CN101926300A - 一种石斑鱼雌核发育二倍体的诱导方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种石斑鱼雌核发育二倍体的诱导方法。本发明石斑鱼雌核发育二倍体的诱导方法包括如下步骤：取石斑鱼精液稀释后置于紫外线下照射，使精子的遗传性能失活，混合石斑鱼成熟卵子，卵子受精后转移到海水中冷休克处理，使染色体组加倍，产生雌核发育二倍体，将其转入海水中，按普通石斑鱼苗管理，即得石斑鱼雌核发育二倍体鱼苗，所诱导产生的后代只含有雌性亲本的基因，可加速优良基因纯合化，使优良的遗传性状得以迅速固定，可应用于石斑鱼遗传分析，在石斑鱼养殖和育种上具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及鱼类遗传育种领域，具体涉及一种石斑鱼雌核发育二倍体的诱导方法。
背景技术
雌核发育是单性生殖的一种，指卵子只依靠本身的遗传物质发育成个体的生殖行为。同种或异种精子进入卵内只起刺激卵子发育的作用，并不参与发育，其子代的遗传物质完全来自雌核，胚胎发育完全是在雌核的控制之下进行，后代只具有母本的性状。
鱼类中存在的天然雌核发育已确知的有4-5种，如黑龙江银鲫、滇池高背鲫、台湾莫氏淫、亚洲钩齿蝶等。人工诱导雌核发育是加速鱼类优良基因纯合化，使优良的遗传性状得以迅速固定，从而实现快速育种的最有效方法之一。雌核发育在鱼类育种中有着广泛的应用前景，能快速获得鱼类纯系，鱼类只需经过一次雌核发育，其子代再经过一次雌核发育，就可以作为纯系亲本用于育种生产。此外，雌核发育应用在生产上还可以提高产量，如雌核发育的异育银鲫生长速度比母本方正银鲫平均快34.7％，比当地鲫鱼快2-3倍。人工雌核发育是用γ射线、x射线或紫外线照射精子，使精子遗传失活与正常的卵″受精″，卵在人工条件下(温差、化学刺激等)得以发育成正常的个体。目前国内外已有20多种养殖鱼类人工诱导雌核发育成功，70年代中期我国对此展开了研究，鲤、鲫、草、鲢等人工诱导雌核发育已取得了一定的成就。
石斑鱼类隶属鲈形目(Perciformes)，鮨科(Serranidae)，石斑鱼亚科(Epinephelinae)，石斑鱼属(Epinephelus)，为暖水性礁栖鱼类，广泛分布于印度洋和太平洋的热带、亚热带海域。石斑鱼是驰名世界的名贵海产鱼类之一，其肉质鲜美，营养丰富，为餐桌中的上等佳肴，深受各地消费者的喜爱。由于石斑鱼生长快、市场价格高而稳定，因而倍受养殖者的欢迎，是我国南方传统海水养殖名贵鱼类。我国南方适宜石斑鱼养殖的海域广阔，除了众多的优良港湾可供石斑鱼网箱养殖外，还可以通过其它养殖方式的开发，例如外海网箱养殖、池塘养殖、室内工厂化养殖及投放人工鱼礁粗放养殖等，进一步推动和发展石斑鱼养殖业。可见，石斑鱼养殖具有巨大的开发潜力和有利条件，具有显著的社会经济效益。石斑鱼养殖业的可持续发展，面临着种质退化等问题，然而传统的育种模式基因纯合速度慢，育种周期长，不符合石斑鱼养殖业发展的迫切需要，因此有必要开展可加速育种进程的人工雌核发育技术研究。
发明内容
本发明的目的在于根据现有技术中石斑鱼传统育种模式基因纯合速度慢，育种周期长等问题，提供一种优良的遗传性状可以迅速固定的，育种周期短的石斑鱼雌核发育二倍体的诱导方法。
本发明目的通过以下技术方案予以实现：
一种石斑鱼雌核发育二倍体的诱导方法，包括如下步骤：取石斑鱼精液稀释后置于紫外线下照射，使精子的遗传性能失活，混合石斑鱼成熟卵子，卵子受精后转移到海水中冷休克处理，使染色体组加倍，产生雌核发育二倍体，将其转入海水中，按普通石斑鱼苗管理，即得石斑鱼雌核发育二倍体鱼苗。
作为一种优选方案，上述方法包括如下步骤：
(1)精子的遗传失活：取石斑鱼精液，稀释5～10倍，用紫外线照射；
(2)卵子雌核发育的启动：将石斑鱼成熟卵子与经紫外线照射的石斑鱼精子混合；
(3)雌核发育单倍体染色体组加倍：卵子受精后，转移到海水中冷休克，使染色体组加倍，产生雌核发育二倍体卵；
(4)将石斑鱼雌核发育二倍体卵转入海水中，按普通石斑鱼苗生长方法管理，得到石斑鱼雌核发育二倍体鱼苗。
上述步骤(1)中，所述石斑鱼精液最优选稀释5倍后用紫外线照射，所述紫外线照射剂量最优选为500～800×100μW/cm2。
上述步骤(2)中，所述与卵子混合的石斑鱼精子的最终浓度至少为105个/ml，所述卵子与精子混合时的温度最优选为22～28℃。
上述步骤(3)中，所述在海水中的冷休克时间为15～25min，海水温度为4℃，其中，在海水中的冷休克时间最优选为25min。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明利用经紫外线照射遗传失活的石斑鱼精子，启动卵子雌核发育以及染色体加倍的措施，所诱导产生的后代只含有雌性亲本的基因，可加速优良基因纯合化、使优良的遗传性状得以迅速固定，可应用于是石斑鱼遗传分析，在石斑鱼养殖和育种上具有广阔的推广应用前景。
具体实施方式
以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。
实施例1
提前一天对石斑鱼雌雄鱼注射催产剂，如绒毛膜促性腺激素HCG、促黄体素释放激素类似物A2。根据情况对雌鱼麻醉挤卵。卵子获得前，对石斑鱼雄鱼麻醉挤精液。将精液经稀释液稀释5倍后放置于直径为9-15cm的培养皿内，用紫外线照射，剂量为800×100μW/cm2；使精子遗传失活。将处理后的精子与卵子混合，精子最终浓度至少为105个/ml，加入温度为25℃的海水，启动石斑鱼卵子的雌核发育。卵子受精后3分钟，转移至4℃的海水中冷休克20min，使石斑鱼雌核发育单倍体染色体组加倍成为雌核发育二倍体。将处理后的石斑鱼雌核发育卵转入正常水温海水中，按普通石斑鱼苗管理，生产石斑鱼雌核发育二倍体鱼苗。
实施例2
与实施例1类似，其区别在于取石斑鱼精液经稀释液稀释10倍后放置于直径为9-15cm的培养皿内，用紫外线照射，剂量为500×100μW/cm2；使精子遗传失活。将处理后的精子与卵子混合，精子最终浓度至少为105个/ml，加入温度为25℃的海水，启动石斑鱼卵子的雌核发育。卵子受精后3分钟，转移至6℃的海水中冷休克25min，使石斑鱼雌核发育单倍体染色体组加倍成为雌核发育二倍体。将处理后的石斑鱼雌核发育卵转入正常水温海水中，按普通石斑鱼苗管理，生产石斑鱼雌核发育二倍体鱼苗。
实施例3
与实施例1类似，其区别在于取石斑鱼精液经稀释液稀释8倍后放置于直径为9-15cm的培养皿内，用紫外线照射，剂量为700×100μW/cm2；使精子遗传失活。将处理后的精子与卵子混合，精子最终浓度至少为105个/ml，加入温度为22℃的海水，启动石斑鱼卵子的雌核发育。卵子受精后3分钟，转移至3℃的海水中冷休克15min，使石斑鱼雌核发育单倍体染色体组加倍成为雌核发育二倍体。将处理后的石斑鱼雌核发育卵转入正常水温海水中，按普通石斑鱼苗管理，生产石斑鱼雌核发育二倍体鱼苗。
Claims (8)
1.一种石斑鱼雌核发育二倍体的诱导方法，其特征在于包括如下步骤：取石斑鱼精液稀释后置于紫外线下照射，使精子的遗传性能失活，混合石斑鱼成熟卵子，卵子受精后转移到海水中冷休克处理，使染色体组加倍，产生雌核发育二倍体，将其转入海水中，按普通石斑鱼苗管理，即得石斑鱼雌核发育二倍体鱼苗。
2.根据权利要求1所述的石斑鱼雌核发育二倍体的诱导方法，其特征所述方法包括如下步骤：
(1)精子的遗传失活：取石斑鱼精液，稀释5～10倍，用紫外线照射；
(2)卵子雌核发育的启动：将石斑鱼成熟卵子与经紫外线照射的石斑鱼精子混合；
(3)雌核发育单倍体染色体组加倍：卵子受精后，转移到海水中冷休克，使染色体组加倍，产生雌核发育二倍体卵；
(4)将石斑鱼雌核发育二倍体卵转入海水中，按普通石斑鱼苗生长方法管理，得到石斑鱼雌核发育二倍体鱼苗。
3.根据权利要求2所述的石斑鱼雌核发育二倍体的诱导方法，其特征在于步骤(1)中，所述石斑鱼精液稀释5倍后用紫外线照射。
4.根据权利要求2所述的石斑鱼雌核发育二倍体的诱导方法，其特征在于步骤(1)中，所述紫外线照射剂量为500～800×100μW/cm2。
5.根据权利要求2所述的石斑鱼雌核发育二倍体的诱导方法，其特征在于步骤(2)中，所述与卵子混合的石斑鱼精子的最终浓度至少为105个/ml。
6.根据权利要求2所述的石斑鱼雌核发育二倍体的诱导方法，其特征在于步骤(2)中，所述卵子与精子混合时的温度为22～28℃。
7.根据权利要求2所述的石斑鱼雌核发育二倍体的诱导方法，其特征在于步骤(3)中，所述在海水中的冷休克时间为15～25min，海水温度为4℃。
8.根据权利要求7所述的石斑鱼雌核发育二倍体的诱导方法，其特征在于步骤(3)中，所述在海水中的冷休克时间为25min。
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