CN110423264A - 一种基于活化酯高效制备棕榈酰三肽-5的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种基于活化酯高效制备棕榈酰三肽‑5的方法，属于多肽的制备技术领域。本发明提供的基于活化酯高效制备棕榈酰三肽‑5的方法，该方法是以棕榈酸及氨基酸为原材料，通过酰氯与活化酯相结合，制备出棕榈酰三肽片段，再通过氢化反应脱除保护基团得到终产品棕榈酰三肽‑5。本发明提供的方法避免了其余方法中反复上保护与脱保护的操作，节约了成本，提高了效率。本发明的方法具有操作简单，产物纯度高、收率高，成本相对较低等优点，且能够大规模生产，可以工业化制备棕榈酰三肽‑5。

Description

一种基于活化酯高效制备棕榈酰三肽-5的方法
技术领域
本发明属于多肽的制备技术领域，具体涉及一种基于活化酯高效制备棕榈酰三肽-5的方法。
背景技术
棕榈酰三肽-5(Palmitoyl-Lysyl-Valyl-Lysine，Pal-Lys-Val-Lys-OH)又称为“三肽”或“胶原肽COLL-O2”，是应用最早、最广泛的美容胜肽。棕榈酰三肽-5属于信号类胜肽，能够通过增加基质细胞活动来促进胶原蛋白(Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅳ型)的合成和细胞外基质蛋白的生成，让皮肤看起来更显年轻和富有弹性。将其添加到化妆品中，能帮助肌肤补充胶原蛋白，提升面部弹性，显著减少脸部皱纹。同时它还具有增强细胞活性，提升肌肤含水量，增强肌肤光泽，改善肤色的特性。
现有技术中关于棕榈酰三肽-5的应用研究报道较多。如文献[日用化学工业，2018,48(3),166-171]对棕榈酰三肽-5的美白功效及作用机制进行了研究，结果表明，棕榈酰三肽-5能够通过抑制酪氨酸酶活性，下调小眼畸形相关转录因子(MITF)和酪氨酸酶的mRNA水平，从而抑制黑色素细胞内黑色素的生成，可以考虑将其作为美白添加剂应用于化妆品领域。公开号为CN108619047A的中国专利公开了一种抗衰老的化妆品配方及其制备方法，其抗衰组分之一即为棕榈酰三肽-5。公开号为CN 107669564A的中国专利公开了一种具有修复再生、补水保湿、延缓衰老的护肤组合物，棕榈酰三肽-5即为其主要成分之一。相关的研究报道还有很多，在此不一一列举。
但是现有技术中关于棕榈酰三肽-5制备的文献报道确极少，美国专利US2007099842A1中提到过用固相合成法制备棕榈酰三肽-5，但其需要多种保护基团及脱保护试剂，且最终收率仅为19％。除此方法外，目前尚无其他制备棕榈酰三肽-5方法的报道。
发明内容
本发明要解决现有技术中的技术问题，提供一种基于活化酯高效制备棕榈酰三肽-5的方法。该方法避免了现有技术中反复上保护与脱保护的操作，节约了成本，提高了效率。本发明的方法具有操作简单，产物纯度高、收率高，成本相对较低等优点，适用于规模化制备棕榈酰三肽-5。
为了解决上述技术问题，本发明的技术方案具体如下：
本发明提供一种基于活化酯高效制备棕榈酰三肽-5的方法，包括以下步骤：
(1)、棕榈酰氯(Pal-Cl)的制备：
以棕榈酸为起始原料，使用酰氯化试剂，制备棕榈酰氯；
(2)、Pal-Lys(Cbz)-OH的制备：
取碱溶于水中，加入四氢呋喃(THF)及Nε-Cbz-L-赖氨酸溶解；再将步骤(1)中制备的棕榈酰氯溶解于THF中，0℃条件下，滴入反应体系中，滴加完毕后，室温下搅拌反应4～24小时，加入1M HCl调节pH为2-4，萃取，干燥，抽滤，滤液旋干，即得到Pal-Lys(Cbz)-OH；
(3)、Pal-Lys(Cbz)-ONB或Pal-Lys(Cbz)-ONHS活化酯的制备：
将步骤(2)中所得产物Pal-Lys(Cbz)-OH溶解在溶剂中，降温至0℃，加入N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺(HONB)或N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，及DMAP，再分批加入EDCl，加完后逐渐恢复至室温，搅拌反应6-48小时，萃取，干燥，抽滤，滤液旋干，即得到Pal-Lys(Cbz)-ONB或Pal-Lys(Cbz)-ONHS活化酯；
(4)、Pal-Lys(Cbz)-Val-OH的制备：
取碱溶于水中，加入L-缬氨酸溶解，再将步骤(3)中所得Pal-Lys(Cbz)-ONB或Pal-Lys(Cbz)-ONHS活化酯溶解在THF中，0℃条件下，滴入反应体系中，滴加完毕后，逐渐恢复至室温，搅拌反应4～24小时，加入1M HCl调节pH为3-4，萃取，干燥，抽滤，滤液旋干，即得Pal-Lys(Cbz)-Val-OH；
(5)、Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB或Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS活化酯制备：
将步骤(4)中所得产物Pal-Lys(Cbz)-Val-OH溶解在溶剂中，降温至0℃，加入N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺(HONB)或N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，及DMAP，再分批加入EDCl，加完后逐渐恢复至室温，搅拌反应6-48小时，萃取，干燥，抽滤，滤液旋干，即得到Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB或Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS活化酯；
(6)、Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH的制备：
取碱溶于水中，加入四氢呋喃(THF)及Nε-Cbz-L-赖氨酸溶解，再将步骤(5)中所得Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB或Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS活化酯溶解在THF中，0℃条件下，滴入反应体系中，滴加完毕后，逐渐恢复至室温，搅拌反应4～24小时，加入1M HCl调节pH为3-4，萃取，干燥，抽滤，滤液旋干，即得Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH；
(7)、Pal-Lys-Val-Lys-OH的制备：
将步骤(6)中所得Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH溶解于甲醇中，加入含量为5％的湿Pd/C，氮气置换三次，氢气置换三次，最后保持氢气氛围，室温下搅拌反应10-48小时，抽滤除去Pd/C，滤液旋干，乙醇重结晶，即得Pal-Lys-Val-Lys-OH。
在上述技术方案中，步骤(1)中所述的酰氯化试剂为能够与羧基反应生成酰氯的试剂，具体为氯化亚砜、三氯化磷、五氯化磷、草酰氯、光气、双光气和三光气中的一种。
在上述技术方案中，步骤(1)中所述的酰氯化试剂与棕榈酸的摩尔比为(1-100):1。
在上述技术方案中，步骤(1)中所用溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、苯、甲苯、氯苯、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺和二甲基亚砜中的一种或几种，反应温度为-78℃-150℃，反应时间为1h-24h。
在上述技术方案中，步骤(2)、(4)和(6)中所述的碱为氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸氢钠、浓氨水和三乙胺中的一种或多种。
在上述技术方案中，步骤(2)中所述的四氢呋喃与水的体积比为(0.5-2):1，所述的Nε-Cbz-L-赖氨酸、碱及棕榈酰氯的摩尔比为1：(2-10)：(1-2)；步骤(4)中所述的L-缬氨酸、碱、及Pal-Lys(Cbz)-ONB或Pal-Lys(Cbz)-ONHS活化酯的摩尔比为1：(2-10)：(1-2)；步骤(6)中所述的四氢呋喃与水的体积比为(0.5-2):1，所述的Nε-Cbz-L-赖氨酸、碱、及Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB或Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS活化酯的摩尔比为1：(2-10)：(1-2)。
在上述技术方案中，步骤(3)和(5)中所述的溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷中、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺和二甲基亚砜中的一种。
在上述技术方案中，步骤(3)中所述的Pal-Lys(Cbz)-OH、HONB或NHS、DMAP及EDCl的摩尔比为1：(1.1-2)：(0.1-1)：(1.1-3)；步骤(5)中所述的Pal-Lys(Cbz)-Val-OH、HONB或NHS、DMAP及EDCl的摩尔比为1：(1.1-2)：(0.1-1)：(1.1-3)。
在上述技术方案中，步骤(7)中所述的Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH与甲醇的质量-体积比为1g：(50-200)mL。
在上述技术方案中，步骤(7)中所述的Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH与Pd/C的质量比为1：(0.05-0.5)。
本发明的有益效果是：
本发明提供的一种基于活化酯高效制备棕榈酰三肽-5的方法，该方法是以棕榈酸及氨基酸为原材料，通过酰氯与活化酯相结合，制备出棕榈酰三肽片段，再通过氢化反应脱除保护基团得到终产品棕榈酰三肽-5。
本发明提供的方法避免了其余方法中反复上保护与脱保护的操作，节约了成本，提高了效率。其具有操作简单，产物纯度高、收率高，成本相对较低等优点，且能够大规模生产，可以工业化制备棕榈酰三肽-5。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
图1为实施列1制备得到的棕榈酰三肽-5的质谱图(ESI-MS)示意图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做以详细说明。
本发明提供一种基于活化酯高效制备棕榈酰三肽-5的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)、棕榈酰氯(Pal-Cl)的制备：
以棕榈酸为起始原料，选用酰氯化试剂，反应制备出棕榈酰氯；
(2)、Pal-Lys(Cbz)-OH的制备：
取碱溶于水中，加入四氢呋喃(THF)及Nε-Cbz-L-赖氨酸溶解，再将步骤(1)中制备的棕榈酰氯溶解于THF中，0℃条件下，缓慢滴入反应体系中，滴加完毕后，室温下搅拌反应4～24小时，加入1M HCl调节pH为2-4，萃取，干燥，抽滤，滤液旋干，即得到Pal-Lys(Cbz)-OH；
(3)、Pal-Lys(Cbz)-ONB或Pal-Lys(Cbz)-ONHS活化酯的制备：
将步骤(2)中所得产物Pal-Lys(Cbz)-OH溶解在溶剂中，降温至0℃，加入N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺(HONB)或N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和DMAP，再分批加入EDCl，加完后逐渐恢复至室温，搅拌反应6-48小时，萃取，干燥，抽滤，滤液旋干，即得到Pal-Lys(Cbz)-ONB或Pal-Lys(Cbz)-ONHS活化酯；
(4)、Pal-Lys(Cbz)-Val-OH的制备：
取碱溶于水中，加入L-缬氨酸溶解，再将步骤(3)中所得Pal-Lys(Cbz)-ONB或Pal-Lys(Cbz)-ONHS活化酯溶解在THF中，0℃条件下，缓慢滴入反应体系中，滴加完毕后，逐渐恢复至室温，搅拌反应4～24小时，加入1M HCl调节pH为3-4，萃取，干燥，抽滤，滤液旋干，即得Pal-Lys(Cbz)-Val-OH；
(5)、Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB或Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS活化酯制备：
将步骤(4)中所得产物Pal-Lys(Cbz)-Val-OH溶解在溶剂中，降温至0℃，加入N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺(HONB)或N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和DMAP，再分批加入EDCl，加完后逐渐恢复至室温，搅拌反应6-48小时，萃取，干燥，抽滤，滤液旋干，即得到Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB或Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS活化酯；
(6)、Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH的制备：
取碱溶于水中，加入四氢呋喃(THF)及Nε-Cbz-L-赖氨酸溶解，再将步骤(5)中所得Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB或Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS活化酯溶解在THF中，0℃条件下，缓慢滴入反应体系中，滴加完毕后，逐渐恢复至室温，搅拌反应4～24小时，加入1M HCl调节pH为3左右，萃取，干燥，抽滤，滤液旋干，即得Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH；
(7)、Pal-Lys-Val-Lys-OH(棕榈酰三肽-5)的制备：
将步骤(6)中所得Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH溶解于甲醇中，加入含量为5％的湿Pd/C，氮气置换三次，氢气置换三次，最后保持氢气氛围，室温下搅拌反应10-48小时，抽滤除去Pd/C，滤液旋干，乙醇重结晶，即得Pal-Lys-Val-Lys-OH(棕榈酰三肽-5)精品。
优选的是，步骤(1)中所述的酰氯化试剂为能够与羧基反应生成酰氯的试剂，具体为氯化亚砜、三氯化磷、五氯化磷、草酰氯、光气、双光气和三光气中的一种。
优选的是，步骤(1)中所述的酰氯化试剂与棕榈酸的摩尔比为(1-100):1。
优选的是，步骤(1)中所用溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、苯、甲苯、氯苯、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺和二甲基亚砜中的一种或几种，反应温度为-78℃-150℃，反应时间为1h-24h。
优选的是，步骤(2)、(4)和(6)中所述的碱为氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸氢钠、浓氨水和三乙胺中的一种或多种。
优选的是，步骤(2)中所述的四氢呋喃与水的体积比为(0.5-2):1，所述的Nε-Cbz-L-赖氨酸、碱及棕榈酰氯的摩尔比为1：(2-10)：(1-2)；步骤(4)中所述的L-缬氨酸、碱、及Pal-Lys(Cbz)-ONB或Pal-Lys(Cbz)-ONHS活化酯的摩尔比为1：(2-10)：(1-2)；步骤(6)中所述的四氢呋喃与水的体积比为(0.5-2):1，所述的Nε-Cbz-L-赖氨酸、碱、及Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB或Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS活化酯的摩尔比为1：(2-10)：(1-2)。
优选的是，步骤(3)和(5)中所述的溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷中、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺和二甲基亚砜中的一种。
优选的是，步骤(3)中所述的Pal-Lys(Cbz)-OH、HONB或NHS、DMAP及EDCl的摩尔比为1：(1.1-2)：(0.1-1)：(1.1-3)；步骤(5)中所述的Pal-Lys(Cbz)-Val-OH、HONB或NHS、DMAP及EDCl的摩尔比为1：(1.1-2)：(0.1-1)：(1.1-3)。
优选的是，步骤(7)中所述的Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH与甲醇的质量-体积比为1g：(50-200)mL。
优选的是，步骤(7)中所述的Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH与Pd/C的质量比为1：(0.05-0.5)。
实施例1
(1)、棕榈酰氯(Pal-Cl)的制备
250mL单口圆底烧瓶中，加入20.52g棕榈酸，加入60mL氯化亚砜溶解，80℃回流反应5小时，冷却至室温，溶剂旋干，得白色油状目标产物棕榈酰氯(21.6g，98％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ0.86-0.90(t,3H),1.26-1.34(m,24H),1.66-1.75(m,2H),2.86-2.90(t,2H).
(2)、Pal-Lys(Cbz)-OH的制备
500mL单口圆底烧瓶，称取21g Na2CO3溶于120mL水中，加入60mL四氢呋喃，再加入11g Nε-Cbz-L-赖氨酸溶解，室温下，再滴入60mL含有11.2g棕榈酰氯的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，搅拌反应16h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-OH(19.3g，93％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.83-0.87(m,3H),1.23-1.69(m,34H),2.94-3.00(m,2H),4.10-4.17(m,1H),4.57(s,1H),5.00(s,2H),7.23-7.39(m,5H),7.99-8.01(d,1H),12.43(s,1H).
(3)、Pal-Lys(Cbz)-ONHS活化酯的制备
500mL单口圆底烧瓶，将19.3g Pal-Lys(Cbz)-OH溶于300mL二氯甲烷中，冰浴条件下，加入6.4g N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、0.91g DMAP及10.7g EDCl，加完后，逐渐恢复至室温搅拌反应18h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-ONHS(19.4g，85％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.82-0.87(m,3H),1.23-1.29(m,26H),1.40-1.50(m,4H),1.71-1.86(m,2H),2.10-2.15(m,2H),2.79(s,4H)，2.95-2.99(m,2H),4.54-4.61(m,1H),5.00(s,2H),7.24-7.39(m,5H),8.42-8.44(d,1H).
(4)、Pal-Lys(Cbz)-Val-OH的制备
500mL单口圆底烧瓶，称取11.7g Na2CO3溶于120mL水中，加入3.9g L-缬氨酸溶解，氮气氛围，冰浴条件下，滴入120mL含有17g Pal-Lys(Cbz)-ONHS的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，逐渐恢复至室温，搅拌反应20h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-Val-OH(16.5g，97％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.82-0.87(m,9H),1.22-1.46(m,32H),1.98-2.12(m,3H),2.93-2.97(m,2H),4.09-4.17(m,1H),4.30-4.40(m,1H),4.99(s,2H),7.23-7.39(m,5H),7.84-7.91(m,1H),7.97-8.01(m,1H),12.55(s,1H).
(5)、Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS活化酯的制备
500mL单口圆底烧瓶，将17.5g Pal-Lys(Cbz)-Val-OH溶于200mL二氯甲烷中，冰浴条件下，加入4.9g N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、0.69g DMAP及8.17g EDCl，加完后，逐渐恢复至室温搅拌反应18h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS(18.2g，90％)。1HNMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.82-1.02(m,9H),1.22-1.57(m,32H),1.98-2.21(m,3H),2.80(s,4H),2.91-2.97(m,2H),4.31-4.63(m,2H),4.99(s,2H),7.22-7.39(m,5H),7.88-7.95(m,1H),8.41-8.51(m,1H).
(6)、Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH的制备
500mL单口圆底烧瓶，称取11.7g Na2CO3溶于120mL水中，加入60mL四氢呋喃，再加入9.3g Nε-Cbz-L-赖氨酸溶解，室温下，再滴入60mL含有19.7g Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，搅拌反应16h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH(23.56g，97％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.78-0.85(m,9H),1.22-1.59(m,38H),1.96-2.09(m,3H),2.91-2.99(m,4H),4.12-4.32(m,3H),4.99(s,4H),7.21-7.38(m,10H),7.60-8.16(m,3H),12.49(s,1H).
(7)、Pal-Lys-Val-Lys-OH(棕榈酰三肽-5)的制备
2000mL单口圆底烧瓶，23.56g Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH溶于1500mL甲醇中，加入4.7g 5％的湿Pd/C(Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH与Pd/C质量比为5：1)，氮气置换三次，氢气置换三次，最后保持氢气氛围，室温、常压下搅拌反应24小时。反应结束后，滤除Pd/C，将甲醇旋干，再用乙醇重结晶，得白色粉末状目标产物棕榈酰三肽-5(13.1g，80％)。1H NMR(CD3OD,300MHz)δ0.87-0.98(m,9H),1.29-1.86(m,40H),2.12-2.31(m,3H),2.80-2.88(m,4H),4.12-4.46(m,3H).
实施例2
(1)、棕榈酰氯(Pal-Cl)的制备
250mL单口圆底烧瓶中，加入20.52g棕榈酸及160mL二氯甲烷，冰浴条件下滴入14mL草酰氯及2滴N，N-二甲基甲酰胺，加完后逐渐恢复至室温搅拌反应18小时，反应结束后，溶剂旋干，得白色油状目标产物棕榈酰氯(19.8g，90％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ0.86-0.90(t,3H),1.26-1.34(m,24H),1.66-1.75(m,2H),2.86-2.90(t,2H).
(2)、Pal-Lys(Cbz)-OH的制备
称取29g NaOH于500mL单口圆底烧瓶，加入100mL水，再加入21g Nε-Cbz-L-赖氨酸溶解，室温下，滴入100mL含有19.8g棕榈酰氯的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，搅拌反应18h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝2～3，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-OH(35g，95％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.83-0.87(m,3H),1.23-1.69(m,34H),2.94-3.00(m,2H),4.10-4.17(m,1H),4.57(s,1H),5.00(s,2H),7.23-7.39(m,5H),7.99-8.01(d,1H),12.43(s,1H).
(3)、Pal-Lys(Cbz)-ONHS活化酯的制备
500mL单口圆底烧瓶，将19.3g Pal-Lys(Cbz)-OH溶于300mL二氯甲烷中，冰浴条件下，加入6.4g N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、0.91g DMAP及10.7g EDCl，加完后，逐渐恢复至室温搅拌反应18h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-ONHS(19.4g，85％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.82-0.87(m,3H),1.23-1.29(m,26H),1.40-1.50(m,4H),1.71-1.86(m,2H),2.10-2.15(m,2H),2.79(s,4H)，2.95-2.99(m,2H),4.54-4.61(m,1H),5.00(s,2H),7.24-7.39(m,5H),8.42-8.44(d,1H).
(4)、Pal-Lys(Cbz)-Val-OH的制备
称取3gNaOH于250mL单口圆底烧瓶，加入80mL水溶解，再称取3.5g L-缬氨酸溶解，冰浴条件下，滴入80mL含有15g Pal-Lys(Cbz)-ONHS的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，逐渐恢复至室温，搅拌反应24h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-Val-OH(14.3g，95％)。1HNMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.82-0.87(m,9H),1.22-1.46(m,32H),1.98-2.12(m,3H),2.93-2.97(m,2H),4.09-4.17(m,1H),4.30-4.40(m,1H),4.99(s,2H),7.23-7.39(m,5H),7.84-7.91(m,1H),7.97-8.01(m,1H),12.55(s,1H).
(5)、Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS活化酯的制备
500mL单口圆底烧瓶，将12g Pal-Lys(Cbz)-Val-OH溶于200mL二氯甲烷中，冰浴条件下，加入3.4g N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、0.47g DMAP及5.56g EDCI，加完后，逐渐恢复至室温搅拌反应20h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS(12.5g，90％)。1HNMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.82-1.02(m,9H),1.22-1.57(m,32H),1.98-2.21(m,3H),2.80(s,4H),2.91-2.97(m,2H),4.31-4.63(m,2H),4.99(s,2H),7.22-7.39(m,5H),7.88-7.95(m,1H),8.41-8.51(m,1H).
(6)、Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH的制备
称取1.7g NaOH于250mL单口圆底烧瓶，加入80mL水溶解，再加入4.7g Nε-Cbz-L-赖氨酸溶解，室温下，向反应体系中缓慢滴入80mL含有10g Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，搅拌反应20h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH(11.7g，95％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.78-0.85(m,9H),1.22-1.59(m,38H),1.96-2.09(m,3H),2.91-2.99(m,4H),4.12-4.32(m,3H),4.99(s,4H),7.21-7.38(m,10H),7.60-8.16(m,3H),12.49(s,1H).
(7)、Pal-Lys-Val-Lys-OH(棕榈酰三肽-5)的制备
称取10g Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH于2000mL单口圆底烧瓶，加入1200mL甲醇溶解，再向反应体系中加入1g 5％的湿Pd/C(Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH与Pd/C质量比为10：1)，氮气置换三次，氢气置换三次，最后保持氢气氛围，室温、常压下搅拌反应24h。反应结束后，滤除Pd/C，将甲醇旋干，再用乙醇重结晶，得白色粉末状目标产物棕榈酰三肽-5(5.2g，75％)。1H NMR(CD3OD,300MHz)δ0.87-0.98(m,9H),1.29-1.86(m,40H),2.12-2.31(m,3H),2.80-2.88(m,4H),4.12-4.46(m,3H).
实施例3
(1)、棕榈酰氯(Pal-Cl)的制备
称取25.6g棕榈酸于500mL单口圆底烧瓶中，加入200mL氯仿溶解，冰浴条件下，向反应体系中逐滴滴入100mL含有25g五氯化磷的氯仿溶液，滴加完毕后，逐渐恢复至室温，搅拌反应12小时，将溶剂旋干，得白色油状目标产物棕榈酰氯(25g，90％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ0.86-0.90(t,3H),1.26-1.34(m,24H),1.66-1.75(m,2H),2.86-2.90(t,2H).
(2)、Pal-Lys(Cbz)-OH的制备
称取30g K2CO3及20g Nε-Cbz-L-赖氨酸于500mL单口圆底烧瓶，加入120mL水及60mL四氢呋喃溶解，冰水浴条件下，再缓慢滴入60mL含有20g棕榈酰氯的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，逐渐恢复至室温，搅拌反应18h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-OH(35.8g，95％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.83-0.87(m,3H),1.23-1.69(m,34H),2.94-3.00(m,2H),4.10-4.17(m,1H),4.57(s,1H),5.00(s,2H),7.23-7.39(m,5H),7.99-8.01(d,1H),12.43(s,1H).
(3)、Pal-Lys(Cbz)-ONHS活化酯的制备
称取30g Pal-Lys(Cbz)-OH溶于300mL三氯甲烷中，加入500mL单口圆底烧瓶中，室温下，加入9.9g N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、1.41g DMAP及16.5g EDCI，加完后，搅拌反应15h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，三氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-ONHS(29.5g，83％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.82-0.87(m,3H),1.23-1.29(m,26H),1.40-1.50(m,4H),1.71-1.86(m,2H),2.10-2.15(m,2H),2.79(s,4H)，2.95-2.99(m,2H),4.54-4.61(m,1H),5.00(s,2H),7.24-7.39(m,5H),8.42-8.44(d,1H).
(4)、Pal-Lys(Cbz)-Val-OH的制备
称取16g K2CO3及6g L-缬氨酸于500mL单口圆底烧瓶，加入200mL水溶解，氮气氛围，逐滴滴入100mL含有25g Pal-Lys(Cbz)-ONHS的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，室温下搅拌反应19h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-Val-OH(24.6g，98％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.82-0.87(m,9H),1.22-1.46(m,32H),1.98-2.12(m,3H),2.93-2.97(m,2H),4.09-4.17(m,1H),4.30-4.40(m,1H),4.99(s,2H),7.23-7.39(m,5H),7.84-7.91(m,1H),7.97-8.01(m,1H),12.55(s,1H).
(5)、Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS活化酯的制备
称取20g Pal-Lys(Cbz)-Val-OH溶于200mL三氯甲烷中并置于500mL单口圆底烧瓶中，冰浴条件下，加入7.5g N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、0.79g DMAP及10g EDCI，加完后，逐渐恢复至室温搅拌反应20h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，三氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS(19.2g，83％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.82-1.02(m,9H),1.22-1.57(m,32H),1.98-2.21(m,3H),2.80(s,4H),2.91-2.97(m,2H),4.31-4.63(m,2H),4.99(s,2H),7.22-7.39(m,5H),7.88-7.95(m,1H),8.41-8.51(m,1H).
(6)、Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH的制备
500mL单口圆底烧瓶，称取8.7g K2CO3溶于150mL水中，加入70mL四氢呋喃，再加入7g Nε-Cbz-L-赖氨酸溶解，室温下滴入80mL含有15g Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，搅拌反应20h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH(18.1g，98％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.78-0.85(m,9H),1.22-1.59(m,38H),1.96-2.09(m,3H),2.91-2.99(m,4H),4.12-4.32(m,3H),4.99(s,4H),7.21-7.38(m,10H),7.60-8.16(m,3H),12.49(s,1H).
(7)、Pal-Lys-Val-Lys-OH(棕榈酰三肽-5)的制备
2000mL单口圆底烧瓶，18g Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH溶于1200mL甲醇中，加入1.8g 5％的湿Pd/C(Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH与Pd/C质量比为10：1)，氮气置换三次，氢气置换三次，最后保持氢气氛围，室温、常压下搅拌反应30小时。反应结束后，滤除Pd/C，将甲醇旋干，再用乙醇重结晶，得白色粉末状目标产物棕榈酰三肽-5(11.8g，95％)。1H NMR(CD3OD,300MHz)δ0.87-0.98(m,9H),1.29-1.86(m,40H),2.12-2.31(m,3H),2.80-2.88(m,4H),4.12-4.46(m,3H).
实施例4
(1)、棕榈酰氯(Pal-Cl)的制备
称取25.6g棕榈酸于500mL单口圆底烧瓶中，加入200mL氯仿溶解，冰浴条件下，向反应体系中逐滴滴入200mL含有68g三氯化磷的氯仿溶液，滴加完毕后，逐渐恢复至室温，搅拌反应20小时，将溶剂旋干，得白色油状目标产物棕榈酰氯(25.3g，94％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ0.86-0.90(t,3H),1.26-1.34(m,24H),1.66-1.75(m,2H),2.86-2.90(t,2H).
(2)、Pal-Lys(Cbz)-OH的制备
称取30g K2CO3及20g Nε-Cbz-L-赖氨酸于500mL单口圆底烧瓶，加入120mL水及60mL四氢呋喃溶解，冰水浴条件下，再缓慢滴入60mL含有20g棕榈酰氯的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，逐渐恢复至室温，搅拌反应18h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-OH(35.8g，95％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.83-0.87(m,3H),1.23-1.69(m,34H),2.94-3.00(m,2H),4.10-4.17(m,1H),4.57(s,1H),5.00(s,2H),7.23-7.39(m,5H),7.99-8.01(d,1H),12.43(s,1H).
(3)、Pal-Lys(Cbz)-ONB活化酯的制备
称取30g Pal-Lys(Cbz)-OH溶于300mL二氯甲烷中，加入500mL单口圆底烧瓶中，冰浴条件下，加入15.5g N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺(HONB)、1.41g DMAP及16.5gEDCI，加完后，逐渐恢复至室温搅拌反应15h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-ONB(30.3g，85％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.82-0.87(m,3H),1.23-1.29(m,26H),1.37-1.71(m,8H),2.10-2.15(m,2H)，2.95-2.99(m,2H),3.32-3.41(m,4H),4.20-4.25(m,1H),5.00(s,2H),5.32-5.35(m,1H),6.11-6.13(m,4H),7.24-7.39(m,5H),7.74-7.76(d,1H).
(4)、Pal-Lys(Cbz)-Val-OH的制备
称取18.5g NaHCO3及6.2g L-缬氨酸于500mL单口圆底烧瓶，加入200mL水溶解，氮气氛围，逐滴滴入100mL含有30g Pal-Lys(Cbz)-ONB的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，室温下搅拌反应15h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-Val-OH(26.4g，97％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.82-0.87(m,9H),1.22-1.46(m,32H),1.98-2.12(m,3H),2.93-2.97(m,2H),4.09-4.17(m,1H),4.30-4.40(m,1H),4.99(s,2H),7.23-7.39(m,5H),7.84-7.91(m,1H),7.97-8.01(m,1H),12.55(s,1H).
(5)、Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB活化酯的制备
称取25g Pal-Lys(Cbz)-Val-OH溶于200mL二氯甲烷中并置于500mL单口圆底烧瓶中，冰浴条件下，加入10.8g N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺(HONB)、0.98g DMAP及11.6g EDCI，加完后，逐渐恢复至室温搅拌反应20h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，三氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB(26.8g，85％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.82-1.02(m,9H),1.22-1.73(m,34H),2.12-2.22(m,3H),2.93-2.98(m,2H),3.32-3.41(m,4H),4.31-4.63(m,2H),4.99(s,2H),5.45-5.47(m,1H),6.11-6.13(m,2H),7.22-7.39(m,5H),7.71-7.74(m,1H),7.80-7.82(m,1H).
(6)、Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH的制备
500mL单口圆底烧瓶，称取10.8g NaHCO3溶于150mL水中，加入70mL四氢呋喃，再加入13.5g Nε-Cbz-L-赖氨酸溶解，室温下滴入80mL含有25g Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，搅拌反应18h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH(27.4g，97％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.78-0.85(m,9H),1.22-1.59(m,38H),1.96-2.09(m,3H),2.91-2.99(m,4H),4.12-4.32(m,3H),4.99(s,4H),7.21-7.38(m,10H),7.60-8.16(m,3H),12.49(s,1H).
(7)、Pal-Lys-Val-Lys-OH(棕榈酰三肽-5)的制备
2000mL单口圆底烧瓶，18g Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH溶于1200mL甲醇中，加入1.8g 5％的湿Pd/C(Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH与Pd/C质量比为10：1)，氮气置换三次，氢气置换三次，最后保持氢气氛围，室温、常压下搅拌反应30小时。反应结束后，滤除Pd/C，将甲醇旋干，再用乙醇重结晶，得白色粉末状目标产物棕榈酰三肽-5(11.8g，95％)。1H NMR(CD3OD,300MHz)δ0.87-0.98(m,9H),1.29-1.86(m,40H),2.12-2.31(m,3H),2.80-2.88(m,4H),4.12-4.46(m,3H).
实施例5
(1)、棕榈酰氯(Pal-Cl)的制备
称取25.6g棕榈酸于500mL单口圆底烧瓶中，加入200mL氯仿溶解，冰浴条件下，向反应体系中逐滴滴入100mL含有25g五氯化磷的氯仿溶液，滴加完毕后，逐渐恢复至室温，搅拌反应12小时，将溶剂旋干，得白色油状目标产物棕榈酰氯(25g，90％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ0.86-0.90(t,3H),1.26-1.34(m,24H),1.66-1.75(m,2H),2.86-2.90(t,2H).
(2)、Pal-Lys(Cbz)-OH的制备
称取12g KOH于500mL单口圆底烧瓶，加入120mL水溶解，再称取20g Nε-Cbz-L-赖氨酸溶于体系中，冰水浴条件下，缓慢滴入100mL含有20g棕榈酰氯的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，逐渐恢复至室温，搅拌反应18h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-OH(36.9g，98％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.83-0.87(m,3H),1.23-1.69(m,34H),2.94-3.00(m,2H),4.10-4.17(m,1H),4.57(s,1H),5.00(s,2H),7.23-7.39(m,5H),7.99-8.01(d,1H),12.43(s,1H).
(3)、Pal-Lys(Cbz)-ONB活化酯的制备
称取30g Pal-Lys(Cbz)-OH溶于300mL四氢呋喃中，加入500mL单口圆底烧瓶中，冰浴条件下，加入15.5g N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺(HONB)、1.41g DMAP及16.5gEDCI，加完后，逐渐恢复至室温搅拌反应18h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-ONB(35.4g，90％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.82-0.87(m,3H),1.23-1.29(m,26H),1.37-1.71(m,8H),2.10-2.15(m,2H)，2.95-2.99(m,2H),3.32-3.41(m,4H),4.20-4.25(m,1H),5.00(s,2H),5.32-5.35(m,1H),6.11-6.13(m,4H),7.24-7.39(m,5H),7.74-7.76(d,1H).
(4)、Pal-Lys(Cbz)-Val-OH的制备
500mL单口圆底烧瓶，称取20.6g Na2CO3溶于120mL水中，加入6.2g L-缬氨酸溶解，氮气氛围，冰浴条件下，滴入120mL含有30g Pal-Lys(Cbz)-ONB的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，逐渐恢复至室温，搅拌反应20h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-Val-OH(26.7g，98％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.82-0.87(m,9H),1.22-1.46(m,32H),1.98-2.12(m,3H),2.93-2.97(m,2H),4.09-4.17(m,1H),4.30-4.40(m,1H),4.99(s,2H),7.23-7.39(m,5H),7.84-7.91(m,1H),7.97-8.01(m,1H),12.55(s,1H).
(5)、Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB活化酯的制备
称取25g Pal-Lys(Cbz)-Val-OH溶于200mL四氢呋喃中并置于500mL单口圆底烧瓶中，冰浴条件下，加入10.8g N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺(HONB)、0.98g DMAP及11.6g EDCI，加完后，逐渐恢复至室温搅拌反应20h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB(27.4g，87％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.82-1.02(m,9H),1.22-1.73(m,34H),2.12-2.22(m,3H),2.93-2.98(m,2H),3.32-3.41(m,4H),4.31-4.63(m,2H),4.99(s,2H),5.45-5.47(m,1H),6.11-6.13(m,2H),7.22-7.39(m,5H),7.71-7.74(m,1H),7.80-7.82(m,1H).
(6)、Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH的制备
500mL单口圆底烧瓶，称取14.8g Na2CO3溶于120mL水中，加入60mL四氢呋喃，再加入13.5g Nε-Cbz-L-赖氨酸溶解，室温下，再滴入60mL含有25g Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，搅拌反应20h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH(27.4g，97％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.78-0.85(m,9H),1.22-1.59(m,38H),1.96-2.09(m,3H),2.91-2.99(m,4H),4.12-4.32(m,3H),4.99(s,4H),7.21-7.38(m,10H),7.60-8.16(m,3H),12.49(s,1H).
(7)、Pal-Lys-Val-Lys-OH(棕榈酰三肽-5)的制备
2000mL单口圆底烧瓶，25g Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH溶于1500mL甲醇中，加入5g 5％的湿Pd/C(Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH与Pd/C质量比为5：1)，氮气置换三次，氢气置换三次，最后保持氢气氛围，室温、常压下搅拌反应48小时。反应结束后，滤除Pd/C，将甲醇旋干，再用乙醇重结晶，得白色粉末状目标产物棕榈酰三肽-5(17.0g，98％)。1HNMR(CD3OD,300MHz)δ0.87-0.98(m,9H),1.29-1.86(m,40H),2.12-2.31(m,3H),2.80-2.88(m,4H),4.12-4.46(m,3H).
实施例6
(1)、棕榈酰氯(Pal-Cl)的制备
250mL单口圆底烧瓶中，加入20.52g棕榈酸及160mL二氯甲烷，冰浴条件下滴入14mL草酰氯及2滴N，N-二甲基甲酰胺，加完后逐渐恢复至室温搅拌反应18小时，反应结束后，溶剂旋干，得白色油状目标产物棕榈酰氯(19.8g，90％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ0.86-0.90(t,3H),1.26-1.34(m,24H),1.66-1.75(m,2H),2.86-2.90(t,2H).
(2)、Pal-Lys(Cbz)-OH的制备
称取29g NaOH于500mL单口圆底烧瓶，加入100mL水，再加入21g Nε-Cbz-L-赖氨酸溶解，室温下，滴入100mL含有19.8g棕榈酰氯的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，搅拌反应18h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝2～3，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-OH(35g，95％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.83-0.87(m,3H),1.23-1.69(m,34H),2.94-3.00(m,2H),4.10-4.17(m,1H),4.57(s,1H),5.00(s,2H),7.23-7.39(m,5H),7.99-8.01(d,1H),12.43(s,1H).
(3)、Pal-Lys(Cbz)-ONB活化酯的制备
500mL单口圆底烧瓶，将30g Pal-Lys(Cbz)-OH溶于300mL二氯甲烷中，冰浴条件下，15.5g N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺(HONB)、1.41g DMAP及16.5g EDCI，加完后，逐渐恢复至室温搅拌反应18h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-ONB(35.4g，90％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.82-0.87(m,3H),1.23-1.29(m,26H),1.37-1.71(m,8H),2.10-2.15(m,2H)，2.95-2.99(m,2H),3.32-3.41(m,4H),4.20-4.25(m,1H),5.00(s,2H),5.32-5.35(m,1H),6.11-6.13(m,4H),7.24-7.39(m,5H),7.74-7.76(d,1H).
(4)、Pal-Lys(Cbz)-Val-OH的制备
称取6gNaOH于250mL单口圆底烧瓶，加入100mL水溶解，再加入6.2g L-缬氨酸溶解，氮气氛围，冰浴条件下，滴入100mL含有30g Pal-Lys(Cbz)-ONB的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，逐渐恢复至室温，搅拌反应24h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-Val-OH(26.4g，97％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.82-0.87(m,9H),1.22-1.46(m,32H),1.98-2.12(m,3H),2.93-2.97(m,2H),4.09-4.17(m,1H),4.30-4.40(m,1H),4.99(s,2H),7.23-7.39(m,5H),7.84-7.91(m,1H),7.97-8.01(m,1H),12.55(s,1H).
(5)、Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB活化酯的制备
500mL单口圆底烧瓶，将25g Pal-Lys(Cbz)-Val-OH溶于200mL二氯甲烷中，冰浴条件下，加入10.8g N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺(HONB)、0.98g DMAP及11.6g EDCI，加完后，逐渐恢复至室温搅拌反应20h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB(24.6g，85％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.82-1.02(m,9H),1.22-1.73(m,34H),2.12-2.22(m,3H),2.93-2.98(m,2H),3.32-3.41(m,4H),4.31-4.63(m,2H),4.99(s,2H),5.45-5.47(m,1H),6.11-6.13(m,2H),7.22-7.39(m,5H),7.71-7.74(m,1H),7.80-7.82(m,1H).
(6)、Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH的制备
称取4.3g NaOH于250mL单口圆底烧瓶，加入100mL水溶解，再加入13.5g Nε-Cbz-L-赖氨酸溶解，室温下，向反应体系中缓慢滴入100mL含有25g Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB的四氢呋喃溶液，滴加完毕后，搅拌反应20h。反应结束后，用1M HCl调节体系pH＝3～4，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后，将滤液旋干，得白色固体目标产物Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH(27.4g，97％)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.78-0.85(m,9H),1.22-1.59(m,38H),1.96-2.09(m,3H),2.91-2.99(m,4H),4.12-4.32(m,3H),4.99(s,4H),7.21-7.38(m,10H),7.60-8.16(m,3H),12.49(s,1H).
(7)、Pal-Lys-Val-Lys-OH(棕榈酰三肽-5)的制备
称取25g Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH于2000mL单口圆底烧瓶，加入1500mL甲醇溶解，再向反应体系中加入2.5g 5％的湿Pd/C(Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH与Pd/C质量比为10：1)，氮气置换三次，氢气置换三次，最后保持氢气氛围，室温、常压下搅拌反应24h。反应结束后，滤除Pd/C，将甲醇旋干，再用乙醇重结晶，得白色粉末状目标产物棕榈酰三肽-5(14.8g，85％)。1H NMR(CD3OD,300MHz)δ0.87-0.98(m,9H),1.29-1.86(m,40H),2.12-2.31(m,3H),2.80-2.88(m,4H),4.12-4.46(m,3H).
上述实施例中所使用的酰氯化试剂还可以为光气、双光气和三光气中的一种；所使用的溶剂还可以为四氯化碳、苯、甲苯、氯苯、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺和二甲基亚砜中的一种或几种；所使用的碱还可以为碳酸氢钾、浓氨水和三乙胺中的一种或多种；所用的反应原料、溶剂等各物质的用量、及各反应的时间等均可以在前述限定的范围内任选，这里不再一一列举实例。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种基于活化酯高效制备棕榈酰三肽-5的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)、棕榈酰氯(Pal-Cl)的制备：
以棕榈酸为起始原料，使用酰氯化试剂，制备棕榈酰氯；
(2)、Pal-Lys(Cbz)-OH的制备：
取碱溶于水中，加入四氢呋喃(THF)及Nε-Cbz-L-赖氨酸溶解；再将步骤(1)中制备的棕榈酰氯溶解于THF中，0℃条件下，滴入反应体系中，滴加完毕后，室温下搅拌反应4～24小时，加入1M HCl调节pH为2-4，萃取，干燥，抽滤，滤液旋干，即得到Pal-Lys(Cbz)-OH；
(3)、Pal-Lys(Cbz)-ONB或Pal-Lys(Cbz)-ONHS活化酯的制备：
将步骤(2)中所得产物Pal-Lys(Cbz)-OH溶解在溶剂中，降温至0℃，加入N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺(HONB)或N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，及DMAP，再分批加入EDCl，加完后逐渐恢复至室温，搅拌反应6-48小时，萃取，干燥，抽滤，滤液旋干，即得到Pal-Lys(Cbz)-ONB或Pal-Lys(Cbz)-ONHS活化酯；
(4)、Pal-Lys(Cbz)-Val-OH的制备：
取碱溶于水中，加入L-缬氨酸溶解，再将步骤(3)中所得Pal-Lys(Cbz)-ONB或Pal-Lys(Cbz)-ONHS活化酯溶解在THF中，0℃条件下，滴入反应体系中，滴加完毕后，逐渐恢复至室温，搅拌反应4～24小时，加入1M HCl调节pH为3-4，萃取，干燥，抽滤，滤液旋干，即得Pal-Lys(Cbz)-Val-OH；
(5)、Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB或Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS活化酯的制备：
将步骤(4)中所得产物Pal-Lys(Cbz)-Val-OH溶解在溶剂中，降温至0℃，加入N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺(HONB)或N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，及DMAP，再分批加入EDCl，加完后逐渐恢复至室温，搅拌反应6-48小时，萃取，干燥，抽滤，滤液旋干，即得到Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB或Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS活化酯；
(6)、Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH的制备：
取碱溶于水中，加入四氢呋喃(THF)及Nε-Cbz-L-赖氨酸溶解，再将步骤(5)中所得Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB或Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS活化酯溶解在THF中，0℃条件下，滴入反应体系中，滴加完毕后，逐渐恢复至室温，搅拌反应4～24小时，加入1M HCl调节pH为3-4，萃取，干燥，抽滤，滤液旋干，即得Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH；
(7)、Pal-Lys-Val-Lys-OH的制备：
将步骤(6)中所得Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH溶解于甲醇中，加入含量为5％的湿Pd/C，氮气置换三次，氢气置换三次，最后保持氢气氛围，室温下搅拌反应10-48小时，抽滤除去Pd/C，滤液旋干，乙醇重结晶，即得Pal-Lys-Val-Lys-OH。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的酰氯化试剂为能够与羧基反应生成酰氯的试剂，具体为氯化亚砜、三氯化磷、五氯化磷、草酰氯、光气、双光气和三光气中的一种。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的酰氯化试剂与棕榈酸的摩尔比为(1-100):1。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所用溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、苯、甲苯、氯苯、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺和二甲基亚砜中的一种或几种，反应温度为-78℃-150℃，反应时间为1h-24h。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)、(4)和(6)中所述的碱为氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸氢钠、浓氨水和三乙胺中的一种或多种。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
步骤(2)中所述的四氢呋喃与水的体积比为(0.5-2):1，所述的Nε-Cbz-L-赖氨酸、碱及棕榈酰氯的摩尔比为1：(2-10)：(1-2)；
步骤(4)中所述的L-缬氨酸、碱、及Pal-Lys(Cbz)-ONB或Pal-Lys(Cbz)-ONHS活化酯的摩尔比为1：(2-10)：(1-2)；
步骤(6)中所述的四氢呋喃与水的体积比为(0.5-2):1，所述的Nε-Cbz-L-赖氨酸、碱、及Pal-Lys(Cbz)-Val-ONB或Pal-Lys(Cbz)-Val-ONHS活化酯的摩尔比为1：(2-10)：(1-2)。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)和(5)中所述的溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷中、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺和二甲基亚砜中的一种。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
步骤(3)中所述的Pal-Lys(Cbz)-OH、N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺或N-羟基琥珀酰亚胺、DMAP及EDCl的摩尔比为1：(1.1-2)：(0.1-1)：(1.1-3)；
步骤(5)中所述的Pal-Lys(Cbz)-Val-OH、N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺或N-羟基琥珀酰亚胺、DMAP及EDCl的摩尔比为1：(1.1-2)：(0.1-1)：(1.1-3)。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(7)中所述的Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH与甲醇的质量-体积比为1g：(50-200)mL。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(7)中所述的Pal-Lys(Cbz)-Val-Lys(Cbz)-OH与Pd/C的质量比为1：(0.05-0.5)。
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