CN110467643B

CN110467643B - 从平卧菊三七中提取脑苷脂的方法及脑苷脂的用途

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Publication number: CN110467643B
Application number: CN201910821344.1A
Authority: CN
Inventors: 吴磊; 胡居吾; 熊伟; 韩晓丹; 涂招秀; 黄斌华
Original assignee: Institute of Applied Chemistry Jiangxi Academy of Sciences
Current assignee: JIANGXI HUAZIREN AGRICULTURAL DEVELOPMENT Co.,Ltd.; Institute of Applied Chemistry Jiangxi Academy of Sciences
Priority date: 2019-09-02
Filing date: 2019-09-02
Publication date: 2020-07-28
Anticipated expiration: 2039-09-02
Also published as: CN110467643A

Abstract

本发明属于天然产物分离纯化技术领域，公开一种从平卧菊三七中提取脑苷脂的方法，其以平卧菊三七为原料，利用两相溶剂混合萃取、柱色谱和结晶等步骤能够快速从平卧菊三七中分离得到一种新的脑苷脂，得到的产品纯度高，天然分子不被破坏，适合大规模生产，得到的脑苷脂具有优秀的抗炎活性，可以用于开发相关抗炎药物之用。

Description

从平卧菊三七中提取脑苷脂的方法及脑苷脂的用途

技术领域

本发明属于天然产物分离纯化技术领域，尤其是涉及一种从平卧菊三七中提取脑苷脂的方法及脑苷脂的用途。

背景技术

平卧菊三七(Gynura procumbens(Lour.)Merr.)为菊科，三七属植物，又名蔓三七、蛇接骨、续命草、神仙草，味辛、微苦、性凉，为多年生草本药食两用植物，广泛分布在中国、马来西亚、泰国、印度尼西亚、韩国和菲律宾等国家。平卧菊三七具有广泛的药理作用，2009年上半年，中国疾病预防控制中心、国家食品质量监督检验中心、中国食品发酵工业研究院等有关单位完成了平卧菊三七毒理学检验、卫生学检验和多种成分的检验，结论是：无毒、无致畸影响；其有效成份具有通经活络，消炎止咳，散淤消肿，活血生肌，治疗跌打损伤，支气管肺炎、肺结核等功效；能延缓衰老、激活免疫细胞、改善机体免疫功能、提高人体免疫力，增强人体的新陈代谢并对记忆障碍有一定改善作用；具有降血压、降血脂、降血糖、抗氧化、抗溃疡和预防慢性肾病、抑制乙型肝炎的显著效果；对预防和治疗心脑血管疾病、糖尿病等有一定的疗效；还具有抗病毒、抗菌活性、抑制骨髓癌和志贺样毒素细胞的活性。另一方面，平卧菊三七是一种药食兼可的独特植物，具有极好的营养价值，因此，广泛利用于食品医药工业、日用化工工业等领域，是一种极具潜力和高经济价值的药食两用植物。但截至目前为止，对其功效成分及其作用机制研究还不够深入。

脑苷脂(cerebroside)亦称为酰基鞘氨醇六碳糖苷，为神经鞘糖脂的一种，是酰基鞘氨醇上以糖苷键结合一分子六碳糖而成的化合物。研究发现脑苷脂类成分为细胞膜的结构成分，主要存在于哺乳动物的脑组织、表皮，以及心脏、肝脏、红细胞的膜组织中，在某些高度分化的组织膜表面含量也较高，如髓鞘、小肠刷状缘、叶绿体及某些流感病毒等。近年来对药用植物和药用真菌中的脑苷脂类成分的报道较多，并不断有新的脑苷脂类成分被发现。现代的药理研究表明，一些脑苷脂类成分具有抗菌抗病毒、抑制肿瘤和调控细胞生长等药理活性。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的是提供一种从平卧菊三七中提取脑苷脂的方法，同时，公开上述方法制备得到的脑苷脂的用途。

为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种从平卧菊三七中提取脑苷脂的方法，其包括以下步骤：

步骤1、将原料平卧菊三七洗净、阴干、粉碎，得到粉料；

步骤2、将步骤1中得到的粉料与体积浓度50～90％的乙醇水溶液按料液比1:1～30g/mL混合，采用超声波提取，超声波功率为50～100W，提取温度为40～60℃，提取时间为10～60min，得到提取液，然后过滤、减压浓缩成粗浸膏；

步骤3、将步骤2中得到的粗浸膏用水超声振荡成悬浮液，再使用等体积的第一有机溶剂进行萃取，减压浓缩制成萃取后的浸膏；

步骤4、将步骤3中得到的萃取后的浸膏用体积浓度1～20％的甲醇溶液溶解，得到浸膏初步纯化产物的甲醇溶液，将浸膏初步纯化产物的甲醇溶液进行中高压柱色谱分离纯化，使用体积浓度20～100％的甲醇溶液梯度洗脱；洗脱液经薄层色谱检测，合并相同馏分，将具有相同特征的馏分浓缩至干，并加入第二有机溶剂进行结晶，得到结晶溶液；

步骤5、将步骤4中得到的结晶溶液静置、离心分离，得到白色粉末状沉淀，即为目标产物脑苷脂，结构式如下：

进一步地，上述的平卧菊三七原料为全株、或根、茎或叶中的一种。

进一步地，上述的步骤3中，第一有机溶剂为正己烷/甲醇、正丁醇/三氯甲烷、二氯甲烷/甲醇、乙酸乙酯/甲醇中的一种。

进一步地，上述的步骤4中，中高压柱色谱分离纯化采用大孔树脂、硅胶、C18或者葡聚糖凝胶柱层析中的一种或者两种以上混合。

进一步地，上述的步骤4中，第二有机溶剂为正丁醇、石油醚、氯仿、乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮中的一种或两种以上混合。

本发明的另一目的是提供由所述方法提取的脑苷脂化合物在制备抗炎药物中的应用。

由于采用如上所述的技术方案，本发明具有如下优越性：

本发明从平卧菊三七中提取脑苷脂的方法，其原料来源广泛，易于获取，方法简单，操作简便，生产成本低，利用两相溶剂混合萃取、柱色谱和结晶等步骤能够快速从平卧菊三七中分离得到一种新的脑苷脂，萃取效果佳，得到的产品纯度高，天然分子不被破坏，适合大规模生产；得到的脑苷脂具有优秀的抗炎活性，能够用于开发相关抗炎药物之用。

附图说明

图1是本发明从平卧菊三七中提取脑苷脂的方法的实施例1中提取的脑苷脂的氢谱图；

图2是本发明从平卧菊三七中提取脑苷脂的方法的实施例1中提取的脑苷脂的碳谱图；

图3是本发明从平卧菊三七中提取脑苷脂的方法的实施例1中提取的脑苷脂的COSY谱图；

图4是本发明从平卧菊三七中提取脑苷脂的方法的实施例1中提取的脑苷脂的HMBC谱图；

图5是不同浓度脑苷脂作用于LPS刺激RAW 264.7细胞炎症因子的释放。

具体实施方式

参照以下实施例可以对本发明作进一步详细说明；但是，以下实施例仅仅是例证，本发明并不局限于这些实施例。

一种从平卧菊三七中提取脑苷脂的方法，其包括以下步骤：

步骤1、将原料平卧菊三七洗净、阴干、粉碎，粉碎后过80～100目筛，得到粉料；其中，平卧菊三七原料为全株、或根、茎或叶中的一种；

步骤2、将步骤1中得到的粉料与体积浓度50～90％的乙醇溶液按料液比1:1～30g/mL混合，采用超声波提取1～5次，超声波功率为50～100W，频率为20～40KHz，提取温度为40～60℃，每次提取时间为10～60min，超声波提取1～5次，得到提取液，然后过滤、减压浓缩成粗浸膏；

其中，上述的粉料与乙醇溶液的料液比优选1:10～20g/mL，乙醇溶液的体积浓度优选80～90％，超声波提取条件：提取次数优选3～4次，每次20～30min，提取温度优选40℃；

步骤3、将步骤2中得到的粗浸膏用少量水超声振荡成悬浮液，再使用与悬浮液等体积的第一有机溶剂进行萃取，萃取次数3～5次，减压浓缩制成萃取后的浸膏；上述的萃取剂为正己烷/甲醇、正丁醇/三氯甲烷、二氯甲烷/甲醇、乙酸乙酯/甲醇中的一种，萃取剂的两相混合溶剂的体积比为(4:1)～(1:4)；

步骤4、将步骤3中得到的萃取后的浸膏用体积浓度1％～20％的甲醇溶液溶解，得到浸膏初步纯化产物的甲醇溶液，将浸膏初步纯化产物的甲醇溶液进行中高压柱色谱分离纯化，使用体积浓度20～100％的甲醇溶液梯度洗脱；洗脱液经薄层色谱(Thin LayerChromatography，TLC)检测，合并相同馏分，将具有相同特征的馏分浓缩至干，并加入第二有机溶剂在0～4℃条件下结晶12～24h，得到结晶溶液；

其中，结晶过程中加入的第二有机溶剂的质量是浓缩固体的7～10倍，有机溶剂为正丁醇、石油醚、氯仿、乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮中的一种或两种以上混合，两种以上有机溶剂按体积比进行混合；优选氯仿与甲醇混合，混合比例为1:3，总使用量是浓缩固体的10倍；优选氯仿与甲醇混合，混合比例为1:4，总使用量是浓缩固体的8倍；优选氯仿与甲醇混合，混合比例为1:3，总使用量是浓缩固体的10倍；优选正丁醇、石油醚和丙酮混合，混合比例为1:1:1，总使用量是浓缩固体的9倍；优选乙醇和乙酸乙酯混合，混合比例为2:1，总使用量是浓缩固体的7倍；优选氯仿、甲醇和乙醇混合，混合比例为1:1:2，总使用量是浓缩固体的10倍；

步骤5、将步骤4中得到的结晶溶液在3～5℃下静置30～60min，然后离心，离心机转速为4000～5000r/min,离心时间为20～30min，得到白色粉末状沉淀，即为目标产物脑苷脂，结构式如下：

目标产物脑苷脂的分子式为C₄₈H₉₁O₉N，化学名为化合名为：1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2R，6E，9R，12E)-2-[(2′R)-2′-羟基二十五碳酰胺基]-1，9-二羟基-十七碳-6，12-二烯，其对应英文名为：1-O-β-D-glucopyranosyl-(2R,6E,9R,12E)-2-[(2′R)-2′-hydroxylpentacosaneoyl-amino]-6,12-heptadecene-1,9-diol。该脑苷脂化合物为白色，其熔点为(mp)：168～170℃，

＝+9.1(c0.11,MeOH)；紫外光谱分析其在218nm有最大吸收，红外光谱分析显示在3353cm^-1(NH，OH)，2920cm^-1(CH₂),2851cm^-1,1649cm^-1(-CONH-)，1342cm^-1(CH₃)处有吸收。

上述的步骤4中，中高压柱色谱分离纯化采用大孔树脂、硅胶、C18或者葡聚糖凝胶柱层析中的一种或者两种以上混合。

以下通过实施例详细说明本发明提供的脑苷脂及其提取制备方法。

实施例1

取1000g粉碎的平卧菊三七叶，按料液比1g:10mL加入体积百分浓度80％的乙醇水溶液，超声波提取3次，超声波功率为50W，频率为20KHz，提取温度为40℃，每次提取时间为20min，得到提取液，然后过滤、减压浓缩成粗浸膏；在粗浸膏中加入少量水超声震荡成悬浮液，再使用正丁醇/三氯甲烷进行萃取，正丁醇与三氯甲烷的体积比为3：1，萃取次数为3次，减压浓缩成萃取后的浸膏；得到的萃取后的浸膏用体积浓度10％的甲醇溶液溶解，得到浸膏初步纯化产物的甲醇溶液，将浸膏初步纯化产物的甲醇溶液进行中高压柱色谱分离纯化，使用体积浓度20～100％的甲醇溶液梯度洗脱；洗脱液经薄层色谱检测，合并相同馏分，将具有相同特征的馏分浓缩至干，并加入甲醇在4℃条件下结晶24h，得到结晶溶液；得到的结晶溶液在5℃下静置30min，然后离心，离心机转速为4000r/min,离心时间为30min，得到白色粉末状沉淀2.654g；白色粉末状沉淀物经一维和二维核磁共振谱鉴定为1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2R，6E，9R，12E)-2-[(2′R)-2′-羟基二十五碳酰胺基]-1，9-二羟基-十七碳-6，12-二烯，鉴定数据如表1所示。

表1.1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2R，6E，9R，12E)-2-[(2′R)-2′-羟基二十五碳酰胺基]-1，9-二羟基-十七碳-6，12-二烯的¹H-NMR(400MHz)和¹³C-NMR(100MHz)谱数据(CDCl₃,δ,ppm,J/Hz)

HR-ESIMS[m/z 848.6694[M+Na]+确定分子量为825.6316，参照图1、图2、图3，结合氢谱和碳谱确定其分子式为C48H91O9N的1H-NMR和13C-NMR数据表明存在单糖的信号，该单糖端基质子信号在δH 5.02处具有吸收，在δH4.02处具有一个与氮合的甲基质子的酰胺键，在δC 177.13处具有一个羰基碳，以及一个脂肪族长链(在δH 0.88处具有末端甲基质子，在δH 1.26处具有广泛的亚甲基质子信号)；以上这些数据是脑苷脂类化合物具有的特征数据，表明该化合物是脑苷脂类物质。

参照图4，通过HMBC实验确定化合物由三个部分的连接而成。在化合物的HMBC谱中，长链脂肪酸部分的δ177.13(c-1′)处的羰基信号与长链碱基部分的δ4.02(H-2)处的质子信号相关。13C核磁共振谱中δ105.63、75.34、78.55、78.64、71.08和62.83处的信号表明，化合物中的糖部分是β-吡喃葡萄糖苷。H-1′[δ5.02(1H，d，7.7Hz)]和H-2′[4.07(1H，m)]之间的耦合常数支持糖的β-D-构型。此外，长链碱基δ70.53(C-1)处的碳信号与吡喃葡萄糖基δ5.02(H-1′)处的端基质子信号之间的相关性表明β-D-葡萄糖与LCB的C-1位置相连。

1H和13C核磁共振波谱还显示在鞘氨醇部分存在典型的△6双键[δH 5.43(dd，J＝15.3，5.8Hz，H-6)，δC 133.45(C-6)；δH 5.73(dt，J＝15.3，5.8Hz，H-7)，δC 126.93(C-7)]和另外的双键[δH 5.38(2h，m，H-12和H-13)，δC 130.63(C-12和C-13)]。基于H-5/C-6、H-6/C-7、H-7/C-8、H-8/C-7、H-11/C-12和H-14/C-13的COSY相关和关键HMBC相关，双键的位置分别为C-6和C-12。此外，6，7烯基键被发现是反式的，由相邻耦合常数(J6,7＝15.3，5.8Hz)证明。12，13烯基键也被发现是反式的，C-11和C-14的化学位移(32.38，32.88)证明了这一点。通常顺式双键旁边的碳信号出现在δ27–28处，而反式双键的信号出现在δ32–33处。根据这些信息，能够确定化合物是1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2R，6E，9R，12E)-2-[(2′R)-2′-羟基二十五碳酰胺基]-1，9-二羟基-十七碳-6，12-二烯。

实施例2

取2000g粉碎的平卧菊三七叶，按料液比1g:20mL加入体积百分浓度70％的乙醇水溶液，超声波提取3次，超声波功率为50W，频率为20KHz，提取温度为40℃，每次提取时间为20min，得到提取液，然后过滤、减压浓缩成粗浸膏；在粗浸膏中加入少量水超声震荡成悬浮液，再使用正己烷/甲醇进行萃取，正己烷与甲醇的体积比为4：1，萃取次数为3次，减压浓缩成萃取后的浸膏；得到的萃取后的浸膏用体积浓度8％的甲醇溶液溶解，得到浸膏初步纯化产物的甲醇溶液，将浸膏初步纯化产物的甲醇溶液进行中高压柱色谱分离纯化，使用体积浓度20～100％的甲醇溶液梯度洗脱；洗脱液经薄层色谱检测，合并相同馏分，将具有相同特征的馏分浓缩至干，并加入正丁醇进行结晶，得到结晶溶液；得到的结晶溶液在3℃下静置50min，然后离心，离心机转速为4200r/min,离心时间为30min，得到白色粉末状沉淀4.185g；白色粉末状沉淀物经一维和二维核磁共振谱鉴定为1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2R，6E，9R，12E)-2-[(2′R)-2′-羟基二十五碳酰胺基]-1，9-二羟基-十七碳-6，12-二烯，鉴定数据如表1所示。

实施例3

取1500g粉碎的平卧菊三七根，按料液比1g:10mL加入体积百分浓度50％的乙醇水溶液，超声波提取4次，超声波功率为70W，频率为23KHz，提取温度为45℃，每次提取时间为30min，得到提取液，然后过滤、减压浓缩成粗浸膏；在粗浸膏中加入少量水超声震荡成悬浮液，再使用二氯甲烷/甲醇进行萃取，二氯甲烷与甲醇的体积比为2：1，萃取次数为3次，减压浓缩成萃取后的浸膏；得到的萃取后的浸膏用体积浓度15％的甲醇溶液溶解，得到浸膏初步纯化产物的甲醇溶液，将浸膏初步纯化产物的甲醇溶液进行中高压柱色谱分离纯化，使用体积浓度20～100％的甲醇溶液梯度洗脱；洗脱液经薄层色谱检测，合并相同馏分，将具有相同特征的馏分浓缩至干，并加入混合比例为1:3的氯仿与甲醇进行结晶，得到结晶溶液；得到的结晶溶液在4℃下静置45min，然后离心，离心机转速为4500r/min,离心时间为25min，得到白色粉末状沉淀3.254g；白色粉末状沉淀物经一维和二维核磁共振谱鉴定为1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2R，6E，9R，12E)-2-[(2′R)-2′-羟基二十五碳酰胺基]-1，9-二羟基-十七碳-6，12-二烯，鉴定数据如表1所示。

实施例4

取2500g粉碎的平卧菊三七全株，按料液比1g:25mL加入体积百分浓度60％的乙醇水溶液，超声波提取2次，超声波功率为80W，频率为30KHz，提取温度为55℃，每次提取时间为12min，得到提取液，然后过滤、减压浓缩成粗浸膏；在粗浸膏中加入少量水超声震荡成悬浮液，再使用乙酸乙酯/甲醇进行萃取，乙酸乙酯与甲醇的体积比为1：2，萃取次数为5次，减压浓缩成萃取后的浸膏；得到的萃取后的浸膏用体积浓度18％的甲醇溶液溶解，得到浸膏初步纯化产物的甲醇溶液，将浸膏初步纯化产物的甲醇溶液进行中高压柱色谱分离纯化，使用体积浓度20～100％的甲醇溶液梯度洗脱；洗脱液经薄层色谱检测，合并相同馏分，将具有相同特征的馏分浓缩至干，并加入混合比例为1:1:1的正丁醇、石油醚和丙酮进行结晶，得到结晶溶液；得到的结晶溶液在5℃下静置60min，然后离心，离心机转速为4800r/min,离心时间为22min，得到白色粉末状沉淀5.324g；白色粉末状沉淀物经一维和二维核磁共振谱鉴定为1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2R，6E，9R，12E)-2-[(2′R)-2′-羟基二十五碳酰胺基]-1，9-二羟基-十七碳-6，12-二烯，鉴定数据如表1所示。

实施例5

取3000g粉碎的平卧菊三七叶，按料液比1g:30mL加入体积百分浓度90％的乙醇水溶液，超声波提取4次，超声波功率为100W，频率为40KHz，提取温度为60℃，每次提取时间为10min，得到提取液，然后过滤、减压浓缩成粗浸膏；在粗浸膏中加入少量水超声震荡成悬浮液，再使用正丁醇/三氯甲烷进行萃取，正丁醇/三氯甲烷的体积比为1：3，萃取次数为3次，减压浓缩成萃取后的浸膏；得到的萃取后的浸膏用体积浓度20％的甲醇溶液溶解，得到浸膏初步纯化产物的甲醇溶液，将浸膏初步纯化产物的甲醇溶液进行中高压柱色谱分离纯化，使用体积浓度20～100％的甲醇溶液梯度洗脱；洗脱液经薄层色谱检测，合并相同馏分，将具有相同特征的馏分浓缩至干，并加入混合比例为1:1:2的氯仿、甲醇和乙醇进行结晶，得到结晶溶液；得到的结晶溶液在4℃下静置50min，然后离心，离心机转速为5000r/min,离心时间为20min，得到白色粉末状沉淀6.782g；白色粉末状沉淀物经一维和二维核磁共振谱鉴定为1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2R，6E，9R，12E)-2-[(2′R)-2′-羟基二十五碳酰胺基]-1，9-二羟基-十七碳-6，12-二烯，鉴定数据如表1所示。

下面详细提供本发明从平卧菊三七中提取脑苷脂的方法制备的脑苷脂用途实验。

1.待评价样品：上述各个实施例制备的1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2R，6E，9R，12E)-2-[(2′R)-2′-羟基二十五碳酰胺基]-1，9-二羟基-十七碳-6，12-二烯的抗炎活性评价。

2.试验方法：

(1)、RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)从美国典型培养物保藏中心(ATCC)购得，用1640培养基(含10％胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素)于37℃、5％CO₂培养箱中培养。每三天传代一次，细胞复苏后，传至4代后方可用于建模。

(2)、采用MTT法检测细胞存活率：选取对数生长期RAW 264.7细胞，按1×10⁶个/mL、100μL/孔接种于96孔板中，置于CO₂培养箱培养过夜后，吸取旧培养基，加入待测药物的新培养基继续培养24小时，吸取旧培养基，于每孔中加入MTT工作液100μL，继续孵育3h后，每孔加入MTT终止液100μL继续培养16～20小时后，用酶标仪在550nm处测定OD值，实验重复3次，计算细胞的相对存活率。相对细胞存活率＝(实验组孔吸光值-空白组孔吸光值)/(对照组孔吸光值-空白组孔吸光值)×100％

3.实验结果：

重点考察不同浓度的脑苷脂对LPS刺激RAW 264.7细胞上清液的炎症因子分泌的影响。

首先通过MTT实验考察了脑苷脂对细胞存活率的影响：如图5(A)所示，说明在给药浓度为6.25～100μg/mL范围内，与空白对照组相比，无明显差异，对细胞并无毒性。采用Griess法检测不同浓度对LPS刺激RAW264.7细胞的一氧化氮(NO)释放量以及用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中PGE₂和TNF-α的分泌量，结果如图5(B、C、D)所示，将空白对照组的细胞因子水平为100％，实验组以此为对照，研究表明，随着给药浓度的增加，NO的分泌水平分别为92.35％、83.65％、63.45％、47.02％和24.35％；PGE₂的分泌水平分别为86.35％、63.65％、39.45％、27.02％和14.35％；TNF-α的分泌水平分别为95.35％、86.65％、68.45％、45.02％和22.36％；炎症因在的释放水平随着给药浓度的增加而逐渐减少，并呈现出浓度依赖关系，另一方面当给药浓度为100μg/mL时，炎症因子的释放水平达到最低值，与空白对照组相比，存在显著性差异(P＜0.05)。

实验结果充分说明1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2R，6E，9R，12E)-2-[(2′R)-2′-羟基二十五碳酰胺基]-1，9-二羟基-十七碳-6，12-二烯具有显著的抗炎作用，能够广泛应用在抗炎药品制备中。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种从平卧菊三七中提取脑苷脂的方法，其特征是：其包括以下步骤：

步骤1、将原料平卧菊三七洗净、阴干、粉碎，得到粉料；

步骤3、将步骤2中得到的粗浸膏用水超声振荡成悬浮液，再使用等体积的第一有机溶剂进行萃取，减压浓缩制成萃取后的浸膏；第一有机溶剂为正己烷/甲醇、正丁醇/三氯甲烷、二氯甲烷/甲醇、乙酸乙酯/甲醇中的一种；

步骤4、将步骤3中得到的萃取后的浸膏用体积浓度1～20％的甲醇溶液溶解，得到浸膏初步纯化产物的甲醇溶液，将浸膏初步纯化产物的甲醇溶液进行中高压柱色谱分离纯化，使用体积浓度20～100％的甲醇溶液梯度洗脱；洗脱液经薄层色谱检测，合并相同馏分，将具有相同特征的馏分浓缩至干，并加入第二有机溶剂进行结晶，得到结晶溶液；第二有机溶剂为正丁醇、石油醚、氯仿、乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮中的一种或两种以上混合；

2.根据权利要求1所述的从平卧菊三七中提取脑苷脂的方法，其特征是：其平卧菊三七原料为全株、根、茎、叶中的一种。

3.根据权利要求1所述的从平卧菊三七中提取脑苷脂的方法，其特征是：步骤4中，中高压柱色谱分离纯化采用大孔树脂、硅胶、C18或者葡聚糖凝胶柱层析中的一种或者两种以上混合。

4.一种权利要求1～3中任一权利要求的方法所提取的脑苷脂化合物在制备抗炎药物中的应用。