CN1104437C

CN1104437C - 从老鹳草中提取的新化合物及其药物制剂

Info

Publication number: CN1104437C
Application number: CN98120203A
Authority: CN
Inventors: 魏璐雪; 雷海民
Original assignee: Beijing University of Chinese Medicine
Current assignee: Beijing University of Chinese Medicine
Priority date: 1998-09-30
Filing date: 1998-09-30
Publication date: 2003-04-02
Anticipated expiration: 2018-09-30
Also published as: CN1249308A

Abstract

本发明公开了一种化合物，该化合物的结构式如下：其中R代表或者H；该化合物具有抗肿瘤活性，可用于制备抗肿瘤药物。本发明还公开了含有所述化合物的药物组合物。

Description

从老鹳草中提取的新化合物及其药物制剂

本发明涉及一种新的化合物及其衍生物，该化合物是从中药老鹳草中提取得到的新物质，具有抗肿瘤活性；本发明还涉及含有该化合物的药物制剂。

95版中国药典收载，老鹳草为拢牛儿苗科植物拢牛儿苗(Erodium stepha-nianum willd)或老鹳草(Geranium wilfordii Maxim)的干燥地上部分。有祛风湿、通经络、止泻痢的功能。主治风湿痹痛，麻木拘挛，筋骨酸痛，泄泻痢疾。其制剂老鹳草软膏有消炎解毒、收敛生肌的功能，主治湿疹、痈、疔、疮、疖、小面积水、火烫伤。在我国，老鹳草品种较多，分布较广，资源颇丰，有着广阔的应用开发前景。

鞣质(Tannins)是一类结构复杂的多元酚类化合物，其具有广泛的药理活性，近年来倍受人们的重视，尤其在抗肿瘤、抗病毒、消除自由基、降压降脂等方面的活性。发明人经过多年的研究工作，从老鹳草商品来源之一的粗根老鹳草(Geranium dahuricum DC.)中分离得到单体化合物，属于多元酚类化合物，经过药理活性筛选，完成了本发明。

因此，本发明目的是提供一种新的化合物，该化合物具有抗肿瘤活性。

本发明的另一目的是提供一种新的药物组合物。

本发明所说的化合物具有下述结构式：其中R代表或者H。当R为

时，其化学名称

为没食子酸甲酯-3-O-β-D-(6’-O-没食子酰基)-吡喃葡萄糖甙式，在本申请中称之为GD-BA。

当R＝H时，其化学名称为：没食子酸甲酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖甙，在本申请中称之为GD-BB。

上述化合物是从粗根老鹳草中分离的单体化合物，经过光谱分析，具有如下理化特性。

GD-BA：为黄棕色粉来(甲醇)，MP159-160℃，易溶于甲醇、乙醇、水，FeCl3反应阳性，Molish反应阳性，紫外光谱max(甲醇)：280nm处有最大吸收，红外光谱cm^-1(KBr压片)：3450.0(OH)，2957.0(CH₃)，1693.8(C＝O)，1611.7(C＝C)，1079.5(C-O)，875.0，766.5(C-H)等处有吸收峰。核磁共振氢谱(DMSO)δppm：

7.18，d，J＝2HZ，1H(H-2)；7.12，d，J＝2HZ，1H(H-6)；6.95，s，2H(H-2”6”)；3.63，S，3H(OCH₃)；4.81，d，J＝6HZ，1H(H-1’)，4.42，d，J＝14HZ，1H(H-6’)；4.28，dd，J＝14，6HZ；1H(H-6’)；3，0-4.0，m，4H(糖除C₁’-H和C₆’-H双氢外其余氢)。¹³CNMR(DMSO)δPPM：165.9(C-7”)，119.6(C-1”)，108.8(C-2”，6”)，145.5(C-3”，5”)，138.4(C-4”)，166.0(C-7)，119.4(C-1)，111.8(C-2)，140.4(C-3)145.7(C-4)，145.6(C-5)109.4(C-6)，102.6(C-1’)73.4(C-2’)75.5(C-3’)69.7(C-4’)，74.2(C-5’)63.4(C-6’)51.7(OCH₃)，质谱(m/Z)：499(M+1)⁺，315(M+1-没食子酸甲酯)⁺，153(M+1一没食子酸甲酯一葡萄糖)⁺。

GD-BB：黄棕色粉末(甲醇)，mp119-120℃，易溶于甲醇，乙醇，次，FeCl3反应暗绿色，Molish反应阳性，紫外光谱max(甲醇)：280nm处有最大吸收峰，红外光谱U_cm ^-1(KBr压片)：3450.0(OH)，2957.0(CH₃)，1702.1(C＝O)，1610.4(C＝C)，1329.9(CH₃)，1074.9(c-O)，764.6(CH)等处有吸收峰，HNMR(DMSO)δPPM：7.2，d，J＝2HZ，1H(H-2)；7.12，d，J＝2HZ，1H(H-6)；4.68，d，J＝9HZ，1H((C₁-H)，3.73，S，3H(O-CH₃)，3.0-4.0，m，6H(糖上除C₁-H外的其余氢)。¹³CNMR(DMSO)δPPM：166.1(C＝O)，118.8(C-1)，116.6(C-2)，141.4(C-3)，145.5(C-4)，145.8(C-5)，110.4(C-6)，103.2(C-1’)，73.4(C-2’)，75.9(C-3’)69.7(C-4’)，77.3(C-5’)，60.6(C-6’)，51.7(OCH₃)；质谱(m/z)：347(M+H)⁺，185(m+1-葡萄糖)⁺，153(m+1-没食子酰基)⁺。

上述两种物质是从粗根老鹳草中提取分离的，其提取分离方法如下：

取2.6kg新鲜粗根老鹳草全草(干约1kg)，切碎，用70％丙酮高速粉碎提取2次，提取液减压浓缩至500ml，依次用乙醚(300ml×5)、乙酸乙酯(500ml×10)、正丁醇(300ml×8)萃取，萃取液分别减压浓缩并抽干得乙醚部分(GD-A)33.6g，乙酸乙酯部分(GD-B)52.2g，正丁醇部分(GD-C)39.8g，水部分(GD-D)87.7g，总提取率为21.3％，取GD-B部分25.0g，30％甲醇溶解，不溶部分用吡啶溶解得黄色针状结晶为GD-BX。30％甲醇溶液(约19g)上ToyopearLHW40(Coarse)柱，依次用H₂O，10％、30％、50％、70％甲醇、50％丙酮梯度洗脱，部分收集仪收集。在280nm波长处紫外检测每一流份，继用硅胶薄层1b、1c、1d和高效液相3a系统跟踪，合并相同流份，得GD-BA及GDB₁、GD-B₂、GD-B₃、GD-B₄、GD-B₅、GD-B₆、GD-B₇部分。GD-B₁部分上Sephadex LH-20柱，30％乙醇洗脱，检测同GD-B部分，合并相同流份得化合物GD-BB。

经过药理学实验筛选，上述化合物具有抗肿瘤活性，对于GD-BA和GD-BB两种化合物在结构式上的适当修饰所产生的衍生物，由于也具备了其药理活性主架结构，在不改变本发明实质内容的情况下，仍属于本发明的保护范围。

由于本发明的化合物具有抗肿瘤活性，按照常规的制药技术，可以将其制备成任何一种常规药剂，例如，片剂，丸剂，胶囊剂，冲剂，喷雾剂，口服液、混悬液，透皮吸收剂，注射剂等。

做为含有本发明化合物的药物组合物，其组成为含有治疗有效量的本发明化合物GD-BA或GD-BB，所说的化合物GD-BA和GD-BB在药物组合物当中可以是单独使用，也可以是组合使用，如果配合使用，GD-BA与GD-BB的用量比为(1-10)：(10-1)重量比。

本发明的药物组合物一般含有0.1-99％的化合物GD-BA或GD-BB，优选含有1-50％，更优选1-30％，最好为1-20％重量比的本发明化合物GD-BA或GD-BB。

本发明的药物组合物除了含有上述化合物之外，还含有常规的药物赋形剂，例如，粘合剂、崩解剂、填冲剂、润滑剂、调味剂、增溶剂、溶剂、防腐剂等。

下述的药理实验证实了本发明化合物的抗肿瘤药理活性。

实验例

抗肿瘤活性的初步筛选

自1972年Kerr提出凋亡的概念，越来越多的研究表明肿瘤的发生与凋亡之间有着密不可分的联系。正常状态下细胞增殖与细胞凋亡维持着一种动态的平衡，若增殖增加或凋亡受阻，则细胞表现出生长优势，这是肿瘤发生的重要基础，本实验是在东直门医院血液科协作下，初步观察了GD-BA、GD-BX、ES-BG对HL-60(人早幼粒白血病细胞株)的影响，初步实验结果如下：

HL-60细胞株，在RPMI-1640培养液中，加入10-15％胎牛血清，于CO₂培养箱中37℃恒温培养；2-3天换液一次；在HL-60细胞数为1×10⁵时，加入药物5ml(C＝10ug/ml)，观察0小时、24小时、72小时细胞死亡数，以死亡率＝代细胞死亡数/代细胞总数来评价药物对HL-60细胞的促凋亡作用(表1)。

表1 不同单体对HL-60细胞的促凋亡作用供试品 0小时(％) 24小时(％) 72小时(％)GD-BA 6.25±8.84 95.6±5.04* 100±0*GD-BX 0±0 83.6±8.27* 100±0*ES-BG 0±0 86.8±18.6* 100±0*虫草素 6.25±8.84 43.2±9.64* 100±0*对照组 6.25±8.84 14.2±13.6* 29.0±12.8

注：t检验 *P＜0.01

实验结果表明：与对照组比较，GD-BA、GD-BX、ES-BG在24h和72h内具有显著促细胞凋亡作用。从而说明本发明的化合物具有抗肿瘤活性。

实施例1

化合物GD-BA和GD-BB的提取分离。

1、实验材料及仪器

1.1药材

粗根老鹳草采自陕西省太白山，由西安医科大学药学院生药教研究徐文友教授鉴定为拢牛儿苗科老鹳草属植物粗根老鹳草Geranium dahuricum DC。

1.2仪器

熔点用Boetius THMKO5型显微熔点测定仪测定，温度计未校正；紫外光谱用日本岛津UV-2000型紫外分光光度计测定；红外光谱用NICOLET FI-IR 5D-X红外光谱仪测定(KBr压片)；核磁共振氢谱用VIRIAN GEMINI300型核磁共振仪测定，TMS为内标；质谱用ZebspecE型质谱仪测定；高效液相图谱用Beckman332型液相色谱仪测定，色谱柱为C₁₈10um(4.0mm×25cm)；回收溶剂用上海玻璃仪器二厂生产的旋转薄膜蒸发仪；部分收集器为上海沪西仪器厂生产。

1.3试药

柱层析用Toyopeal HW 40(Fine)和Toyopearl HW 40(coarse)为日本Tosoh公司生产；柱层析Sephadex LH-20为上海化学试剂厂分装(Pharmacia产品)；柱层析C₁₈为Macherey NAGEL产品；柱层析和薄层层析硅较为青岛海洋化工厂产品。检测系统：(1)硅胶G薄层板，展开剂Ia乙酸乙酯∶石油醚∶甲酸(3∶6.5∶0.5，3.5∶6.5∶1)，显色剂2％FeCL₃乙醇溶液；1b苯∶甲酸乙酯∶甲酸(1∶7∶1)，1C苯∶甲酸乙醋∶甲酸(2∶7∶1)，1d苯∶甲酸乙醋∶甲酸(1∶5∶2)，显色剂2％FeCl₃乙醇溶液；le氯仿∶甲醇∶水(30∶12∶4下层)9ml加1ml冰醋酸，显示剂邻苯二甲酸苯胺试剂。(2)聚酰胺-6薄膜，展开剂2a 95％乙醇；2b 60％乙醇，显色剂为1％AICl₃乙醇液。(3)HPLC反相色谱，流动相3a0.05％H₃PO₄∶0.05％KH₂PO₄∶EtoH∶EtO AC(42.5∶42.5∶10∶5)；流速1.0ml/min。

2、提取分离

2.1提取：取2.6kg新鲜粗根老鹳草全草(干约1kg)，切碎，用70％丙硐高速粉碎提取2次，提取液减压浓缩到500ml，依次用乙醚(300ml×5)、乙酸乙酯(500ml×10)、正丁醇(300ml×8)萃取，萃取液分别减压浓缩并抽干得乙醚部分(GD-A)33.6g，乙酸乙酯部分(GD-B)52.2g、正丁醇部分(GD-C)39.8g，水部分(GD-D)87.7g，总提取率为21.3％。

2.2分离

取GD-B部分25.0g，30％甲醇溶解，不溶部分用吡啶溶解得黄色针状结晶为GD-BX。30％甲醇溶液(约19g)上Toyopearl HW 40(Coarse)柱，依次用H₂O、10％、30％、50％、70％甲醇、50％丙酮梯度洗脱，部分收集仪收集。在280nm波长处紫外检测每一流份，继用硅胶薄层1b、1c、1d和高效液相3a系统跟踪，合并相同流份，得GD-BA及GD-B₁，GD-B₂，GD-B₃，GD-B₄，GD-B₅，GD-B₆，GD-B₇部分，GD-B1部分上Sephadex LH-20柱，30％乙醇洗脱，检测同GD-B部分，合并相同流份得化合物GD-BB。

实施例2

制备抗肿瘤片剂

取实施例1制备的化合物GD-BA10克，加入赋形剂药用淀粉90克，混合均匀，造粒，整粒压片，制得片剂，每片含化合物GD-BA10毫克。

实施例3

制备本发明抗肿瘤口服液

取实施例1制备的化合物GD-BB10克，加入到蒸馏水1980克中，加入调味剂和防腐剂适量，制成口服液，每毫升含化合物10毫克。

Claims

1、一种化合物，其特征在于该化合物的结构式如下：

2、一种药物组合物，其特征在于含治疗有效量的下述结构式化合物及药物赋形剂：

3、具备下述结构式的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用：其中R代表或者H。