CN105494187A - 一种皱纹盘鲍与黑足鲍种间杂交制种方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种受精率和孵化率较高皱纹盘鲍与黑足鲍种间杂交制种方法，本发明的种间杂交制种方法以中国皱纹盘鲍为母本种鲍，新西兰黑足鲍为父本种鲍；将种鲍按照雌雄分别放置在不同的亲鲍培育池中培育；将性腺发育成熟的皱纹盘鲍雌鲍采用阴干结合紫外线照射海水刺激方法进行催产，将性腺发育成熟的新西兰黑足鲍雄鲍采用阴干结合过氧化氢海水浸泡法进行催产，直至雌雄种鲍产卵和排精为止；皱纹盘鲍♀×黑足鲍♂杂交种受精卵的获得：分别取皱纹盘鲍的卵子和黑足鲍的精子，将二者混合，调节受精海水温度，待受精卵分裂至二细胞期后开始洗卵；按照常规的孵化及后期培育方法即可获得皱纹盘鲍与黑足鲍杂交种苗。
Description
技术领域
本发明涉及一种贝类的杂交制种方法，特别涉及一种皱纹盘鲍与黑足鲍种间杂交制种方法。
背景技术
利用遗传改良技术，为贝类养殖业培育优良品种，具有深远的理论意义和广阔的应用前景。杂交育种技术属于遗传改良技术，杂交一般是指品种或品系以上的两个不同类型的亲本之间的交配，分类地位在种以上的两个亲本之间的交配称为种间杂交。通过杂交育种所培育的杂交种个体在生长势、存活率和抗病性上将具有较高的杂种优势，能迅速和显著地提高杂交种的产量和成活率。
鲍是海洋贝类的一种，被誉为海产八珍之首，素有“软黄金”之称，具有极高的经济价值。皱纹盘鲍（Haliotisdiscushannnai）属冷水种，在我国主要分布在辽东半岛和山东半岛一带，系我国北方沿海地区主要养殖鲍种，由于海洋环境污染、累代养殖和近亲繁殖，造成皱纹盘鲍种质退化严重、生长速度慢、抗逆性差等，亟需新的优良品种改善鲍养殖品种单一的现状。黑足鲍（Haliotisiris）分布于新西兰周边海域，是世界大型经济鲍种，该种具有个体大、生长速度快和抗病力强等特点，但该种在我国海区无自然分布。山东大学于2007年从新西兰引进了黑足鲍，并开展了黑足鲍与皱纹盘鲍杂交育种工作。研究结果表明，二者在性状方面具有一定的互补性，通过杂交途径，可以集两种鲍的优良性状于一体，培育出适温范围广、生长迅速的杂交鲍种，杂交后代可供选择的幅度广泛，容易获得优良的新品种。
据《山东大学学报：理学版》（2013年第48期）“皱纹盘鲍(Haliotisdiscushannai)与黑足鲍(Haliotisiris)杂交育苗的初步研究”报道，在杂交受精过程中，皱纹盘鲍♀×黑足鲍♂受精率和孵化率仅为23.45%和32.87%，远远低于皱纹盘鲍自交受精率和孵化率（79.83%和76.86%）。目前皱纹盘鲍与黑足鲍杂交技术存在以下不足：1.杂交用的黑足鲍种鲍多数未经过挑选，对杂交用亲本的综合性状情况不了解；2.传统的杂交技术只是简单地把不同种的精子和卵子混合，没有考虑到杂交时受精条件的影响，因此受精率和孵化率往往较低，无法大规模培育杂交苗种。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有杂交技术所存在的受精率和孵化率较低等问题，提供一种受精率和孵化率较高的黑足鲍与皱纹盘鲍种间杂交制种方法。
为了实现上述技术目标，本发明采用以下技术方案：
本发明通过优化杂交受精条件，使受精卵在合适的受精环境中进行胚胎发育，杂交受精率和孵化率均有显著提高，能满足大规模培育杂交苗种的需要。
本发明的具体步骤如下：
l)种鲍的选择：取皱纹盘鲍作为母本种鲍，取黑足鲍作为父本种鲍；
2)种鲍的同步促熟：将种鲍按照雌雄分别放置在不同的亲鲍培育池中进行培育；
3)人工催产：将性腺发育成熟的皱纹盘鲍雌鲍采用阴干结合紫外线照射海水刺激方法进行催产，将性腺发育成熟的新西兰黑足鲍雄鲍采用阴干结合过氧化氢海水浸泡法进行催产，直至雌雄种鲍产卵和排精为止；
4)皱纹盘鲍♀×黑足鲍♂杂交种受精卵的获得：分别取皱纹盘鲍的卵子和黑足鲍的精子混合，调节受精温度，待受精卵分裂至二细胞期后洗卵；
5)按照常规的孵化及后期培育方法即可获得皱纹盘鲍与黑足鲍杂交种苗。
在步骤1）中，所述的种鲍的选择，取壳长范围为8-12cm，个体活力良好、肌肉无损伤的皱纹盘鲍作为母本种鲍；取壳长范围为14-16cm，个体活力良好、肌肉无损伤的黑足鲍作为父本种鲍。
在步骤2）中，所述的种鲍的同步促熟，皱纹盘鲍性腺促熟温度为20-22℃，黑足鲍性腺促熟温度为15-17℃。
在步骤3）中，所述的催产的方法可采用在16-20℃的室温条件下，阴干60-90min，然后将皱纹盘鲍的雌种鲍和黑足鲍的雄种鲍分别置于不同的容器内，雌雄个体严格区分，不同种的种鲍的容器相隔5m以上，防止不同种的精子混合；在皱纹盘鲍容器中注入照射强度为500-1200mwh/L紫外线处理海水，每隔40-60min更换一次紫外线处理海水，直至皱纹盘鲍种鲍产卵为止；同时，黑足鲍催产容器中加入12L海水，每个容器中加入60g/L的过氧化氢溶液18ml，1mol/L的氢氧化钠溶液13.2ml，海水温度优选为：15-17.5℃，充分搅拌后将黑足鲍种鲍放入催产容器直至排精为止。
上述技术方案使用阴干结合紫外线照射海水刺激法和阴干结合过氧化氢海水浸泡法分别对性腺发育成熟雌性皱纹盘鲍和雄性黑足鲍进行催产，除催产方法外，紫外线的照射条件、过氧化氢和氢氧化钠溶液的用量的控制均需按上述条件或比例严格控制，否则不仅会影响父本种鲍和母本种鲍的排卵或排精效果，甚至会使父本种鲍和母本种鲍难以排卵或排精，致使杂交制种的受精率和孵化率大大降低。
在步骤4）中，所述的受精温度调节，是指在受精前，将温度调节至精子活力最适的温度16℃，完成受精后，逐渐升高温水至20℃。
在步骤4）中，所述的受精卵分裂至二细胞期是指30%-50%的受精卵分裂至二细胞期；
在步骤4）中，皱纹盘鲍♀×黑足鲍♂杂交时，所述的黑足鲍精子浓度为3×106~6.5×106个/mL
与现有技术相比，本发明有以下突出优点：
1.采用本发明在进行种间杂交时，由于优化了受精条件，使受精卵在合适的受精环境中进行胚胎发育，因此杂交受精率和孵化率与现有杂交技术条件下相比提高了178%和158%以上。
2.在苗种的养成阶段，采用本发明获得的杂交种在生长速度和成活率上均显著优于自交。
3.本发明操作简单，对操作者的经验要求不高，便于掌握。
具体实施方式
实施例1
取个体活力良好、肌肉无损伤的皱纹盘鲍做为母本种鲍与黑足鲍做为父本种鲍，其中皱纹盘鲍平均壳长9.5cm，黑足鲍平均壳长15.2cm；调节海水温度对皱纹盘鲍和黑足鲍进行同步促熟，其中皱纹盘鲍的性腺促熟温度20-22℃，黑足鲍的性腺促熟温度为15-17℃，促熟过程中，将种鲍按照雌雄分别放置在不同的亲鲍培育池中进行饲育，每个亲鲍培育池内亲鲍的性别特征必须单一，不能雌雄混合放养在同一个亲鲍培育池内，培育密度为30个/m3，亲鲍投喂海带；待种鲍性腺发育成熟后，在16-20℃的室温下将性腺发育成熟的皱纹盘鲍个体阴干60min，随后注入照射强度为1000mwh/L紫外线处理海水，海水水温为22℃，每隔50min更换一次紫外线处理海水，直至雌鲍产卵为止；在16-20℃的室温下将性腺发育成熟的黑足鲍个体阴干90min，在装有12L海水的催产容器中加入60g/L的过氧化氢18ml，1mol/L的氢氧化钠溶液13.2ml，海水水温为15-17.5℃，充分搅拌后将黑足鲍种鲍放入催产容器直至排精为止；上述催产过程中将皱纹盘鲍与黑足鲍的雌雄种鲍分别置于不同的容器内，雌雄个体严格区分，不同种的种鲍的容器相隔5m以上，操作过程严格防止同种精卵混合；分别取黑足鲍的精子和皱纹盘鲍的卵子，将二者混合，其中黑足鲍的精子浓度为6.5×106个/mL，调节精卵受精温度至16℃，待30%-50%的受精卵分裂至二细胞期后开始洗卵；按照常规的孵化及后期培育方法即可获得皱纹盘鲍与黑足鲍杂交种苗。
其中，皱纹盘鲍♀×黑足鲍♂杂交受精率为41.87±2.93%，孵化率为52.4±4.75%；杂交种生长迅速，成活率高，具有明显的杂种优势，适合大面积的推广养殖。
Claims (10)
1.一种皱纹盘鲍与黑足种间杂交制种方法，其特征在于其具体步骤如下：
l)种鲍的选择：取皱纹盘鲍作为母本种鲍，取黑足鲍作为父本种鲍；
2)种鲍的同步促熟：将种鲍按照雌雄分别放置在不同的亲鲍培育池中进行培育；
3)人工催产：将性腺发育成熟的皱纹盘鲍雌鲍采用阴干结合紫外线照射海水刺激方法进行催产，将性腺发育成熟的新西兰黑足鲍雄鲍采用阴干结合过氧化氢海水浸泡法进行催产，直至雌雄种鲍产卵和排精为止；
4)皱纹盘鲍♀×黑足鲍♂杂交种受精卵的获得：分别取皱纹盘鲍的卵子和黑足鲍的精子混合，调节受精温度，待受精卵分裂至二细胞期后洗卵；
5)按照常规的孵化及后期培育方法即可获得皱纹盘鲍与黑足鲍杂交种苗。
2.根据权利要求l所述的一种皱纹盘鲍与黑足鲍种间杂交制种方法，其特征在于：所述的皱纹盘鲍母本种鲍的壳长范围为8-12cm。
3.根据权利要求1所述的一种皱纹盘鲍与黑足鲍种间杂交制种方法，其特征在于：所述的黑足鲍父本种鲍的壳长范围为14-16cm。
4.根据权利要求1所述的一种皱纹盘鲍与黑足鲍种间杂交制种方法，其特征在于：步骤2）中所述的皱纹盘鲍性腺促熟所用海水水温为20-22℃。
5.根据权利要求1所述的一种皱纹盘鲍与黑足鲍种间杂交制种方法，其特征在于：步骤2）中所述的黑足鲍性腺促熟所用海水水温为15-17℃。
6.根据权利1要求所述的一种皱纹盘鲍与黑足鲍种间杂交制种方法，其特征在于：步骤4）中所述的受精温度调节为16℃。
7.根据权利要求6所述的一种皱纹盘鲍与黑足鲍种间杂交制种方法，其特征在于：完成受精后，逐渐升高水温至20℃。
8.根据权利要求1所述的一种皱纹盘鲍与黑足鲍种间杂交制种方法，其特征在于：步骤4)中所述的受精卵分裂至二细胞期是指30%-50%的受精卵分裂至二细胞期。
9.根据权利要求1所述的一种皱纹盘鲍与黑足鲍种间杂交制种方法，其特征在于：步骤4)中，皱纹盘鲍♀×黑足鲍♂杂交时，所述黑足鲍的精子浓度为：3×106~6.5×106个/mL。
10.根据权利要求1-9中任一权利要求所述的一种皱纹盘鲍与黑足鲍种间杂交制种方法，其特征在于：步骤3）中的催产方法采用在16-20℃条件下，阴干60-90min，然后将皱纹盘鲍和黑足鲍的雌雄种鲍分别置于不同的催产容器内，雌雄个体严格区分，不同种的种鲍的容器相隔5m以上；在皱纹盘鲍的催产容器中注入照射强度为500-1200mWh/L的紫外线处理海水，每隔40-60min更换一次紫外线处理海水，直至皱纹盘鲍母本种鲍产卵为止；同时，在黑足鲍催产容器中加入12L海水，每个容器中加入浓度为60g/L的过氧化氢溶液18ml，1mol/L的氢氧化钠溶液13.2mL，充分搅拌后将黑足鲍父本种鲍放入催产容器直至排精为止。
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