CN110433288A - 试剂盒和β-葡聚糖提取物在禽类动物免疫增强中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及β‑葡聚糖提取物在禽类动物免疫增强中的应用。具体地说，本发明提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括：(1)用于禽类动物免疫增强的免疫增强剂，所述免疫增强剂包含从酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)细胞壁提取得到的β‑葡聚糖提取物；和(2)病毒疫苗。本发明还提供了从酿酒酵母细胞壁提取得到的β‑葡聚糖提取物在制备用于禽类动物免疫增强的试剂盒和免疫增强剂中的应用。本发明使用提取自酿酒酵母细胞壁的β‑葡聚糖来对禽类动物进行加强免疫，可以增强接种疫苗的禽类动物的淋巴细胞增殖反应和T细胞应答；降低病毒载量；降低致病率或死亡率；提前产生抗体；提高抗体生成量；和/或限制病毒扩散。

Description

试剂盒和β-葡聚糖提取物在禽类动物免疫增强中的应用

技术领域

本发明涉及免疫学领域，具体涉及酿酒酵母细胞壁组分β-葡聚糖在禽类中作为免疫增强剂的应用。

背景技术

现在医学的一个成功例子之一是研发出疫苗来对抗传染性病毒。但是，针对某种病原体，疫苗不一定总是能够有效地诱导免疫反应。杀灭疫苗和亚单位疫苗需要佐剂来加强它们的免疫原性。明矾(铝盐)是人类和动物中最常用的疫苗佐剂。一个世纪以来，明矾都被认为是安全的。但是，明矾的神经毒性和局部反应是个问题，特别是在皮内注射的时候。而且，明矾诱导强烈的Th2型(体液性)反应并且能够有效地对抗细胞外病原体，但是几乎没有能力诱导强烈的Th1(细胞介导的)反应，而这种Th1反应对抵抗很多细胞内病原体是非常重要的。市场上另一种强力的佐剂是弗氏佐剂，这种佐剂是一种带有或者不带有杀灭分枝杆菌(mycobacterium)油包水乳液(分别称为CFA和IFA)。完全弗氏佐剂是丰富的(abounded)，因为在注射部位诱导强烈的反应和坏死。因此，非常需要安全的、无毒的并且有效的能够诱导强烈体液免疫和细胞介导性免疫的佐剂。此外，任何准备研发的新佐剂，不管其是天然产品还是合成产品，都应该适用于新疫苗平台技术包括亚单位疫苗，并且在通过不同途径(包括口服、粘膜注射和皮内注射)接种疫苗来施用时也必须是安全的。本申请人已经研发出独特的天然产品β-1,3/1,6-葡聚糖，这种葡聚糖从酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)细胞壁提取得到，并且满足佐剂的所有这些安全标准。

β-葡聚糖颗粒具有能够与免疫细胞例如巨噬细胞和树突细胞上的受体相互作用的细胞表面受体，从而诱导强烈的免疫反应。而且，一些体外测试已经表明，β-葡聚糖能够锻炼记忆反应的免疫系统，说明它们能够用作良好的疫苗佐剂。此外，β-葡聚糖颗粒的多孔性且中空的结构能够封装疫苗，使得它们不仅是良好的佐剂，而且还是亚单位疫苗和DNA疫苗的完美的疫苗输送系统。尽管所有这些报道表明β-葡聚糖能够诱导强烈的免疫反应并加强疫苗诱导性免疫反应，但是仍然没有确凿的证据表明将β-葡聚糖在动物尤其是禽类的疫苗接种中能够用作疫苗佐剂。

因此，本发明的主要目的是检测了基于β-葡聚糖颗粒的疫苗接种方案在禽类中抵抗病毒性感染(现有疫苗在防止动物感染方面不太有效)的免疫加强潜力。β-葡聚糖可以以饲料添加剂在疫苗接种之前或者期间提供，这种方式是向畜禽尤其是禽类动物使用佐剂的最经济的途径。β-葡聚糖还可以与疫苗联合并且和疫苗一起口服或者肠胃外施用。

发明内容

为了解决现有技术的一个或者多个上述问题，本发明在第一方面提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括：(1)用于禽类动物免疫增强的免疫增强剂，所述免疫增强剂包含从酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)细胞壁提取得到的β-葡聚糖提取物；和(2)病毒疫苗。

本发明在第二方面提供了β-葡聚糖提取物在制备本发明第一方面所述的试剂盒中的应用，其中所述β-葡聚糖提取物从酿酒酵母细胞壁提取得到。

本发明第三方面提供了β-葡聚糖提取物在制备用于禽类动物免疫增强的免疫增强剂中的应用，其中所述β-葡聚糖提取物从酿酒酵母细胞壁提取得到。

本发明具有如下优点：

(1)可以增强接种疫苗动物的淋巴细胞增殖反应和T细胞应答。

(2)可以降低接种疫苗动物的病毒载量，从而减轻大载量病毒对接种疫苗动物的身体负担。

(3)可以降低接种疫苗动物的致病率或死亡率。

(4)可以使接种疫苗动物提前产生抗体。

(5)可以提高接种疫苗动物的抗体生成量。

(6)可以限制病毒的扩散。

附图说明

为了理解本发明并了解如何可以在实践中实施本发明，下文仅通过非限制性实施例的方式并参考附图对优选实施方式进行说明，其中：

图1显示了使用ND疫苗对SPF鸡(无特定病原(Specific Pathogen Free)鸡)进行疫苗接种后不同的时间点的抗NDV抗体水平，所述SPF鸡在饮水时补充口服不同剂量的β-葡聚糖或者补充口服对照饮食。

图2显示了在SPF鸡中接种IBV疫苗后的抗传染性支气管炎病毒(Infectiousbronchitis virus，IBV)生成量，所述SPF鸡在接种疫苗期间在饮水时食用不同剂量的β-葡聚糖或者生理盐水14天。

图3显示了在存在不同浓度的作为佐剂的β-葡聚糖的情况下或仅存在疫苗的情况下载接种疫苗之后第7天和第14天的抗NDV抗体滴度。未接种疫苗的SPF鸡作为阴性对照。

图4显示了在存在或者不存在2％的β-葡聚糖作为佐剂的情况下使用ND疫苗进行接种的SPF鸡中，在接种后90天期间抗NDV抗体生成量的动力学曲线。

图5显示了使用致死剂量的NDV接种的SPF鸡在接种后致病和死亡的SPF鸡数量。疫苗和不同浓度的作为佐剂的β-葡聚糖或者生理盐水一起提供。采用没有接种的SPF鸡作为阴性对照。

图6显示了使用致死剂量的IBV接种的SPF鸡在接种后致病和死亡的SPF鸡数量。SPF鸡在不同浓度的作为佐剂的β-葡聚糖存在的情况下或者在生理盐水存在的情况下接种疫苗。采用没有接种的SPF鸡作为阴性对照。

图7显示了在不同剂量的β-葡聚糖或生理盐水作为佐剂的情况下以致死剂量的NDV或IBV对SPF鸡进行免疫后SPF鸡的病毒散播能力。采用没有接种的SPF鸡作为阴性对照。

具体实施方式

以下通过具体实施方式对本发明进行进一步说明。这里想要指出的是，下面的具体实施方式仅用于说明本发明，本领域技术人员在理解本发明精神和实质的前提下，可以根据本发明披露的内容结合现有技术对本发明进行改进，这些技术方案均属于本发明的范围之内。

如上所述，本发明第一方面提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括：(1)用于禽类动物免疫增强的免疫增强剂，所述免疫增强剂包含从酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)细胞壁提取得到的β-葡聚糖提取物；和(2)病毒疫苗。

在一些优选的实施方式中，所述病毒疫苗为灭活病毒疫苗或者减毒疫苗。在另外一些优选的实施方式中，所述病毒疫苗可以选自由DNA病毒疫苗、亚单位疫苗、新城疫病毒疫苗和传染性支气管炎病毒疫苗组成的组。在一些更优选的实施方式中，所述病毒疫苗为新城疫病毒疫苗和/或传染性支气管炎病毒疫苗。

在一些优选的实施方式中，所述免疫增强剂包含或者由如下物质组成：(1)总量不低于50重量％的β-1,3-葡聚糖和β-1,6-葡聚糖；和/或(2)不高于6重量％的水。在另外优选的实施方式中，所述免疫增强剂为无菌粉末形式。

在一些优选的实施方式中，所述β-葡聚糖提取物富含β-1,3-葡聚糖和β-1,6-葡聚糖，例如包含总量不低于50重量％的β-1,3-葡聚糖和β-1,6-葡聚糖。另外或者进一步可选的是，所述β-葡聚糖提取物的含水量不大于6重量％。

在一些优选的实施方式中，所述免疫增强剂为油包水乳液。

在一些优选的实施方式中，所述免疫增强剂为肌肉内注射制剂。本领技术人员根据本申请的教导有能力确定注射剂量。例如，所述剂量可以为100mg/kg体重至500mg/kg体重，更优选为150mg/kg体重至300mg/kg的所述β-葡聚糖。

在一些优选的实施方式中，所述免疫增强剂为口服制剂或饲料添加剂。经过本发明人研究发现，本发明的免疫增强剂可以通过口服施用，例如在使用疫苗免疫之后，可以让接种疫苗动物引用添加有所述免疫增强剂的水。所述免疫增强剂和水的比例可以设置成使得其中的所述β-葡聚糖的浓度为1重量％至20重量％，例如1重量％、2重量％、5重量％、10重量％、15重量％或20重量％。

本发明在第二方面提供了β-葡聚糖提取物在制备本发明第一方面所述的试剂盒中的应用，其中所述β-葡聚糖提取物从酿酒酵母细胞壁提取得到。

在一些优选的实施方式中，所述禽类动物为雉科动物，更优选为原鸡属动物，进一步优选为红原鸡种动物。

在一些优选的实施方式中，所述免疫增强剂用于：(1)增强接种疫苗动物的淋巴细胞增殖反应和T细胞应答；(2)降低接种疫苗动物的病毒载量；(3)降低接种疫苗动物的致病率或死亡率；(4)使接种疫苗动物提前产生抗体；(5)提高接种疫苗动物的抗体生成量；和/或(6)限制病毒扩散。

在一些优选的实施方式中，所述试剂盒中所包括的病毒疫苗可以与所述免疫增强剂混合在一起，也可以各自分别包装。

本发明第三方面提供了β-葡聚糖提取物在制备用于禽类动物免疫增强的免疫增强剂中的应用，其中所述β-葡聚糖提取物从酿酒酵母细胞壁提取得到。

在一些优选的实施方式中，所述免疫增强剂包含或者由如下物质组成：(1)总量不低于50重量％的β-1,3-葡聚糖和β-1,6-葡聚糖；和/或(2)不高于6重量％的水。在另外优选的实施方式中，所述免疫增强剂为无菌粉末形式。

在一些优选的实施方式中，所述β-葡聚糖提取物富含β-1,3-葡聚糖和β-1,6-葡聚糖，例如包含总量不低于50重量％的β-1,3-葡聚糖和β-1,6-葡聚糖。另外或者进一步可选的是，所述β-葡聚糖提取物的含水量不大于6重量％。

在一些优选的实施方式中，所述免疫增强剂为油包水乳液。

在一些优选的实施方式中，所述免疫增强剂为肌肉内注射制剂。本领技术人员根据本申请的教导有能力确定注射剂量。例如，所述剂量可以为100mg/kg体重至500mg/kg体重，更优选为150mg/kg体重至300mg/kg的所述β-葡聚糖。

在一些优选的实施方式中，所述免疫增强剂为口服制剂或饲料添加剂。经过本发明人研究发现，本发明的免疫增强剂可以通过口服施用，例如在使用疫苗免疫之后，可以让接种疫苗动物引用添加有所述免疫增强剂的水。所述免疫增强剂和水的比例可以设置成使得其中的所述β-葡聚糖的浓度为1重量％至20重量％，例如1重量％、2重量％、5重量％、10重量％、15重量％或20重量％。

在一些优选的实施方式中，所述动物为禽类动物，所述动物为雉科动物，更优选为原鸡属动物，进一步优选为红原鸡种动物。

在一些优选的实施方式中，所述试剂盒用于：(1)增强接种疫苗动物的淋巴细胞增殖反应和T细胞应答；(2)降低接种疫苗动物的病毒载量；(3)降低接种疫苗动物的致病率或死亡率；(4)使接种疫苗动物提前产生抗体；(5)提高接种疫苗动物的抗体生成量；和/或(6)限制病毒扩散。优选的是，所述动物为禽类动物。

本发明人使用不同的接种疫苗途径以新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)和传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV)疫苗对SPF鸡接种疫苗。在接种疫苗的过程中施用β-葡聚糖颗粒作为佐剂，然后对肉鸡进行不同的研究以检测佐剂的效果。这些研究包括例如：(1)21天龄的SPF鸡食用NDV或IBV进行接种并且在饮水中口服补充300mg/kg或150mg/kg的β-葡聚糖颗粒14天；(2)在接种疫苗当天以20mg/kg或10mg/kg的剂量肌肉内注射β-葡聚糖颗粒，第7天后再给一些剂量；(3)将β-葡聚糖颗粒以1％或2％浓度与失活NDV或IBV共混然后使用矿物油乳化成油包水形式的疫苗，每周测量体重增量和免疫器官指标(法氏囊，脾脏和胸腺)，从翼静脉收集血样以确定从接种疫苗后第7天开始不同时间点的抗体滴度；(4)进行了淋巴细胞增殖分析以测量在接种疫苗后第7天、第14天和第21天诱导的细胞介导的免疫力水平。不同的研究已经表明，在对SPF鸡进行抗病毒性疾病的疫苗接种的过程中，施用β-1,3/1,6-葡聚糖可以在接种的SPF鸡中加强细胞介导的病毒特异性抗体反应，这可以提供SPF鸡的成活率，并且降低以致死剂量的传染性病毒颗粒免疫后病毒扩散能力。

下文将通过实施例的方式对本发明进行进一步的说明，但是，这些实施例仅仅出于举例说明目的，本发明的保护范围不限于这些实施例。

实施例

材料

SPF鸡和鸡胚：从北京维塔桥实验动物有限公司(Beijing Vital BridgeExperimental Animal Co.Ltd)购买580只21日龄SPF鸡和700个10日龄的鸡胚。

饲料：从当地商业饲料企业(什么公司，没有找到)采购。

疫苗：从北京华都诗华生物制品有限公司(Beijing Ceva-Huadou BiologicalCo.Ltd)订购新城疫病毒(NDV)和传染性支气管炎病毒(IBV)减毒疫苗。

药剂：含有β-葡聚糖的酵母葡聚糖来源于酿酒酵母菌。

检测试剂盒：检测抗新城疫病毒(NDV)和传染性支气管炎病毒(IBV)抗体的ELISA试剂盒购自IDEXX(北京)有限公司。

新疫苗制剂：首先，将酿酒酵母葡聚糖(含有总量不低于50重量％的β-1,3-葡聚糖和β-1,6-葡聚糖，并且含水量不高于6重量％)以水相形式溶解，然后将NDV或IBV减毒疫苗与上述酵母提取物混合，使得其中的β-葡聚糖浓度分别为1重量％、2重量％、5重量％、10重量％和20重量％。制备完毕后，将新疫苗储存在4℃下进一步检测。

方法

在SPF鸡中对酵母提取物进行评价：

分组：将80只21日龄SPF鸡分成4组，每组20只SPF鸡。研究了来自酿酒酵母细胞壁的β-葡聚糖以300mg/kg和150mg/kg的剂量通过饮水提供给SPF鸡的效果，并以生理盐水和单独施用的疫苗作为对照。

免疫：在动物适应环境后，对SPF鸡胸肌注射施用一个剂量的抗NDV或IBV(每只鸡0.05ml)减毒疫苗。用减毒疫苗接种后，以来自上述酿酒酵母细胞壁的β-葡聚糖通过胸肌注射提供给SPF鸡。

体液反应：

免疫前一天为第0天(免疫前)，在第7天、第14天、第21天、第28天和第42天从每组10只SPF鸡的翼静脉收集血液样品。用ELISA试剂盒检测鸡血清中的抗NDV和抗IBV抗体。

灭活疫苗的制备：

将新疫苗用生理盐水稀释，然后接种于10日龄鸡胚中，每个鸡胚0.1ml。接种后，每天监测死亡率。将从北京赛瓦华都生物有限公司购买商品化的新城疫病毒灭活疫苗(NDV)接种到10日龄的鸡胚中测定EID50。按照中国药典2010年版标准规程制造含有来自酿酒酵母细胞壁的β-葡聚糖的灭活NDV疫苗。首先，从SPF胚胎的尿囊腔收集NDV株，然后按照中国药典2010版中描述的方案通过福尔马林灭活。然后，将β-葡聚糖以水相形式溶解，然后将NDV抗原与上述β-葡聚糖的混合，使得其中的β-葡聚糖浓度分别为1％、2％、5％、10％和20％。经过充分混合和测试后，将制剂无菌填充到10ml和20ml容器中。最终的疫苗储存在4℃下进一步测试。

SPF鸡试验：

10只SPF鸡通过滴眼剂单独给予0.05ml的稀释液，而10只鸡通过胸肌注射接种生理盐水作为对照。最后，每天监测接种的SPF鸡并观察表现14天。

功效测试：

(1)NDV抗体检测及疫苗免疫保护试验：用NDV疫苗接种70只SPF鸡，每组10只鸡，同时用0.1ml生理盐水鼻内给予10只鸡作为对照。在进行免疫接种后第14天，采集血液样品以使用ELISA试剂盒检测NDV抗体水平，然后用1.0ml致命性北京株(1X 10⁵ELD50/ml)肌肉注射所有SPF鸡，并且每天观察死亡率。该方案记录于中国药典2010年版第222页。

(2)IBV抗体检测及疫苗免疫保护试验试验：70只SPF鸡接种IBV疫苗，每组10只鸡，而10只鸡以0.1ml生理盐水作为对照进行鼻内给药。在免疫后第14天，采集血液样品以使用ELISA试剂盒检测IBV抗体水平。所有的鸡都用2滴致命性M41株鼻内攻毒。攻毒后，超过8只鸡得到了保护。该方案记录于中国药典2010年版第214页。

免疫后抗体持久性：

在功效试验的基础上，按照中国药典2010版第224页制备疫苗制剂。每组新鲜疫苗接种120只21日龄SPF鸡，每组10只。在第14天、30天、60天和90天收集血液样品，然后通过ELISA试剂盒测定抗NDV和IBV抗体的水平。

免疫效力试验：

使用致死剂量(1X 10⁵ELD50/ml)通过胸部肌肉注射对SPF鸡进行攻毒。在攻毒后第14天(此时对照小组全部死亡)，统计死亡率。死亡率统计时根据的判断标准如下：(1)保护：感染后出现一过性发蔫，精神不振后恢复，能自行采集食物和饮水；无神经症状或转颈现象；(2)不保护：分发病和死亡两种情况，发病是指肢体震颤、转圈和不协调运动，精神不振，无食欲和饮水，严重时出现卧倒不起；死亡是指攻毒后SPF鸡发病，最后出现死亡。在对病毒载量进行测定，NDV使用腺胃进行，IBV病毒使用气管进行。

统计分析：

数据表示为平均值±SEM(平均值的标准误差)。分析使用了Student’s T检验；当p<0.05时认为差异显著不同，当p<0.01时认为差异高度显著不同。

结果与分析

图1显示了使用NDV疫苗对SPF鸡进行疫苗接种后不同的时间点的抗NDV抗体水平，所述SPF鸡在饮水时补充口服不同剂量的β-葡聚糖或者补充口服对照饮食。从图1可以看出，在用NDV疫苗与不同浓度的β-葡聚糖进行免疫后，抗NDV抗体滴度明显高于生理盐水对照，并且300mg/kg剂量的β-葡聚糖可以获得显著高于150mg/kg剂量的β-葡聚糖的抗NDV抗体滴度，并且从免疫开始到第42天均显著较高。另外，150mg/kg剂量的β-葡聚糖加强免疫在第21天时出现峰值抗NDV抗体滴度。

图2显示了在SPF鸡中接种IBV疫苗后的抗传染性支气管炎病毒(Infectiousbronchitis virus，IBV)生成量，所述SPF鸡在接种疫苗期间在饮水时食用不同剂量的β-葡聚糖或者生理盐水14天。从图2可以看出，以IBV疫苗进行免疫并用β-葡聚糖进行加强免疫，抗IBV抗体滴度无论是300mg/kg还是150mg/kg剂量都显著高于生理盐水对照。另外，300mg/kg剂量的β-葡聚糖可以获得显著高于150mg/kg剂量的β-葡聚糖的抗NDV抗体滴度，并且从免疫开始到第42天均显著较高。另外，150mg/kg剂量的β-葡聚糖加强免疫在第28天时出现峰值抗NDV抗体滴度。

图3显示了在存在不同浓度的作为佐剂的β-葡聚糖的情况下或仅存在疫苗的情况下载接种疫苗之后第7天和第14天的抗NDV抗体滴度。未接种疫苗的SPF鸡作为阴性对照。从图3可以看出，没有使用β-葡聚糖的情况下，第7天还没有出现抗体，到第14天时有抗体产生。在使用1％和2％的β-葡聚糖的情况下，在第7天就有抗体产生，并且达到了没有使用β-葡聚糖的情况下所得到的抗体水平；在第14天时抗体生成量又几乎翻了一倍。

图4显示了在存在或者不存在2％的β-葡聚糖作为佐剂的情况下使用NDV疫苗进行接种的SPF鸡中，在接种后90天期间抗NDV抗体生成量的动力学曲线。从图4可以看出，采用2％的β-葡聚糖作为佐剂，从免疫后14天至90天，NDV抗体滴度都一直显著高于没有采用2％的β-葡聚糖作为佐剂的情况。

图5显示了使用致死剂量的NDV接种的SPF鸡在接种后致病和死亡的SPF鸡数量。疫苗和不同浓度的作为佐剂的β-葡聚糖或者生理盐水一起提供。采用没有接种的SPF鸡作为阴性对照。从图5可以看出，采用β-葡聚糖作为佐剂加强IBV疫苗，可以显著减少SPF鸡的致病率和死亡率。

图6显示了使用致死剂量的IBV接种的SPF鸡在接种后致病和死亡的SPF鸡数量。SPF鸡在不同浓度的作为佐剂的β-葡聚糖存在的情况下或者在生理盐水存在的情况下接种疫苗。采用没有接种的SPF鸡作为阴性对照。从图6可以看出，采用β-葡聚糖作为佐剂加强IBV疫苗，可以显著减少SPF鸡的致病率和死亡率。

图7显示了在不同剂量的β-葡聚糖或生理盐水作为佐剂的情况下以致死剂量的NDV或IBV对SPF鸡进行免疫后SPF鸡的病毒散播能力。采用没有接种的SPF鸡作为阴性对照。从图7可以看出，采用β-葡聚糖作为佐剂，无论是NDV还是IBV，SPF鸡肺部中的EID50病毒量几乎为0。没有采用β-葡聚糖作为佐剂，无论是疫苗对照还是盐水对照，则存在大量的病毒。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (18)

1.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

(1)用于禽类动物免疫增强的免疫增强剂，所述免疫增强剂包含从酿酒酵母细胞壁提取得到的β-葡聚糖提取物；和

(2)病毒疫苗。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述病毒疫苗为灭活病毒疫苗或者减毒疫苗。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述病毒疫苗可以选自由DNA病毒疫苗、亚单位疫苗、新城疫病毒疫苗和传染性支气管炎病毒疫苗组成的组。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述病毒疫苗为新城疫病毒疫苗和/或传染性支气管炎病毒疫苗。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述免疫增强剂包含：(1)总量不低于50重量％的β-1,3-葡聚糖和β-1,6-葡聚糖；和/或(2)不高于6重量％的水。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述免疫增强剂为油包水乳液。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述免疫增强剂为肌肉内注射制剂。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述免疫增强剂为口服制剂或饲料添加剂。

9.β-葡聚糖提取物在制备权利要求1至8中任一项所述的试剂盒中的应用，其中所述β-葡聚糖提取物从酿酒酵母细胞壁提取得到。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述禽类动物为雉科动物，更优选为原鸡属动物，进一步优选为红原鸡种动物。

11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述免疫增强剂用于：

(1)增强接种疫苗动物的淋巴细胞增殖反应和T细胞应答；

(2)降低接种疫苗动物的病毒载量；

(3)降低接种疫苗动物的致病率或死亡率；

(4)使接种疫苗动物提前产生抗体；

(5)提高接种疫苗动物的抗体生成量；和/或

(6)限制病毒扩散。

12.β-葡聚糖提取物在制备用于禽类动物免疫增强的免疫增强剂中的应用，其中所述β-葡聚糖提取物从酿酒酵母细胞壁提取得到。

13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述免疫增强剂包含：(1)总量不低于50重量％的β-1,3-葡聚糖和β-1,6-葡聚糖；和/或(2)不高于6重量％的水。

14.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述免疫增强剂为油包水乳液。

15.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述免疫增强剂为肌肉内注射制剂。

16.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述免疫增强剂为口服制剂或饲料添加剂。

17.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述禽类动物为雉科动物，更优选为原鸡属动物，进一步优选为红原鸡种动物。

18.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述免疫增强剂用于：

(1)增强接种疫苗动物的淋巴细胞增殖反应和T细胞应答；

(2)降低接种疫苗动物的病毒载量；

(3)降低接种疫苗动物的致病率或死亡率；

(4)使接种疫苗动物提前产生抗体；

(5)提高接种疫苗动物的抗体生成量；和/或

(6)限制病毒扩散。