CN115974718B - 蔓三七草酰胺ⅰ及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于植物化学成分分析及天然产物应用领域，公开了一种蔓三七草酰胺Ⅰ及其制备方法和应用，该制备方法将干燥的蔓三七粉碎，加入溶剂Ⅰ进行热回流提取，过滤，减压浓缩成浸膏；将浸膏加入溶剂Ⅱ中，超声振荡成悬浮液，过滤，合并滤液，减压浓缩，得到浓缩液；将浓缩液进行中高压柱色谱分离，使用甲醇水溶液等度洗脱；收集洗脱液，减压浓缩得到蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分；将蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分溶解，结晶所得白色沉淀即为蔓三七草酰胺Ⅰ。本发明提出的制备方法纯度高、天然分子不被破坏、高效、投资少，成本低，且适合大规模生产，所得蔓三七草酰胺Ⅰ可用于降尿酸药物。
Description
技术领域
本发明涉及天然产物分离纯化技术领域，尤其涉及蔓三七草酰胺Ⅰ及其制备方法和应用。
背景技术
平卧菊三七为菊科，三七属植物，又名蔓三七，味辛、微苦、性凉，为多年生草本植物。作为中药材，主要用于治疗发热、皮疹、肾病、偏头痛、便秘、高血压和糖尿病；利用其通经活络，消肿止痛，消炎止咳，治疗跌打损伤，支气管肺炎、肺结核等。药理研究表明平卧菊三七具有消炎、抗癌、抗病毒、降压、降糖、降脂、抗氧化、抗溃疡等功效，平卧菊三七也具有极好的营养价值。因此，可广泛利用于医药工业、日用化工工业等领域。但截至目前为止，对其功效成分及其作用机制研究还不够深入。
神经酰胺（ceramide）主要存在于动物界,植物中也有分布。在某些高度特化的组织膜表面浓度较高,如髓鞘、小肠刷状缘、叶绿体及某些流感病毒等。神经酰胺分子由长链鞘氨醇通过酰胺键与长链脂肪酸共价结合而成，虽然分子中含有数个亲水性基团，但因含两条长烷基链总体极性不大。另外, 神经酰胺在生物膜极性与非极性界面可形成广泛的氢键网络,这也是构成生物膜层状结构稳定性的重要因素。因此，神经酰胺活性作用温和,毒副作用小。随着其抗肿瘤、抗病毒、免疫调节等多种活性的发现,可望开发成为防治慢性疾病的新药。
发明内容
本发明的目的是提供一种蔓三七草酰胺Ⅰ及其制备方法和应用，本发明从蔓三七中分离提取得到一种神经酰胺，经鉴定为蔓三七草酰胺Ⅰ，蔓三七草酰胺Ⅰ可用于降尿酸。
为了解决上述技术问题，本发明是这样实现的：
蔓三七草酰胺Ⅰ，其结构式如下：
本发明提供了一种蔓三七草酰胺Ⅰ的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、将干燥的蔓三七粉碎，加入溶剂Ⅰ进行热回流提取，过滤，减压浓缩成浸膏；
步骤二、将浸膏加入溶剂Ⅱ中，超声振荡成悬浮液，过滤，循环超声振荡和过滤多次，合并滤液，减压浓缩，得到浓缩液；
步骤三、将浓缩液进行中高压柱色谱分离，使用甲醇水溶液等度洗脱；收集洗脱液，减压浓缩得到蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分。
步骤四、将蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分加入结晶溶剂中，加热使其溶解，放冷后得白色针状晶体，离心干燥后所得白色沉淀即为蔓三七草酰胺Ⅰ。
可选的，所述蔓三七的原料为蔓三七根或蔓三七茎或蔓三七叶的一种或多种。
可选的，溶剂Ⅰ为正己烷、石油醚、甲醇、乙醇和丙酮的一种或者两种。
可选的，步骤一中，蔓三七与溶剂Ⅰ的料液比为：1:1-30（g/mL）。
可选的，所述溶剂Ⅱ为正己烷/甲醇，正丁醇/三氯甲烷，二氯甲烷/甲醇，乙酸乙酯/甲醇，正己烷/吡啶中的一种。
可选的，所述柱色谱分离采用的填料是大孔树脂、硅胶、C18或者葡聚糖凝胶柱层析的一种或者多种。
可选的，所述结晶溶剂为正丁醇、石油醚、氯仿、乙醇、甲醇、乙酸乙酯或丙酮中的一种、两种或三种的混合物。
可选的，加入结晶溶剂的质量是蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分质量的7-10倍。
本发明还提供了蔓三七草酰胺Ⅰ在制备降尿酸药物中的应用。
本发明利用混合溶剂先提取、然后用溶剂对浸膏溶解、柱色谱和结晶等方法快速从平卧菊三七中分离得到一种新的神经酰胺（蔓三七草酰胺Ⅰ） ，该方法简易、高效、投资少。所得神经酰胺具有优秀的降尿酸活性，适合开发相关降尿酸药物。
附图说明
图1是本发明实施例1从平卧菊三七中提取的ceramide的质谱图；
图2是本发明实施例1从平卧菊三七中提取的ceramide的氢谱图；
图3是本发明实施例1从平卧菊三七中提取的ceramide的碳谱图；
图4不同浓度ceramide对黄嘌呤氧化酶抑制活性。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明从蔓三七（平卧菊三七）中分离得到一种新的神经酰胺（ceramide），其结构式如下：
分子式为C49H97NO5，化学名为：蔓三七草酰胺Ⅰ，其对应英文名为：(2′R)-2-hydroxy-N-((2S,3S,4R,E)-1,3,4-trihydroxyoctadec-8-en-2-yl)hentriacontanamide。该化合物为白色，其熔点为（mp）：139–142℃， = +18.2 (c 0.11, Pyridine )；紫外光谱分析其在225 nm有最大吸收，红外光谱分析显示在3330 cm-1 (NH，OH)，2920 cm-1（CH2）, 2849 cm-1, 1618 cm-1（-CONH-），1451 cm-1（CH3）处有吸收。
从蔓三七中提取上述化合物的方法如下：
（1）将干燥的蔓三七粉碎，粉碎后过100目筛，按料液比1:1-30（g/ml）加入溶剂Ⅰ热回流提取，过滤，减压浓缩成浸膏。
其中，料液比优选地选择是1:10-20（g/ml），溶剂Ⅰ为正己烷、石油醚、甲醇、乙醇和丙酮的一种或者两种混合使用（体积比为1:1）。
（2）将浸膏加入溶剂Ⅱ中，超声振荡成悬浮液，过滤，循环次数3-5次，合并滤液，减压浓缩成原体积的1/4，得到浓缩液。
溶剂Ⅱ是：正己烷/甲醇，正丁醇/三氯甲烷，二氯甲烷/甲醇，乙酸乙酯/甲醇，正己烷/吡啶中的一种。
（3）将浓缩液进行中高压柱色谱分离，使用单一比例的甲醇水溶液等度洗脱；收集洗脱液，减压浓缩得到蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分。
其中柱色谱分离采用填料是大孔树脂、硅胶、C18或者葡聚糖凝胶柱层析的一种或者混合使用。
（4）将蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分加入结晶溶剂中，加热使其溶解，放冷后得白色针状晶体，离心干燥后所得白色沉淀即为蔓三七草酰胺Ⅰ。
其中，加入结晶溶剂的量是蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分质量的7-10倍，所选结晶溶剂为正丁醇、石油醚、氯仿、乙醇、甲醇、乙酸乙酯或丙酮中的一种、两种或三种的混合物。优选氯仿与甲醇混合，混合比例为体积比1:3，使用量是蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分质量的10倍；优选氯仿与甲醇混合，混合比例为体积比1:4，使用量是蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分质量的8倍；优选正丁醇、石油醚和丙酮混合，混合比例为体积比1:1:1，使用量是蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分质量的9倍；优选乙醇和乙酸乙酯混合，混合比例为体积比2:1，使用量是蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分质量的7倍；优选氯仿、甲醇和乙醇混合，混合比例为体积比1:1:2，使用量是蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分质量的10倍。
以下通过实施例详细说明本发明提供的蔓三七草酰胺Ⅰ及其制备方法。
实施例1
取5000g粉碎的蔓三七叶，按料液比1:10（g/mL）的比例加入正己烷热回流提取，过滤，减压浓缩成浸膏。
将浸膏加入正己烷/甲醇超声振荡成悬浮液，过滤，循环次数3-5次，合并滤液减压浓缩成原体积的1/4，得到浓缩液。
将浓缩液进行大孔树脂中高压柱色谱分离，使用30%的甲醇水溶液等度洗脱；收集洗脱液，减压浓缩得到蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分。
向蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分加入10倍质量的结晶溶剂（氯仿与甲醇，混合比例为体积比1:3），加热使其溶解，放冷后得白色针状晶体，离心干燥后所得白色沉淀即为蔓三七草酰胺Ⅰ（神经酰胺（ceramide）。所得蔓三七草酰胺Ⅰ的质量为2.26g。经一维和二维核磁共振谱鉴定为(2′R)-2-hydroxy-N-((2S,3S,4R,E)-1,3,4-trihydroxyoctadec-8-en-2-yl)hentriacontanamide。鉴定数据如表1所示。
表1. (2′R)-2-hydroxy-N-((2S,3S,4R,E)-1,3,4-trihydroxyoctadec-8-en-2-yl) hentriacontanamide 的1H-NMR（400 MHz）和13C-NMR（100 MHz）谱数据 (pyridine-d 5, δ, ppm, J/Hz)
参照图1-图3，HR-ESIMS [m/z 780.5 [M+H]+确定分子量为779，结合氢谱和碳谱确定其分子式为C49H97NO5，的1H-NMR和13C-NMR数据如图2和3所示，在δH 4.41处具有一个与氮合的甲基质子的酰胺键，在δC 175.01处具有一个羰基碳，以及一个脂肪族长链（在δH0.86处具有末端甲基质子，在δH 1.26处具有广泛的亚甲基质子信号）。以上这些数据是神经酰胺类化合物具有的特征数据，表明该化合物是神经酰胺类物质。1H和13C NMR谱还显示了酰胺链接（δH 8.55,1H，d，J=8.5 Hz；δC 175.01）、次甲基酰胺（δH 5.09，δC 52.75）、含氧亚甲基（δH 4.51和4.28，δC 61.8）、三个氧化的次甲基（δH 4.32、4.41和4.60；δC 76.62、72.79和72.67）和两个长链脂族部分的信号。化合物1中双键的反式（E）构型由烯烃质子信号表示，该信号在吡啶-d5中的δ 5.50和5.52处表现为两个双峰（J=15.3,5.8Hz），13C NMR光谱中双键旁边的碳在δ 35.1、33.92处的信号，这些信号借助于2D谱图进行分配（表1）。此外，在1H–1H COSY和HMBC实验的基础上，对NMR光谱中的各种质子和碳进行了分配。COSY光谱揭示了与硝基（H-2）相连的次甲基与氧亚甲基（2H-1）和氧次甲基（H-3）的偶联在HMBC光谱的基础上确认了羟基的位置，其中δ 8.55（NH）处的质子信号与羰基（C-1′)和含氮的次甲基（C-2）。根据这些信息，我们确定化合物是(2′R)-2-hydroxy-N-((2S,3S,4R,E)-1,3,4-trihydroxyoctadec-8-en-2-yl)hentriacontanamide 。
其结构式为：
也即：
实施例2
取5000g粉碎的蔓三七根，按料液比1:10（g/mL）的比例加入石油醚热回流提取，过滤，减压浓缩成浸膏。
将浸膏加入正丁醇/三氯甲烷超声振荡成悬浮液，过滤，循环次数3-5次，合并滤液减压浓缩成原体积的1/4，得到浓缩液。
将浓缩液进行硅胶中高压柱色谱分离，使用40%的甲醇水溶液等度洗脱；收集洗脱液，减压浓缩得到蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分。
蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分加入8倍质量的结晶溶剂（氯仿与甲醇，混合比例为体积比1:4），加热使其溶解，放冷后得白色针状晶体，离心干燥后所得白色沉淀即为蔓三七草酰胺Ⅰ。所得蔓三七草酰胺Ⅰ的质量为1.98g。经一维和二维核磁共振谱鉴定为(2′R)-2-hydroxy-N-((2S,3S,4R,E)-1,3,4-trihydroxyoctadec-8-en-2-yl)hentriacontanamide。鉴定数据如表1所示。
实施例3
取5000g粉碎的蔓三七茎，按料液比1:10（g/mL）的比例加入甲醇热回流提取，过滤，减压浓缩成浸膏。
将浸膏加入二氯甲烷/甲醇超声振荡成悬浮液，过滤，循环次数3-5次，合并滤液减压浓缩成原体积的1/4，得到浓缩液。
将浓缩液进行C18中高压柱色谱分离，使用60%的甲醇水溶液等度洗脱；收集洗脱液，减压浓缩得到蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分。
蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分加入9倍质量的结晶溶剂（正丁醇、石油醚和丙酮混合，混合比例为体积比1:1:1），加热使其溶解，放冷后得白色针状晶体，离心干燥后所得白色沉淀即为蔓三七草酰胺Ⅰ。所得蔓三七草酰胺Ⅰ的质量为1.52g。经一维和二维核磁共振谱鉴定为(2′R)-2-hydroxy-N-((2S,3S,4R,E)-1,3,4-trihydroxyoctadec-8-en-2-yl)hentriacontanamide。鉴定数据如表1所示。
实施例4
取5000g粉碎的蔓三七叶，按料液比1:10（g/mL）的比例加入乙醇热回流提取，过滤，减压浓缩成浸膏。
将浸膏加入乙酸乙酯/甲醇超声振荡成悬浮液，过滤，循环次数3-5次，合并滤液减压浓缩成原体积的1/4，得到浓缩液。
将浓缩液进行硅胶中高压柱色谱分离，使用70%的甲醇水溶液等度洗脱；收集洗脱液，减压浓缩得到蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分。
蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分加入10倍质量的结晶溶剂（氯仿、甲醇和乙醇混合，混合比例为体积比1:1:2），加热使其溶解，放冷后得白色针状晶体，离心干燥后所得白色沉淀即为蔓三七草酰胺Ⅰ。所得蔓三七草酰胺Ⅰ的质量为1.34g。经一维和二维核磁共振谱鉴定为(2′R)-2-hydroxy-N-((2S,3S,4R,E)-1,3,4-trihydroxyoctadec-8-en-2-yl)hentriacontanamide。鉴定数据如表1所示。
实施例5
取5000g粉碎的蔓三七叶，按料液比1:10（g/mL）的比例加入丙酮热回流提取，过滤，减压浓缩成浸膏。
将浸膏加入正己烷/吡啶超声振荡成悬浮液，过滤，循环次数3-5次，合并滤液减压浓缩成原体积的1/4，得到浓缩液。
将浓缩液进行大孔树脂中高压柱色谱分离，使用40%的甲醇水溶液等度洗脱；收集洗脱液，减压浓缩得到蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分。
蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分加入7倍质量的结晶溶剂（乙醇和乙酸乙酯混合，混合比例为体积比2:1），加热使其溶解，放冷后得白色针状晶体，离心干燥后所得白色沉淀即为蔓三七草酰胺Ⅰ。所得蔓三七草酰胺Ⅰ的质量为2.58g。经一维和二维核磁共振谱鉴定为(2′R)-2-hydroxy-N-((2S,3S,4R,E)-1,3,4-trihydroxyoctadec-8-en-2-yl)hentriacontanamide。鉴定数据如表1所示。
实施例6
取5000g粉碎的蔓三七叶，按料液比1:10（g/mL）的比例加入正己烷/甲醇热回流提取，过滤，减压浓缩成浸膏。
将浸膏加入正己烷/吡啶超声振荡成悬浮液，过滤，循环次数3-5次，合并滤液减压浓缩成原体积的1/4，得到浓缩液。
将浓缩液进行硅胶中高压柱色谱分离，使用50%的甲醇水溶液等度洗脱；收集洗脱液，减压浓缩得到蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分。
蔓三七草酰胺Ⅰ低含量组分加入10倍质量的结晶溶剂（氯仿与甲醇，混合比例为体积比1:3），加热使其溶解，放冷后得白色针状晶体，离心干燥后所得白色沉淀即为蔓三七草酰胺Ⅰ。所得蔓三七草酰胺Ⅰ的质量为2.78g。经一维和二维核磁共振谱鉴定为(2′R)-2-hydroxy-N-((2S,3S,4R,E)-1,3,4-trihydroxyoctadec-8-en-2-yl)hentriacontanamide。鉴定数据如表1所示。
本发明制备的蔓三七草酰胺Ⅰ用途实验。
1．待评价样品：上述制备蔓三七草酰胺Ⅰ的降尿酸活性检测。
2. 溶液配制：0.05 mol/L Tris-HCl缓冲液配制：精密称量 6.0572 g Tris，蒸馏水溶解，定容至1L，用盐酸调p H至8.0。
0.52 U/m L黄嘌呤氧化酶溶液：精密称量一定量的黄嘌呤氧化酶溶液，蒸馏水稀释，得到 0.52 U/m L的酶溶液，现配现用。
2.0 mmol/L黄嘌呤溶液：精密称量黄嘌呤 0.06084 g，用少量的 1.0 mol/L NaOH溶液溶解，定容为 2.0 mmol/L的黄嘌呤溶液。
显色液配制：精密称取0.0619 g 4-氨基安替比林，0.006 g辣根过氧化物酶，0.168 g苯酚，用pH 8.0的Tris-HCl缓冲液定容至300 mL，4°C保存，备用。
3.试验方法：
在10 mL试管中依次加入200 μL不同浓度的蔓三七草酰胺Ⅰ溶液（蔓三七草酰胺Ⅰ浓度分别为：5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml），和50μL黄嘌呤氧化酶溶液，混匀，于37°C下保温10 min。再加入400 μL黄嘌呤溶液，3050 μL显色液启动反应，37°C下保温20 min，继续加100μL 1.0 mol/L 的NaOH溶液对酶灭活，终止反应。冷却至室温后508nm下测定吸光值，以不添加蔓三七草酰胺Ⅰ和黄嘌呤氧化酶的体系为空白调零。
抑制率 (%)=[Ac-（As-Ao）]/Ac×100（3-3）
其中，Ac为阳性空白组体系不添加提取物样品，As为样品组，Ao为样品空白组体系不加黄嘌呤溶液。
4.实验结果：
蔓三七草酰胺Ⅰ对XO的抑制活性如图4所示，随着蔓三七草酰胺Ⅰ浓度由低变高过程中XO抑制活性开始显示为缓慢增强，随着蔓三七草酰胺Ⅰ浓度增加，抑制活性快速增强。当药物浓度为80ug/mL时，其对XO抑制率达到97.68%。实验结果充分说明(2′R)-2-hydroxy-N-((2S,3S,4R,E)-1,3,4-trihydroxyoctadec-8-en-2-yl) hentriacontanamide 具有显著的降尿酸活性作用，可广泛应用在降尿酸药品中。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.蔓三七草酰胺Ⅰ，其特征是，结构式如下：
。
2.如权利要求1中所述的蔓三七草酰胺Ⅰ在制备降尿酸药物中的应用。
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Patent Citations (2)
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| CN110467643A (zh) * | 2019-09-02 | 2019-11-19 | 江西省科学院应用化学研究所 | 从平卧菊三七中提取脑苷脂的方法及脑苷脂的用途 |
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