CN110396493A - 培养基组合及生产异亮氨酸的方法 - Google Patents
培养基组合及生产异亮氨酸的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110396493A CN110396493A CN201910847757.7A CN201910847757A CN110396493A CN 110396493 A CN110396493 A CN 110396493A CN 201910847757 A CN201910847757 A CN 201910847757A CN 110396493 A CN110396493 A CN 110396493A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fermentation
- culture medium
- hydrolyzate
- isoleucine
- medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 title claims abstract description 39
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims abstract description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 title abstract description 25
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract description 24
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 12
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 86
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 86
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims abstract description 41
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims abstract description 41
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims abstract description 41
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims abstract description 41
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 22
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims abstract description 10
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000006188 syrup Substances 0.000 claims abstract description 7
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 16
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 claims description 13
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 claims description 10
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 9
- 230000003519 ventilatory effect Effects 0.000 claims description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 8
- 229940063746 oxygen 20 % Drugs 0.000 claims description 7
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000004721 Polyphenylene oxide Substances 0.000 claims description 4
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 claims description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229940097974 biotin 0.3 mg Drugs 0.000 claims description 3
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 claims description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 2
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 claims description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 claims 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 claims 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 claims 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 22
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract description 11
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 abstract description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 5
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 abstract description 5
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 abstract description 5
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 abstract description 3
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 abstract description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 13
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 7
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 6
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 4
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 4
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 4
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- -1 carbon dicarboxylic acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108010064711 Homoserine dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 150000005693 branched-chain amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 229940062054 oxygen 30 % Drugs 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- DWNBOPVKNPVNQG-LURJTMIESA-N (2s)-4-hydroxy-2-(propylamino)butanoic acid Chemical compound CCCN[C@H](C(O)=O)CCO DWNBOPVKNPVNQG-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- AFENDNXGAFYKQO-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybutyric acid Chemical compound CCC(O)C(O)=O AFENDNXGAFYKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100030840 AT-rich interactive domain-containing protein 4B Human genes 0.000 description 1
- 108010055400 Aspartate kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-STHAYSLISA-N D-threonine Chemical compound C[C@H](O)[C@@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-STHAYSLISA-N 0.000 description 1
- 101000792935 Homo sapiens AT-rich interactive domain-containing protein 4B Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 241000607715 Serratia marcescens Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100033451 Thyroid hormone receptor beta Human genes 0.000 description 1
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 1
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 1
- 241000319304 [Brevibacterium] flavum Species 0.000 description 1
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N alpha-aminobutyric acid Chemical compound CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000001177 diphosphate Substances 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 150000002085 enols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000009123 feedback regulation Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 1
- 108010071598 homoserine kinase Proteins 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000010977 jade Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 235000020265 peanut milk Nutrition 0.000 description 1
- 229930029653 phosphoenolpyruvate Natural products 0.000 description 1
- DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-N phosphoenolpyruvic acid Chemical compound OC(=O)C(=C)OP(O)(O)=O DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/06—Alanine; Leucine; Isoleucine; Serine; Homoserine
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及培养基组合及生产异亮氨酸的方法。本发明提供了的培养基中发酵培养基和种子培养基的组分合理，补料培养基能够在发酵培养基中氮源营养开始不足时，通过匀速流加以一定比例配置的玉米浆和水解液(豆粕水解液或玉米浆水解液)的混合液，及时补充氮源，提高了异亮氨酸的生成速率及产量，且由于水解液(豆粕水解液或玉米浆水解液)所含生物素很少，避免了菌体量的过量增长，维持了较高的转化率。该方法简单易行，异亮氨酸生产水平得到显著提高，50L罐水平发酵产酸可达45.5g/L。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及培养基组合及生产异亮氨酸的方法。
背景技术
L-异亮氨酸又称“L-异白氨酸”，属于支链氨基酸(branched chain amino acid，BCAA)，是人与动物自身不能合成而必需以来外源供给的八大必需氨基酸之一，具有多种生理功能，是合成人体激素、酶类的原料，具有促进蛋白质生成和抑制其分解的效果，在人体生命活动中起着重要作用，因此在食品和医药行业具有广泛的应用及商业价值。
L-异亮氨酸的生产方法有提取法、化学合成法和发酵法三种，而目前在工业生产上实施的只有发酵法。发酵法是利用微生物的代谢作用，生物合成并过量积累L-异亮氨酸的的方法，包括添加前体发酵法和直接发酵法两类。其中添加前体发酵法又称微生物转化法，这种方法使用葡萄糖作为发酵碳源、能源，在添加特异的前体物质以避免氨基酸生物合成途径中的反馈调节作用，经微生物作用将其有效的转化为目的氨基酸。对于L-异亮氨酸，其前提物质主要有α-氨基丁酸、α-羟基丁酸、α-酮基丁酸和D-苏氨酸等，采用的微生物主要有芽孢杆菌、假单胞菌或粘质赛氏杆菌等。直接发酵法借助于微生物具有合成自身所需氨基酸的能力，通过对特定微生物的诱变处理，选育出营养缺陷型及氨基酸结构类似物抗性变异株，以解除代谢调解中的反馈抑制与阻遏，达到过量积累某种氨基酸的目的。目前L-异亮氨酸产生菌大多由谷氨酸产生菌(黄色短杆菌、谷氨酸棒杆菌、乳糖发酵短杆菌等)诱变选育而来。L-异亮氨酸的生物合成途径包括：葡萄糖经酵解途径生成磷酸烯醇式丙酮酸，磷酸烯醇式丙酮酸经二氧化碳固定反应生成四碳二羧酸，后经氨基化反应生成天冬氨酸；天冬氨酸在天冬氨酸激酶催化作用下，生成天冬氨酸半醛；天冬氨酸半醛在高丝氨酸脱氢酶的催化下，生成高丝氨酸；高丝氨酸在高丝氨酸激酶的催化作用下生成苏氨酸；苏氨酸经苏氨酸脱氨酶、乙酰羧基酸合成酶和支链氨基酸谷氨酸转氨酶的催化作用，生成异亮氨酸。
目前，国内已有多家企业通过发酵法进行L-异亮氨酸的生产，但仍存在菌株产酸水平低，发酵产物提取技术差等问题。因此，改进L-异亮氨酸的发酵技术工艺，提高产酸水平，进而降低提取难度，对提高国内L-异亮氨酸的产量及产品市场竞争力具有重要意义。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供培养基组合及生产异亮氨酸的方法，该培养基组合能够使异亮氨酸生产水平得到显著提高。
本发明提供的谷氨酸棒状杆菌的培养基组合包括：
种子培养基、发酵培养基和补料培养基；
所述种子培养基包括：葡萄糖20g/L、玉米浆60g/L、氯化钾0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、消泡剂0.3mL/L、生物素0.3mg/L、VB1 2mg/L；
所述发酵培养基包括：葡萄糖80g/L、玉米浆30g/L、硫酸铵10g/L、磷酸氢二钾1g/L、硫酸镁0.5g/L、消泡剂0.3mL/L、生物素0.1mg/L、VB1 0.1mg/L；
所述补料培养基包括：玉米浆和水解液；所述水解液为豆粕水解液或玉米浆水解液。
一些实施例中，所述补料培养基中包括：玉米浆125g/L～250g/L和水解液250g/L～375g/L。
一些实施例中，所述补料培养基中，玉米浆和水解液的总量为500g/L；其中，玉米浆和水解液的比例为1：(1～3)。
一些实施例中，所述种子培养基或发酵培养基中的消泡剂为有机硅油，菜籽油，矿物油或聚醚类化合物。
一些具体实施例中，所述消泡剂为聚醚消泡剂DF103。
本发明所述的培养基组合在发酵生产L-异亮氨酸中的应用。
在现有发酵工艺中，培养基中玉米浆等氮源往往在发酵开始一次性投入，随着发酵进行，底物浓度，尤其是氮源营养逐渐下降，同时菌体的比生长速率也呈逐渐下降趋势。实验发现，当菌体的比生长速率低于0.1h-1时，产酸速率会明显变慢，表明此时培养基中氮源营养已明显不足。因此在菌体的比生长速率接近0.1h-1时，及时补充氮源，有助于减慢菌体的比生长速率下降速度，提高异亮氨酸的生成速率及产量。而实验表明，本发明提供的补料培养基对氮源的补充更有效，并且有利于异亮氨酸的产量。
本发明还提供了一种发酵生产L-异亮氨酸的方法，其包括：
以本发明所述的种子培养基活化谷氨酸棒状杆菌，获得种子液；
将种子液接种至本发明所述的发酵培养基，发酵至比生长速率为0.1±0.01h-1，流加本发明所述的补料培养基，继续发酵获得含有L-异亮氨酸的发酵液。
一些实施例中，所述流加的速度为50mL/h。
在本发明中，接种种子液开始发酵约30～32h后，比生长速率达到0.1±0.01h-1，此时开始流加补料培养基，在流加条件下，再继续发酵28～30h，终止发酵。一些实施例中，所述发酵的总时长为60h。
一些实施例中，所述种子液的接种量为15％。
一些实施例中，所述发酵的条件为：罐压0.05～0.1Mpa，通气量10L/min～25L/min，搅拌200～800rpm，温度31～33℃，pH值为6.8～7.2，溶氧20％～40％。
本发明提供了培养基组合，该培养基中发酵培养基和种子培养基的组分合理，补料培养基能够在发酵培养基中氮源营养开始不足时，通过匀速流加以一定比例配置的玉米浆和水解液(豆粕水解液或玉米浆水解液)的混合液，及时补充氮源，提高了异亮氨酸的生成速率及产量，且由于水解液(豆粕水解液或玉米浆水解液)所含生物素很少，避免了菌体量的过量增长，维持了较高的转化率。该方法简单易行，异亮氨酸生产水平得到显著提高，50L罐水平发酵产酸可达45.5g/L。
具体实施方式
本发明提供了培养基组合及生产异亮氨酸的方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
玉米浆是发酵常用的有机氮源，其含有丰富的可溶性蛋白，以及磷和生长因子(如生物素)等。豆粕水解液、玉米浆水解液也属于常用氮源，因其一般是豆粕或玉米浆经酸处理后得到，所以pH一般较低，其中生长因子(如生物素)较玉米浆要少，但各种游离氨基酸较多，更易被菌体所利用。本发明研究表明，发酵过程中如仅流加玉米浆，会带入较多的生物素，导致菌体量过量增长，不利于转化率的提高，而采用流加以一定比例(1:1～1:3)配置的玉米浆和水解液(豆粕水解液或玉米浆水解液)的混合液则可解决这个问题，使转化率得到大幅提高。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
对比例不流加补充玉米浆和水解液
将培养好的谷氨酸棒状杆菌种子液按15％的接种量接入50L发酵罐中，初定容20L。种子所用培养基组成为：葡萄糖20g/L、玉米浆60g/L、氯化钾0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、聚醚消泡剂DF103(美国陶氏化学)0.3mL/L、生物素0.3mg/L、VB1 2mg/L，其余为水。发酵所用培养基组成为：葡萄糖80g/L、玉米浆30g/L、硫酸铵10g/L、磷酸氢二钾1g/L、硫酸镁0.5g/L、聚醚消泡剂DF103(美国陶氏化学)0.3mL/L、生物素0.1mg/L、VB1 0.1mg/L，其余为水。发酵条件为：罐压0.05～0.1Mpa，通气量10～25L/min，搅拌200～800rpm，温度31～33℃，pH6.8～7.2，溶氧20％～40％。
本对比实验例重复3次，发酵结束，利用HPLC测定发酵液中的异亮氨酸含量，发酵指标见下表1。
实施例1
将培养好的谷氨酸棒状杆菌种子液按15％的接种量接入50L发酵罐中，初定容20L。种子、发酵所用培养基组成及发酵培养条件均与对比例相同。发酵32h时，比生长速率达到0.108h-1，开始以50mL/h的速度流加补料培养基(以水配制，含玉米浆250g/L和玉米浆水解液250g/L)，发酵60h停止流加。发酵条件为：温度31℃，pH6.9～7.0，溶氧20％～30％，根据溶氧需要提升搅拌/通风量/罐压，罐压0.05～0.1Mpa，通气量10～25L/min，搅拌200～800rpm。
本实施例重复3次，发酵结束，利用HPLC测定发酵液中的异亮氨酸含量，发酵指标见下表1。
实施例2
将培养好的谷氨酸棒状杆菌种子液按15％的接种量接入50L发酵罐中，初定容20L。种子、发酵所用培养基组成及发酵培养条件均与对比例相同。发酵32h时，比生长速率达到0.108h-1，开始以50mL/h的速度流加补料培养基(以水配制，含玉米浆250g/L和豆粕水解液250g/L)，发酵60h停止流加。发酵条件为：温度32℃，pH6.9～7.0，溶氧20％～30％，根据溶氧需要提升搅拌/通风量/罐压，罐压0.05～0.1Mpa，通气量10～25L/min，搅拌200～800rpm。
本实施例重复3次，发酵结束，利用HPLC测定发酵液中的异亮氨酸含量，发酵指标见下表1。
实施例3
将培养好的谷氨酸棒状杆菌种子液按15％的接种量接入50L发酵罐中，初定容20L。种子、发酵所用培养基组成及发酵培养条件均与对比例相同。发酵32h时，比生长速率达到0.1h-1，开始以50mL/h的速度流加补料培养基(以水配制，含玉米浆167g/L和玉米浆水解液333g/L)，发酵60h停止流加。发酵条件为：温度32℃，pH6.9～7.0，溶氧30％～40％，根据溶氧需要提升搅拌/通风量/罐压，罐压0.05～0.1Mpa，通气量10～25L/min，搅拌200～800rpm。
本实施例重复3次，发酵结束，利用HPLC测定发酵液中的异亮氨酸含量，发酵指标见下表1。
实施例4
将培养好的谷氨酸棒状杆菌种子液按15％的接种量接入50L发酵罐中，初定容20L。种子、发酵所用培养基组成及发酵培养条件均与对比例相同。发酵32h时，比生长速率达到0.1h-1，开始以50mL/h的速度流加补料培养基(以水配制，含玉米浆167g/L和豆粕水解液333g/L)，发酵60h停止流加。发酵条件为：温度32℃，pH7.0～7.2，溶氧20％～30％，根据溶氧需要提升搅拌/通风量/罐压，罐压0.05～0.1Mpa，通气量10～25L/min，搅拌200～800rpm。
本实施例重复3次，发酵结束，利用HPLC测定发酵液中的异亮氨酸含量，发酵指标见下表1。
实施例5
将培养好的谷氨酸棒状杆菌种子液按15％的接种量接入50L发酵罐中，初定容20L。种子、发酵所用培养基组成及发酵培养条件均与对比例相同。发酵30h时，比生长速率达到0.103h-1，开始以50mL/h的速度流加补料培养基(以水配制，含玉米浆125g/L和玉米浆水解液375g/L)，发酵60h停止流加。发酵条件为：温度33℃，pH7.0～7.2，溶氧20％～30％，根据溶氧需要提升搅拌/通风量/罐压，罐压0.05～0.1Mpa，通气量10～25L/min，搅拌200～800rpm。
本实施例重复3次，发酵结束，利用HPLC测定发酵液中的异亮氨酸含量，发酵指标见下表1。
实施例6
将培养好的谷氨酸棒状杆菌种子液按15％的接种量接入50L发酵罐中，初定容20L。种子、发酵所用培养基组成及发酵培养条件均与对比例相同。发酵30h时，比生长速率达到0.103h-1，开始以50mL/h的速度流加补料培养基(以水配制，含玉米浆125g/L和豆粕水解液375g/L)，发酵60h停止流加。发酵条件为：温度33℃，pH7.0～7.2，溶氧30％～40％，根据溶氧需要提升搅拌/通风量/罐压，罐压0.05～0.1Mpa，通气量10～25L/min，搅拌200～800rpm。
本实施例重复3次，发酵结束，利用HPLC测定发酵液中的异亮氨酸含量，发酵指标见下表1。
发酵指标统计与分析
本发明采用安捷伦公司的高效液相色谱仪(Agilent Technologies 1200)进行发酵液中积累的异亮氨酸含量检测，具体方法如下：
色谱柱：ZORBAX Eclipse-AAA柱(3.5μm，4.6×75mm)
流动相A：称取6.24g NaH2PO4·2H2O，转移到1000mL玻璃烧杯中。加入1000mL超纯水，搅拌，直到所有晶体完全溶解。用NaOH调节溶液pH值至7.80。
流动相B：乙腈:甲醇:水＝45:45:10(V/V/V)。
流速：2ml/min。
表1对比例与各实施例产酸量(g/L)
| 重复1次 | 重复2次 | 重复3次 | 平均值 | |
| 对比例 | 35.2 | 34.4 | 33.9 | 34.5 |
| 实施例1 | 40.9 | 41.4 | 41.6 | 41.3* |
| 实施例2 | 42.5 | 41.7 | 41.3 | 41.8* |
| 实施例3 | 43.5 | 44.3 | 44.8 | 44.2* |
| 实施例4 | 45.6 | 44.8 | 46.1 | 45.5* |
| 实施例5 | 41.4 | 42.0 | 43.2 | 42.2* |
| 实施例6 | 41.9 | 43.5 | 42.0 | 42.5* |
注：*示与对比例相比具有极显著差异(P<0.01)。
由表1可知，在培养基中氮源营养开始不足时，通过匀速流加以一定比例配置的玉米浆和水解液混合液，确实可以提高异亮氨酸的生成速率及产量，实施例1～6较对比例能够将产酸量提高6.8～11.0g/L。其中，实施例4当流加玉米浆和豆粕水解液的配比为1:2时，效果最为显著，产酸量较对比例可提高11.0g/L。实施例4的效果相较实施例1、实施例2、实施例5和实施例6均有显著差异(P<0.01)，但较实施例3差异不显著(P＞0.05)。说明按实施例3和实施例4的方法对提高异亮氨酸产酸量有同等好的效果。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种谷氨酸棒状杆菌的培养基组合，其包括：
种子培养基、发酵培养基和补料培养基；
所述种子培养基包括：葡萄糖20g/L、玉米浆60g/L、氯化钾0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、消泡剂0.3mL/L、生物素0.3mg/L、VB1 2mg/L；
所述发酵培养基包括：葡萄糖80g/L、玉米浆30g/L、硫酸铵10g/L、磷酸氢二钾1g/L、硫酸镁0.5g/L、消泡剂0.3mL/L、生物素0.1mg/L、VB1 0.1mg/L；
所述补料培养基包括：玉米浆和水解液；所述水解液为豆粕水解液或玉米浆水解液。
2.根据权利要求1所述的培养基组合，其特征在于，所述补料培养基中包括：玉米浆125g/L～250g/L和水解液250g/L～375g/L。
3.根据权利要求1或2所述的培养基组合，其特征在于，
所述补料培养基中，玉米浆和水解液的总量为500g/L；其中，玉米浆和水解液的比例为1：(1～3)。
4.根据权利要求1所述的培养基组合，其特征在于，所述种子培养基或发酵培养基中的消泡剂为有机硅油，菜籽油，矿物油或聚醚类化合物。
5.权利要求1～4任一项所述的培养基组合在发酵生产L-异亮氨酸中的应用。
6.一种发酵生产L-异亮氨酸的方法，其包括：
以权利要求1～4任一项所述的种子培养基活化谷氨酸棒状杆菌，获得种子液；
将种子液接种至权利要求1～4任一项所述的发酵培养基，发酵至生长速率为0.1±0.01h-1，流加权利要求1～4任一项所述的补料培养基，继续发酵获得含有L-异亮氨酸的发酵液。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述流加的速度为50mL/h。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述发酵的总时长为60h。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述种子液的接种量为15％。
10.根据权利要求6～9任一项所述的方法，其特征在于，所述发酵的条件为：罐压0.05～0.1Mpa，通气量10L/min～25L/min，搅拌200～800rpm，温度31～33℃，pH值为6.8～7.2，溶氧20％～40％。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910847757.7A CN110396493B (zh) | 2019-09-09 | 2019-09-09 | 培养基组合及生产异亮氨酸的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910847757.7A CN110396493B (zh) | 2019-09-09 | 2019-09-09 | 培养基组合及生产异亮氨酸的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110396493A true CN110396493A (zh) | 2019-11-01 |
| CN110396493B CN110396493B (zh) | 2021-09-07 |
Family
ID=68328429
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910847757.7A Active CN110396493B (zh) | 2019-09-09 | 2019-09-09 | 培养基组合及生产异亮氨酸的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110396493B (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111172086A (zh) * | 2020-03-18 | 2020-05-19 | 通辽梅花生物科技有限公司 | 一种生产l-异亮氨酸的发酵方法 |
| CN111378709A (zh) * | 2020-03-20 | 2020-07-07 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种玉米多肽-硒螯合物的制备方法 |
| CN112094873A (zh) * | 2020-11-19 | 2020-12-18 | 乐康珍泰（天津）生物技术有限公司 | 一种提高l-异亮氨酸发酵产量的方法 |
| CN112094871A (zh) * | 2020-08-31 | 2020-12-18 | 天津科技大学 | 一种提高l-异亮氨酸产量的方法 |
| CN114149950A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-03-08 | 通辽梅花生物科技有限公司 | 复合氮源及其制备方法及用其制备微生物发酵培养基的用途 |
| CN116042753A (zh) * | 2022-11-26 | 2023-05-02 | 黑龙江金象生化有限责任公司 | 一种玉米浆菌体蛋白复合水解液的制备方法及l-异亮氨酸的制备方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1724645A (zh) * | 2005-06-22 | 2006-01-25 | 天津科技大学 | 谷氨酸棒杆菌突变株tl1105及在发酵法生产l－组氨酸中的应用 |
| CN101962663A (zh) * | 2010-11-02 | 2011-02-02 | 天津科技大学 | 一种高效发酵生产l-异亮氨酸的方法 |
| CN102174603A (zh) * | 2011-03-10 | 2011-09-07 | 上海化工研究院 | 一种13c、15n双标记-l-赖氨酸盐酸盐的制备方法 |
| CN104450815A (zh) * | 2014-11-20 | 2015-03-25 | 河南巨龙生物工程股份有限公司 | 一种提高异亮氨酸产量的发酵方法 |
| CN109593800A (zh) * | 2019-01-24 | 2019-04-09 | 内蒙古拜克生物有限公司 | 一种发酵生产l-亮氨酸的方法 |
| CN109609565A (zh) * | 2019-02-24 | 2019-04-12 | 内蒙古拜克生物有限公司 | 一种发酵生产l-异亮氨酸的方法 |
-
2019
- 2019-09-09 CN CN201910847757.7A patent/CN110396493B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1724645A (zh) * | 2005-06-22 | 2006-01-25 | 天津科技大学 | 谷氨酸棒杆菌突变株tl1105及在发酵法生产l－组氨酸中的应用 |
| CN101962663A (zh) * | 2010-11-02 | 2011-02-02 | 天津科技大学 | 一种高效发酵生产l-异亮氨酸的方法 |
| CN102174603A (zh) * | 2011-03-10 | 2011-09-07 | 上海化工研究院 | 一种13c、15n双标记-l-赖氨酸盐酸盐的制备方法 |
| CN104450815A (zh) * | 2014-11-20 | 2015-03-25 | 河南巨龙生物工程股份有限公司 | 一种提高异亮氨酸产量的发酵方法 |
| CN109593800A (zh) * | 2019-01-24 | 2019-04-09 | 内蒙古拜克生物有限公司 | 一种发酵生产l-亮氨酸的方法 |
| CN109609565A (zh) * | 2019-02-24 | 2019-04-12 | 内蒙古拜克生物有限公司 | 一种发酵生产l-异亮氨酸的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| XIAOYUAN WANG，ET AL: "Strategy for improving L-isoleucine production efficiency in Corynebacterium glutamicum", 《APPLIED MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY 》 * |
| 沈加彬 等: "响应面法优化L-异亮氨酸产生菌的摇瓶发酵条件", 《福建师范大学学报(自然科学版)》 * |
| 王壮壮 等: "L-异亮氨酸高产菌选育及其培养基优化", 《生物技术通报》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111172086A (zh) * | 2020-03-18 | 2020-05-19 | 通辽梅花生物科技有限公司 | 一种生产l-异亮氨酸的发酵方法 |
| CN111378709A (zh) * | 2020-03-20 | 2020-07-07 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种玉米多肽-硒螯合物的制备方法 |
| CN112094871A (zh) * | 2020-08-31 | 2020-12-18 | 天津科技大学 | 一种提高l-异亮氨酸产量的方法 |
| CN112094873A (zh) * | 2020-11-19 | 2020-12-18 | 乐康珍泰（天津）生物技术有限公司 | 一种提高l-异亮氨酸发酵产量的方法 |
| CN114149950A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-03-08 | 通辽梅花生物科技有限公司 | 复合氮源及其制备方法及用其制备微生物发酵培养基的用途 |
| CN116042753A (zh) * | 2022-11-26 | 2023-05-02 | 黑龙江金象生化有限责任公司 | 一种玉米浆菌体蛋白复合水解液的制备方法及l-异亮氨酸的制备方法 |
| CN116042753B (zh) * | 2022-11-26 | 2024-05-10 | 哈尔滨象柏生物科技有限公司 | 一种玉米浆菌体蛋白复合水解液的制备方法及l-异亮氨酸的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110396493B (zh) | 2021-09-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110396493A (zh) | 培养基组合及生产异亮氨酸的方法 | |
| CN102517239B (zh) | 具有提高的l-缬氨酸生产能力的微生物及利用该微生物生产l-缬氨酸的方法 | |
| CN106701853B (zh) | 一种产l-异亮氨酸谷氨酸棒杆菌发酵培养基及培养方法 | |
| CN101501204B (zh) | 一种利用甘油生产氨基酸的方法 | |
| CN102168115A (zh) | 一种辅酶q10工业化生产方法 | |
| WO2020140388A1 (zh) | 谷氨酸的绿色清洁发酵工艺 | |
| CN106755156A (zh) | 一种l‑赖氨酸的发酵方法 | |
| CN113373103B (zh) | 一种提高5-羟基色氨酸产量的方法 | |
| EP0555540A1 (en) | Method of producing trehalose | |
| BR112015013049B1 (pt) | Produção fermentativa de um hidrocarboneto | |
| CN112251475A (zh) | 一种提高l-谷氨酰胺发酵产率和糖酸转化率的方法 | |
| Razak et al. | Optimization of fermentation upstream parameters and immobilization of Corynebacterium glutamicum MH 20-22 B cells to enhance the production of L-lysine | |
| CN109652476B (zh) | 一种发酵生产l-缬氨酸的方法 | |
| CN101705261A (zh) | 一种γ-氨基丁酸的制备方法 | |
| CN101182555B (zh) | 一种利用氧化还原电位调控厌氧发酵产丁二酸的方法 | |
| CN114921502B (zh) | 一种基于微生物生理参数进行反馈调控氮源流加的戊二酸生产方法 | |
| CN101130798A (zh) | 一种生物酶制备l-天门冬氨酸钠的方法 | |
| CN113046398A (zh) | 一种稳定高效生产l-异亮氨酸的发酵方法及发酵稳定剂 | |
| CN109609567B (zh) | 一种利用菌体蛋白酶解液代替酵母粉的l-色氨酸绿色生产方法 | |
| CN106086099A (zh) | L‑缬氨酸发酵培养基及用其生产l‑缬氨酸的发酵方法 | |
| CN112481325A (zh) | 一种利用粘质沙雷氏菌流加葡萄糖生产组氨酸的方法 | |
| CN106222152A (zh) | 一种产(‑)γ‑内酰胺酶重组大肠杆菌的发酵方法 | |
| CN110885774A (zh) | 一种优化谷氨酸发酵的方法 | |
| CN106520744A (zh) | 一种提高枯草芽孢杆菌腈水合酶活性的方法 | |
| CN101321860A (zh) | 制备l-赖氨酸的发酵工艺 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |