CN110447575A - 一种基于静水压法的红鳍东方鲀雌核发育诱导方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种基于静水压法的红鳍东方鲀雌核发育诱导方法，属于红鳍东方鲀养殖领域。本发明所述红鳍东方鲀雌核发育诱导方法包括如下步骤：精子的遗传失活：取红鳍东方鲀成熟雄鱼的精液，稀释，在紫外灯下照射；受精：将红鳍东方鲀雌鱼成熟的卵子与失活后的精子混合；施压：将受精卵转移到静水压机的加压腔中，施压30‑70MPa，持续3‑15min；孵化：将静水压处理后的受精卵转移到孵化器中孵化。本发明建立了基于静水压法的红鳍东方鲀人工诱导雌核发育技术，该方法的诱导效果比冷休克、热休克方法更好，具有操作简便，孵化率高等优点，可以大量获得雌核发育二倍体。
Description
技术领域
本发明涉及一种基于静水压法的红鳍东方鲀雌核发育诱导方法，属于红鳍东方鲀养殖领域。
背景技术
红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)属于鲀形目，鲀科，红鳍鲀属，分布于北太平洋西部，在中国见于黄渤海和东海。红鳍东方鲀是大型经济鱼类，尤其以美味生鱼片著称，在日本、韩国和我国堪称海水鱼之最。红鳍东方鲀还是知名的有毒鱼类，其生殖腺、内脏、皮肤等均有毒，但是，雄鱼的精巢不仅无毒，还是上等佳肴，是河鲀鱼最贵重的部分。随着养殖技术的提高及群体的扩大，我国红鳍东方鲀的产量几乎全部是养殖群体。我国养殖的红鳍东方鲀以前全部用于出口日本和韩国，因为有毒，国内不允许出售。不但冷冻等加工品出口，活鱼也出口。我国的红鳍鲀幼鱼出口到日本后，他们养殖一年，达到商品规格后再上市。因此日本红鳍鲀上市量的一半来自中国的判断也不为过。近年，国内实施“有条件放开”政策，即在备案的养殖场养殖，在备案的加工厂加工，在备案的饭店加工出售。随着管理形式的改变，河鲀也将出现在国内饭店中，国内市场可能逐渐扩大。在累代繁殖条件下，近亲繁殖导致的遗传衰退，生长速度缓慢和抗病能力减弱等弊病逐渐呈现。因此，红鳍东方鲀的良种选育及全雄化已经成为产业界的一致呼声。
发明内容
本发明利用红鳍东方鲀的精子，经紫外线灭活、激活卵子，并经静水压处理，获得雌核发育二倍体，大幅度提高了雌核发育的成功率。
本发明提供了一种基于静水压法的红鳍东方鲀雌核发育诱导方法，所述红鳍东方鲀雌核发育诱导方法包括如下步骤：精子的遗传失活：取红鳍东方鲀成熟雄鱼的精液，稀释，在紫外灯下照射；受精：将红鳍东方鲀雌鱼成熟的卵子与失活后的精子混合；施压：将受精卵转移到静水压机的加压腔中，施压30-70MPa，持续3-15min；孵化：将静水压处理后的受精卵转移到孵化器中孵化。
本发明优选为所述精子遗传失活的步骤中，精液与精子保护液按体积比1：5-60的比例进行稀释。
本发明所述的精液稀释视精液浓度而定，如精液较浓，则稀释比例大些；如精液浓度较稀，则稀释比例小些。
本发明优选为所述精子遗传失活的步骤中，照射时间为1-10min，照射剂量为1250-8250mJ/cm2。
本发明优选为所述受精的步骤中，成熟卵子与失活后的精子混合时间为2-12min。
本发明优选为所述孵化的步骤中，孵化的水温为15-22℃，保持流水。
本发明的雌核发育二倍体诱导率达20％左右。
本发明有益效果为：
本发明建立了基于静水压法的红鳍东方鲀人工诱导雌核发育技术，该方法的诱导效果比冷休克、热休克方法更好，具有操作简便，孵化率高等优点，可以大量获得雌核发育二倍体。
本发明获得的雌核发育二倍体经流式细胞仪检测倍性，全部为二倍体；利用与性别相关的SNP标记进行性别鉴定，全部为雌性；利用SNP标记检测，雌核发育二倍体全部与母本相同，而与父本完全不同，证明虽然是同源精子，但是精子灭活是彻底的、有效的。
具体实施方式
下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
一种基于静水压法的红鳍东方鲀雌核发育诱导方法，所述红鳍东方鲀雌核发育诱导方法包括如下步骤：
精子的遗传失活：取红鳍东方鲀成熟雄鱼的精液，精液与精子保护液按体积比1：30的比例进行稀释，在紫外灯下照射5min，照射剂量为3250mJ/cm2；
受精：将红鳍东方鲀雌鱼成熟的卵子与失活后的精子混合2min；
施压：将受精卵转移到静水压机的加压腔中，施压40MPa，持续3min；
孵化：将静水压处理后的受精卵转移到孵化器中孵化，孵化的水温为17℃，保持流水。
结果表明孵化率在80％以上。
实施例2
一种基于静水压法的红鳍东方鲀雌核发育诱导方法，所述红鳍东方鲀雌核发育诱导方法包括如下步骤：
精子的遗传失活：取红鳍东方鲀成熟雄鱼的精液，精液与精子保护液按体积比1：10的比例进行稀释，在紫外灯下照射3min，照射剂量为5250mJ/cm2；
受精：将红鳍东方鲀雌鱼成熟的卵子与失活后的精子混合5min；
施压：将受精卵转移到静水压机的加压腔中，施压50MPa，持续5min；
孵化：将静水压处理后的受精卵转移到孵化器中孵化，孵化的水温为20℃，保持流水。
结果表明孵化率在90％以上。
实施例3
一种基于静水压法的红鳍东方鲀雌核发育诱导方法，所述红鳍东方鲀雌核发育诱导方法包括如下步骤：
精子的遗传失活：取红鳍东方鲀成熟雄鱼的精液，精液与精子保护液按体积比1：45的比例进行稀释，在紫外灯下照射5min，照射剂量为4250mJ/cm2；
受精：将红鳍东方鲀雌鱼成熟的卵子与失活后的精子混合8min；
施压：将受精卵转移到静水压机的加压腔中，施压60MPa，持续5min；
孵化：将静水压处理后的受精卵转移到孵化器中孵化，孵化的水温为18℃，保持流水。
结果表明孵化率在80％以上。
实施例4
一种基于静水压法的红鳍东方鲀雌核发育诱导方法，所述红鳍东方鲀雌核发育诱导方法包括如下步骤：
精子的遗传失活：取红鳍东方鲀成熟雄鱼的精液，精液与精子保护液按体积比1：55的比例进行稀释，在紫外灯下照射8min，照射剂量为3250mJ/cm2；
受精：将红鳍东方鲀雌鱼成熟的卵子与失活后的精子混合12min；
施压：将受精卵转移到静水压机的加压腔中，施压30MPa，持续8min；
孵化：将静水压处理后的受精卵转移到孵化器中孵化，孵化的水温为20℃，保持流水。
结果表明孵化率在60％以上。
实施例5
一种基于静水压法的红鳍东方鲀雌核发育诱导方法，所述红鳍东方鲀雌核发育诱导方法包括如下步骤：
精子的遗传失活：取红鳍东方鲀成熟雄鱼的精液，精液与精子保护液按体积比1：30的比例进行稀释，在紫外灯下照射5min，照射剂量为3500mJ/cm2；
受精：将红鳍东方鲀雌鱼成熟的卵子与失活后的精子混合6min；
施压：将受精卵转移到静水压机的加压腔中，施压50MPa，持续3min；
孵化：将静水压处理后的受精卵转移到孵化器中孵化，孵化的水温为18℃，保持流水。
结果表明孵化率在80％以上。
实施例6
一种基于静水压法的红鳍东方鲀雌核发育诱导方法，所述红鳍东方鲀雌核发育诱导方法包括如下步骤：
精子的遗传失活：取红鳍东方鲀成熟雄鱼的精液，精液与精子保护液按体积比1：33的比例进行稀释，在紫外灯下照射7min，照射剂量为2500mJ/cm2；
受精：将红鳍东方鲀雌鱼成熟的卵子与失活后的精子混合8min；
施压：将受精卵转移到静水压机的加压腔中，施压50MPa，持续3min；
孵化：将静水压处理后的受精卵转移到孵化器中孵化，孵化的水温为18℃，保持流水。
结果表明孵化率在80％以上。
实施例7
一种基于静水压法的红鳍东方鲀雌核发育诱导方法，所述红鳍东方鲀雌核发育诱导方法包括如下步骤：
精子的遗传失活：取红鳍东方鲀成熟雄鱼的精液，精液与精子保护液按体积比1：35的比例进行稀释，在紫外灯下照射5min，照射剂量为3850mJ/cm2；
受精：将红鳍东方鲀雌鱼成熟的卵子与失活后的精子混合8min；
施压：将受精卵转移到静水压机的加压腔中，施压50MPa，持续3min；
孵化：将静水压处理后的受精卵转移到孵化器中孵化，孵化的水温为21℃，保持流水。
结果表明孵化率在80％以上。
实施例8
一种基于静水压法的红鳍东方鲀雌核发育诱导方法，所述红鳍东方鲀雌核发育诱导方法包括如下步骤：
精子的遗传失活：取红鳍东方鲀成熟雄鱼的精液，精液与精子保护液按体积比1：28的比例进行稀释，在紫外灯下照射4min，照射剂量为5250mJ/cm2；
受精：将红鳍东方鲀雌鱼成熟的卵子与失活后的精子混合8min；
施压：将受精卵转移到静水压机的加压腔中，施压50MPa，持续8min；
孵化：将静水压处理后的受精卵转移到孵化器中孵化，孵化的水温为19℃，保持流水。
结果表明孵化率在60％以上。
Claims (5)
1.一种基于静水压法的红鳍东方鲀雌核发育诱导方法，其特征在于：所述红鳍东方鲀雌核发育诱导方法包括如下步骤：
精子的遗传失活：取红鳍东方鲀成熟雄鱼的精液，稀释，在紫外灯下照射；
受精：将红鳍东方鲀雌鱼成熟的卵子与失活后的精子混合；
施压：将受精卵转移到静水压机的加压腔中，施压30-70MPa，持续3-15min；
孵化：将静水压处理后的受精卵转移到孵化器中孵化。
2.根据权利要求1所述基于静水压法的红鳍东方鲀雌核发育诱导方法，其特征在于：所述精子遗传失活的步骤中，精液与精子保护液按体积比1：5-60的比例进行稀释。
3.根据权利要求2所述基于静水压法的红鳍东方鲀雌核发育诱导方法，其特征在于：所述精子遗传失活的步骤中，照射时间为1-10min，照射剂量为1250-8250mJ/cm2。
4.根据权利要求3所述基于静水压法的红鳍东方鲀雌核发育诱导方法，其特征在于：所述受精的步骤中，成熟卵子与失活后的精子混合时间为2-12min。
5.根据权利要求4所述基于静水压法的红鳍东方鲀雌核发育诱导方法，其特征在于：所述孵化的步骤中，孵化的水温为15-22℃，保持流水。
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