CN110358710B - 一株侧孢芽孢杆菌及在制备抗病耐盐碱功能微生物制剂中的应用 - Google Patents

一株侧孢芽孢杆菌及在制备抗病耐盐碱功能微生物制剂中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110358710B
CN110358710B CN201910678783.1A CN201910678783A CN110358710B CN 110358710 B CN110358710 B CN 110358710B CN 201910678783 A CN201910678783 A CN 201910678783A CN 110358710 B CN110358710 B CN 110358710B
Authority
CN
China
Prior art keywords
laterosporus
culture
bacillus laterosporus
kxn
zhscb
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201910678783.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110358710A (zh
Inventor
姚强
董晓霞
宫志远
王梅
辛寒晓
孙中涛
韩建东
司洪宇
黄春燕
张元祺
谢红艳
刘青
安森
魏秀萍
李瑾
杨鹏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Agricultural Resources and Environment of Shandong Academy of Agricultural Sciences
Original Assignee
Institute of Agricultural Resources and Environment of Shandong Academy of Agricultural Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Agricultural Resources and Environment of Shandong Academy of Agricultural Sciences filed Critical Institute of Agricultural Resources and Environment of Shandong Academy of Agricultural Sciences
Priority to CN201910678783.1A priority Critical patent/CN110358710B/zh
Publication of CN110358710A publication Critical patent/CN110358710A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110358710B publication Critical patent/CN110358710B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G22/00—Cultivation of specific crops or plants not otherwise provided for
    • A01G22/20—Cereals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G7/00—Botany in general
    • A01G7/06—Treatment of growing trees or plants, e.g. for preventing decay of wood, for tingeing flowers or wood, for prolonging the life of plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Ecology (AREA)
  • Forests & Forestry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及一株侧孢芽孢杆菌及在制备抗病耐盐碱功能微生物制剂中的应用。一株侧孢芽孢杆菌(Baclilus laterosporus)Zhscb‑kxn，2019年3月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.17377。本发明首次公开了具有增强盐碱地玉米抗病和增产性能的侧孢芽孢杆菌Zhscb‑kxn，该菌株可广泛应用盐碱地土壤的玉米种植，可以显著提高玉米产量。

Description

一株侧孢芽孢杆菌及在制备抗病耐盐碱功能微生物制剂中的 应用
技术领域
本发明涉及一株侧孢芽孢杆菌及在制备抗病耐盐碱功能微生物制剂中的应用，属于微生物工程技术领域。
背景技术
土壤盐渍化是人类面临的生态危机之一，也是限制当前农业生产的主要环境因子。大量研究表明，利用生物措施改良盐碱地是目前最经济最有效的措施之一。在中国对耕地有影响的盐碱地总面积超过5亿亩，盐碱地面积在全世界所有国家中位居第三，其中具有农业发展潜力的占中国耕地总面积10％以上。盐碱地作为一种重要的土地资源，其土质改良和利用一直是农业研究领域的重点和热点，也是我国耕地后备资源开发与粮食增产潜在保障的基础。因此，进一步深入研究植物对盐碱胁迫的生理生化响应机制，在理论和实践上具有十分重要的意义。
玉米是我国第一大粮食作物，在保障国家粮食安全中占有重要地位，由于玉米对土壤要求不十分严格，土质疏松，土层深厚即可，且pH为5-8范围内均可种植玉米，因此，玉米对盐碱地、旱薄地、荒地等中低产田的开发、改良和利用是扩大玉米种植面积的有效途径。山东省中低产田面积约占山东省总耕地面积2/3，其中包括黄河三角洲地区近600万亩的盐碱耕地，由于受土壤盐碱瘠薄、施肥不尽合理、淡水资源匮乏等因素制约，盐碱地玉米单产不足300kg/亩。随着人口的增加与耕地日益减少之间的矛盾不断加剧，提高单位耕地面积的粮食产量和保护开发盐碱地已成为是缓解粮食压力、保障粮食安全的关键措施之一。越来越多的研究结果表明，在作物生长过程中增加微生物能够有效增强植物抗病性提高粮食产量、改善作物品质。
侧孢芽孢杆菌(Bacliluslaterosporus)为革兰氏阳性菌，其芽孢为椭圆形，侧生、中生或近中生，孢囊膨大，游离芽孢一边比另一边厚，呈现独木舟形。侧孢芽孢杆菌在多个领域具有重要应用，例如：1、其能够分泌大量的几丁质酶，抑制真菌类病害；2、可对弧菌大肠杆菌和杆状病毒等有害细菌具有很强的抑制作用；3、可减少鱼、虾病害发生，提高产量；4、可分解池中残饵、粪便、有机物等，消除蓝藻，净化水质；5、促进植物根系生长，增强根系吸收能力，从而提高作物产量：6、抑制植物体内外病原菌繁殖，减轻病虫害，降低农药残留；7、改良疏松土壤，解决土壤板结现象，从而活化土壤，提高肥料利用率；8、增强植物新陈代谢，促进光合作用和强化叶片保护膜，抵抗病原菌；9、增强光合作用，提高化肥利用率，降低硝酸盐含量；10、固化若干重金属，降低植物体内重金属含量正是由于侧孢芽孢杆菌的上述诸多用途，从而在畜牧业、饲料业、农药、肥料、杀菌、园林业、养殖业、农作物种植、苗木培育等多个领域中都具有广泛的应用，且其应用领域和新的用途也一直在研究和拓展中。
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilus)在污水处理及生物肥发酵或发酵床制作中应用相当广泛，是一种多功能的微生物。在治理环境污染和农业增产中发挥重要作用。
微生物肥料是活体肥料，是二十一世纪的新型肥料，是一种低碳、纯天然、无毒、无害、无污染的有机微生物菌剂。它主要靠大量有益微生物的生命活动代谢来完成，具有提高土壤肥力，增加土壤中有益微生物数量及活性，改善土壤性状，防止土壤板结，提高土壤保肥、保水，抗寒能力，增强作物抗病能力，增加土壤中的有机质，阻止病原菌入侵，减少植物的病虫害生长，促进农作物生长，提高农作物产量，改善和还原农产品品质等功能。侧孢芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌协同作用于玉米等可降低植物体内硝酸盐含量20％以上，能降低重金属含量，可使果实中可溶性糖含量、淀粉含量、游离氨基酸等含量提高。增加产量，提高经济效益。
中国专利文献CN106834179A(申请号201710098359.0)公开了一种侧孢芽孢杆菌的新型培养方法，所述方法包括如下步骤：S1：侧孢芽孢杆菌菌株活化，无菌水冲洗，得到种子液；S2：使用第一培养液对种子液进行扩增培养，得到第一扩增培养液；S3：使用第二培养液对第一扩增培养液进行培养，得到第二扩增培养液；S4：第二扩增培养液进行液体发酵培养，得到发酵液；S5：将发酵液淋入固体培养基中进行固体发酵，并进行后处理，得到侧孢芽孢杆菌发酵菌剂，从而完成侧孢芽孢杆菌的所述培养方法。
中国专利文献CN108676755A(申请号201810562169.4)公开了一种含芽孢杆菌的微生物液体肥，该液体肥为含有活菌数为2.0×108cfu/ml～2.5×108cfu/ml的芽孢杆菌的发酵液，所述芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的混合菌，地衣芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)W205，该菌株于2016年8月8日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.12817，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101；枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilibs)W309，该菌株于2016年8月8日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.12815，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。同时还公开其制备方法和在茶树种植中的应用。
由于不同作物在生长过程中对环境的要求不同，在盐碱环境下，不同的作物受到环境影响产量更为明显，如何筛选合适的微生物在特定环境下提高不同作物产量，成为目前微生物农业的精细化发展的主要方向。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一株侧孢芽孢杆菌及在制备抗病耐盐碱功能微生物制剂中的应用。
本发明技术方案如下：
一株侧孢芽孢杆菌(Baclilus laterosporus)Zhscb-kxn，2019年3月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.17377。
上述侧孢芽孢杆菌(Baclilus laterosporus)Zhscb-kxn的培养方法，步骤如下：
(i)将侧孢芽孢杆菌(Baclilus laterosporus)Zhscb-kxn接种于活化培养基中，在35～37℃条件下，活化培养22～26h，制得活化菌株；
(ii)将步骤(i)制得的活化菌株接种于扩大培养基中，在35～37℃、转速为200～240r/min条件下，扩大培养3～4d，制得种子液；
(iii)将步骤(ii)制得的种子液按体积百分比5％～8％的比例转接至固体发酵培养基中，在35～37℃条件下，发酵培养3～4d，制得侧孢芽孢杆菌(Baclilus laterosporus)Zhscb-kxn固体培养料。
根据本发明优选的，所述步骤(i)中，活化培养基每升组份如下：
蛋白胨5～8g，酵母浸膏2～3g，玉米粉8～10g，氯化钠2～3g，葡萄糖3～5g，琼脂15～20g，水定容至1L，pH 7～7.5。使用时121℃0.13Mpa灭菌40min。
根据本发明优选的，所述步骤(ii)中，扩大培养基每升组份如下：
葡萄糖18～22g、豆饼粉9～11g、玉米浆4.5～5.5g，水定容至1L，pH 6.8～7.2。使用时121℃0.13Mpa高压灭菌40min。
根据本发明优选的，所述步骤(iii)中，固体培养基组份如下，均为重量份：
30～35份麸皮，15～18份花生壳粉，13～15份干燥甘蔗渣，2～3份草木灰，0.2份氯化铵，0.01份纤维素酶，含水量为40～45％为宜，pH自然。使用时堆置发酵腐熟2～3d。
一种抗病耐盐碱功能微生物菌剂，含有有效微生物的活菌菌体浓度如下：侧孢芽孢杆菌(Baclilus laterosporus)Zhscb-kxn(1～3)×1010cfu/g、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilus)(3～6)×109cfu/g。
上述抗病耐盐碱功能微生物制剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilus)进行活化培养、扩大培养、发酵培养，制得枯草芽孢杆菌菌液；
(2)将上述侧孢芽孢杆菌(Baclilus laterosporus)Zhscb-kxn菌液与步骤(1)制得的枯草芽孢杆菌菌液按体积比(3～5)：1的比例混合后，接种于固态发酵培养基中，在温度33℃～37℃、通气量0.5～1.5m2/h的条件下，发酵培养3～4d，制得固态发酵菌剂；
(3)将步骤(2)制得的固态发酵菌剂经干燥、粉碎，制得抗病耐盐碱功能微生物制剂。
根据本发明优选的，所述步骤(1)中的枯草芽孢杆菌普通市售产品，可购自山东德佳生物科技有限公司。
根据本发明优选的，所述步骤(1)中的活化，温度35℃～37℃，活化时间24h，活化培养基每升组份如下：
蛋白胨5～8g，酵母浸膏2～3g，玉米粉8～10g，氯化钠2～3g，葡萄糖3～5g，琼脂15～20g，水1L，pH 7～7.5。使用时121℃0.13Mpa灭菌40min。
根据本发明优选的，所述步骤(1)中扩大培养，温度35℃～37℃、转速220r/min条件下，培养时间3～4d，扩大培养基每升组份如下：
葡萄糖20g、豆饼粉10g、玉米浆5g，水1L，pH 6.8～7.2。使用时121℃0.13Mpa高压灭菌40min。
根据本发明优选的，所述步骤(2)中，固态发酵培养基组份如下，均为重量份：
30～35份麸皮，15～18份花生壳粉，13～15份干燥甘蔗渣，2～3份草木灰，0.2份氯化铵，0.01份纤维素酶，含水量40％～45wt％，pH自然。使用时堆置发酵2～3d。
根据本发明优选的，所述步骤(2)中，接种量为固态发酵培养基质量的5～10％。
根据本发明优选的，所述步骤(3)的干燥条件为：温度45～50℃，通气量1.8～3m2/h，干燥至水分含量小于等于15％。
上述抗病耐盐碱功能微生物制剂在盐碱地种植玉米中的应用。
根据本发明优选的，所述应用，抗病耐盐碱功能微生物菌剂的施用量为每亩地1～2kg，施用于作物根际区域，田间持水量在30～40％。
有益效果
1、本发明首次公开了具有增强盐碱地玉米抗病和增产性能的侧孢芽孢杆菌(Baclilus laterosporus)Zhscb-kxn，该菌株可广泛应用盐碱地土壤的玉米种植，可以显著提高玉米产量；
2、本发明制备获得了含有侧孢芽孢杆菌(Baclilus laterosporus)Zhscb-kxn与枯草芽孢杆菌的抗病耐盐碱功能微生物制剂，该制剂能显著提高盐碱地种植条件下玉米的光合速率、可溶性糖含量、淀粉含量、游离氨基酸和可溶性蛋白含量，进而提高玉米的抗病性和产量，并且可以显著提高玉米的耐盐碱特性。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，若未特别指明，实施例中的培养基及实验条件均为常规培养基和实验条件。实施例中所用的试验材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例中所述侧孢芽孢杆菌(Baclilus laterosporus)Zhscb-kxn，2019年3月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.17377。
实施例1：侧芽孢杆菌(Bacliluslaterosporus)的获得及鉴定
1、菌株分离
从山东省东营市盐碱地植物根际土壤采集土壤样品。称取5g土壤样品于灭菌离心管中，加入5倍体积无菌水，将土壤滤去，取滤液接种于LB平板培养基，在37℃下恒温培养，直至菌落出现，用接种针挑取边缘生长良好的细菌，接种于新的LB平板培养基上，待新接种的内生菌长成菌落后，再挑取其边缘的内生菌划线培养，如此反复得到纯化，总共获得20个单菌落，选择1个抗盐碱、抗逆环境方面最优菌落命名为B191；
所述LB平板培养基包括：蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化钠10g/L，琼脂15g/L，pH值为7.0，在121℃灭菌40min。
2、菌株鉴定
(1)菌体形态观察：扫描电子显微镜下观察，菌株B191的芽孢为椭圆形，侧生、中生或近中生，孢囊膨大，游离芽孢一边比另一边厚，呈现独木舟形。B192单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。B193细胞呈杆状，革兰氏阳性菌，端生芽孢，无鞭毛。
(2)菌株的生理生化特征：菌株能够在含葡萄糖、果糖、蔗糖为碳源的培养基中生长；淀粉水解试验结果为阳性。
(3)菌株的分子生物学鉴定：采用细菌全基因组快速抽提试剂盒，提取菌株B191的全基因组，通过引物F9-27:(5-GAGTTTGATCCTGGCTCA G-3’)和R1525-1539(5’-AGAAAGGAGGTGATCCAGCC-3)进行PCR，然后测序分析。
测序结果经BLAST比对，鉴定菌株B191为侧芽孢杆菌。
试剂盒与引物以及测序均由济南宏美生物科技有限公司提供。
3、菌株突变
芽孢杆菌其特征在于通过复合诱变获得，包括以下几个步骤：
(1)先将20w紫外灯预热30min，取30mL浓度为108CFU/mL的普通侧芽孢杆菌种子液至灭菌的培养皿，放置在磁力搅拌器上搅拌，调整照射距离为45cm，打开皿盖，搅拌照射5s；诱变后所有操作均在红光下进行；
(2)再将普通菌株种子液中加入灭菌的4mol/L NaNO2溶液，使NaNO2浓度达到500mmol/L，充分混匀后反应1h，即得到诱变菌株。重复(1)(2)步骤，得到不同突变菌株，进行筛选。
(3)将得到的突变菌株接种于含盐量为3％的BHI平板培养基中，35℃恒温培养筛选耐盐活性较强的菌株进行下一步的试验。将筛选的菌株BHI平板划线培养，病原菌：假单孢杆菌等有害菌分别于6、12、18、24、36h用消毒灭菌棉签垂直交叉划线于平板上。继续培养24h后，观察并测量抑菌区域的宽度判断抑菌效果，从而筛选耐盐抗逆性菌株。
鉴定菌株Zhscb-kxn为侧芽孢杆菌，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2019年3月20日，保藏号为CGMCC No.17377。
实施例2：侧芽孢杆菌菌液的制备
上述侧孢芽孢杆菌(Baclilus laterosporus)Zhscb-kxn的培养方法，步骤如下：
(i)将侧孢芽孢杆菌(Baclilus laterosporus)Zhscb-kxn接种于活化培养基中，在37℃条件下，活化培养24h，制得活化菌株；
(ii)将步骤(i)制得的活化菌株接种于扩大培养基中，在35℃、转速为220r/min条件下，扩大培养4d，制得种子液；
(iii)将步骤(ii)制得的种子液按体积百分比5％～10％的比例转接至固体发酵培养基中，在37℃条件下，发酵培养3d，制得侧孢芽孢杆菌(Baclilus laterosporus)Zhscb-kxn微生物菌剂。
根据本发明优选的，所述步骤(i)中，活化培养基每升组份如下：
蛋白胨5g，酵母浸膏3g，玉米粉8g，氯化钠3g，葡萄糖3g，琼脂20g，水1L，pH 7.2。使用时121℃0.13Mpa灭菌40min。
根据本发明优选的，所述步骤(ii)中，扩大培养基每升组份如下：
葡萄糖20g、豆饼粉10g、玉米浆5g，水1L，pH 7.0。使用时121℃0.13Mpa高压灭菌40min。
根据本发明优选的，所述步骤(iii)中，固体培养基组份如下：
35份麸皮，15份花生壳粉，15份干燥甘蔗渣，2份草木灰，0.2份氯化铵，0.01份纤维素酶，含水量为45％为宜，pH自然。使用时堆置发酵腐熟3d。
实施例3：侧芽孢杆菌固态发酵
采用实施例1制备的种子，接种到具有恒温装置和通风装置的固态发酵车间中。固态发酵培养基为锯末300g，麸皮2500g，豆粕粉300g，碳酸钙30g，水1.5L，pH7.0。培养基经过121℃灭菌30min。接种量为10％(种子体积和固体培养基质量之比)，发酵温度为37℃，发酵开始通气量为0.5m2/h，发酵12h后通气量增加到1m2/h，发酵24h后通气量增加到1.5m2/h，发酵36小时结束。24h后，最终产品的含水量小于10％。将3种菌的固态发酵物按照6：2.5：1.5混合得到制剂，侧芽孢杆菌活菌数达到3.5×1010/g。
实施例4：功能微生物制剂实验室实验
利用盆栽方法对玉米幼苗施用上述制剂，通过检测玉米叶片的光合速率、可溶性糖含量、淀粉含量、游离氨基酸和可溶性蛋白含量，对试剂效果进行评价。
玉米叶片光合速率测定方法参照王秋兰、靳鲲鹏、曹晋军的《大气CO2浓度升高对玉米叶片光合生理指标及其产量的影响》(《山西农业科学》2018年12期)；可溶性糖含量测定参照王仲林、谌俊旭、程亚娇等的《干旱胁迫下玉米叶片可溶性糖光谱估测研究》(《四川农业大学学报》2018年8月)；淀粉含量检测方法参照陈殿宁、李才明、顾正彪等的《玉米淀粉浓度对酶法制备直链麦芽低聚糖的影响》(《食品与发酵工业》2019年第4期)；游离氨基酸和可溶性蛋白含量的检测方法参照李慧杰、齐家兴、单冬冬等的论文《转AAP1基因玉米游离氨基酸与可溶性蛋白质含量变化关系的研究》(《玉米科学》2017年第1期)。
其中：空白对照(CK)不加任何菌剂，3个对照组(1，2，3)添加原始侧芽孢杆菌菌株B191与枯草芽孢杆菌制备的制剂，实验组(4，5，6)加入侧孢芽孢杆菌Zhscb-kxn与枯草芽孢杆菌制备的制剂，二者除侧孢芽孢杆菌菌株不同外，其他制备过程均相同；
施用条件：平均每株玉米的是施加量为10g，施加后15天收样，保存处理每株叶位最顶端完全展开的叶片，用于生理生化指标的测定。测定结果如表1所示：
表1玉米各生化指标的对比
Figure GDA0002160095770000071
由上述结果可以看出，施加菌剂的玉米各观测指标优于空白对照，同时，实验组的玉米各项指标显著高于对照组。
实施例5：功能微生物制剂的田间试验
选取山东省滨州市沾化盐碱地试验区作为微生物制剂的试验田，选取20亩条件完全相同的小麦种植区域，选取20亩条件完全相同的玉米种植区域，在小麦对照组与施菌剂组水肥管理条件相同、玉米对照组与施菌剂组水肥管理条件相同的情况下，各种植区域10亩地施加微生物制剂，另10亩地施用普通市售侧孢芽孢杆菌菌剂作为对照，市售菌剂由北海强兴生物科技有限公司生产。通过检测小麦和玉米植株的死亡率、发病率，对试剂效果进行评价。实验结果如表2所示，对于玉米发病率减少10.9％，死亡率减少9.7％，产量平均增加644kg/hm2。果实品质明显提高，而对于小麦没有显著影响。
表2盐碱地生化指标表
Figure GDA0002160095770000072
通过上述对照可以看出，本申请所述菌剂在盐碱环境下对玉米产量提高非常显著，而对小麦增产效果并不明显，这说明本申请菌剂中的侧孢芽孢杆菌Zhscb-kxn较现有普通市售侧孢芽孢杆菌施用后，其对土壤环境的影响较为适合玉米作物生长不同阶段对土壤环境的要求，但并不完全适合小麦生长不同阶段对土壤环境的要求。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一株侧孢芽孢杆菌(Baclilus laterosporus)Zhscb-kxn，2019年3月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.17377。
2.权利要求1所述侧孢芽孢杆菌(Baclilus laterosporus)Zhscb-kxn的培养方法，步骤如下：
（i）将侧孢芽孢杆菌(Baclilus laterosporus)Zhscb-kxn接种于活化培养基中，在35～37℃条件下，活化培养22～26h，制得活化菌株；
（ii）将步骤（i）制得的活化菌株接种于扩大培养基中，在35～37℃、转速为200～240r/min条件下，扩大培养3～4d，制得种子液；
（iii）将步骤（ii）制得的种子液按体积百分比5%～8%的比例转接至固体发酵培养基中，在35～37℃条件下，发酵培养3～4d，制得侧孢芽孢杆菌(Baclilus laterosporus)Zhscb-kxn微生物菌剂。
3.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述步骤（i）中，活化培养基每升组份如下：
蛋白胨5～8g，酵母浸膏2～3g，玉米粉8～10g，氯化钠2～3g，葡萄糖3～5g，琼脂15～20g，水定容至1L，pH 7～7.5；使用时121℃ 0.13Mpa灭菌40min。
4.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述步骤（ii）中，扩大培养基每升组份如下：
葡萄糖18～22 g、豆饼粉9～11g、玉米浆4.5～5.5g，水定容至1L，pH 6.8～7.2；使用时121℃ 0.13Mpa高压灭菌40min。
5.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述步骤（iii）中，固体发酵培养基组份如下，均为重量份：
30～35份麸皮，15～18份花生壳粉，13～15份干燥甘蔗渣，2～3份草木灰，0.2份氯化铵，0.01份纤维素酶，含水量为40～45%为宜，pH自然，使用时堆置发酵腐熟2～3d。
CN201910678783.1A 2019-07-25 2019-07-25 一株侧孢芽孢杆菌及在制备抗病耐盐碱功能微生物制剂中的应用 Active CN110358710B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910678783.1A CN110358710B (zh) 2019-07-25 2019-07-25 一株侧孢芽孢杆菌及在制备抗病耐盐碱功能微生物制剂中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910678783.1A CN110358710B (zh) 2019-07-25 2019-07-25 一株侧孢芽孢杆菌及在制备抗病耐盐碱功能微生物制剂中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110358710A CN110358710A (zh) 2019-10-22
CN110358710B true CN110358710B (zh) 2021-03-16

Family

ID=68222291

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910678783.1A Active CN110358710B (zh) 2019-07-25 2019-07-25 一株侧孢芽孢杆菌及在制备抗病耐盐碱功能微生物制剂中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110358710B (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111172064B (zh) * 2020-01-06 2023-01-24 河南新仰韶生物科技有限公司 一株侧孢芽孢杆菌及其应用
CN111548948B (zh) * 2020-03-19 2022-05-06 宁夏农林科学院植物保护研究所（宁夏植物病虫害防治重点实验室） 一种用于盐碱地玉米茎基腐病防治的微生物菌剂jf及其制备方法
CN111662852A (zh) * 2020-07-15 2020-09-15 杨凌绿都生物科技有限公司 一种具有杀线功能的侧孢短芽孢的制备和应用
CN113186126A (zh) * 2021-04-16 2021-07-30 天津益农生物科技有限公司 一种微生物菌剂
CN114480197B (zh) * 2022-02-09 2022-10-04 山东农业大学 一株侧孢短芽孢杆菌及菌剂与其在生物药肥中的应用

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102976840A (zh) * 2011-09-05 2013-03-20 麻林涛 一种玉米专用复合微生物肥料及其制备方法
CN103965916A (zh) * 2014-05-07 2014-08-06 苟俊 一种土壤修复剂及其制备方法和土壤修复方法
CN106929426B (zh) * 2016-12-05 2020-06-09 中国科学院兰州化学物理研究所 一种用于马铃薯复合微生物菌剂及其制备方法
CN106906162A (zh) * 2017-03-24 2017-06-30 郑州绿动源生物科技有限公司 农用微生物菌肥及其制备方法与应用
CN107022512A (zh) * 2017-06-13 2017-08-08 寿光市固本培园农业科技有限公司 大棚作物秸秆还田生物菌剂及生物发酵方法
CN108586164A (zh) * 2018-01-26 2018-09-28 广西亿润生物科技有限公司 长效玉米专用复混肥及其制备方法
CN109156108B (zh) * 2018-07-31 2022-09-09 杭州市园林绿化股份有限公司 一种土壤盐碱地综合治理方法
CN109661963A (zh) * 2019-01-31 2019-04-23 广东传丰复合肥厂有限公司 一种衰退茶园的复壮方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN110358710A (zh) 2019-10-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110358710B (zh) 一株侧孢芽孢杆菌及在制备抗病耐盐碱功能微生物制剂中的应用
CN111117910B (zh) 一株路德维希肠杆菌pn6及其应用
CN110616171B (zh) 一株耐盐碱太平洋芽孢杆菌及其活菌制剂与应用
CN113151062B (zh) 贝莱斯芽孢杆菌ljbv19及其应用
CN107136122B (zh) 一种防治马铃薯晚疫病的生防菌剂
CN111073825B (zh) 具有抗植物土传病害作用的细菌及其用途
CN108192838B (zh) 一种具有降解无机磷和防病双重作用的解淀粉芽孢杆菌
CN110283751A (zh) 促进豆科植物生长的菌剂及其所用菌株与应用
CN110396028B (zh) 一种适用于油菜的生物有机肥料及应用
CN106929443B (zh) 一种弧菌lx6-2及其在制备生物海藻肥中的用途
CN105543149B (zh) 一株新的巨大芽孢杆菌及其应用
CN114774301B (zh) 一株拮抗食用菌病原真菌的内生枯草芽孢杆菌jl-b16及其应用
CN114262673B (zh) 贝莱斯芽孢杆菌及其在防治作物疾病中的应用
CN109735475B (zh) 一株耐酸产乙偶姻的解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN109136142B (zh) 一种白黄链霉菌及利用该微生物制备生防微生物菌剂的方法与应用
CN108048360B (zh) 一种具有降解有机磷和防病双重作用的枯草芽孢杆菌
CN110791459B (zh) 一株用于防控连作百合土传枯萎病的枯草芽孢杆菌及其应用
CN107325980A (zh) 一种耐辐射类芽孢杆菌kh9及其在生物抗蒸腾剂中的应用
CN101525584B (zh) 一种氟磺胺草醚农药残留降解菌及其生产的菌剂
CN101560482B (zh) 一种噻嗪酮农药残留降解菌及其生产的菌剂
CN114958691B (zh) 一种热噬淀粉芽孢杆菌及其应用
CN113832071B (zh) Brevibacillus halotolerans菌及其制备生防菌剂中的应用
CN115960766A (zh) 一种防治青枯病的微生物及其应用
CN101486985B (zh) 一种烟嘧磺隆农药残留降解菌及其生产的菌剂
CN111411046A (zh) 一种深色有隔内生真菌菌剂与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant