccgtt ggggtgttta cacttcagtg gcgcagctaa 780

cgcattaagc ttcccgcctg gggagtacgg tcgcaagatt aaaactcaaa ggaattgacg 840

ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc 900

agcccttgac atcccggtcg cgatttccag agatggattt cttcagttcg gctggaccgg 960

tgacaggtgc tgcatggctg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca 1020

acgagcgcaa ccctcgcctt tagttgccat catttagttg ggcactctag agggactgcc 1080

ggtgataagc cggaggaagg tggggatgag gtcaagtcat catggccctt acgggctggg 1140

ctacacacgt gctacaatgg cggtgacaga gggcagctac ttggcgacaa gatgctaatc 1200

cctaaaaacc gtctcagttc ggattgcact ctgcaactcg ggtgcatgaa gttggaatcg 1260

ctagtaatcg cagatcagca tgctgcggtg aatacgttcc cgggccttgt acacaccgcc 1320

cgtcacacca tgggagttgg ttctacccga agccggtgcg ctaacctttt ggaggcagcc 1380

gaccacggta gggtcagcga ctggggtg 1408

<210> 19

<211> 1418

<212> DNA

<213> 粪产碱菌粪亚种(Alcaligenes faecalis subsp. phenolicus)

<400> 19

attgaacgct agcgggatgc tttacacatg caagtcgaac ggcagcgcga gagagcttgc 60

tctcttggcg gcgagtggcg gacgggtgag taatatatcg gaacgtgccc agtagcgggg 120

gataactact cgaaagagtg gctaataccg catacgccct acgggggaaa gggggggatc 180

gcaagacctc tcactattgg agcggccgat atcggattag ctagttggtg gggtaaaggc 240

tcaccaaggc aacgatccgt agctggtttg agaggacgac cagccacact gggactgaga 300

cacggcccag actcctacgg gaggcagcag tggggaattt tggacaatgg gggaaaccct 360

gatccagcca tcccgcgtgt atgatgaagg ccttcgggtt gtaaagtact tttggcagag 420

aagaaaaggt atctcctaat acgagatact gctgacggta tctgcagaat aagcaccggc 480

taactacgtg ccagcagccg cggtaatacg tagggtgcaa gcgttaatcg gaattactgg 540

gcgtaaagcg tgtgtaggcg gttcggaaag aaagatgtga aatcccaggg ctcaaccttg 600

gaactgcatt tttaactgcc gagctagagt atgtcagagg ggggtagaat tccacgtgta 660

gcagtgaaat gcgtagatat gtggaggaat accgatggcg aaggcagccc cctgggataa 720

tactgacgct cagacacgaa agcgtgggga gcaaacagga ttagataccc tggtagtcca 780

cgccctaaac gatgtcaact agctgttggg gccgttaggc cttagtagcg cagctaacgc 840

gtgaagttga ccgcctgggg agtacggtcg caagattaaa actcaaagga attgacgggg 900

acccgcacaa gcggtggatg atgtggatta attcgatgca acgcgaaaaa ccttacctac 960

ccttgacatg tctggaaagc cgaagagatt tggccgtgct cgcaagagaa ccggaacaca 1020

ggtgctgcat ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag 1080

cgcaaccctt gtcattagtt gctacgcaag agcactctaa tgagactgcc ggtgacaaac 1140

cggaggaagg tggggatgac gtcaagtcct catggccctt atgggtaggg cttcacacgt 1200

catacaatgg tcgggacaga gggtcgccaa cccgcgaggg ggagccaatc tcagaaaccc 1260

gatcgtagtc cggatcgcag tctgcaactc gactgcgtga agtcggaatc gctagtaatc 1320

gcggatcaga atgtcgcggt gaatacgttc ccgggtcttg tacacaccgc ccgtcacacc 1380

atgggagtgg gtttcaccag aagtaggtag cctaaccg 1418

<210> 20

<211> 1386

<212> DNA

<213> 海神鲁杰氏菌(Ruegeria marina)

<400> 20

aacgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc gcgcccttcg gggtgagcgg 60

cggacgggtt agtaacgcgt gggaacgtgc ccttctctac ggaatagtcc cgggaaactg 120

ggggtaatac cgtatacgcc ctttggggga aagatttatc ggagaaggat cggcccgcgt 180

tagattaggt agttggtggg gtaatggcct accaagccta cgatctatag ctggttttag 240

aggatgatca gcaacactgg gactgagaca cggcccagac tcctacggga ggcagcagtg 300

gggaatcttg gacaatgggg gcaaccctga tccagccatg ccgcgtgagt gaagaaggcc 360

ctagggtcgt aaagctcttt cgcctgtgaa gataatgacg gtagcaggta aagaaacccc 420

ggctaactcc gtgccagcag ccgcggtaat acggaggggg ttagcgttgt tcggaattac 480

tgggcgtaaa gcgcgcgtag gcggattgga aagttggggg tgaaatccca gggctcaacc 540

ctggaactgc ctccaaaact cccagtcttg agttcgagag aggtgagtgg aattccgagt 600

gtagaggtga aattcgtaga tattcggagg aacaccagtg gcgaaggcgg ctcactggct 660

cgatactgac gctgaggtgc gaaagtgtgg ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt 720

ccacaccgta aacgatgaat gccagtcgtc gggtagcatg ctgctcggtg acacacctaa 780

cggattaagc attccgcctg gggagtacgg ccgcaaggtt aaaactcaaa ggaattgacg 840

ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgca gaaccttacc 900

aacccttgac atcctcggac cgttccagag atggttcttt cccttcgggg accgagtgac 960

aggtgctgca tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tcggttaagt ccggcaacga 1020

gcgcaaccca cacccttagt tgccagcagt tcggctgggc actctagggg aactgcccgt 1080

gataagcggg aggaaggtgt ggatgacgtc aagtcctcat ggcccttacg ggttgggcta 1140

cacacgtgct acaatggtag tgacaatggg ttaatcccaa aaagctatct cagttcggat 1200

tgtcgtctgc aactcgacgg catgaagtcg gaatcgctag taatcgcgta acagcatgac 1260

gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc acaccatggg agttgggtct 1320

acccgaagac ggtgcgccaa cctttcgagg aggcagctgg ccacggtagg ctcagcgact 1380

ggggtg 1386

<210> 21

<211> 1387

<212> DNA

<213> 施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)

<400> 21

catgcagtcg aacggtgaag cagagcttgc tctgtggatc agtggcgaac gggtgagtaa 60

cacgtgagca atctgcccct gactctggga taagcgctgg aaacggcgtc taataccgga 120

tacgagctgc gaaggcatct tcagcagctg gaaagaattt cggtcaggga tgagctcgcg 180

gcctatcagc ttgttggtga ggtaacggct caccaaggcg tcgacgggta gccggcctga 240

gagggtgacc ggccacactg ggactgagac acggcccaga ctcctacggg aggcagcagt 300

ggggaatatt gcacaatggg cgaaagcctg atgcagcaac gccgcgtgag ggacgacggc 360

cttcgggttg taaacctctt ttagcaggaa agaagcgaaa gtgacggtac ctgcagaaaa 420

agcgccggct aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt agggcgcaag cgttatccgg 480

aattattggg cgtaaagagc tcgtaggcgg tctgtcgcgt ctgctgtgaa aacccgaggc 540

tcaacctcgg gcctgcagtg ggtacgggca gactagagtg cggtagggga gattggaatt 600

cctggtgtag cggtggaatg cgcagatatc aggaggaaca ccgatggcga aggcagatct 660

ctgggccgta actgacgctg aggagcgaaa gggtggggag caaacaggct tagataccct 720

ggtagtccac cccgtaaacg ttgggaacta gttgtggggt ccattccacg gattccgtga 780

cgcagctaac gcattaagtt ccccgcctgg ggagtacggc cgcaaggcta aaactcaaag 840

gaattgacgg ggacccgcac aagcggcgga gcatgcggat taattcgatg caacgcgaag 900

aaccttacca aggcttgaca tatacgagaa cgggccagaa atggtcaact ctttggacac 960

tcgtaaacag gtggtgcatg gttgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc 1020

cgcaacgagc gcaaccctcg ttctatgttg ccagcacgta atggtgggaa ctcatgggat 1080

actgccgggg tcaactcgga ggaaggtggg gatgacgtca aatcatcatg ccccttatgt 1140

cttgggcttc acgcatgcta caatggccgg tacaaagggc tgcaataccg cgaggtggag 1200

cgaatcccaa aaagccggtc ccagttcgga ttgaggtctg caactcgacc tcatgaagtc 1260

ggagtcgcta gtaatcgcag atcagcaacg ctgcggtgaa tacgttcccg ggtcttgtac 1320

acaccgcccg tcaagtcatg aaagtcggta acacctgaag ccggtggccc aacccttgtg 1380

gagggag 1387

<210> 22

<211> 1426

<212> DNA

<213> 蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)

<400> 22

aggcggctgg ctccaaaaag gttaccccac cgacttcggg tgttacaaac tctcgtggtg 60

tgacgggcgg tgtgtacaag gcccgggaac gtattcaccg cggcatgctg atccgcgatt 120

actagcgatt ccagcttcat gtaggcgagt tgcagcctac aatccgaact gagaacggtt 180

ttatgagatt agctccacct cgcggtcttg cagctctttg taccgtccat tgtagcacgt 240

gtgtagccca ggtcataagg ggcatgatga tttgacgtca tccccacctt cctccggttt 300

gtcaccggca gtcaccttag agtgcccaac ttaatgatgg caactaagat caagggttgc 360

gctcgttgcg ggacttaacc caacatctca cgacacgagc tgacgacaac catgcaccac 420

ctgtcactct gctcccgaag gagaagccct atctctaggg ttttcagagg atgtcaagac 480

ctggtaaggt tcttcgcgtt gcttcgaatt aaaccacatg ctccaccgct tgtgcgggcc 540

cccgtcaatt cctttgagtt tcagccttgc ggccgtactc cccaggcgga gtgcttaatg 600

cgttaacttc agcactaaag ggcggaaacc ctctaacact tagcactcat cgtttacggc 660

gtggactacc agggtatcta atcctgtttg ctccccacgc tttcgcgcct cagtgtcagt 720

tacagaccag aaagtcgcct tcgccactgg tgttcctcca tatctctacg catttcaccg 780

ctacacatgg aattccactt tcctcttctg cactcaagtc tcccagtttc caatgaccct 840

ccacggttga gccgtgggct ttcacatcag acttaagaaa ccacctgcgc gcgctttacg 900

cccaataatt ccggataacg cttgccacct acgtattacc gcggctgctg gcacgtagtt 960

agccgtggct ttctggttag gtaccgtcaa ggtgccagct tattcaacta gcacttgttc 1020

ttccctaaca acagagtttt acgacccgaa agccttcatc actcacgcgg cgttgctccg 1080

tcagactttc gtccattgcg gaagattccc tactgctgcc tcccgtagga gtctgggccg 1140

tgtctcagtc ccagtgtggc cgatcaccct ctcaggtcgg ctacgcatcg ttgccttggt 1200

gagccgttac ctcaccaact agctaatgcg acgcgggtcc atccataagt gacagccgaa 1260

gccgcctttc aatttcgaac catgcggttc aaaatgttat ccggtattag ccccggtttc 1320

ccggagttat cccagtctta tgggcaggtt acccacgtgt tactcacccg tccgccgcta 1380

acttcataag agcaagctct taatccattc gctcgactgc atgtat 1426

<210> 23

<211> 1392

<212> DNA

<213> 赤红球菌(Rhodococcus ruber)

<400> 23

cggctccctc ccacgagggg ttaggccacc ggcttcgggt gttaccgact ttcatgacgt 60

gacgggcggt gtgtacaagg cccgggaacg tattcaccgc agcgttgctg atctgcgatt 120

actagcgact ccgacttcac ggggtcgagt tgcagacccc gatccgaact gagaccggct 180

ttaagggatt cgctccacct cgcggtatcg cagccctctg taccggccat tgtagcatgt 240

gtgaagccct ggacataagg ggcatgatga cttgacgtcg tccccacctt cctccgagtt 300

gaccccggca gtctcctgcg agtccccacc attacgtgct ggcaacacag gacaagggtt 360

gcgctcgttg cgggacttaa cccaacatct cacgacacga gctgacgaca gccatgcacc 420

acctgtacac cgaccacaag ggaaacccca tctctggggc ggtccggtgt atgtcaaacc 480

caggtaaggt tcttcgcgtt gcatcgaatt aatccacatg ctccgccgct tgtgcgggcc 540

cccgtcaatt cctttgagtt ttagccttgc ggccgtactc cccaggcggg gcgcttaatg 600

cgttagctac ggcacggatc ccgtggaagg aaacccacac ctagcgccca ccgtttacgg 660

cgtggactac cagggtatct aatcctgttc gctacccacg ctttcgctcc tcagcgtcag 720

ttactgccca gagacccgcc ttcgccaccg gtgttcctcc tgatatctgc gcatttcacc 780

gctacaccag gaattccagt ctcccctgca gtactcaagt ctgcccgtat cgcctgcaag 840

cccgcagttg agctgcgggt tttcacagac gacgcgacaa accgcctacg agctctttac 900

gcccagtaat tccggacaac gctcgcaccc tacgtattac cgcggctgct ggcacgtagt 960

tggccggtgc ttcttctgta cctaccgtca cttgcgcttc gtcggtactg aaagaggttt 1020

acaacccgaa ggccgtcatc cctcacgcgg cgtcgctgca tcaggcttgc gcccattgtg 1080

caatattccc cactgctgcc tcccgtagga gtctgggccg tgtctcagtc ccagtgtggc 1140

cggtcgccct ctcaggccgg ctacccgtcg tcgccttggt gggccgttac cccaccaaca 1200

agctgatagg ccgcgggccc atcctgcacc ggaaaacctt tccaccccgg aacatgcatc 1260

ccgaggtcct atccggtatt agacccagtt tcccaggctt atcccgaagt gcagggcaga 1320

tcacccacgt gttactcacc cgttcgccac taatccaccc agcaagctgg gcttcatcgt 1380

tcgactgcat gt 1392

<210> 24

<211> 1405

<212> DNA

<213> 鲁氏不动杆菌(Acinetobacter lwoffii)

<400> 24

acacatgcag tcgagcgggg aagagtagct tgctacttta cctagcggcg gacgggtgag 60

taatgcttag gaatctgcct attagtgggg gacaacatct cgaaagggat gctaataccg 120

catacgtcct acgggagaaa gcaggggacc ttcgggcctt gcgctaatag atgagcctaa 180

gtcggattag ctagttggtg gggtaaaggc ctaccaaggc gacgatctgt agcgggtctg 240

agaggatgat ccgccacact gggactgaga cacggcccag actcctacgg gaggcagcag 300

tggggaatat tggacaatgg ggggaaccct gatccagcca tgccgcgtgt gtgaagaagg 360

ccttttggtt gtaaagcact ttaagcgagg aggaggctac cgagattaat actcttggat 420

agtggacgtt actcgcagaa taagcaccgg ctaactctgt gccagcagcc gcggtaatac 480

agagggtgca agcgttaatc ggatttactg ggcgtaaagc gcgcgtaggt ggccaattaa 540

gtcaaatgtg aaatccccga gcttaacttg ggaattgcat tcgatactgg ttggctagag 600

tatgggagag gatggtagaa ttccaggtgt agcggtgaaa tgcgtagaga tctggaggaa 660

taccgatggc gaaggcagcc atctggccta atactgacac tgaggtgcga aagcatgggg 720

agcaaacagg attagatacc ctggtagtcc atgccgtaaa cgatgtctac tagccgttgg 780

ggcctttgag gctttagtgg cgcagctaac gcgataagta gaccgcctgg ggagtacggt 840

cgcaagacta aaactcaaat gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt 900

taattcgatg caacgcgaag aaccttacct ggtcttgaca tagtaagaac tttccagaga 960

tggattggtg ccttcgggaa cttacataca ggtgctgcat ggctgtcgtc agctcgtgtc 1020

gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctt ttccttattt gccagcgggt 1080

taagccggga actttaagga tactgccagt gacaaactgg aggaaggcgg ggacgacgtc 1140

aagtcatcat ggcccttacg accagggcta cacacgtgct acaatggtcg gtacaaaggg 1200

ttgctacctc gcgagaggat gctaatctca aaaagccgat cgtagtccgg attggagtct 1260

gcaactcgac tccatgaagt cggaatcgct agtaatcgcg gatcagaatg ccgcggtgaa 1320

tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccatg ggagtttgtt gcaccagaag 1380

taggtagtct aaccgtaagg aggac 1405

<210> 25

<211> 1409

<212> DNA

<213> 松嫩假单胞菌(Pseudomonas songnenensis)

<400> 25

cacatgcagt cgagcggatg aagagagctt gctctctgat tcagcggcgg acgggtgagt 60

aatgcctagg aatctgcctg gtagtggggg acaacgtttc gaaaggaacg ctaataccgc 120

atacgtccta cgggagaaag caggggacct tcgggccttg cgctatcaga tgagcctagg 180

tcggattagc tagttggtga ggtaaaggct caccaaggcg acgatccgta actggtctga 240

gaggatgatc agtcacactg gaactgagac acggtccaga ctcctacggg aggcagcagt 300

ggggaatatt ggacaatggg cgaaagcctg atccagccat gccgcgtgtg tgaagaaggt 360

cttcggattg taaagcactt taagttggga ggaagggcag taagctaata ccttgctgtt 420

ttgacgttac cgacagaata agcaccggct aacttcgtgc cagcagccgc ggtaatacga 480

agggtgcaag cgttaatcgg aattactggg cgtaaagcgc gcgtaggtgg ttcgttaagt 540

tggatgtgaa agccccgggc tcaacctggg aactgcatcc aaaactggcg agctagagta 600

tggcagaggg tggtggaatt tcctgtgtag cggtgaaatg cgtagatata ggaaggaaca 660

ccagtggcga aggcgaccac ctgggctaat actgacactg aggtgcgaaa gcgtggggag 720

caaacaggat tagataccct ggtagtccac gccgtaaacg atgtcgacta gccgttggga 780

tccttgagat cttagtggcg cagctaacgc attaagtcga ccgcctgggg agtacggccg 840

caaggttaaa actcaaatga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta 900

attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg ccttgacatg cagagaactt tccagagatg 960

gattggtgcc ttcgggaact ctgacacagg tgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt 1020

gagatgttgg gttaagtccc gtaacgagcg caacccttgt ccttagttac cagcacgtta 1080

aggtgggcac tctaaggaga ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa 1140

gtcatcatgg cccttacggc ctgggctaca cacgtgctac aatggtcggt acaaagggtt 1200

gccaagccgc gaggtggagc taatcccata aaaccgatcg tagtccggat cgcagtctgc 1260

aactcgactg cgtgaagtcg gaatcgctag taatcgtgaa tcagaatgtc acggtgaata 1320

cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc acaccatggg agtgggttgc tccagaagta 1380

gctagtctaa ccttcggggg gacggtacc 1409

Claims (10)

1.用于降解目标土壤中原油的菌株组合配伍方法，包括如下步骤：

(a1)参照方法A和方法B筛选菌株；

(a2)将1-3种方法A筛选的菌株和1-3种方法B筛选的菌株进行组合，得到用于降解目标土壤中原油的菌株组合；

方法A包括如下步骤：从候选菌株中筛选与目标土壤中优势菌种相似度大于88％的菌株；

方法B包括如下步骤：从候选菌株中筛选与经过生物激活的目标土壤中竞争优势菌种相似度大于88％的菌株；

所述候选菌株为具有原油利用能力的菌株。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：

方法A包括如下(b1)-(b3)所述的步骤：

(b1)利用T-RFLP分析目标土壤中微生物菌落结构，筛选丰度最高的n种T-RFs；

(b2)获得步骤(b1)筛选的n种T-RFs代表的细菌16S rDNA作为参照序列；

(b3)在候选菌株中筛选16S rDNA与步骤(a2)中的任一种参照序列相似度大于88％的菌株；

方法B包括如下(c1)-(c3)所示的步骤：

(c1)利用T-RFLP分析经过生物激活的目标土壤中微生物菌落结构，筛选激活前后丰度增长最多的n种T-RFs；

(c2)获得步骤(c1)筛选的n种T-RFs对应的细菌16S rDNA作为参照序列；

(c3)在候选菌株中筛选16S rDNA与步骤(a2)中的任一种参照序列相似度大于88％的菌株；

n为1-10中任意自然数。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：

所述(b2)或(c2)中，所述T-RFs代表的细菌16S rDNA的获得方式如下：将待测土壤菌落16S rDNA文库导入大肠杆菌并通过蓝白斑筛选阳性克隆，利用T-RFLP对阳性克隆进行分析，将T-RFs与步骤(b1)或(c1)中筛选的T-RFs相同的阳性克隆的16S rDNA片段测序获得所述T-RFs代表的细菌16S rDNA。

4.如权利要求1至3任一所述的方法，其特征在于：

所述具有原油利用能力的菌株筛选方法如下：将菌株接种于含有10g/L原油的培养基中，使培养体系初始OD600＝0.1，然后30度、150rpm培养7天，在培养结束后检测培养体系OD600，筛选OD600值大于20的菌株。

5.如权利要求1至4任一所述的方法，其特征在于：

所述生物激活方法如下：向目标土壤中加入氮和磷，在25±1℃温度下运行60天，控制土壤含水率在20±3％；所述氮和磷与土壤中总有机碳的质量比为：10:1:200。

6.权利要求1至5任一所述方法在降解原油或原油污染治理中的应用。

7.利用权利要求1-6中任一所述方法得到的菌株组合。

8.菌株组合，由如下(A)-(E)的菌株组成；

(A)在中国普通微生物菌种保藏管理中心的菌种编号为1.6444的胜利盐单胞菌Halomonas shengliensis；

(B)在中国普通微生物菌种保藏管理中心的菌种编号为1.6294的孤岛海杆状菌Marinobactergudaonensis；

(C)在中国普通微生物菌种保藏管理中心的菌种编号为1.10267的浅黄海洋杆菌Pelagibacterium luteolum；

(D)在德国微生物菌种保藏中心的菌种编号为16503的粪产碱菌粪亚种Alcaligenesfaecalis subsp.phenolicus；

(E)在中国普通微生物菌种保藏管理中心的菌种编号为1.9108的海神鲁杰氏菌Ruegeria marina。

9.权利要求7或8所述的菌株组合在下述任一中的应用：

1)降解原油；

2)制备降解原产品；

3)消除或降低原油污染；

4)制备消除或降低原油污染产品；

5)消除或降低土壤原油污染；

6)制备消除或降低土壤原油污染产品。

10.土壤中原油降解方法，包括如下步骤：将以权利要求7或8所述的菌株组合加至目标土壤中进行培养，实现土壤中的原油降解。