CN110438197B - 携带稻瘟病菌的大麦粒在稻瘟病杀菌剂筛选中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供携带稻瘟病菌的大麦粒在稻瘟病杀菌剂筛选中的应用方法，包括以下应用步骤：（1）携带稻瘟病菌的大麦粒的制备：将蒸过或煮过的大麦粒装瓶，接着向装有大麦粒的瓶中接种稻瘟病菌，培养，得到携带稻瘟病菌的大麦粒；（2）含杀菌剂平板培养基的制备：向灭菌后的、熔融态的适合稻瘟病菌生长的培养基中加入待筛选的杀菌剂，制得含有杀菌剂的平板培养基；（3）接菌：在含有杀菌剂的平板培养基上接种携带稻瘟病菌的大麦粒，培养，最后测量平板培养基上以大麦粒为中心的菌落的直径，直径越小，待筛选的杀菌剂对该稻瘟病菌的杀菌效果越好；直径越大，待筛选的杀菌剂对该稻瘟病菌的杀菌效果越差。本发明利于大批量快速筛选稻瘟病杀菌剂。
Description
技术领域
本发明涉及微生物学技术领域，具体涉及携带稻瘟病菌的大麦粒在稻瘟病杀菌剂筛选中的应用。
背景技术
稻瘟病菌属于稻梨孢菌属。由稻瘟病菌引起的稻瘟病是水稻的主要病害之一，每年由其造成的水稻损失可占水稻总产量的10%-30%，是阻碍水稻高产、稳产的关键因素之一。至今为止，稻瘟病遍及世界各大水稻主产区，其中以亚洲和非洲病情较为严重。在福建省，稻瘟病常年发生，严重危害水稻产量，一般情况下稻瘟病只在局部地区发生，如果品种感病，又逢有利于发病的气候条件，稻瘟病则会大面积发生、流行，对水稻生产造成极大威胁。
目前，对稻瘟病的防治主要是化学药剂防治。市场上防治稻瘟病的各类型各品牌杀菌剂种类繁多，由于耐药性和杀菌剂质量的影响使得这些杀菌剂对稻瘟病的防治效果参差不齐，所以，在对稻瘟病进行防治之前需要筛选效果好的杀菌剂，而筛选杀菌剂是一件费时费力的工作。杀菌剂筛选分为实验室筛选和田间筛选两种，田间筛选主要是通过设置三重复小区，测试杀菌剂对稻瘟病田间发病的控制作用，相对实验室筛选耗费人力、物力、财力较多，不适合大批量筛选杀菌剂，因此，常采用实验室筛选方法来对稻瘟病药剂进行大批量初筛选。现有的实验室筛选方法主要是采用菌丝生长速率法，具体为：先制备长满稻瘟病菌的大片菌饼；同时配置含有杀菌剂的平板培养基；然后，用菌种打孔器在大片菌饼上打取小颗粒菌饼，并将小颗粒菌饼的长有菌丝的一面朝下放入含有杀菌剂的平板培养基中，恒温培养；最后通过测量平板培养基上以小颗粒菌饼为中心的菌落的直径大小来判断杀菌剂的杀菌效果（菌落直径越小，杀菌剂的杀菌效果越好）。但是，由于小颗粒菌饼的制作过程相对复杂，存在消毒不方便、操作过程繁琐等问题，效率低，不利于大批量快速筛选杀菌剂；并且，小颗粒菌饼仅一面长有菌丝，其接种于平板培养基后小颗粒菌饼四周的菌丝长势不均匀，影响菌落直径测量的准确性。因此，亟待寻找一种利于大批量快速筛选稻瘟病杀菌剂的方法。
发明内容
本发明旨在提供携带稻瘟病菌的大麦粒在稻瘟病杀菌剂筛选中的应用方法，该方法中稻瘟病菌载体（即携带稻瘟病菌的大麦粒）的制作简单，不易染菌，且成本低，进而可大大提高稻瘟病杀菌剂筛选的效率，利于大批量快速筛选稻瘟病杀菌剂。
携带稻瘟病菌的大麦粒在稻瘟病杀菌剂筛选中的应用，其包括以下应用步骤：
（1）携带稻瘟病菌的大麦粒的制备：将蒸过或煮过的大麦粒装瓶，灭菌，冷却，接着向装有大麦粒的瓶中接种稻瘟病菌，并在25～28℃条件下培养7～10d，期间摇动培养瓶2～3次，得到携带稻瘟病菌的大麦粒；
（2）含杀菌剂平板培养基的制备：向灭菌后的、熔融态的适合稻瘟病菌生长的培养基中加入待筛选的杀菌剂，充分摇匀，并将培养基倒入平板培养皿内，待培养基冷却凝固，制得含有杀菌剂的平板培养基；
（3）接菌：在含有杀菌剂的平板培养基上接种步骤（1）得到的携带稻瘟病菌的大麦粒，并将平板培养基放于25～28℃条件下培养7～10d，最后测量平板培养基上以大麦粒为中心的菌落的直径，直径越小，待筛选的杀菌剂对该稻瘟病菌的杀菌效果越好；直径越大，待筛选的杀菌剂对该稻瘟病菌的杀菌效果越差。
在微生物研究领域，大麦粒菌常被用作菌种扩培时的菌种载体，而本申请人打破常规，首次将大麦粒菌用作稻瘟病杀菌剂筛选时的菌种载体，其相对于现有的稻瘟病杀菌剂筛选时的菌种载体（即携带有稻瘟病菌的小颗粒菌饼）来说，制作简单，一个培养瓶可培养千粒以上的大麦粒，大大节约培养成本和时间，并且，在接菌到平板培养基的过程中，携带稻瘟病菌的大麦粒的夹取和放置在平板培养基上的操作均更简单、易于操作，可降低操作的染菌概率，同时，在大麦粒表面菌丝的生长为立体三维的全方位生长，加上，在培养过程中摇动培养瓶使得菌丝生长能够均匀生长，接种后大麦粒扩展菌丝也更为均匀，利于测量菌落直径，综上所述，本发明的技术方案可大大提高稻瘟病杀菌剂筛选的效率，利于大批量快速筛选稻瘟病杀菌剂。
优选的，步骤（1）中所述的蒸过或煮过的大麦粒为：经泡水后煮或蒸至半生不熟的大麦粒。当然，蒸过或煮过的大麦粒也可以是熟而不烂的大麦粒。但是，半生不熟的大麦粒质地较硬，形状固定，易于夹取。
优选的，步骤（2）中所述适合稻瘟病菌生长的培养基为可溶性淀粉培养基，其成分为：可溶性淀粉8.0～10.0g，酵母膏1.5～2.0g，CaCO3 2.0～3.0g，琼脂粉16.0～18.0g，蒸馏水 1000.0ml，pH6.5～7.0。
优选的，步骤（3）中每个含有杀菌剂的平板培养基上接种3～4粒携带稻瘟病菌的大麦粒，所有携带稻瘟病菌的大麦粒均匀分布，最后分别测量平板培养基上所有的以携带稻瘟病菌的大麦粒为中心的菌落的直径，并计算平均值，这样得到的试验数据更准确。进一步的，每个含有杀菌剂的平板培养基上接种4粒携带稻瘟病菌的大麦粒时，具体操作如下：制作一个白底黑字的塑料圆形十字刻度板，该十字刻度板的直径与平板培养皿的外径相等，接菌前，先将十字刻度板对齐放置于平板培养皿的正下方，平板培养皿为透明结构，平板培养基呈半透明状，将4粒携带稻瘟病菌的大麦粒分别放置在由十字刻度板映射在平板培养基上的十字影像上，此时，每个含有杀菌剂的平板培养基上接种4粒携带稻瘟病菌的大麦粒。此种操作方便，且不易造成污染。
优选的，步骤（3）中先将无菌镊子的镊子头烧热，通过烧热的镊子头在平板培养基的待接菌位置处点出小洞，后将携带稻瘟病菌的大麦粒放置于小洞内，以防止后续因移动平板培养基而造成大麦粒移动。
优选的，步骤（3）中通过封口膜对接种有携带稻瘟病菌的大麦粒的平板培养基边缘进行封口后，再进行培养，防止污染。
优选的，步骤（1）中用于装大麦粒的瓶采用茄形培养瓶，接种有稻瘟病菌的茄形培养瓶侧面朝下平放进行培养，有利于稻瘟病菌菌丝的横向生长。
附图说明
图1为本发明的平板培养皿在十字刻度板对齐放置于其正下方时的俯视结构图；
图2为本发明的部分实施例最终得到的长有稻瘟病菌菌落的平板培养基的图片，图2中自左向右、自上而下分别为实施例29、实施例15、实施例24、实施例22、实施例11、实施例12、CK组、实施例27、实施例16、实施例25对应的平板培养基图片。
具体实施方式
现具体说明本发明的实施方式：
携带稻瘟病菌的大麦粒在稻瘟病杀菌剂筛选中的应用，其包括以下应用步骤：
（1）携带稻瘟病菌的大麦粒的制备：将蒸过或煮过的大麦粒装瓶，灭菌，冷却，接着向装有大麦粒的瓶中接种稻瘟病菌，并在25～28℃条件下培养7～10d，期间摇动培养瓶2～3次，得到携带稻瘟病菌的大麦粒；
（2）含杀菌剂平板培养基的制备：向熔融态的适合稻瘟病菌生长的培养基中加入待筛选的杀菌剂，充分摇匀，并将培养基倒入平板培养皿内，待培养基冷却凝固，制得含有杀菌剂的平板培养基；
（3）接菌：在含有杀菌剂的平板培养基上接种4粒步骤（1）得到的携带稻瘟病菌的大麦粒，并将平板培养基放于25～28℃条件下培养7～10d，最后测量平板培养基上以大麦粒为中心的菌落的直径，并计算平均值，直径越小，待筛选的杀菌剂对该稻瘟病菌的杀菌效果越好；直径越大，待筛选的杀菌剂对该稻瘟病菌的杀菌效果越差。
本申请将大麦粒菌用作稻瘟病杀菌剂筛选时的菌种载体，制作简单，一个培养瓶可培养千粒以上的大麦粒，大大节约培养成本和时间，并且，在接菌到平板培养基的过程中，携带稻瘟病菌的大麦粒的夹取和放置在平板培养基上的操作均更简单、易于操作，可降低操作的染菌概率，同时，在大麦粒表面菌丝的生长为立体三维的全方位生长，加上，在培养过程中摇动培养瓶使得菌丝生长能够均匀生长，接种后大麦粒扩展菌丝也更为均匀，利于测量菌落直径，综上所述，本发明的技术方案可大大提高稻瘟病杀菌剂筛选的效率，利于大批量快速筛选稻瘟病杀菌剂。
根据本发明的技术方案本发明人提供了29个实施例（即实施例1-实施例29），每个实施例重复进行3次，在实施例1-实施例29中，步骤（1）中所述的蒸过或煮过的大麦粒为：经泡水后煮或蒸至半熟的大麦粒；步骤（2）中所述适合稻瘟病菌生长的培养基为可溶性淀粉培养基，其成分为：可溶性淀粉8.0～10.0g，酵母膏1.5～2.0g，CaCO3 2.0～3.0g，琼脂粉16.0～18.0g，蒸馏水 1000.0ml，pH6.5～7.0；同时设置不含抗菌剂的平板培养基作空白对照（即CK组），CK组也重复进行3次。实施例1-实施例29以及CK组的菌落直径（mm）和抑菌率（%）见下表1：
表1
表1中的菌丝生长抑制率(％)=（1-实施例组的菌落直径/CK组的菌丝生长）×100%。
本发明的实施例1-实施例29中，哪一组实施例的菌落直径越小（菌丝生长抑制率越高），则该组实施例对应的杀菌剂的杀菌效果就越好，从表1中可看出，实施例22和实施例27所对应的杀菌剂的杀菌效果最好。
通常，在确定了杀菌剂后，可进一步对该杀菌剂进行倍比稀释（例如稀释成5个系列的杀菌剂浓度，浓度分别为10.000、5.000、2.500、1.250、0.625µg/mL的药液），并分别针对这各个系列的杀菌剂浓度药液均按照本发明的技术方案进行抑菌率的测定，并根据各个系列的杀菌剂浓度数值及对应的菌丝生长抑制率作回归分析，利用DPS分析软件计算出回归方程，求出抑制稻瘟病菌菌丝或孢子萌发的最佳杀菌剂浓度。
当然，步骤（1）中所述的蒸过或煮过的大麦粒不限于采用经泡水后煮或蒸至半生不熟的大麦粒，其也可以为经煮或蒸至熟而不烂的大麦粒；步骤（2）中在含有杀菌剂的平板培养基也不限于上述具体配方的培养基，其也可以为米糠培养基，米糠培养基的成分为：米糠200-250g，琼脂粉16-20g，蒸馏水1000ml，ph6.5-7.0；或者PDA培养基，PDA培养基的成分为：马铃薯180-250g，葡萄糖15-25g，琼脂15~20g，水1000mL（将180-250g马铃薯去皮、切碎、煮烂后取得土豆汁，加入15-25g葡萄糖或者蔗糖，再加入琼脂15~20g，并加水至1000mL，在121-122℃下湿热灭菌25-30 min即可），等现有的、常见的适合稻瘟病菌生长的培养基均可；步骤（3）中每个含有杀菌剂的平板培养基上接种携带稻瘟病菌的大麦粒的数量也不限于4粒，其也可以为1粒、2粒、3粒或多于4粒，但是，每个含有杀菌剂的平板培养基上接种携带稻瘟病菌的大麦粒的数量优选为3～4粒，最后分别测量平板培养基上所有的以携带稻瘟病菌的大麦粒为中心的菌落的直径，并计算平均值，这样得到的试验数据会更准确。
优选的，每个含有杀菌剂的平板培养基上接种4粒携带稻瘟病菌的大麦粒时，具体操作如下：制作一个白底黑字的塑料圆形十字刻度板，该十字刻度板的直径与平板培养皿的外径相等，接菌前，先将十字刻度板对齐放置于平板培养皿的正下方，平板培养皿为透明结构，平板培养基呈半透明状，将4粒携带稻瘟病菌的大麦粒分别放置在由十字刻度板映射在平板培养基上的十字影像上，此时，每个含有杀菌剂的平板培养基上接种4粒携带稻瘟病菌的大麦粒。此种操作方便，且不易造成污染。
优选的，步骤（3）中先将无菌镊子的镊子头烧热，通过烧热的镊子头在平板培养基的待接菌位置处点出小洞，后将携带稻瘟病菌的大麦粒放置于小洞内，以防止后续因移动平板培养基而造成大麦粒移动。
优选的，步骤（3）中通过封口膜对接种有携带稻瘟病菌的大麦粒的平板培养基边缘进行封口后，再进行培养，防止污染。
优选的，步骤（1）中用于装大麦粒的瓶采用茄形培养瓶，接种有稻瘟病菌的茄形培养瓶侧面朝下平放于培养箱内进行培养，有利于稻瘟病菌菌丝的横向生长。
Claims (8)
1.携带稻瘟病菌的大麦粒在稻瘟病杀菌剂筛选中的应用，其特征在于，包括以下应用步骤：
（1）携带稻瘟病菌的大麦粒的制备：将蒸过或煮过的大麦粒装瓶，灭菌，冷却，接着向装有大麦粒的瓶中接种稻瘟病菌，并在25～28℃条件下培养7～10d，期间摇动培养瓶2～3次，得到携带稻瘟病菌的大麦粒；
（2）含杀菌剂平板培养基的制备：向灭菌后的、熔融态的适合稻瘟病菌生长的培养基中加入待筛选的杀菌剂，充分摇匀，并将培养基倒入平板培养皿内，待培养基冷却凝固，制得含有杀菌剂的平板培养基；
（3）接菌：在含有杀菌剂的平板培养基上接种步骤（1）得到的携带稻瘟病菌的大麦粒，并将平板培养基放于25～28℃条件下培养7～10d，最后测量平板培养基上以大麦粒为中心的菌落的直径，直径越小，待筛选的杀菌剂对该稻瘟病菌的杀菌效果越好；直径越大，待筛选的杀菌剂对该稻瘟病菌的杀菌效果越差。
2.根据权利要求1所述的携带稻瘟病菌的大麦粒在稻瘟病杀菌剂筛选中的应用，其特征在于，步骤（1）中所述的蒸过或煮过的大麦粒为：经泡水后煮或蒸至半生不熟的大麦粒。
3.根据权利要求1所述的携带稻瘟病菌的大麦粒在稻瘟病杀菌剂筛选中的应用，其特征在于，步骤（2）中所述适合稻瘟病菌生长的培养基为可溶性淀粉培养基，其成分为：可溶性淀粉8.0～10.0g，酵母膏1.5～2.0g，CaCO3 2.0～3.0g，琼脂粉16.0～18.0g，蒸馏水1000.0ml，pH6.5～7.0。
4.根据权利要求1所述的携带稻瘟病菌的大麦粒在稻瘟病杀菌剂筛选中的应用，其特征在于，步骤（3）中每个含有杀菌剂的平板培养基上接种3～4粒携带稻瘟病菌的大麦粒，所有携带稻瘟病菌的大麦粒均匀分布，最后分别测量平板培养基上所有的以携带稻瘟病菌的大麦粒为中心的菌落的直径，并计算平均值。
5.根据权利要求4所述的携带稻瘟病菌的大麦粒在稻瘟病杀菌剂筛选中的应用，其特征在于，每个含有杀菌剂的平板培养基上接种4粒携带稻瘟病菌的大麦粒，具体操作如下：制作一个白底黑字的塑料圆形十字刻度板，该十字刻度板的直径与平板培养皿的外径相等，接菌前，先将十字刻度板对齐放置于平板培养皿的正下方，平板培养皿为透明结构，平板培养基呈半透明状，将4粒携带稻瘟病菌的大麦粒分别放置在由十字刻度板映射在平板培养基上的十字影像上。
6.根据权利要求1所述的携带稻瘟病菌的大麦粒在稻瘟病杀菌剂筛选中的应用，其特征在于，步骤（3）中先将无菌镊子的镊子头烧热，通过烧热的镊子头在平板培养基的待接菌位置处点出小洞，后将携带稻瘟病菌的大麦粒放置于小洞内。
7.根据权利要求1所述的携带稻瘟病菌的大麦粒在稻瘟病杀菌剂筛选中的应用，其特征在于，步骤（3）中通过封口膜对接种有携带稻瘟病菌的大麦粒的平板培养基边缘进行封口后，再进行培养。
8.根据权利要求1所述的携带稻瘟病菌的大麦粒在稻瘟病杀菌剂筛选中的应用，其特征在于，步骤（1）中用于装大麦粒的瓶采用茄形培养瓶，接种有稻瘟病菌的茄形培养瓶侧面朝下平放进行培养。
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Citations (3)
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|---|---|---|---|---|
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Non-Patent Citations (8)
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|---|
| 36%丙环唑·咪鲜胺悬浮剂对稻瘟病的防治效果;刘怀阿等;《江苏农业科学》;20141225;第42卷(第12期);参见第161页 1材料与方法的1.1.3试验处理、1.1.4数据记载与分析 * |
| 4种杀菌剂防治稻瘟病的效果及其评价;胡建坤等;《江西农业学报》;20150115;第27卷(第1期);参见全文 * |
| Functions of the Magnaporthe oryzae Flb3p and Flb4ptranscription factors in the regulation of conidiation;S. Matheis等;《Microbiological Research》;20170531;第196卷;参见全文 * |
| Magnaporthe oryzae Effector AVR-Pii Helps to Establish Compatibility by Inhibition of the Rice NADP-Malic Enzyme Resulting in Disruption of Oxidative Burst and Host Innate Immunity;Raksha Singh等;《Molecules and cells》;20161231;第39卷(第5期);参见全文 * |
| 不同杀菌剂对水稻稻瘟病的防治效果研究;陈峰等;《现代农业科技》;20160601(第9期);参见全文 * |
| 吡唑醚菌酯防治水稻纹枯病、穗颈瘟的效果及应用技术;唐小飞等;《上海农业科技》;20161205(第6期);参见全文 * |
| 水稻抗性基因Pi对福建省稻瘟病菌优势菌群的抗性分析;阮宏椿等;《中国水稻科学》;20170110;第31卷(第1期);参见全文 * |
| 福建省稻瘟病生理小种及品种资源抗性鉴定;邓云等;《福建省稻瘟病生理小种及品种资源抗性鉴定》;20190331;第37卷(第1期);参见全文 * |
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