CN110441447B - 一种氘代标记的磺胺二甲唑-d4的合成方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种氘代标记的磺胺二甲唑‑d 4的合成方法，包括将N‑乙酰基磺胺二甲唑‑d 4在蛋白酶的水解催化下脱去乙酰基得到磺胺二甲唑‑d 4。同时本发明公开了以苯‑d 6为起始原料，经乙酰化、羰基成肟、Beckmann重排成N‑乙酰苯胺‑d 5、氯磺酰化、酰胺化与酶水解脱乙酰基六步反应得到磺胺二甲唑‑d 4的合成路线。本发明提供的合成方法通过蛋白酶水解法脱去乙酰基，相对于传统的酸碱法，避免酸或碱条件下脱乙酰基时发生异恶唑环水解而造成的收率较低的问题。本发明的方法原料易得，操作简单，重现性较好，产品收率与同位素丰度较高，满足作为内标药物的质量要求。

Description

一种氘代标记的磺胺二甲唑-d4的合成方法
技术领域
本发明涉及药物合成技术领域，具体涉及到一种氘代标记的磺胺二甲唑的合成方法。
背景技术
磺胺类药的种类繁多，主要作用是抑制细菌的繁殖，因有些细菌生长时，需利用对氨基苯甲酸。氨基苯甲酸和二氢嘧啶在二氢叶酸合成酶的作用下，合成二氢叶酸；二氢叶酸在二氢叶酸还原酶的作用下，又生成四氢叶酸；四氢叶酸再进一步形成活化型四氢叶酸，也就是辅酶F，它能传递碳基团参与嘌呤、嘧啶核苷酸合成。由于磺胺类药的化学结构与氨基苯甲酸相似，可与氨苯甲酸竞争二氢叶酸合成酶，妨碍二氢叶酸的形成，最终影响细菌核蛋白的合成，从而抑制细菌的生长繁殖。
作为磺胺类药物中的一种，磺胺二甲唑是人工合成的抗菌药物之一，具有抗菌谱广的特点，对链球菌、沙门氏菌、葡萄球菌、痢疾杆菌、巴氏杆菌、大肠杆菌、李氏杆菌等均有抑制作用，目前主要作为兽药，在鸡、猪、牛、羊等家禽、牲畜养殖方面广泛使用。随着人们对食品安全问题越来越重视，动物性食品中的兽药残留问题已成为人们普遍关注的社会热点，在农业部关于印发2017年动物及动物产品兽药残留监控计划的通知中，明确要求对相关动物源食品中磺胺类兽药残留的检测。
在兽药残留检测中，应用稳定同位素标记药物作为内标物，结合色谱-串联质谱技术，可更加准确、灵敏、快速，现已经成为食品安全国家标准中常采用的方法（如：农业部1077号公告-1-2008 水产品中17种磺胺类及15种喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法）。目前，在国内市场上销售的稳定同位素标记药物大多为代理进口产品，价格较昂贵，严重限制了该类稳定同位素标记标准品在我国食品安全领域的应用，不利于我国食品安全监管与防范水平的提升。
稳定同位素氘代标记的磺胺二甲唑-d 4可以很好的作为动物源食品中的磺胺类兽药残留检测的内标物。目前，关于磺胺二甲唑-d 4的合成研究鲜见报道，因此，亟需开发一种稳定性高，操作简单易行，成本相对较低的稳定同位素氘代标记的磺胺二甲唑-d 4的合成方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种氘代标记的磺胺二甲唑的合成方法。
为达上述目的，本发明的一个技术方案中提供了一种氘代标记的磺胺二甲唑的合成方法，合成方法是以氘代N-乙酰基磺胺二甲唑经酶水解催化脱乙酰基得到氘代磺胺二甲唑；氘代的取代基为N-乙酰基磺胺二甲唑的苯环取代基。
本发明的另一个技术方案公开了一种氘代标记的磺胺二甲唑的合成方法，包括将式I 所示化合物N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4在蛋白酶的水解催化下脱去乙酰基得到式II所示化合物磺胺二甲唑-d 4，合成反应式如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
为了能够准确的实施本发明，本发明的优化方案中，蛋白酶为胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、糜蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草蛋白酶中的一种或者多种的混合物。
本发明的优化方案之一：蛋白酶的溶剂为甲醇水溶液、乙醇水溶液、丙酮水溶液或者乙腈水溶液中的一种或者几种的混合。
本发明的优化方案之一：蛋白酶的溶剂中溶质与水的体积比为4:1；式I所示化合物N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4与蛋白酶的投料比为100 mg : 10000 U，水解反应的温度为25℃~35℃。
本发明的优化方案之一：水解反应的过程为：将N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4与蛋白酶加入到溶剂中，于25℃~35℃下搅拌反应；反应完毕后，减压浓缩蒸除溶剂得到粗品，粗品中加入稀盐酸溶液，然后过滤；滤液用饱和氢氧化钙溶液调节pH 为弱碱性，析出白色固体磺胺二甲唑-d 4。
本发明还公开了一种氘代标记的磺胺二甲唑的合成方法，合成方法是以苯-d 6与乙酰氯作为起始原料，经乙酰化、羰基成肟、Beckmann重排成N-乙酰苯胺-d 5、氯磺酰化、酰胺化与酶水解脱乙酰基六步反应得到磺胺二甲唑-d 4；合成方法具体步骤包括：
苯-d 6与乙酰氯反应得苯乙酮-d 5；
苯乙酮-d 5发生羰基成肟反应得到苯乙酮肟-d 5；
苯乙酮肟-d 5发生Beckmann重排反应生成N-乙酰苯胺-d 5；
N-乙酰苯胺-d 5经氯磺酰化得到N-乙酰氨基苯磺酰氯-d 4；
N-乙酰氨基苯磺酰氯-d 4与4,5-二甲基-1,3-恶唑-2-胺溶于二氯甲烷，反应得到N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4；
N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4经蛋白酶催化脱乙酰基得到磺胺二甲唑-d 4。
本发明的优化方案之一：氘代标记的磺胺二甲唑的合成方法包括以下步骤：
（1）苯乙酮-d 6的合成
以苯-d 6、乙酰氯与三氯化铝为起始原料；将苯-d 6与无水三氯化铝投到溶剂二硫化碳中，冰浴以及氮气保护的情况下，向其中滴加乙酰氯，滴加完毕后升温至45℃~60℃反应2~3 h，得棕色油状粗品苯乙酮-d 6；
（2）苯乙酮肟-d 5的合成
将苯乙酮-d 5溶于甲醇水溶液，向其中加入盐酸羟胺与醋酸钠；升温回流反应3~5h，减压浓缩蒸除溶剂甲醇；然后加入水和二氯甲烷萃取，将萃取液减压浓缩蒸除溶剂二氯甲烷，得黄色固体苯乙酮肟-d 5；
（3）N-乙酰苯胺-d 5的合成
将苯乙酮肟-d 5、三聚氯氰与二氯化锌加入到乙腈中；升温回流反应3~5 h，减压浓缩蒸除溶剂乙腈，加入水，抽滤，用水重结晶，得无色晶体N-乙酰苯胺-d 5；
（4）N-乙酰氨基苯磺酰氯-d 4的合成
在冰浴下，将N-乙酰苯胺-d 5分批投入到氯磺酸中，投料完毕后，升温至65℃~80℃反应1~1.5 h，冰水淬灭，氯仿重结晶，得土黄色固体N-乙酰氨基苯磺酰氯-d 4；
（5）N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4的合成
将N-乙酰氨基苯磺酰氯-d 4、4,5-二甲基-1,3-恶唑-2-胺、4-二甲氨基吡啶与吡啶加入到二氯甲烷中；常温搅拌反应1~3 h，减压浓缩除去溶剂二氯甲烷，加入水，乙酸乙酯萃取，将萃取液减压浓缩蒸除溶剂乙酸乙酯，得淡黄色固体N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4；
（6）磺胺二甲唑-d 4的合成
将N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4与蛋白酶加入到溶剂中；N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4与酶的投料比为100 mg : 10000 U；在25℃~35℃搅拌反应24~48 h，减压浓缩除去溶剂，加入水，乙酸乙酯萃取，将萃取液减压浓缩蒸除溶剂乙酸乙酯，真空干燥，得淡黄色固体磺胺二甲唑-d 4。
本发明的另一个目的是提供一种磺胺二甲唑的合成方法，合成路线如下所示：
Figure DEST_PATH_IMAGE003
合成方法包括以下步骤：
（1）苯乙酮的合成
以苯、乙酰氯与三氯化铝为起始原料；将苯与无水三氯化铝投到溶剂二硫化碳中，冰浴以及氮气保护的情况下，向其中滴加乙酰氯，滴加完毕后升温至45℃~60℃反应2~3 h，得棕色油状粗品苯乙酮；
（2）苯乙酮肟的合成
将苯乙酮溶于甲醇水溶液，向其中加入盐酸羟胺与醋酸钠；升温回流反应3~5 h，减压浓缩蒸除溶剂甲醇；然后加入水和二氯甲烷萃取，将萃取液减压浓缩蒸除溶剂二氯甲烷，得黄色固体苯乙酮肟；
（3）N-乙酰苯胺的合成
将苯乙酮肟、三聚氯氰与二氯化锌加入到乙腈中；升温回流反应3~5 h，减压浓缩蒸除溶剂乙腈，加入水，抽滤，用水重结晶，得无色晶体N-乙酰苯胺；
（4）N-乙酰氨基苯磺酰氯的合成
在冰浴下，将N-乙酰苯胺分批投入到氯磺酸中，投料完毕后，升温至65℃~80℃反应1~1.5 h，冰水淬灭，氯仿重结晶，得土黄色固体N-乙酰氨基苯磺酰氯；
（5）N-乙酰基磺胺二甲唑的合成
将N-乙酰氨基苯磺酰氯、4,5-二甲基-1,3-恶唑-2-胺、4-二甲氨基吡啶与吡啶加入到二氯甲烷中；常温搅拌反应1~3 h，减压浓缩除去溶剂二氯甲烷，加入水，乙酸乙酯萃取，将萃取液减压浓缩蒸除溶剂乙酸乙酯，得淡黄色固体N-乙酰基磺胺二甲唑；
（6）磺胺二甲唑的合成
将N-乙酰基磺胺二甲唑与蛋白酶加入到溶剂中；N-乙酰基磺胺二甲唑与酶的投料比为100 mg : 10000 U；在25℃~35℃搅拌反应24~48 h，减压浓缩除去溶剂，加入水，乙酸乙酯萃取，将萃取液减压浓缩蒸除溶剂乙酸乙酯，真空干燥，得淡黄色固体磺胺二甲唑。
综上所述，本发明具有以下优点：
1、本发明公开了六步法制备磺胺药物中磺胺二甲唑的方法，本发明的合成路线原料易得，收率高，产物稳定。同时本发明还以氘代苯环为起始原料合成氘代磺胺二甲唑-d 4，氘代苯环容易制备得到，四个氘代位置的稳定性更强，合成难度降低。
2、本发明提供的合成方法通过酶水解法脱去乙酰基，相对于传统的酸碱法，避免酸或碱条件下脱乙酰基时发生异恶唑环水解而造成的收率较低的问题。本发明的方法原料易得，操作简单，重现性较好，产品收率与同位素丰度较高，满足作为内标药物的质量要求。
3、氘代标记后作为内标药物使用液-质联用在兽药残留检测方面具有更加灵敏、高效等优势；同时苯环上的氘代标记也更有利于液-质联用检测技术对该兽药残留的检测。
具体实施方式
本发明一个实施例中公开了一种氘代标记的磺胺二甲唑的合成方法所述合成方法是以氘代N-乙酰基磺胺二甲唑经酶水解催化脱乙酰基得到氘代磺胺二甲唑；所述氘代的取代基为N-乙酰基磺胺二甲唑的苯环取代基。
作为上述实施例的优化，本发明公开了一种氘代标记的磺胺二甲唑的合成方法，包括将式I 所示化合物N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4在蛋白酶的水解催化下脱去乙酰基得到式II所示化合物磺胺二甲唑-d 4。
为了能够准确的实施本发明，本发明的具体实施例中，蛋白酶可以为胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、糜蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草蛋白酶中的一种或者多种的混合物。蛋白酶的种类对本发明的技术效果并无实质性影响，因此本发明可以选择能够水解N-乙酰基磺胺二甲唑-d4的蛋白酶即可。
蛋白酶是以溶剂的形式加入的，蛋白酶的溶剂为甲醇水溶液、乙醇水溶液、丙酮水溶液或者乙腈水溶液中的一种或者几种的混合。蛋白酶的溶剂中溶质与水的体积比为4:1；式I所示化合物N-乙酰基磺胺二甲唑-d4与蛋白酶的投料比为100 mg : 10000 U，水解反应的温度为25℃~35℃。
蛋白酶的水解反应的过程为：将N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4与蛋白酶加入到溶剂中，于25℃~35℃下搅拌反应；反应完毕后，减压浓缩蒸除溶剂得到粗品，粗品中加入稀盐酸溶液，然后过滤；滤液用饱和氢氧化钙溶液调节pH 为弱碱性，析出白色固体磺胺二甲唑-d 4。
实施例1：苯乙酮-d 6的合成
将苯-d 6（1.2 mL），无水三氯化铝（2.14 g）加入到二硫化碳（3 mL）中，于冰浴下搅拌10 min，氮气保护下向上述溶液中滴加溶于5 mL二硫化碳的乙酰氯（1.14 mL）溶液，15min滴加完毕，反应体系呈浅棕色溶液，移去冰浴，自然升至室温搅拌反应4 h，然后升温至回流反应3 h，反应完毕，自然冷却至室温，将反应液缓慢倒入到冰水中，用二氯甲烷萃取三次（3 × 10 mL），合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，减压浓缩得棕色液体1.52 g的苯乙酮-d 6，收率为95%，ESI–MS, m/z: 126.1 [M+H]+。
实施例2：苯乙酮肟-d 5的合成
将苯乙酮-d 6（1.5 g）、盐酸羟胺（1.32 g）与醋酸钠（3.26 g）加入到30 mL的甲醇-水（v：v, 90:10）体系中，升温回流3 h，反应完毕后，减压浓缩除去大部分溶剂，加入适量水，用二氯甲烷萃取三次（3 × 10 mL），合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，减压浓缩得1.47 g黄色固体苯乙酮肟-d 5，收率为88%，ESI–MS,m/z: 141.1 [M+H]+。
实施例3：N-乙酰苯胺-d 5的合成
将苯乙酮肟-d 5（1.4 g）、三聚氯氰（0.037 g）与二氯化锌（0.027 g）加入到乙腈（20 mL）中，升温回流反应3 h，反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，加入适量水，抽滤得固体粗品，用适量水重结晶得1.27 g无色透明片状晶体N-乙酰苯胺-d 5，收率为91%，ESI–MS, m/z:141.1 [M+H]+。
实施例4：N-乙酰氨基苯磺酰氯-d 4的合成
将氯磺酸（0.85 mL）于冰浴下搅拌冷却10 min，分批向上述氯磺酸中投入N-乙酰苯胺-d 5（0.35 g），20 min投料完毕，移去冰浴，升温至70℃反应1 h，反应完毕，冷却至室温，将反应液缓慢倒入到冰水中，不断搅拌，析出土黄色固体粗品，抽滤，以三氯甲烷重结晶得0.52 g的N-乙酰氨基苯磺酰氯-d 4，收率为88%，ESI–MS, m/z: 238.1 [M+H]+。
实施例5：N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4的合成
将N-乙酰氨基苯磺酰氯-d 4（0.24 g）、4,5-二甲基-1,3-恶唑-2-胺（0.12 g）、4-二甲氨基吡啶（0.006 g）与吡啶（0.1 mL）加入到二氯甲烷（10 mL）中，常温搅拌反应1 h，反应完毕后，减压浓缩除去大部分溶剂，加入适量水，用乙酸乙酯萃取三次（3 × 10 mL），合并有机相，依次用5%稀盐酸、饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，减压浓缩得0.27 g淡黄色固体N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4，收率为86%，ESI–MS, m/z: 314.1 [M+H]+。
实施例6：磺胺二甲唑-d 4的合成
将N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4（0.16 g）与胰蛋白酶（16000 U）加入到5 mL的甲醇-水（v:v，4:1）中，在30℃搅拌反应36 h，减压浓缩除去溶剂，加入水，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，减压浓缩蒸除溶剂乙酸乙酯，真空干燥，得0.12 g淡黄色固体磺胺二甲唑-d 4，收率为87%，ESI–MS, m/z: 272.1 [M+H]+。
本发明经过实施例1~实施例6六个步骤即可得到产物，实施例1~实施例6中每个步骤的反应时间不相同，其中实施例1~实施例5合计反应时间为15h左右，实施例6的酶解时间为36h，说明本发明的主要反应时间与实施例6的反应时间最相关。本发明实施例1~实施例5中主要为化学反应，反应速率较快，实施例6为酶解反应，这类反应效率本身较低，因而导致实施例6的反应时间较长。
本发明为了提高实施例6的反应效率，减少反应时间，希望通过加入催化剂来提高反应时间。本发明人经过实验选择了多种试剂进行验证，发现化学物N,N-二羟乙基甘氨酸能够对实施例6的酶解反应起到促进作用。
实施例7：助剂对蛋白酶水解反应时间的影响
实验目的：
用于检测不同反应时间下产物的收率。
实验方法：
将N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4（0.16 g）与胰蛋白酶（16000 U）加入到5 mL的甲醇-水（v:v，4:1）中，再加入助剂N,N-二羟乙基甘氨酸，助剂的加入量为N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4加入量的25%，即0.04g，然后在30℃搅拌反应15~40 h。减压浓缩除去溶剂，加入水，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，减压浓缩蒸除溶剂乙酸乙酯，真空干燥。由于助剂具有良好的水溶性，因此助剂可以在萃取过程中被去除。对照组中不加入助剂，即以实施例6为对照组，实施例7和实施例6的收率的计算方法相同。本实施例的实验结果如表1所示。
表1：实施例7实验结果
Figure 1
从表1中可以看出，在加入助剂后相同的反应时间下实施例7的产物收率更高，说明其酶解反应更快速，实施例7在24h、32h以及40h时收率基本相同，不具备显著性差异，说明反应在24h前已经达到终点，相比实施例6需要36h才能够达到终点减少了12h；反应效率提高了；使得反应周期缩短，更有利于工业化生产。N,N-二羟乙基甘氨酸含有两个羟基和一个羧基，其CAS No.为150-25-4 ，分子式为 C6H13NO4；分子量为163.17172。现有技术中N,N-二羟乙基甘氨酸未见公开其能够促进蛋白酶酶解反应的文献公开。同时，本发明人将N,N-二羟乙基甘氨酸加入到纤维素酶或者淀粉酶的水解液中，并未发现其能够促进纤维素酶和淀粉酶的作用，说明本发明的助剂只能够对蛋白酶的酶解反应有促进效果，并未体现出对所有酶解反应有促进效果。
本发明的蛋白酶对N-乙酰氨基苯磺酰氯-d 4能够对酰胺键水解，具有脱乙酰基的效果，同时不容易造成异恶唑环的水解。由此可见，本发明的助剂能够加快酶对酰胺键的水解，加快脱乙酰基的反应速率。
实验8：助剂对不同蛋白酶的促进效果实验
实验方法：
将N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4（0.16 g）与蛋白酶（16000 U）加入到5 mL的甲醇-水（v:v，4:1）中，再加入助剂N,N-二羟乙基甘氨酸，助剂的加入量为N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4加入量的25%，即0.04g，然后在30℃搅拌反应15~40 h。减压浓缩除去溶剂，加入水，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，减压浓缩蒸除溶剂乙酸乙酯，真空干燥。每组蛋白酶的选型以表2为准，实验结果如表2所述。
表2：实施例8实验结果
Figure 2
从表2中可以看出，助剂对本发明的各类蛋白酶均具有一定的促进作用，其能够在20h左右达到良好的收率，在25h达到最高的产率，相比实施例6的36h反应时间大大降低。
实验9：N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4的酸碱水解法脱乙酰基实验
酸水解法：将N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4（0.16 g）溶于10 mL乙醇溶液，向上述溶液中加入2 N的盐酸（2 mL），升温回流反应，薄层色谱监测至原料反应完毕，减压浓缩除去乙醇，加入适量水，用饱和氢氧化钙溶液调pH = 6.5，无目标产物生成。
碱水解法：将N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4（0.16 g）溶于10 mL乙醇溶液，向上述溶液中加入10%的氢氧化钠溶液（5 mL），升温回流反应，薄层色谱监测至原料反应完毕，减压浓缩除去乙醇，加入适量水，用醋酸调pH = 6.5，无目标产物生成。
本发明采用对比实验验证了酸碱法处理后无目标产物生产，说明这两种方法不适用于对N-乙酰基磺胺二甲唑-d 4的脱乙酰基的处理。本发明的酶水解法产率高，不易造成异恶唑环水解的主要原因为酶对酰胺键的水解具有专一选择性；进而能够保证异恶唑环的稳定性。

Claims (3)

1.一种氘代标记的磺胺二甲唑-d4的合成方法，其特征在于：所述合成方法是以苯-d6与乙酰氯作为起始原料，经乙酰化、羰基成肟、Beckmann重排成N-乙酰苯胺-d5、氯磺酰化、酰胺化与酶水解脱乙酰基六步反应得到磺胺二甲唑-d4；所述合成方法具体步骤包括：
苯-d6与乙酰氯反应得苯乙酮-d5；
苯乙酮-d5发生羰基成肟反应得到苯乙酮肟-d5；
苯乙酮肟-d5发生Beckmann重排反应生成N-乙酰苯胺-d5；
N-乙酰苯胺-d5经氯磺酰化得到N-乙酰氨基苯磺酰氯-d4；
N-乙酰氨基苯磺酰氯-d4与4,5-二甲基-1,3-恶唑-2-胺溶于二氯甲烷，反应得到N-乙酰基磺胺二甲唑-d4；
N-乙酰基磺胺二甲唑-d4经蛋白酶催化脱乙酰基得到磺胺二甲唑-d4。
2.如权利要求1所述的氘代标记的磺胺二甲唑-d4的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)苯乙酮-d6的合成
以苯-d6、乙酰氯与三氯化铝为起始原料；将苯-d6与无水三氯化铝投到溶剂二硫化碳中，冰浴以及氮气保护的情况下，向其中滴加乙酰氯，滴加完毕后升温至45℃～60℃反应2～3h，得棕色油状粗品苯乙酮-d6；
(2)苯乙酮肟-d5的合成
将苯乙酮-d5溶于甲醇水溶液，向其中加入盐酸羟胺与醋酸钠；升温回流反应3～5h，减压浓缩蒸除溶剂甲醇；然后加入水和二氯甲烷萃取，将萃取液减压浓缩蒸除溶剂二氯甲烷，得黄色固体苯乙酮肟-d5；
(3)N-乙酰苯胺-d5的合成
将苯乙酮肟-d5、三聚氯氰与二氯化锌加入到乙腈中；升温回流反应3～5h，减压浓缩蒸除溶剂乙腈，加入水，抽滤，用水重结晶，得无色晶体N-乙酰苯胺-d5；
(4)N-乙酰氨基苯磺酰氯-d4的合成
在冰浴下，将N-乙酰苯胺-d5分批投入到氯磺酸中，投料完毕后，升温至65℃～80℃反应1～1.5h，冰水淬灭，氯仿重结晶，得土黄色固体N-乙酰氨基苯磺酰氯-d4；
(5)N-乙酰基磺胺二甲唑-d4的合成
将N-乙酰氨基苯磺酰氯-d4、4,5-二甲基-1,3-恶唑-2-胺、4-二甲氨基吡啶与吡啶加入到二氯甲烷中；常温搅拌反应1～3h，减压浓缩除去溶剂二氯甲烷，加入水，乙酸乙酯萃取，将萃取液减压浓缩蒸除溶剂乙酸乙酯，得淡黄色固体N-乙酰基磺胺二甲唑-d4；
(6)磺胺二甲唑-d4的合成
将N-乙酰基磺胺二甲唑-d4与蛋白酶加入到溶剂中；N-乙酰基磺胺二甲唑-d4与酶的投料比为100mg:10000U；在25℃～35℃搅拌反应24～48h，减压浓缩除去溶剂，加入水，乙酸乙酯萃取，将萃取液减压浓缩蒸除溶剂乙酸乙酯，真空干燥，得淡黄色固体磺胺二甲唑-d4。
3.一种磺胺二甲唑的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)苯乙酮的合成
以苯、乙酰氯与三氯化铝为起始原料；将苯与无水三氯化铝投到溶剂二硫化碳中，冰浴以及氮气保护的情况下，向其中滴加乙酰氯，滴加完毕后升温至45℃～60℃反应2～3h，得棕色油状粗品苯乙酮；
(2)苯乙酮肟的合成
将苯乙酮溶于甲醇水溶液，向其中加入盐酸羟胺与醋酸钠；升温回流反应3～5h，减压浓缩蒸除溶剂甲醇；然后加入水和二氯甲烷萃取，将萃取液减压浓缩蒸除溶剂二氯甲烷，得黄色固体苯乙酮肟；
(3)N-乙酰苯胺的合成
将苯乙酮肟、三聚氯氰与二氯化锌加入到乙腈中；升温回流反应3～5h，减压浓缩蒸除溶剂乙腈，加入水，抽滤，用水重结晶，得无色晶体N-乙酰苯胺；
(4)N-乙酰氨基苯磺酰氯的合成
在冰浴下，将N-乙酰苯胺分批投入到氯磺酸中，投料完毕后，升温至65℃～80℃反应1～1.5h，冰水淬灭，氯仿重结晶，得土黄色固体N-乙酰氨基苯磺酰氯；
(5)N-乙酰基磺胺二甲唑的合成
将N-乙酰氨基苯磺酰氯、4,5-二甲基-1,3-恶唑-2-胺、4-二甲氨基吡啶与吡啶加入到二氯甲烷中；常温搅拌反应1～3h，减压浓缩除去溶剂二氯甲烷，加入水，乙酸乙酯萃取，将萃取液减压浓缩蒸除溶剂乙酸乙酯，得淡黄色固体N-乙酰基磺胺二甲唑；
(6)磺胺二甲唑的合成
将N-乙酰基磺胺二甲唑与蛋白酶加入到溶剂中；N-乙酰基磺胺二甲唑与酶的投料比为100mg:10000U；在25℃～35℃搅拌反应24～48h，减压浓缩除去溶剂，加入水，乙酸乙酯萃取，将萃取液减压浓缩蒸除溶剂乙酸乙酯，真空干燥，得淡黄色固体磺胺二甲唑。
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