CN102696515A - 一种鲑鳟鱼三倍体苗种的制备方法 - Google Patents

一种鲑鳟鱼三倍体苗种的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种鲑鳟鱼三倍体苗种的制备方法。本发明将硬头鳟雌性亲鱼与北极红点鲑雄性亲鱼杂交,7℃条件下,受精卵受精20min后移入26℃水体中热休克20min后,入7℃水体中孵化60天左右,受精卵孵化出仔鱼。孵化期间受精卵发眼率为75%以上,苗种孵化率达到90%以上,得到的仔鱼经流式细胞仪检测,三倍体率为90%-95%。本发明提供的鲑鳟鱼三倍体苗种制备方法,缓解了虹鳟鱼养殖过程中由于长期的近亲繁殖和缺乏系统的选育,导致养殖个体出现了性早熟、个体小型化、病害滋生等问题,同时杂交三倍体具有杂交和三倍体两种优势,在生长速度和抗病能力上明显优于现有的二倍体虹鳟鱼,具有较好的经济效益和市场价值。

Description

一种鲑鳟鱼三倍体苗种的制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及水产生物育种技术领域,具体地涉及鲑鳟鱼的一种杂交三倍体苗种的制备方法。
背景技术
[0002] 鲑鳟鱼是目前世界上主要养殖的鱼类之一,自然条件下它们多生长于常年水温不超过20°C、水质为贫营养性、没有化学污染和有机污染的低温泉水或清澈的溪流中,因此又称之为冷水性鱼类。由于鲑科鱼类对生存水质有非常高的要求,略有污染即无法生存,所以鲑鳟鱼体干净,无任何污染,是名副其实的无公害绿色食品,吃起来放心。另外,鲑鳟鱼是一种高蛋白、高脂肪、低胆固醇(胆固醇含量微乎其微)的鱼类。和其它鱼相比,鲑鳟鱼含有一般鱼类所缺乏的甘氨酸,维生素A、B的含量也高于其它鱼类,微量元素铁的含量更是其它鱼类所不及。鲑鳟鱼肉质鲜嫩,无邪味,无腥味,无需刮鳞,人每周吃两次鲑鳟鱼就可以预防血栓病的发生。意大利专家一项最新的研究结果表明,吃含有鲑鳟鱼的保健品能够大幅 度减少心脏病患者突然死亡的风险。每天吃I克用鲑鳟鱼鱼油提炼的DHA,将会减少心脏病发作时突然死亡的风险。因此,鲑鳟鱼是一种肉质鲜美且具有保健价值的鱼类。由于其自身的品质和对生活环境的特殊要求,决定了它绿色、环保营养食品的性质,因此颇受消费者的青睐。鲑鳟鱼是我国目前主要的冷水性养殖鱼类,由于长期近亲繁殖、缺乏系统选育等原因,导致养殖个体出现了性早熟、个体小型化、病害滋生等问题,不能满足消费者对大规格鲑鳟鱼的需求,造成养殖效益下降。
[0003] 研究表明:虹鳟鱼三倍体具有可将能量全部用于体细胞生长,从而提高饵料转化率,在幼鱼期和成熟期三倍体普遍比二倍体生长快;避免了性腺发育阶段和产卵季节因能量转移和婚姻色出现而导致的鱼肉品质下降及表观特征变化;抗病能力较二倍体更强(水霉病、IHN病毒病)等优点,已成为国内外水产科学工作者的研究热点,自上世纪80年代以来,三倍体鱼类的人工诱导工作取得了长足进展。
[0004] 国内对鲑鳟鱼三倍体苗种制备的研究主要集中在纯种虹鳟鱼的三倍体制备,其方法为热休克法或静水压方法。现有热休克方法制备纯种三倍体虹鳟鱼的技术是当在26. 5°C的条件下,受精卵发眼率为67. 80 % -70. 28 %,鱼苗三倍体率能够达到50% -65% ;当在28°C条件下,受精卵发眼率为29. 78% -32. 75%,鱼苗三倍体率能够达到80.95% -83. 18% ;在30°C条件下,能够得到非常高的三倍体率,达到90%以上,但其发眼率通常不超过10%,且苗种畸形率高,始终无法形成规模化生产,其原因为现有的纯种生产三倍体苗种制备技术或无法达到生产要求的三倍体率或无法达到可用于生产的苗种成活率。因此,迫切需要一种技术成熟的鲑鳟鱼三倍体育苗技术,提高受精卵的发眼率和苗种三倍体率,从而实现鲑鳟鱼杂交三倍体苗种的规模化生产。
发明内容
[0005] 本发明的目的在于提供一种鲑鳟鱼杂交三倍体苗种制备方法,以克服现有技术的不足。
[0006] 本发明提供的鲑鳟鱼三倍体苗种的制备方法,包括以下步骤:
[0007] (I)鳟鱼亲鱼卵子与鲑鱼亲鱼精子进行杂交;
[0008] (2)热休克法处理受精卵; [0009] (3)降温处理受精卵;
[0010] (4)受精卵在养殖用水中孵化。
[0011] 本发明的鲑鳟鱼杂交三倍体苗种的制备方法,优选鳟鱼亲鱼为硬头鳟,鲑鱼亲鱼为北极红点鲑。
[0012] 进一步地,本发明方法的步骤(I)杂交前按照常规方法使亲鱼同步发育成熟,硬头鳟亲鱼培育水温为10-13°C,流水池水交换量为2h/次;北极红点鲑亲鱼培育水温为8-10°C,流水池水交换量为4h/次。
[0013] 本发明方法中,所述步骤(I)采用挤压法将鱼卵取出;精液用孵化用水清洗,方法为精液与孵化用水的体积比为1-1. 5 : 2500-3000,搅拌0. 5-1. 5min后倒掉水,同样方法反复冲洗3-5次。
[0014] 本发明方法中,所述步骤⑵热休克法处理方法为:鱼卵受精14_16min后,将受精卵迅速移入17. 5-18. 5°C水体中预热4-6min ;之后迅速移入25. 5-26. 5°C水体中,处理19_21min0
[0015] 本发明方法中,所述步骤⑶降温处理方法为:将步骤2)热处理的受精卵迅速移A 17. 5-18. 5°C水体中,降温处理时间为4-6min。
[0016] 本发明方法中,所述步骤(4)受精卵的孵化条件为5_13°C水体孵化55-65天。
[0017] 本发明提供一种鲑鳟鱼三倍体苗种的制备方法,具体操作为:选取硬头鳟雌鱼鱼卵和北极红点鲑鱼雄鱼精子进行杂交受精,鱼卵受精15min后,将受精卵迅速移入18°C水体中预热5min ;之后迅速移入26°C水体中开始热休克处理,保持水温26°C恒定,处理20min ;之后迅速将受精卵移入18°C水体中进行降温处理,处理时间为5min ;之后迅速将受精卵移入7-7. 5°C水体中正常孵化60天,得到鲑鳟鱼三倍体鱼苗。
[0018] 本发明制备方法所用的水体均为符合国家渔业水质标准规定的孵化用水。
[0019] 本发明提供了上述制备方法在鲑鳟鱼三倍体苗种育种工作中的应用。
[0020] 本发明采用硬头鳟雌鱼与北极红点鲑雄鱼的杂交技术,通过热休克的方法抑制受精卵第二极体的排出,实现了硬头鳟雌鱼与北极红点鲑雄鱼的杂交三倍体苗种的制备,受精卵发眼率达到75%,苗种孵化率达到90%以上,苗种三倍体率达到90% -95%,本发明方法受精卵发眼率与正常鲑鳟鱼生产相同,三倍体率达到了生产需求,得到的苗种同时具有杂交优势和三倍体优势,从而提高鲑鳟鱼养殖生产的商品鱼规格和鲑鳟鱼生长速度,缓解了虹鳟鱼养殖过程中由于长期的近亲繁殖和缺乏系统的选育,导致养殖个体出现了性早熟、个体小型化、病害滋生等问题,同时杂交三倍体具有杂交和三倍体两种优势,在生长速度和抗病能力上明显优于现有的二倍体虹鳟鱼,具有较好的经济效益和市场价值。
具体实施方式
[0021] 以下实施例进一步说明本发明的内容,但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下,对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换,均属于本发明的范围。
[0022] 若未特别指明,实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。本发明的硬头鳟亲鱼和北极红点鲑亲鱼均为北京市水产科学研究所由北欧玛生物科技有限公司购买的发眼卵培育而成。
[0023] 实施例I鲑鳟鱼三倍体苗种制备方法(I)
[0024] 采用水流刺激,控制光照等手段,使硬头鳟亲鱼和北极红点鲑亲鱼同步发育成熟。硬头鳟亲鱼培育水温为10°c,流水池水交换量为2h/次;北极红点鲑亲鱼培育水温为8°C,流水池水交换量为4h/次。
[0025] 鱼卵采用干法受精。先将发育成熟的硬头鳟雌鱼采用挤压法将鱼卵挤入干净的瓷盆内,每4尾雌鱼为I组,再将2尾雄性北极红点鲑的精液挤入水盆内,立即搅拌均匀,加入精液与孵化用水的体积比为I : 2500的孵化用水,轻轻搅拌,Imin后将水倒出,反复3次,将精液清洗干净,放置等待处理。
[0026] 硬头鳟鱼卵受精15min后,将受精卵迅速移入18°C水体中预热5min ;之后迅速移A 25. 5°C水体中,开始热休克处理,期间保持水温在25. 5°C,处理时间为20min ;之后迅速移入18°C水体中进行降温处理,处理时间为5min ;之后迅速移入13°C的孵化水体中正常孵化。
[0027] 经过62天孵化出鱼苗,期间三倍体受精卵发眼率为75%,苗种孵化率为92%,其苗种经流式细胞仪检测为三倍体率为93%的硬头鳟与北极红点鲑的杂交三倍体。发眼卵至4月龄阶段三倍体成活率为发眼阶段的81. 5%。
[0028] 实施例2鲑鳟鱼三倍体苗种制备方法(2)
[0029] 采用水流刺激,控制光照等手段,使硬头鳟亲鱼和北极红点鲑亲鱼同步发育成熟。硬头鳟亲鱼培育水温为13°C,流水池水交换量为2h/次;北极红点鲑亲鱼培育水温为10°C,流水池水交换量为4h/次。
[0030] 鱼卵采用干法受精。先将发育成熟的硬头鳟雌鱼采用挤压法将鱼卵挤入干净的瓷盆内,每4尾雌鱼为I组,再将2尾雄性北极红点鲑的精液挤入水盆内,立即搅拌均匀,加入精液与孵化用水的体积比为I : 3000的孵化用水,轻轻搅拌,I. 5min后将水倒出,反复4次,将精液清洗干净,放置等待处理。
[0031] 硬头鳟鱼卵受精14min后,将受精卵迅速移入18. 5°C水体中预热4min ;之后迅速移入26°C水体中,开始热休克处理,期间保持水温在26°C,处理时间为21min ;之后迅速移A 18. 5°C水体中进行降温处理,处理时间为4min ;之后迅速移入7°C的孵化水体中正常孵化。
[0032] 经过63天孵化出鱼苗,期间三倍体受精卵发眼率为76%,苗种孵化率为91%,其苗种经流式细胞仪检测为三倍体率为90%的硬头鳟与北极红点鲑的杂交三倍体。发眼卵至4月龄阶段三倍体成活率为发眼阶段的79. 5%。
[0033] 实施例3鲑鳟鱼三倍体苗种制备方法(3)
[0034] 采用水流刺激,控制光照等手段,使硬头鳟亲鱼和北极红点鲑亲鱼同步发育成熟。硬头鳟亲鱼培育水温为12°C,流水池水交换量为2h/次;北极红点鲑亲鱼培育水温为9°C, 流水池水交换量为4h/次。
[0035] 鱼卵采用干法受精。先将发育成熟的硬头鳟雌鱼采用挤压法将鱼卵挤入干净的瓷盆内,每4尾雌鱼为I组,再将2尾雄性北极红点鲑的精液挤入水盆内,立即搅拌均匀,加入精液与孵化用水的体积比为I. 5 : 3000的孵化用水,轻轻搅拌,0. 5min后将水倒出,反复5次,将精液清洗干净,放置等待处理。
[0036] 硬头鳟鱼卵受精16min后,将受精卵迅速移入17. 5°C水体中预热6min ;之后迅速移入26. 5°C水体中, 开始热休克处理,期间保持水温在26. 5°C,处理时间为19min ;之后迅速移入17. 5°C水体中进行降温处理,处理时间为6min ;之后迅速移入5°C的孵化水体中正
常孵化。
[0037] 经过60天孵化出鱼苗,期间三倍体受精卵发眼率为80%,苗种孵化率为96%,其苗种经流式细胞仪检测为三倍体率为95%的硬头鳟与北极红点鲑的杂交三倍体。发眼卵至4月龄阶段三倍体成活率为发眼阶段的80. 2%。
[0038] 实施例4鲑鳟鱼三倍体苗种制备方法(4)
[0039] 采用水流刺激,控制光照等手段,使硬头鳟亲鱼和北极红点鲑亲鱼同步发育成熟。硬头鳟亲鱼培育水温为11 °C,流水池水交换量为2h/次;北极红点鲑亲鱼培育水温为10°C,流水池水交换量为4h/次。
[0040] 鱼卵采用干法受精。先将发育成熟的硬头鳟雌鱼采用挤压法将鱼卵挤入干净的瓷盆内,每4尾雌鱼为I组,再将2尾雄性北极红点鲑的精液挤入水盆内,立即搅拌均匀,加入精液与孵化用水的体积比为1.5 : 2500的孵化用水,轻轻搅拌,Imin后将水倒出,反复4次,将精液清洗干净,放置等待处理。
[0041] 硬头鳟鱼卵受精15min后,将受精卵迅速移入18°C水体中预热5min ;5min后迅速移入26°C水体中,开始热休克处理,期间保持水温在26°C,处理时间为20min ;之后迅速移入18°C水体中进行降温处理,处理时间为5min ;之后迅速移入10°C的孵化水体中正常孵化。
[0042] 经过55天孵化出鱼苗,期间三倍体受精卵发眼率为77%,苗种孵化率为95%,其苗种经流式细胞仪检测为三倍体率为94%的硬头鳟与北极红点鲑的杂交三倍体。发眼卵至4月龄阶段三倍体成活率为发眼阶段的85. 3%。
[0043] 实施例5鲑鳟鱼三倍体苗种制备方法(5)
[0044] 采用水流刺激,控制光照等手段,使硬头鳟亲鱼和北极红点鲑亲鱼同步发育成熟。硬头鳟亲鱼培育水温为12°C,流水池水交换量为2h/次;北极红点鲑亲鱼培育水温为8°C,流水池水交换量为4h/次。
[0045] 鱼卵采用干法受精。先将发育成熟的硬头鳟雌鱼采用挤压法将鱼卵挤入干净的瓷盆内,每4尾雌鱼为I组,再将2尾雄性北极红点鲑的精液挤入水盆内,立即搅拌均匀,加入精液与孵化用水的体积比为I : 2800的孵化用水,轻轻搅拌,I. 5min后将水倒出,反复3次,将精液清洗干净,放置等待处理。
[0046] 硬头鳟鱼卵受精16min后,将受精卵迅速移入18°C水体中预热6min ;之后迅速移A 26. 2°C水体中,开始热休克处理,期间保持水温在26. 2°C,处理时间为19min ;之后后迅速移入18°C水体中进行降温处理,处理时间为6min ;之后迅速移入12°C的孵化水体中正常孵化。
[0047] 经过65天孵化出鱼苗,期间三倍体受精卵发眼率为79%,苗种孵化率为90%,其苗种经流式细胞仪检测为三倍体率为95%的硬头鳟与北极红点鲑的杂交三倍体。发眼卵至4月龄阶段三倍体成活率为发眼阶段的81. 5%。
[0048] 实施例6鲑鳟鱼三倍体苗种制备方法(6)
[0049] 采用硬头鳟亲鱼和北极红点鲑亲鱼,亲鱼同步发育成熟、鱼卵受精的方法与实施例1-5的方法相同。
[0050] 硬头鳟鱼卵受精IOmin后,将受精卵迅速移入20°C水体中预热5min ;之后迅速移A 28°C水体中,开始热休克处理,期间保持水温在28°C,处理时间为15min ;之后迅速移入20°C水体中进行降温处理,处理时间为5min ;之后迅速移入12°C的水体中正常孵化。
[0051] 经过32天孵化出鱼苗,期间三倍体受精卵发眼率为70%,苗种孵化率为75%,其苗种经流式细胞仪检测为三倍体率为90%的硬头鳟与北极红点鲑的杂交三倍体。发眼卵至4月龄阶段三倍体成活率为发眼阶段的5. 56%。可见使用本实施例的方法得到的杂交三倍 体发眼率、孵化率和成活率均低于实施例1-5方法得到的杂交三倍体。说明预热水温、热休克水温的不同对诱导杂交三倍体能够产生不同的结果。因此,选择(18±0. 5) °C的预热水温和(26±0. 5) °C的热休克水温能够诱导高质量的杂交三倍体。
[0052] 实施例7本发明培育的三倍体苗种生长速度和抗病能力验证
[0053] I、实验用鱼
[0054] 分别为实施例1-5方法制备得到的杂交三倍体鱼种,虹鳟鱼种(为正常二倍体鱼种),均无伤病、体质健壮;其中实施例1-5方法培育的杂交三倍体苗种平均规格为16. 8g/尾,共6000尾,虹鳟鱼种平均规格为16. 5g/尾,共6000尾;投喂北京产冷水鱼鱼种配合饲料。
[0055] 2、试验方法
[0056] 杂交三倍体鱼种和虹鳟鱼种分别在两个鱼种培育池中单独喂养,鱼种培育池均采用水泥池流水培育,鱼种培育池面积为40m2,水深0. 8m,水流量为151/s,苗种培育水温在为13.9°C-14.8°C之间;鱼种放养密度为150尾/m2;每天投喂3次,分别为8:00、12:00、16:00,投喂饲料量为鱼体重的2. 7%。
[0057] 3、日常管理:每隔5天,排干池水,清理池底I次,每天清晨检测养殖池溶氧I次;试验期间每隔20天随机取样100尾称重I次。
[0058] 4、结果
[0059] I、鱼种培育试验共经历100天,本发明实施例1-5方法培育的杂交三倍体鱼种总重量从投放时的100. 8kg增重至977. 8kg,增重8. 7倍;虹鳟鱼种总重量从投放时的99kg增重至796kg,增重7. I倍,杂交三倍体鱼种的生长速度较虹鳟快22. 5%。
[0060] 2、两种鱼种投喂相冋的北点广的冷水鱼鱼种词料,投喂量均为鱼体重的2.7*%,每20天调整一次投喂量,试验期间杂交三倍体鱼种池共投喂饲料947. 2kg,虹鳟鱼种投喂饲料858. 2kg,经测算后得到本发明育得的杂交三倍体鲑鳟鱼的饲料系数为1.08 ;虹鳟的饲料系数为I. 23,可以发现杂交三倍体鲑鳟鱼的饲料利用效率是虹鳟鱼种饲料利用效率的
I. 2 倍。
[0061] 3、试验所用鱼种均为体格健壮,无伤病的鱼种,在试验期间没有发病现象,因此本次试验鱼种培育的成活率均很高,杂交三倍体鱼种培育成活率达到99. 7%,虹鳟苗种培育成活率达到99. 6%,无明显的差异。
[0062] 综上所述,杂交三倍体鱼种无论在生长速度上还是在饲料利用效率上,都较虹鳟有明显的优势,具有 广阔的推广空间,生产中甚至有取代虹鳟的趋势。

Claims (10)

1. 一种鲑鳟鱼杂交三倍体苗种的制备方法,其特征在于,包括以下步骤: 1)鳟鱼亲鱼卵子与鲑鱼亲鱼精子进行杂交; 2)热休克法处理受精卵; 3)降温处理受精卵; 4)受精卵在养殖用水中孵化。
2.如权利要求I所述的制备方法,其特征在于,所述鳟鱼亲鱼为硬头鳟,所述鲑鱼亲鱼为北极红点鲑。
3.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤I)杂交前按照常规方法使亲鱼同步发育成熟,硬头鳟亲鱼培育水温为10-13°C,流水池水交换量为2h/次;北极红点鲑亲鱼培育水温为8-10°C,流水池水交换量为4h/次。
4.如权利要求I所述的制备方法,其特征在于,所述步骤I)采用挤压法将鱼卵取出;精液用孵化用水清洗,方法为精液与孵化用水的体积比为1-1.5 : 2500-3000,搅拌1-1. 5min后倒掉水,同样方法反复冲洗3-5次。
5.如权利要求I所述的制备方法,其特征在于,所述步骤2)热休克法处理方法为:鱼卵受精14-16min后,将受精卵迅速移入17. 5-18. 5°C水体中预热4_6min ;之后迅速移入25. 5-26. 5°C水体中,处理 19-21min。
6.如权利要求I所述的制备方法,其特征在于,所述步骤3)降温处理方法为:将步骤2)热处理的受精卵迅速移入17. 5-18. 5°C水体中,降温处理时间为4-6min。
7.如权利要求I所述的制备方法,其特征在于,所述步骤4)受精卵的孵化条件为5-13°C水体孵化55-65天。
8. 一种鲑鳟鱼杂交三倍体苗种的制备方法,其特征在于,选取硬头鳟雌鱼鱼卵和北极红点鲑鱼雄鱼精子进行杂交受精,鱼卵受精15min后,将受精卵迅速移入18°C水体中预热5min ;之后迅速移入26°C水体中开始热休克处理,保持水温26°C恒定,处理20min ;之后迅速将受精卵移入18°C水体中进行降温处理,处理时间为5min ;之后迅速将受精卵移入7V水体中正常孵化60天,得到鲑鳟鱼三倍体鱼苗。
9.如权利要求8所述的方法,其特征在于,所述水体为符合国家渔业水质标准的孵化用水。
10.权利要求1-9任一所述方法在鲑鳟鱼杂交三倍体苗种育种工作中的应用。
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