CN110432225A - 血瘀痰凝证和喉癌病证结合动物模型的构建方法 - Google Patents
血瘀痰凝证和喉癌病证结合动物模型的构建方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110432225A CN110432225A CN201910668912.9A CN201910668912A CN110432225A CN 110432225 A CN110432225 A CN 110432225A CN 201910668912 A CN201910668912 A CN 201910668912A CN 110432225 A CN110432225 A CN 110432225A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- animal
- blood stasis
- stasis phlegm
- solidifying
- phlegm
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 67
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 67
- 206010062717 Increased upper airway secretion Diseases 0.000 title claims abstract description 56
- 208000026435 phlegm Diseases 0.000 title claims abstract description 56
- 238000010171 animal model Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 238000010276 construction Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 title claims abstract description 18
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims abstract description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract description 16
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 65
- 239000005457 ice water Substances 0.000 claims abstract description 19
- ATADHKWKHYVBTJ-FVGYRXGTSA-N (R)-adrenaline hydrochloride Chemical compound [H+].[Cl-].CNC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 ATADHKWKHYVBTJ-FVGYRXGTSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 206010023825 Laryngeal cancer Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 13
- 230000009182 swimming Effects 0.000 claims abstract description 12
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 238000011729 BALB/c nude mouse Methods 0.000 claims abstract description 5
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 14
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 9
- 108010028554 LDL Cholesterol Proteins 0.000 claims description 8
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 7
- HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N (4S)-2-(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,2-f][1,3]benzothiazol-2-yl)-4,5-dihydro-1,3-thiazole-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(=N1)c1nc2cc3CCNc3cc2s1 HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N 0.000 claims description 4
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 claims description 4
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 claims description 4
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 claims description 4
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 claims description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 3
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 claims description 3
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 claims description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 claims description 3
- 108010022197 lipoprotein cholesterol Proteins 0.000 claims description 3
- JAJWGJBVLPIOOH-IZYKLYLVSA-M sodium taurocholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 JAJWGJBVLPIOOH-IZYKLYLVSA-M 0.000 claims description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 3
- FUFJGUQYACFECW-UHFFFAOYSA-L calcium hydrogenphosphate Chemical compound [Ca+2].OP([O-])([O-])=O FUFJGUQYACFECW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 235000019700 dicalcium phosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 claims description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 claims 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 claims 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000035602 clotting Effects 0.000 abstract description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 4
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 4
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 4
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 3
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 3
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 3
- 240000001624 Espostoa lanata Species 0.000 description 2
- 235000009161 Espostoa lanata Nutrition 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010014080 Ecchymosis Diseases 0.000 description 1
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 1
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 1
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000007773 growth pattern Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid Substances OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 phosphoric acid hydrogen Chemical class 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/02—Breeding vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/111—Aromatic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
- A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/158—Fatty acids; Fats; Products containing oils or fats
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/163—Sugars; Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/20—Inorganic substances, e.g. oligoelements
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/20—Inorganic substances, e.g. oligoelements
- A23K20/22—Compounds of alkali metals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/20—Inorganic substances, e.g. oligoelements
- A23K20/26—Compounds containing phosphorus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/50—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for rodents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61D—VETERINARY INSTRUMENTS, IMPLEMENTS, TOOLS, OR METHODS
- A61D7/00—Devices or methods for introducing solid, liquid, or gaseous remedies or other materials into or onto the bodies of animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/13—Amines
- A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
- A61K31/137—Arylalkylamines, e.g. amphetamine, epinephrine, salbutamol, ephedrine or methadone
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Birds (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了血瘀痰凝证和喉癌病证结合动物模型的构建方法，属于动物模型构建技术领域，其包括以下步骤：动物检疫合格后，采用高脂饲料喂养、冰水游泳和盐酸肾上腺素皮下注射相结合的方式构建血瘀痰凝证动物；向血瘀痰凝证动物的腋下皮肤下注射喉癌细胞，采用的动物是Balb/c裸小鼠。本发明构建方法采用多因素将血瘀痰凝证和喉癌进行结合，构建成功的验证指标有血脂功能和凝血时间，动物模型的可信度较高、重复性好。
Description
技术领域
本发明属于动物模型构建技术领域，尤其涉及结合有血瘀痰凝证和喉癌病证结合动物模型的构建方法。
背景技术
喉癌目前治疗仍然棘手，中医药防治喉癌具有明显的优势，然而其具体的作用机制还阐述不清。根据中医辨证论治和四诊合参，血瘀痰凝证是喉癌形成最基本的证型。因此，为了“探讨中医药抗肿瘤机制，实现中医药现代化”，构建血瘀痰凝证和喉癌病证结合动物模型迫在眉睫。
血瘀痰凝证是临床上常见的中医证候之一，近年来国内许多学者采用不同途径和思路构建了一些证候相关动物模型，其包括血瘀证、寒凝血瘀证等动物模型。该类模型的构建方法大致有全身冷冻法、局部冻伤法、冰水浸泡法、风寒环境法、冰水浸泡加药物法、冷刺激法、寒凉中药法等，然而其存在许多不足：1)造模过程中存在许多随意性，2)造模因素单一或局限，3)评价方法局限在症状体征观察，以及血流测定等，缺乏客观的实验室指标，4)由于Balb/c裸小鼠本身具有免疫缺陷，难以耐受多因素干预，造成造模期间动物死亡率高，难以大批量操作，然而肿瘤疾病研究大多是采用该类种属动物。
发明内容
本发明目的在于克服现有技术存在的不足，而提供结血瘀痰凝证和喉癌病证结合动物模型的构建方法，该构建方法采用多因素将血瘀痰凝证和喉癌进行病证结合，构建成功的验证指标有血脂功能和凝血时间，动物模型的可信度较高、重复性好。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：血瘀痰凝证动物模型的构建方法，其包括以下步骤：动物检疫合格后，采用高脂饲料喂养、冰水游泳和盐酸肾上腺素皮下注射相结合的方式进行构建；与空白组动物相比，血瘀痰凝证动物的总胆固醇、非高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量高于空白组动物，血瘀痰凝证动物的活化部分凝血酶原时间短于空白组动物，血瘀痰凝证动物的全身皮肤呈紫暗色、大便黏腻不成形、舌质呈暗黑色，血瘀痰凝证动物的皮肤温度低于空白组动物，血瘀痰凝证动物的舌质干于空白组动物；所述空白组动物是指不用高脂饲料喂养、不冰水游泳以及不注射盐酸肾上腺素。
作为上述技术方案的改进，所述动物为Balb/c裸小鼠，所述高脂饲料包含以下质量百分含量的组分：蔗糖20％、猪油15％、胆固醇1.2％、胆酸钠0.2％、酪蛋白10％、磷酸氢钙0.6％、石粉0.4％、预混料0.4％和基础饲料52.2％。
作为上述技术方案的改进，动物游泳时冰水的温度为0～4℃，动物冰水游泳直至无力抬头；每日1次腹部皮下注射盐酸肾上腺素，每次的注射量为0.2mg/20g(盐酸肾上腺素与动物的重量比)。
作为上述技术方案的改进，动物检疫合格后，转移至SPF级环境进行模型的构建；期间，盐酸肾上腺素注射30min后，冰水游泳，模型的构建时间为2周。
血瘀痰凝证动物模型的构建方法，优选为：动物检疫3天后，转移至SPF级环境进行造模；高脂饲料自由喂养，自由饮水，盐酸肾上腺素0.2mg/20g(0.9％生理盐水稀释)每日1次腹部皮下注射，旋转出针，棉球轻轻按压，防止漏液；盐酸肾上腺素注射30min后，冰水游泳，温度控制在0～4℃，游泳时间根据动物个体差异，当无力抬头，沉入水中时立即将动物提起，干毛巾擦拭动物身上冰水；造模2周后，摘取动物眼球取血，一部分全血装入普通采血管，另一部全血装入柠檬酸钠采血管，采用生化分析仪检测血脂功能以及雷杜全自动凝血分析仪检测凝血时间。
另外，本发明还提供血瘀痰凝证和喉癌病证结合动物模型的构建方法，其包括以下步骤：
S1)采用所述的构建方法构建出血瘀痰凝证动物；
S2)向所述血瘀痰凝证动物的腋下皮肤下注射喉癌细胞。
作为上述技术方案的改进，所述喉癌细胞为稳定表达荧光素酶的Hep2喉癌细胞，血瘀痰凝证动物的腹腔注射荧光素酶底物，对瘤体进行荧光拍照；所述荧光素酶底物的注射量为150mg/kg。
作为上述技术方案的改进，所述喉癌细胞的浓度为1×107/ml，喉癌细胞的注射量为0.2ml。
喉癌细胞的移植方法，优选为：培养细胞，并传代到一定数量的细胞，胰酶消化，无酚红RPMI培养基重悬细胞，Corning Star细胞计数仪计数，配成细胞数为1×107/ml，每只裸鼠右侧腋下皮肤下注射0.2ml，旋转出针，棉球按压注射点预防漏液；气体麻药麻醉动物情况下，每只小鼠腹腔注射荧光素酶底物(150mg/kg，生理盐水稀释，0.2μM的滤头过滤除菌)，10～15min内小动物活体成像仪拍摄。
本发明的有益效果在于：本发明提供结血瘀痰凝证和喉癌病证结合动物模型的构建方法，本发明首先构建血瘀痰凝证动物，在此基础上再构建血瘀痰凝证和喉癌病证结合的动物，相对于现有技术具有以下优点：
1)基于内外因同时致病的中医理论，多因素联合，物理和化学因素相结合塑造证候模型(即血瘀痰凝证)，在成功的证候模型基础上建立疾病模型(喉癌)，构建喉癌病证结合动物模型；
2)通过反复实验评估，将各类造模因素程度量化，构建方法具有标准化、重复性强等优点；
3)采用客观的实验室指标衡量造模后动物血脂和凝血功能变化，保证了动物模型的可信度，能较好的复制临床血瘀痰凝证的症状特点；
4)严格按照操作流程，动物模型造模未出现死亡，可大批量操作。
附图说明
图1显示血瘀痰凝证小鼠造模期间，饮食、饮水和体重的变化情况；从左至右，依次显示：空白组和模型组的饮食变化，空白组和模型组的饮水变化，空白组和模型组的体重变化；其中，con表示空白组，mo表示模型组，**表示P＜0.01；
图2显示血瘀痰凝证小鼠造模期间，血浆中TC、nonHDL-C、LDL-C、APTT的变化情况；“TC”指总胆固醇，“nonHDL-C”指非高密度脂蛋白胆固醇，“LDL-C”指低密度脂蛋白胆固醇，“APTT”指活化部分凝血酶原时间；*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；
图3显示血瘀痰凝证小鼠的舌像情况；
图4显示血瘀痰凝证小鼠的皮肤颜色；
图5显示血瘀痰凝证小鼠种植的肿瘤体积增长情况；
图6显示小鼠生物发光情况以及瘤体展示。
具体实施方式
为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例和附图对本发明作进一步说明。
实施例1
本实施例提供血瘀痰凝证动物模型的构建方法，其包括以下步骤：动物检疫合格后3天，采用高脂饲料喂养、冰水游泳和盐酸肾上腺素皮下注射相结合的方式进行构建；
优选地，动物为Balb/c裸小鼠，高脂饲料包含以下质量百分含量的组分：蔗糖20％、猪油15％、胆固醇1.2％、胆酸钠0.2％、酪蛋白10％、磷酸氢钙0.6％、石粉0.4％、预混料0.4％和基础饲料52.2％；
优选地，动物游泳时冰水的温度为0～4℃，动物冰水游泳直至无力抬头；每日1次腹部皮下注射盐酸肾上腺素，每次的注射量为0.2mg/20g(盐酸肾上腺素与动物的重量比)；
优选地，转移至SPF级环境进行模型的构建；期间，盐酸肾上腺素注射30min后，冰水游泳，模型的构建时间为2周。
以实施例1构建的血瘀痰凝证小鼠和空白组小鼠为研究对象，进行相关数据测定：
1)动物证候造模期间体重，饮水饮食情况
如图1所示，动物证候造模期间，空白组与模型组一般情况比较，空白组相比模型组的饮食和饮水量整体上多，但两组比较差异无统计学意义；而体重变化上，在造模满一周后，相比模型组，空白组小鼠体重增长速度更快，两组比较差异有统计学意义。
2)血脂和凝血功能的检测
血瘀痰凝证裸小鼠证候造模后，动物全血上清血脂和凝血功能检测结果如图2和表1所示，模型组总胆固醇(TC)、非高密度脂蛋白胆固醇(nonHDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)均比空白组高，两组比较差异具有统计学意义；模型组的活化部分凝血酶原时间缩短，与空白组比较差异具有统计学意义；其中，与正常组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。
表1血浆中TC、nonHDL-C、LDL-C、APTT指标对比
3)血瘀痰凝证动小鼠舌像以及特殊情况表现
如图3和图4所示，空白组小鼠全身皮肤颜色淡红，接触皮肤温暖，大便正常，舌质红润，少量瘀斑；模型小鼠全身皮肤紫暗，接触皮肤温度低，大便黏腻，不成形，舌质暗黑且偏干。
实施例2
本实施例提供血瘀痰凝证和喉癌病证结合动物模型的构建方法，其包括以下步骤：向血瘀痰凝证小鼠的腋下皮肤下注射喉癌细胞；
优选地，喉癌细胞为稳定表达荧光素酶的Hep2喉癌细胞，血瘀痰凝证小鼠的腹腔注射荧光素酶底物，对瘤体进行荧光拍照；荧光素酶底物的注射量为150mg/kg；喉癌细胞的浓度为1×107/ml，喉癌细胞的注射量为0.2ml。
成功在“血瘀痰凝证”裸小鼠上构建移植瘤。
如表2、图5和图6所示，与空白组比较，血瘀痰凝证模型组的瘤体生长速度快，从种瘤第9天开始，模型组的瘤体体积增长速度明显加快，与空白组相比，差异具有统计学意义。
表2小鼠证候造模期间两组的肿瘤体积对比(m3)(x±s)
基于成功的证候模型基础上，将luciferase标记喉癌细胞Hep2移植到动物腋下皮肤，构建血瘀痰凝证喉癌病证结合的动物模型。反复实验，观察动物对造模手段耐受性，严格按照操作流程和程度，能保证动物无死亡。该病证结合动物模型能大批量操作，具有标准化、可复制性等优点。
最后所应当说明的是，以上实施例用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者同等替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (7)
1.血瘀痰凝证动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：动物检疫合格后，采用高脂饲料喂养、冰水游泳和盐酸肾上腺素皮下注射相结合的方式进行构建；与空白组动物相比，血瘀痰凝证动物的总胆固醇、非高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量高于空白组动物，血瘀痰凝证动物的活化部分凝血酶原时间短于空白组动物，血瘀痰凝证动物的全身皮肤呈紫暗色、大便黏腻不成形、舌质呈暗黑色，血瘀痰凝证动物的皮肤温度低于空白组动物，血瘀痰凝证动物的舌质干于空白组动物；所述空白组动物是指不用高脂饲料喂养、不冰水游泳以及不注射盐酸肾上腺素。
2.如权利要求1所述的血瘀痰凝证动物模型的构建方法，其特征在于，所述动物为Balb/c裸小鼠，所述高脂饲料包含以下质量百分含量的组分：蔗糖20％、猪油15％、胆固醇1.2％、胆酸钠0.2％、酪蛋白10％、磷酸氢钙0.6％、石粉0.4％、预混料0.4％和基础饲料52.2％。
3.如权利要求1所述的血瘀痰凝证动物模型的构建方法，其特征在于，动物游泳时冰水的温度为0～4℃，动物冰水游泳直至无力抬头；每日1次腹部皮下注射盐酸肾上腺素，每次的注射量为0.2mg/20g(盐酸肾上腺素与动物的重量比)。
4.如权要求1所述的血瘀痰凝证动物模型的构建方法，其特征在于，动物检疫合格后，转移至SPF级环境进行模型的构建；期间，盐酸肾上腺素注射30min后，冰水游泳，模型的构建时间为2周。
5.血瘀痰凝证和喉癌病证结合动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1)采用如权利要求1～4任一项所述的构建方法构建出血瘀痰凝证动物；
S2)向所述血瘀痰凝证动物的腋下皮肤下注射喉癌细胞。
6.如权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述喉癌细胞为稳定表达荧光素酶的Hep2喉癌细胞，血瘀痰凝证动物的腹腔注射荧光素酶底物，对瘤体进行荧光拍照；所述荧光素酶底物的注射量为150mg/kg。
7.如权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述喉癌细胞的浓度为1×107/ml，喉癌细胞的注射量为0.2ml。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910668912.9A CN110432225B (zh) | 2019-07-23 | 2019-07-23 | 血瘀痰凝证和喉癌病证结合动物模型的构建方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910668912.9A CN110432225B (zh) | 2019-07-23 | 2019-07-23 | 血瘀痰凝证和喉癌病证结合动物模型的构建方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110432225A true CN110432225A (zh) | 2019-11-12 |
| CN110432225B CN110432225B (zh) | 2021-10-22 |
Family
ID=68431436
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910668912.9A Active CN110432225B (zh) | 2019-07-23 | 2019-07-23 | 血瘀痰凝证和喉癌病证结合动物模型的构建方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110432225B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111742883A (zh) * | 2020-01-03 | 2020-10-09 | 广东省中医院（广州中医药大学第二附属医院、广州中医药大学第二临床医学院、广东省中医药科学院） | 一种肺脾气虚证变应性鼻炎病证结合动物模型的构建方法 |
| CN113545419A (zh) * | 2021-07-10 | 2021-10-26 | 广西中医药大学 | 基于痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建方法、饲料组合物 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2292133C1 (ru) * | 2005-05-03 | 2007-01-27 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Орловский государственный аграрный университет" (ФГОУ ВПО ОрелГАУ) | Способ определения типов высшей нервной деятельности у быков-производителей |
| CN101422388A (zh) * | 2007-10-30 | 2009-05-06 | 田金洲 | 一种血瘀证表征模型的制作方法及其用途 |
| JP2009114138A (ja) * | 2007-11-08 | 2009-05-28 | Kaneka Corp | コレステロール上昇抑制剤 |
| CN101707989A (zh) * | 2009-10-23 | 2010-05-19 | 北京中医药大学东方医院 | 一种气虚血瘀证病证结合动物模型的制作方法及其评价方法 |
| CN102626502A (zh) * | 2011-11-07 | 2012-08-08 | 仲崇琳 | 一种治疗乳腺增生的中药组合物 |
| CN106728590A (zh) * | 2015-11-19 | 2017-05-31 | 顾飞 | 治血瘀痰凝型乳核的中药配方 |
| CN107596388A (zh) * | 2017-08-28 | 2018-01-19 | 中山大学 | 一种气虚血瘀证动物模型的制作方法 |
| CN109329207A (zh) * | 2018-11-21 | 2019-02-15 | 胡学东 | 一种抗肿瘤实验动物模型及其构建方法 |
-
2019
- 2019-07-23 CN CN201910668912.9A patent/CN110432225B/zh active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2292133C1 (ru) * | 2005-05-03 | 2007-01-27 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Орловский государственный аграрный университет" (ФГОУ ВПО ОрелГАУ) | Способ определения типов высшей нервной деятельности у быков-производителей |
| CN101422388A (zh) * | 2007-10-30 | 2009-05-06 | 田金洲 | 一种血瘀证表征模型的制作方法及其用途 |
| JP2009114138A (ja) * | 2007-11-08 | 2009-05-28 | Kaneka Corp | コレステロール上昇抑制剤 |
| CN101707989A (zh) * | 2009-10-23 | 2010-05-19 | 北京中医药大学东方医院 | 一种气虚血瘀证病证结合动物模型的制作方法及其评价方法 |
| CN102626502A (zh) * | 2011-11-07 | 2012-08-08 | 仲崇琳 | 一种治疗乳腺增生的中药组合物 |
| CN106728590A (zh) * | 2015-11-19 | 2017-05-31 | 顾飞 | 治血瘀痰凝型乳核的中药配方 |
| CN107596388A (zh) * | 2017-08-28 | 2018-01-19 | 中山大学 | 一种气虚血瘀证动物模型的制作方法 |
| CN109329207A (zh) * | 2018-11-21 | 2019-02-15 | 胡学东 | 一种抗肿瘤实验动物模型及其构建方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| 刘宇龙: "鼻咽癌中医证型与放射敏感性相关性研究", 《广州中医药大学》 * |
| 周世卿等: "痰瘀证裸小鼠模型的建立及评价", 《痰瘀证裸小鼠模型的建立及评价》 * |
| 张婷婷: "喉癌患者中医体质类型分析及痰瘀对喉癌裸鼠miRNA表达影响的研究", 《喉癌患者中医体质类型分析及痰瘀对喉癌裸鼠MIRNA表达影响的研究》 * |
| 王爽等: "荧光素酶生物发光报告体系的优化及在肝癌荷瘤裸鼠模型中的应用", 《荧光素酶生物发光报告体系的优化及在肝癌荷瘤裸鼠模型中的应用》 * |
| 赖名殷: "针刺调控缺血性PSD大鼠神经元自噬抑制炎性坏死机制研究", 《广州中医药大学》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111742883A (zh) * | 2020-01-03 | 2020-10-09 | 广东省中医院（广州中医药大学第二附属医院、广州中医药大学第二临床医学院、广东省中医药科学院） | 一种肺脾气虚证变应性鼻炎病证结合动物模型的构建方法 |
| CN113545419A (zh) * | 2021-07-10 | 2021-10-26 | 广西中医药大学 | 基于痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建方法、饲料组合物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110432225B (zh) | 2021-10-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110432225A (zh) | 血瘀痰凝证和喉癌病证结合动物模型的构建方法 | |
| CN109221011A (zh) | 一种通过饮食和stz诱导建立的sd大鼠肥胖和糖尿病研究模型的方法 | |
| CN109745341A (zh) | 四氧化三铁超顺磁性纳米颗粒刺激干细胞外泌体成骨 | |
| CN104705258A (zh) | 一种饮食诱导胰岛素抵抗模型的构建方法及应用 | |
| CN109486715A (zh) | 一种富硒长双歧杆菌及其制备方法和应用 | |
| CN101624473B (zh) | 一种规模化培养肝细胞的方法 | |
| CN104757111A (zh) | 一种复合益生菌发酵植物饮料及其制备方法 | |
| CN104430849B (zh) | 用于辅助抗糖尿病的多菌发酵脱脂驼乳及其生产方法 | |
| CN106119385A (zh) | 一种诊断2型糖尿病的miRNA分子标志物hsa‑miR‑149‑3p及其应用 | |
| CN105211052A (zh) | 一种培养后的nkt细胞的冻存液及其制备方法 | |
| CN109833333A (zh) | 一种制备肺炎大鼠模型的方法及模型评价方法 | |
| CN109805890A (zh) | 一种评价医用交联透明质酸钠凝胶在体内降解周期的方法 | |
| Xiping et al. | Effects of salvia miltiorrhizae on ICAM-1, TLR4, NF-κB and bax proteins expression in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis or obstructive jaundice | |
| CN101638693A (zh) | 实时荧光定量pcr检测人肠道病毒的试剂盒 | |
| Götze et al. | Three cases of alcohol-induced acute-on-chronic liver failure with successful support by adipose-derived stem cells | |
| CN103013923A (zh) | 建立人卵巢癌动物模型的方法 | |
| CN109620797A (zh) | 一种耐受胃液胁迫的纳米纤维缓释固体剂及其制备方法 | |
| CN104906598A (zh) | Actl6a基因在制备治疗肝癌或术后预防肝癌复发药物中的应用 | |
| CN105092490B (zh) | 人胰岛素及类似物或偶联物体外生物活性测定方法 | |
| CN113230356B (zh) | 葛根芹菜汤在制备抗败血症及心肌损伤组合物中的应用 | |
| CN116966138B (zh) | 一种凝胶在制备提升amh值的药物中的应用 | |
| CN109287619A (zh) | 一种保存介质添加剂在脐带间充质干细胞保存中的应用 | |
| CN109287620A (zh) | 一种保存介质添加剂在脂肪间充质干细胞保存中的应用 | |
| CN109315385A (zh) | 一种脐带间充质干细胞保存介质 | |
| CN104383557A (zh) | 一种治疗肉鸡腹水征合症的rna干扰药物的制备方法和用途及其药效验证方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |