CN110373393A - 抗传染性法氏囊病毒vp2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株1h6 - Google Patents

抗传染性法氏囊病毒vp2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株1h6 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种抗传染性法氏囊病毒VP2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株1H6，属于生物技术领域。本发明用纯化的IBDV QL株抗原免疫BALB/c小鼠，制备脾细胞，与SP2/0骨髓瘤细胞系融合，以原核表达的IBDV重组VP2(rVP2)蛋白和纯化的IBDV QL株进行双重筛选，获得1株既能与原核表达的rVP2蛋白反应又能与IBDV反应的单克隆抗体杂交瘤细胞株1H6，抗体亚类为IgG1κ，诱生腹水的抗体效价分别为108。夹心ELISA检测表明：1H6与其他4种禽类病毒无交叉反应；间接免疫荧光试验证明，1H6具有良好的特异性反应；免疫印迹分析，1H6能与rVP2蛋白和IBDV产生特异性蛋白条带。

Description

抗传染性法氏囊病毒VP2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株1H6
一、技术领域
本发明涉及一种抗传染性法氏囊病毒VP2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株1H6，属于生物技术领域，涉及抗体工程技术。
二、背景技术
传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是引起我国及世界养禽业严重经济损失的主要传染病之一，是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的以侵害雏鸡中枢免疫器官—法氏囊为主要特征的传染病。近年来超强毒株(vvIBDV)的出现使雏鸡免疫失败和死亡率大大增加，造成巨大的间接经济损失。
疫苗接种是预防该病最有效的方法，为了评价疫苗的保护效果，需要分析鸡群疫苗接种前后其抗体水平程度。目前，评价鸡IBDV抗体的主要方法有：中和试验、琼扩和间接ELISA。这些方法虽然比较经典，但是这些方法都有不同的缺点，要么耗时较长，要么需要养培养细胞，要么价格昂贵，要么步骤较多，因此，亟需研制一种新的简便、快速、价格低廉的方法来代替现有方法。而IBDV抗体竞争ELISA检测方法，只需一步，一个小时以内就可以检测出结果，且价格低廉。
IBDV属双RNA病毒科双RNA病毒属，基因组包括大(A)小(B)两个片段，有五种病毒蛋白：VP1、VP2、VP3、VP4和VP5。VP2占病毒蛋白的51％，既是IBDV的主要结构蛋白，又是病毒的主要保护性抗原，与病毒中和抗体的诱导、抗原和毒力的变异以及细胞凋亡的诱导等有关。因此，用VP2蛋白来评价鸡血清样品中IBDV的抗体水平具有其它病毒蛋白没有的优势。
前期本实验室已通过大量的摸索，经过对IBDV VP2基因优化设计及合成，并通过大肠杆菌Rosetta(DE3)进行表达，获得了IBDV重组VP2。但研制IBDV抗体竞争ELISA试剂盒，还需要能够与鸡血清样品中IBDV抗体产生竞争的竞争抗体。虽然，本实验室前期利用纯化的IBDV作为筛选抗原，通过淋巴细胞杂交瘤技术获得了多株针对IBDV的单克隆抗体，但是这些单抗均不能与原核表达的rVP2反应。本发明，针对以上单抗的问题，拟利用原核表达的重组VP2蛋白和IBDV QL株作为双重筛选抗原，来研制IBDV rVP2的单抗，用作鸡血清样品中IBDV抗体的竞争抗体，为研制IBDV抗体竞争ELISA检测试剂盒提供材料。
三、发明内容
技术问题
本发明针对通过淋巴细胞杂交瘤技术获得的单克隆抗体均不能与原核表达的rVP2反应，限制了IBDV竞争ELISA抗体检测试剂盒的研制的问题，拟以原核表达的重组VP2蛋白和纯化的IBDVQL株作为双重筛选抗原，来研制针对IBDV rVP2的单抗，用作鸡血清样品中IBDV抗体的竞争抗体，为研制IBDV抗体竞争ELISA检测试剂盒提供材料。
技术方案
一种抗传染性法氏囊病毒VP2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，该细胞株1H6保藏号为 CCTCC NO：C201966。
所述的杂交瘤细胞株1H6可以在制备传染性法氏囊病病毒IBDV抗原或抗体检测试剂中应用。
用所述的杂交瘤细胞株1H6制备的单克隆抗体可以在制备IBDV抗原或抗体检测试剂中的应用也可以制备IBDV抗原或抗体检测试剂盒。
有益效果
本发明的特点和优点如下：
1、本发明使用的IBDV免疫原是从已免疫过IBDV疫苗但发生免疫失败的鸡场分离的 IBDV QL超强毒株。是用纯化的IBDV QL株抗原免疫BALB/c小鼠，制备脾细胞，与SP2/0骨髓瘤细胞系融合，以原核表达的rVP2蛋白和纯化的IBDV QL株进行双重筛选，获得1 株既能与原核表达的rVP2蛋白反应又能与IBDV反应的单克隆抗体杂交瘤细胞株，命名为 1H6，抗体亚类分别为IgG1κ，诱生腹水的抗体效价为108。夹心ELISA检测特异性表明： 1H6与其他4种禽类病毒无交叉反应；间接免疫荧光试验证明，1H6具有良好的特异性反应；免疫印迹分析，1H6能与原核表达的rVP2蛋白，又可与IBDV产生特异性蛋白条带。
2.本发明是从建立的24株分泌IBDV单克隆抗体的杂交瘤细胞库中筛选出一株杂交瘤细胞1H6，1H6分泌的单抗既可与原核表达的rVP2蛋白反应，又可与IBDV毒株反应。
3.本发明的杂交瘤细胞株1H6分泌的单克隆抗体，不仅特异性好，而且可与鸡血清样品中IBDV抗体具有良好的竞争性，可用于研制IBDV抗体竞争ELISA检测试剂盒。
四、附图说明
图1 Western blot分析rVP2蛋白在大肠杆菌Rosetta(DE3)中的表达生物保藏
该细胞株1H6于2019年5月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C201966，分类命名：抗传染性法氏囊病毒VP2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株1H6。
五、具体实施方式
前期，本实验室利用纯化的IBDV作为筛选抗原，通过淋巴细胞杂交瘤技术获得了多株针对IBDV的单克隆抗体，但是这些单抗均不能与原核表达的rVP2反应，限制了IBDV竞争ELISA抗体检测试剂盒的研制。本发明针对以上单抗的问题，以原核表达的重组VP2蛋白和纯化的IBDVQL株作为双重筛选抗原，来研制针对IBDV rVP2的单抗，用作鸡血清样品中IBDV抗体的竞争抗体，为研制IBDV抗体竞争ELISA检测试剂盒提供材料。
其方法为：用近期从免疫失败的病鸡法氏囊组织中分离的IBDV QL强毒株为抗原，免疫BALB/c小鼠，利用原核表达的重组VP2蛋白和IBDV QL强毒株作为双重筛选抗原，通过淋巴细胞杂交瘤技术获得分泌IBDV VP2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株。用该杂交瘤细胞制备的小鼠腹水，经纯化和辣根过氧化物酶标记，发现该IBDV VP2单抗与鸡血清样品中IBDV抗体具有良好的竞争性。
1材料与方法
1.1病毒、细胞和动物
BALB/c雌性鼠(免疫：6～8周龄、体重15～20g；腹水制作：8～10周龄、体重20g以上) 购自扬州大学比较医学实验中心；SP2/0骨髓瘤细胞系(ATCC-1382)。
1.2主要试剂
RPMI-1640培养基为GIBCO产品；小牛血清购自上海慧人生物科技研究所；二甲亚砜 (DMSO)、聚乙二醇融合剂(PEG4000)、HAT、HT均为Sigma公司产品；单克隆抗体亚类鉴定试剂盒(Mouse Monoclonal Antibody Isotyping Kit)为Thermo scientific产品；HRP-羊抗鼠IgG和FITC-羊抗鼠IgG购自碧云天生物技术有限公司；DAB显色液购自天根生化科技有限公司。
1.3 IBDV rVP2蛋白和IBDV QL病毒抗原的制备
1.3.1原核表达IBDV rVP2蛋白
根据GenBank已登录的IBDV VP2序列(EU417824.1)和大肠杆菌密码子的偏爱性优化设计IBDV VP2基因(SEQ.ID.NO.1)，全基因合成，定向克隆入原核表达载体pET28a(+)中，构建原核表达质粒pET28-VP2，转化大肠杆菌Rosetta(DE3)；用1mM IPTG诱导后，经SDS-PAGE和western blot分析，重组VP2蛋白在大肠杆菌Rosetta(DE3)中获得了高效表达。将200ml大肠杆菌表达的重组VP2蛋白按照HisTrap HP亲和层析柱说明书进行纯化，测定浓度，蛋白浓度为2.23mg/ml，-20℃分装保存。
1.3.2 IBDV QL病毒抗原的制备
从近期疫苗免疫失败的山东发病鸡群中分离到一株IBDV QL超强毒株，用此毒株通过滴鼻、点眼、擦肛三种途径人工感染30只SPF鸡(4周龄)，剖取死亡鸡和发病鸡法氏囊组织，充分研磨，并加入少量0.01mol·L-1PBS(pH7.2)，制成匀浆，反复冻融三次，9000rpm 离心30min，取上清液，用蔗糖密度梯度方法进行纯化。夹心ELISA检测纯化后病毒抗原含量，蛋白浓度为6.17mg/ml，选取此层作为IBDV免疫和筛选用抗原，-20℃保存备用。
1.4杂交瘤细胞株的建立
1.4.1免疫动物
用纯化的IBDV QL毒株免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠，第一次免疫用纯化的IBDVQL 毒株与等体积弗氏完全佐剂乳化后经腹腔注射小鼠，每隔14d用IBDV QL加等量弗氏不完全佐剂乳化后经腹腔再次免疫，剂量均为为100μg/只，共4次，细胞融合前3d用IBDV QL毒株(不加佐剂)进行加强免疫。
1.4.2细胞融合
在融合前一天，制备饲养细胞(来自未免疫的BALB/c小鼠)，铺4块96孔细胞培养板。
第二天，进行细胞融合。具体方法如下：取计数后的SP2/0细胞与脾淋巴细胞按1:5的比例混合于50mL离心管中，充分混匀。1000r/min离心10min，弃上清。用手掌轻击离心瓶底，将沉淀的细胞打散。将离心瓶底部放入40℃水浴中，在1min内边旋转边加入融合用的PEG 1mL，然后继续旋转并加入无血清164015mL，在90s内加完，由慢到快，前5s加 1mL。室温静置10min后，1000r/min离心10min，弃上清，将HAT选择培养液加入到细胞融合物中，悬浮细胞，分配到已加有饲养细胞的96孔细胞培养板，置于37℃、5％CO2的温箱中培养；5d后用新鲜预热的HAT培养基换出一半培养基；9d后用预热的HT换出HAT；观察杂交瘤细胞的生长情况，待其细胞培养上清变黄或克隆分布至孔底面积的1/10以上时，吸取适量细胞上清进行抗体检测。
1.4.3杂交瘤细胞的筛选
第一次检测：用纯化的原核表达的重组VP2蛋白(rVP2)作为筛选抗原。具体方法如下：将纯化的原核表达的rVP2用0.05mol/L碳酸盐缓冲液(pH9.6)稀释成1μg/ml，100μL/孔，4℃过夜包被酶标板；300μL/孔封闭液(PBST+10％小牛血清)37℃作用2h，PBST洗涤4次，拍干；待杂交瘤细胞集落的汇合度达到培养孔1/10左右时，吸取待检孔上清200μL 加入上述检测板孔中，同时设立阳性、阴性和空白对照，37℃1h，用PBST洗涤4次，拍干；加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG(HRP-IgG)，100μL/孔，37℃1h，用PBST洗涤5次，拍干；加入TMB底物显色液100μL/孔，室温显色。每隔2分钟进行观察，直到阴性孔要显色未显色时，记录所有显示蓝色的孔。
第2次检测：检测方法同第一次检测，继续用纯化的原核表达的rVP2做为筛选抗原。将两次检测均为阳性的孔记录下来。
第3次检测：在前面2次检测结果的基础上，用纯化的IBDV QL毒株作为筛选抗原。检测方法同第1次检测，将3次检测均为阳性的孔记录下来，作为待克隆孔。
1.4.4杂交瘤细胞的克隆
选择连续3次检测均为为阳性的杂交瘤细胞株(共24株)，用有限稀释法进行克隆化。当克隆孔细胞生长至孔底面积的1/10时，用纯化的原核表达的rVP2做为筛选抗原对整个细胞孔进行检测，强阳性孔再用有限稀释法进行克隆。第2次克隆孔长至孔底面积的1/10时，用纯化的IBDV QL毒株作为筛选抗原，直至全部克隆孔检测均为阳性时，将克隆化的杂交瘤细胞扩大培养，液氮冻存。
1.4.5腹水制备及纯化
选取8～10周龄体重20g以上的雌性BALB/c鼠，腹腔注射液体石蜡，0.5mL/只，1周后腹腔注射杂交瘤细胞(约5×106细胞/只)，每天观察小鼠腹部，约12～15天左右，小鼠腹部明显增大时抽取腹水，3000r/min离心10min，取上清液。用HiTrapTM Protein G亲和层析柱按操作说明书进行纯化。用SDS-PAGE电泳观察纯化效果，同时用紫外分光光度计测定蛋白浓度，-20℃保存备用。
1.5单克隆抗体的鉴定
1.5.1抗体效价测定
以原核表达的IBDV rVP2蛋白包被酶标板，将杂交瘤细胞腹水做10倍稀释，采用间接 ELISA方法测其效价，二抗为(1：3000稀释)的羊抗鼠HRP-IgG，将阳性反应的最高稀释倍数确定为抗体效价。
1.5.2亚类测定
按照Thermo scientific公司单克隆抗体亚类鉴定试剂盒操作说明书进行，1H6抗体亚类为IgG1κ，细胞培养上清液效价为102，腹水抗体效价测定结果为108。
1.5.3分泌抗体稳定性测定
将获得的克隆化杂交瘤细胞株进行连续传代培养、液氮冻存与复苏试验，用间接ELISA 连续检测杂交瘤细胞培养上清液中的抗体效价，杂交瘤细胞株仍能稳定地分泌单克隆抗体。
1.5.4特异性鉴定
1.5.4.1夹心ELISA试验
将纯化的1H6单抗腹水用包被液稀释成1μg/ml，100μL/孔包被酶标板，4℃过夜，用PBST洗3次，每次5min，拍干，每孔加入300μL封闭液进行封闭，37℃作用2h后，加入， IBD、新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、减蛋综合征病毒(EDSV)、禽流感病毒H9N2亚型(AIV H9N2)和CEF细胞裂解物(以上病毒材料均公知公用，来自南京天邦生物科技有限公司)，37℃作用1h后，用PBST洗3次，每次5min，拍干，加入 HRP-VP2(1H6)单抗，100μL/孔，37℃作用1h后，用PBST洗5次，每次3min，拍干，加入TMB底物显色液100μL/孔，37℃反应10～15min；加入2M H2SO4 50μL/孔终止反应。测定孔内的OD450。结果：1H6只与IBDV反应，而与新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、减蛋综合征病毒(EDSV)、禽流感病毒H9N2亚型(AIV H9N2)和 CEF细胞裂解物无交叉反应。夹心ELISA检测特异性表明：1H6与其他4种禽类病毒无交叉反应。
1.5.4.2间接免疫荧光试验
实验在48孔细胞培养板中进行。将IBDV疫苗株B87(南京天邦生物科技有限公司)接种到DF-1细胞(ATCC细胞库)，待细胞出现少量病变，弃细胞上清；用预冷的PBS洗3 次，然后向细胞培养孔中加入-20℃预冷的无水乙醇1mL/孔，4℃固定30min，用PBS洗3 次，拍干；加入杂交瘤细胞培养上清液，200μL/孔，37℃孵育1h，PBS洗涤3次，拍干；加入500倍稀释的FITC-羊抗鼠IgG抗体工作液，100μL/孔，37℃孵育1h，PBS洗涤5次，置于荧光显微镜下观察。同步设立正常DF-1细胞为对照。在荧光显微镜下，IBDV B87感染的DF-1细胞组可观察到特异性荧光，而正常的DF-1细胞组未观察到荧光，表明1H6具有良好的特异性。
1.5.4.3 western blot分析
将诱导表达的3ml重组菌[pET28a+VP2转化的Rosetta(DE3)，见1.3.1]5000g离心10 min，去除上清液，加入160μL去离子水重悬，再加入40μL 5×SDS-Loading Buffer，10％SDS-PAGE电泳分析，转印到硝酸纤维素膜上，转印完毕后，将硝酸纤维素膜用5％脱脂奶粉4℃封闭过夜，然后将制备的腹水1:1000稀释，37℃孵育2h，PBS洗涤4次；加入羊抗鼠HRP-IgG(1:3000稀释)，37℃孵育1h，PBS洗涤5次，DAB显色，观察特异蛋白条带。
经12％SDS-PAGE电泳、转印和DAB显色后，1H6可与大肠杆菌表达的重组VP2蛋白在分子量约50kDa处有一条目的蛋白带，而与pET28a(+)转化的Rosetta(DE3)则无目的带 (图1)。免疫印迹分析，1H6能与原核表达的rVP2蛋白，又可与IBDV产生特异性蛋白条带。
Optimized DNA(优化设计的VP2基因)SEQ.ID.NO.1
gctaatctgcaggatcagacccagcagattgtgccgtttattcgtagtctgctgatgccgaccaccggcccggccagtattccggatga taccctggaaaaacataccctgcgcagcgaaaccagtacctataatctgaccgttggtgacaccggcagcggcctgattgttttctttcc gggctttccgggcagtattgttggtgcacattataccctgcagagcaatggcaattatgaatttgatcagatgctgctgaccgcccagaa tctgccggccagctataattattgccgtctggttagtcgcagtctgaccgttcgtagcagcaccctgccgggtggtgtgtatgcactgaat ggtaccattaatgcagtgacctttcagggtagcctgagtgaactgaccgatgtgagttataatggtctgatgagtgcaaccgccaatatt aatgataaaattggcaatgtgctggttggtgaaggcgtgaccgttctgagtctgccgaccagctatgatctgggttatgtgcgtctgggc gatccgattccggcaattggtctggaccctaaaatggtggcaacctgtgatagcagcgatcgtccgcgcgtgtataccattaccgcagc agatgattatcagtttagcagccagtatcaggcaggcggcgtgaccattaccctgtttagcgccaatattgatgcaattaccagtctgag cattggcggcgaactggtttttcagaccagtgtgcagggcctgattctgggtgcaaccatctatctgattggctttgatggcaccgccgt gattacccgcgccgttgcagccgataatggcctgaccgccggtaccgataatctgatgccgtttaatattgtgattccgaccagtgaaat tacccagccgattaccagcattaagctggaaattgttaccagtaaaagtggcggtcaggccggcgatcagatgagttggagcgccagt ggcagcctggccgttaccattcatggtggtaattatccgggtgcactgcgtccggtgaccctggtggcatatgaacgtgtggccaccg gtagcgtggttaccgttgccggtgtgagcaattttgaactgattccgaatccggaactggcaaaaaatctggttaccgaatatggtcgttt tgatccgggcgcaatgaattataccaaactgattctgagcgaacgcgatcgtctgggcattaagaccgtttggccgacccgcgaatata ccgattttcgcgaatattttatggaagtggcagatctgaatagcccgctgaaaattgcaggcgcatttggttttaaagatattattcgcgcc。
序列表
<110> 江苏省农业科学院
<120> 抗传染性法氏囊病毒VP2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株1H6
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gctaatctgc aggatcagac ccagcagatt gtgccgttta ttcgtagtct gctgatgccg 60
accaccggcc cggccagtat tccggatgat accctggaaa aacataccct gcgcagcgaa 120
accagtacct ataatctgac cgttggtgac accggcagcg gcctgattgt tttctttccg 180
ggctttccgg gcagtattgt tggtgcacat tataccctgc agagcaatgg caattatgaa 240
tttgatcaga tgctgctgac cgcccagaat ctgccggcca gctataatta ttgccgtctg 300
gttagtcgca gtctgaccgt tcgtagcagc accctgccgg gtggtgtgta tgcactgaat 360
ggtaccatta atgcagtgac ctttcagggt agcctgagtg aactgaccga tgtgagttat 420
aatggtctga tgagtgcaac cgccaatatt aatgataaaa ttggcaatgt gctggttggt 480
gaaggcgtga ccgttctgag tctgccgacc agctatgatc tgggttatgt gcgtctgggc 540
gatccgattc cggcaattgg tctggaccct aaaatggtgg caacctgtga tagcagcgat 600
cgtccgcgcg tgtataccat taccgcagca gatgattatc agtttagcag ccagtatcag 660
gcaggcggcg tgaccattac cctgtttagc gccaatattg atgcaattac cagtctgagc 720
attggcggcg aactggtttt tcagaccagt gtgcagggcc tgattctggg tgcaaccatc 780
tatctgattg gctttgatgg caccgccgtg attacccgcg ccgttgcagc cgataatggc 840
ctgaccgccg gtaccgataa tctgatgccg tttaatattg tgattccgac cagtgaaatt 900
acccagccga ttaccagcat taagctggaa attgttacca gtaaaagtgg cggtcaggcc 960
ggcgatcaga tgagttggag cgccagtggc agcctggccg ttaccattca tggtggtaat 1020
tatccgggtg cactgcgtcc ggtgaccctg gtggcatatg aacgtgtggc caccggtagc 1080
gtggttaccg ttgccggtgt gagcaatttt gaactgattc cgaatccgga actggcaaaa 1140
aatctggtta ccgaatatgg tcgttttgat ccgggcgcaa tgaattatac caaactgatt 1200
ctgagcgaac gcgatcgtct gggcattaag accgtttggc cgacccgcga atataccgat 1260
tttcgcgaat attttatgga agtggcagat ctgaatagcc cgctgaaaat tgcaggcgca 1320
tttggtttta aagatattat tcgcgcc 1347

Claims (5)

1.一种抗传染性法氏囊病毒VP2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株1H6，该细胞株1H6保藏号为CCTCC NO：C201966。
2.权利要求1所述的杂交瘤细胞株1H6在制备传染性法氏囊病病毒IBDV抗原或抗体检测试剂中的应用。
3.用权利要求1所述的杂交瘤细胞株1H6制备的单克隆抗体。
4.权利要求3所述的单克隆抗体在制备IBDV抗原或抗体检测试剂中的应用。
5.用权利要求3所述的单克隆抗体制备的IBDV抗原或抗体检测试剂盒。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112501129A (zh) * 2020-12-14 2021-03-16 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） 抗ibdv vp2蛋白的单克隆抗体组合及其在鉴别检测ibdv中的用途
CN114057867A (zh) * 2021-12-14 2022-02-18 河南联科物联网科技有限公司 一种抗减蛋综合征的单克隆抗体及其应用
CN116286978A (zh) * 2023-03-03 2023-06-23 南京农业大学 一种重组载体、重组菌株或细胞系、重组钙结合蛋白及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101121748A (zh) * 2007-07-20 2008-02-13 浙江大学 抗传染性法氏囊病病毒vp4蛋白单克隆抗体
CN103232974A (zh) * 2013-03-18 2013-08-07 江苏省农业科学院 分泌高中和活性传染性法氏囊病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞
CN103405767A (zh) * 2013-08-13 2013-11-27 江苏省农业科学院 传染性法氏囊病病毒样颗粒与单克隆抗体组合双功能疫苗

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101121748A (zh) * 2007-07-20 2008-02-13 浙江大学 抗传染性法氏囊病病毒vp4蛋白单克隆抗体
CN103232974A (zh) * 2013-03-18 2013-08-07 江苏省农业科学院 分泌高中和活性传染性法氏囊病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞
CN103405767A (zh) * 2013-08-13 2013-11-27 江苏省农业科学院 传染性法氏囊病病毒样颗粒与单克隆抗体组合双功能疫苗

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
夏兴霞等: "传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的制备及其抗病毒活性的分析", 《中国兽医科学》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112501129A (zh) * 2020-12-14 2021-03-16 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） 抗ibdv vp2蛋白的单克隆抗体组合及其在鉴别检测ibdv中的用途
CN112501129B (zh) * 2020-12-14 2022-12-02 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） 抗ibdv vp2蛋白的单克隆抗体组合及其在鉴别检测ibdv中的用途
CN114057867A (zh) * 2021-12-14 2022-02-18 河南联科物联网科技有限公司 一种抗减蛋综合征的单克隆抗体及其应用
CN114057867B (zh) * 2021-12-14 2023-05-12 河南联科物联网科技有限公司 一种抗减蛋综合征的单克隆抗体及其应用
CN116286978A (zh) * 2023-03-03 2023-06-23 南京农业大学 一种重组载体、重组菌株或细胞系、重组钙结合蛋白及其应用
CN116286978B (zh) * 2023-03-03 2023-12-08 南京农业大学 一种重组载体、重组菌株或细胞系、重组钙结合蛋白及其应用

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