CN111548948B

CN111548948B - 一种用于盐碱地玉米茎基腐病防治的微生物菌剂jf及其制备方法

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Publication number: CN111548948B
Application number: CN202010197306.6A
Authority: CN
Inventors: 沙月霞; 周涛; 张丽霞; 任剑; 孙娇; 方秋香; 李明洋; 聂小雁; 邢敏
Original assignee: Institute of Plant Protection of Ningxia Academy of Agriculture and Forestry Sicience
Current assignee: Institute of Plant Protection of Ningxia Academy of Agriculture and Forestry Sicience
Priority date: 2020-03-19
Filing date: 2020-03-19
Publication date: 2022-05-06
Anticipated expiration: 2040-03-19
Also published as: CN111548948A

Abstract

本发明提供了一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂JF的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1S微生物菌剂粉的制备：将活化的索诺拉沙漠芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)B‑2、副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)B‑26、索诺拉沙漠芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)N‑16、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)N‑17单菌落分别进行种子培养和发酵培养，将经过培养的四种菌液用吸附剂吸附，制得微生物菌剂粉；四种微生物菌剂粉按照质量比1:1:1:1混合，得到混合粉剂；2S微生物菌剂JF的制备：将步骤1S中制得的微生物菌剂粉与辅料混合，制得微生物菌剂JF。本发明制备的微生物菌剂JF可以有效改良盐碱地和预防盐碱地玉米茎基腐病。

Description

一种用于盐碱地玉米茎基腐病防治的微生物菌剂JF及其制备方法

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种用于盐碱地玉米茎基腐病防治的微生物菌剂JF及其制备方法。

背景技术

盐碱地作为一种重要的土地资源，其土质改良和利用一直是农业研究领域的重点和热点，也是我国耕地后备资源开发与粮食增产潜在保障的基础。全球盐碱地面积占全球总面积的10％，在中国对耕地有影响的盐碱地总面积超过5亿亩，盐碱地面积在全世界所有国家中位居第三，其中具有农业发展潜力的占中国耕地总面积10％以上。盐碱地的pH值普遍偏高，过量的盐浓度会导致土壤退化，改变土壤渗透和基质潜力，并降低土壤微生物活性，对粮食产量形成了较大威胁。现阶段主要采取的是物理、化学、生物这三类方法来进行盐碱地修复，这几种方法耗费的成本较高，且很难从根本上解决土壤盐渍化问题，而解决这个问题就需从土质上入手，学者认为微生物肥料能从根本上改良土质。随着人们对生态环境的关注且土地资源日益短缺，以天然土壤微生物为主要成分的微生物菌剂应用在盐碱农业中越来越受到重视。微生物菌剂不仅能够改善土壤的质量，还能够与植物联合修复盐碱土壤，同时对玉米、番茄、鹰嘴豆等植物起到良好的防病、防虫和促生作用，提升其蛋白质含量、可溶性糖等，并增加其矿物质和氮的吸收。

玉米是世界上重要的粮食作物，种植规模仅排在小麦之后。随着全球气候条件的变化、重茬连作、高密度栽培等，玉米田生态环境随之改变，土壤中病原菌的优势菌群结构发生改变，病残体的积累数量越来越大，有益微生物群落结构和数量也发生较大变化。这些因素导致玉米田土壤微生物群落结构失衡，玉米茎基腐病的发生日趋严重。

玉米茎基腐病是由多种病原菌复合侵染引起的典型土传病害，是危害世界玉米生产的主要病害之一。一般情况下产量损失在10～25％，严重年份可以达到75％。抗性品种、化学种衣剂和增施钾肥是目前生产上的主要措施，但是品种选育时间较长，化学种衣剂的残留易污染生态环境，也会威胁人类健康，加重土壤的盐渍化，病原菌易产生抗药性。降低土壤中的病原菌数量与干扰其生长的土壤微生态环境是防治玉米茎基腐病的关键手段。因此，研发用于玉米茎基腐病的微生物菌剂对于粮食安全和玉米产业可持续发展具有重要的科学意义和应用价值。

众所周知，土壤中存活着多种病原菌，其数量与活性影响着土壤微生物群落结构的稳定，土壤微生物生态环境的不平衡会会加重农作物土传病害的危害。研究表明，农艺措施和生物制剂对土壤微生物群落多样性以及种群组成的影响显著。微生物菌剂广泛用于改善土壤微生物的生态环境，达到防病、防虫、促生和增产效果。吕宁等研究发现枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)可湿性粉剂滴施后对棉花黄萎病防治效果明显，土壤真菌、细菌和放线菌的数量与物种丰度随着施药量的增加而显著增加。Chen等采用棘孢木霉菌(Trichoderma asperellum)颗粒剂在播种前与化肥混合施入土壤，对玉米茎腐病防效显著。但是目前可以用于玉米病害防治的微生物菌剂较少，有必要研发适用于玉米茎基腐病防治的微生物菌剂。

发明内容

为了解决上述农业生产存在的技术问题及现有技术的不足，本发明提供了一种对盐碱地玉米茎基腐病有良好防治效果的微生物菌剂及其制备方法。

为达此目的，本发明采用以下技术方案。

在第一方面，提供一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂JF及其制备方法，包括以下步骤：

1S微生物菌剂粉的制备：将活化的索诺拉沙漠芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)B-2、副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)B-26、索诺拉沙漠芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)N-16、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)N-17单菌落分别进行种子培养和发酵培养，将经过培养的四种菌液用吸附剂吸附，制得微生物菌剂粉；四种微生物菌剂粉按照质量比1:1:1:1混合，得到混合粉剂；其中，所述四种菌株均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2020年3月5日；索诺拉沙漠芽孢杆菌B-2的保藏编号为CGMCC NO.19454，副地衣芽孢杆菌B-26的保藏编号为CGMCCNO.19449，索诺拉沙漠芽孢杆菌N-16的保藏编号为CGMCC NO.19448，短小芽孢杆菌N-17的保藏编号为CGMCC NO.19450；2S微生物菌剂JF的制备：将步骤1S中制得的混合粉剂与辅料混合，制得微生物菌剂JF。

在步骤1S中，种子培养：体积接种量为0.5～1％，培养温度为30～32℃，搅拌转速180～200rpm/min，培养时间12～15h；种子培养的培养基为NA液体培养基；其中，肉汁胨液体培养基(NA)：牛肉膏0.3％，蛋白胨0.7％，NaCl 0.3％，pH7.2。

在步骤1S中，发酵培养：培养温度为30～32℃，搅拌转速180～200rpm/min，培养时间48～56h，芽孢转化率为95％以上；发酵培养的培养基为NA液体培养基；其中，肉汁胨液体培养基(NA)：牛肉膏0.3％，蛋白胨0.7％，NaCl 0.3％，pH7.2。

在步骤1S之前，还包括索索诺拉沙漠芽孢杆菌B-2、所述副地衣芽孢杆菌B-26、所述索诺拉沙漠芽孢杆菌N-16和所述短小芽孢杆菌N-17的活化步骤，四种菌的活化时间均为24～48h，菌株B-2和B-26培养基选用Horikoshi I培养基，菌株N-16和N-17的培养基选自改良LB－I培养基和改良LB－II培养基中的一种；其中，Horikoshi I培养基(g/L)：葡萄糖10.0g，蛋白胨5.0g，酵母浸出物5.0g，K₂HPO₄ 1.0g，MgSO₄ 0.2g，Na₂CO₃ 10.0g(单独灭菌)，琼脂15～20g，pH 9.0，121℃灭菌20min；改良LB－I培养基(75.0g/L NaCl)：胰蛋白胨10.0g，酵母浸出物5.0g，NaCl 75.0g，琼脂15～20g，水1L，pH值为9.0，121℃灭菌20min；改良LB－II培养基(150.0g/L NaCl):胰蛋白胨10.0g，酵母浸出物5.0g，NaCl 150.0g，琼脂15～20g，水1L，pH值为9.0，121℃灭菌20min。

在步骤1S中，吸附剂选自麦麸、草炭和菌糠中的一种。

在步骤2S中，辅料包括：载体、腐殖酸、调节剂和微量元素。

在步骤2S中，载体为鸡粪有机肥；所述调节剂为硫酸钙(CaSO₄·2H₂O)；所述微量元素包括硫酸锌(ZnSO₄)、硫酸亚铁(FeSO₄·7H₂O)和硫酸钾(K₂SO₄)

所述鸡粪有机肥包含氮、五氧化二磷以及氧化钾。

在步骤2S中，微生物菌剂JF中芽孢杆菌的活菌数＞10亿CFU/g。

在第二方面，提供一种上述制备方法制得的改良盐碱地和预防玉米茎基腐病的微生物菌剂JF。

本发明的有益效果如下：本发明提供的制备方法制得的微生物菌剂JF，具有成本较低，运输方便，改良土壤和防病促生等微生态调控效果显著的特征。对盐碱地玉米农田土壤有较好的改良作用，有效降低土壤pH，增加土壤有机碳、有机质、硝态氮、全氮和速效钾含量；对盐碱地玉米茎基腐病预防效果在60％～70％；对玉米有明显的促生和增产效果，提高玉米出苗率72.65％，增加玉米株高45.97％、提高玉米茎粗43.48％，显著增加有效穗数、玉米穗粗、穗长、穗重和降低秃头率；影响土壤中真菌和细菌群落多样性和结构。本发明的微生物菌剂JF不含致病菌，不含重金属和有毒害化学物质，适合用于种植玉米的土壤处理，且不会对土壤造成额外负担，属于环保型的绿色微生物菌剂，对玉米产业可持续发展和盐碱地资源有效利用具有重要的科学意义和应用价值。

附图说明

构成本发明的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中:

图1是4种嗜盐碱菌株之间的相容性图片。

图2是盐碱地玉米种植前和种植后的田间试验图片。

图3是盐碱地玉米收获期田间试验图片。

图4是盐碱地玉米收获后的玉米穗图片。

图5是微生物菌剂施用后玉米农田土壤细菌群落结构的影响。

图6是微生物菌剂施用后玉米农田土壤真菌群落结构的影响。

图7是微生物菌剂施用后玉米农田土壤细菌群落的主坐标(PCoA)分析(OTU水平)。

图8微生物菌剂YF施用后玉米农田土壤真菌群落的主坐标(PCoA)分析(OTU水平)。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互任意组合。

本发明提供一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂JF及其制备方法，包括以下步骤：

1S微生物菌剂粉的制备：将活化的索诺拉沙漠芽孢杆菌B-2、副地衣芽孢杆菌B-26、索诺拉沙漠芽孢杆菌N-16和短小芽孢杆菌N-17单菌落分别进行种子培养和发酵培养，将经过培养的四种菌液用吸附剂吸附，制得微生物菌剂粉；四种微生物菌剂粉按照质量比1:1:1:1混合，得到混合粉剂；其中，所述四种菌株均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2020年3月5日；索诺拉沙漠芽孢杆菌B-2的保藏编号为CGMCC NO.19454，副地衣芽孢杆菌B-26的保藏编号为CGMCC NO.19449，索诺拉沙漠芽孢杆菌N-16的保藏编号为CGMCC NO.19448，短小芽孢杆菌N-17的保藏编号为CGMCCNO.19450；2S微生物菌剂JF的制备：将步骤1S中制得的混合粉剂与辅料混合，制得微生物菌剂JF。

在步骤1S中，吸附剂选自麦麸、草炭和菌糠中的一种。

在步骤2S中，载体为鸡粪有机肥；调节剂为硫酸钙(CaSO₄·2H₂O)；所述微量元素选用硫酸锌(ZnSO₄)、硫酸亚铁(FeSO₄·7H₂O)和硫酸钾(K₂SO₄)

在步骤2S中，鸡粪有机肥包含氮、五氧化二磷以及氧化钾。

在步骤2S中，微生物菌剂JF中芽孢杆菌的活菌数＞10亿CFU/g。

实施例

(1)嗜盐碱型拮抗菌之间的相容性

参考Barbosa的测定方法，在Horikoshi I或改良LB－I或者改良LB－II培养基固体培养基平板上一半划线接种一种功能菌株，同时在其另一半垂直划线接种另一种功能菌株,每个处理重复3次。将平板放置在30℃的生化培养箱中培养，24h后观察和记录两菌株之间的相容性反应。两菌株之间不产生抑菌条带的为相容，反之为不相容。相容性结果见图1。

Horikoshi I培养基(g/L)：葡萄糖10.0g，蛋白胨5.0g，酵母浸出物5.0g，K₂HPO₄1.0g，MgSO₄ 0.2g，Na₂CO₃ 10.0g(单独灭菌)，琼脂15～20g，pH 9.0，121℃灭菌20min。

改良LB－I培养基(75.0g/L NaCl)：胰蛋白胨10.0g，酵母浸出物5.0g，NaCl75.0g，琼脂15～20g，水1L，pH值为9.0，121℃灭菌20min。

改良LB－II培养基(150.0g/L NaCl):胰蛋白胨10.0g，酵母浸出物5.0g，NaCl150.0g，琼脂15～20g，水1L，pH值为9.0。以上培养基均置于高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌20min。

(2)微生物粉剂的制备

菌种活化：将超低温保藏的索诺拉沙漠芽孢杆菌B-2和副地衣芽孢杆菌B-26接种到Horikoshi I培养基上，索诺拉沙漠芽孢杆菌N-16和短小芽孢杆菌N-17和接种到改良LB－I或者改良LB－II培养基上，在培养箱中30℃条件下培养24～48h。

微生物菌剂粉剂的制备：将活化24h～48h的索诺拉沙漠芽孢杆菌B-2、N-16、短小芽孢杆菌N-17和副地衣芽孢杆菌B-26分别接种到的装有液体NA培养基的种子发酵罐中，30℃条件下，200rpm/min振荡培养12h。分别将四种菌株种子发酵液按照6％的比例转移到批量发酵罐中，30℃条件下，200rpm/min振荡培养48h。培养好的4种菌液用草炭吸附制成粉剂，之后进行包装，按照1:1:1:1的质量比混合均匀。

(3)微生物菌剂JF的配制

微生物菌剂JF(100kg)主要由以下成分组成：索诺拉沙漠芽孢杆菌B-2、N-16和短小芽孢杆菌N-17和副地衣芽孢杆菌B-26作为功能菌制备的微生物菌剂粉剂54kg、腐殖酸5kg、硫酸钙400g(0.4％)、硫酸锌200g(0.2％)、硫酸亚铁200g(0.2％)、硫酸钾200g(0.2％)，载体为鸡粪有机肥40kg(包含氮、五氧化二磷以及氧化钾)，以上组分混合均匀制成微生物菌剂JF，芽孢杆菌的活菌数达到10亿CFU/g以上，低温保存。

测试例

(1)微生物菌剂JF在盐碱地玉米农田土壤的拌土处理

在宁夏回族自治区平罗县黄渠桥盐碱荒地种植糯玉米-旱糯早60，种植前将微生物菌剂JF粉剂均匀撒施在农田土壤表面(40kg/亩)，然后用旋耕机旋耕(深度为20～30cm左右)，将微生物菌剂与土壤均匀混合。设计2个处理：微生物菌剂YF；空白对照CK：不施用任何农药和肥料，试验大区面积为200m²，每个处理4个重复小区，结果见图2。以下研究均在此实验田进行。

(2)微生物菌剂JF对盐碱地玉米田土壤的改良作用

玉米种植45d(乳熟期)采集农田土壤(距离植株15cm，深度为0～20cm)，土壤样本采用冰盒带回实验室，检测土壤pH值、有机碳、有机质、全氮、全磷、硝态氮、有效磷、速效钾等理化指标，结果见表1和表2。

表1微生物菌剂YF对盐碱地玉米农田土壤的改良作用(1)

表2微生物菌剂YF对盐碱地玉米农田土壤的改良作用(2)

(3)微生物菌剂JF对盐碱地玉米的促生作用

糯玉米品种旱糯早60在盐碱地根据不同处理种植14d后调查出苗率，种植30d后测量株高和茎粗(第一节部位植株周长)，计算微生物菌剂JF对盐碱地玉米的促生效果，结果见表3和图3。

表3微生物菌剂JF对盐碱地玉米的促生效果

(4)微生物菌剂JF对盐碱地玉米的促产作用

玉米成熟期(种植约80d)调查结穗率和有效穗数，采集成熟玉米穗，测量糯玉米穗长、鲜重、秃头、穗粒数、行粒数、穗粗(穗中部位置的周长)，评价微生物菌剂JF对盐碱地玉米的促产效果，结果见表4、表5和图4。

表4微生物菌剂JF对盐碱地玉米的促产效果(1)

表5微生物菌剂JF对盐碱地玉米的促产效果(2)

(5)微生物菌剂JF对盐碱地玉米茎基腐病的防治效果

在玉米乳熟期调查盐碱地玉米茎基腐病的发病率和病情指数，发病率以有无病斑为主。茎基腐病调查方法按《农药田间药效试验准则》，玉米茎基腐病分级标准(植株个体受害程度)：1级：全株生长正常，中下部叶片出现青枯/青黄枯症状，茎基生长正常，果穗生长正常；3级：全株叶片出现青枯症状，茎基生长正常，果穗生长正常；5级：全株叶片出现典型青枯症状，茎基部变色且稍有水浸状，果穗基本正常；7级：植株叶片出现典型青枯症状，茎基部明显变软但不倒状，果穗下垂，籽粒不饱满；9级：全株枯死且倒伏，茎基部维管束破裂，籽粒干瘪。微生物菌剂JF对盐碱地玉米茎基腐病的防治效果见表6。

表6微生物菌剂JF对盐碱地玉米茎基腐病的防治效果

(6)微生物菌剂JF对盐碱地玉米农田土壤微生物群落结构的影响

玉米乳熟期采集农田土壤(距离植株15cm，深度为0～20cm)，土壤样本采用冰盒带回实验室。提取各个处理组的土壤样本基因组总DNA，然后利用1％琼脂糖凝胶电泳检测抽提的基因组DNA。细菌扩增引物为338F：5′-barcode-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′，806R：5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′，对细菌16S rRNA基因V3–V4可变区进行PCR扩增，引物由上海美吉生物医药科技有限公司设计合成，测序区域合成带有barcode的特异引物。PCR正式试验采用20μL反应体系：10×PCR Buffer 2μL，2.5mmol/L dNTPs 2μL，5μmol/L正向引物0.8μL，5μmol/L反向引物0.8μL，rTaq Polymerase 0.2μL，BSA 0.2μL，Template DNA10 ng，补ddH2O至20μL。PCR扩增条件：95℃3min；循环数×(95℃30s，55℃30s，72℃45s)；72℃10min，10℃直到反应结束。对第二轮PCR扩增产物用2％琼脂糖凝胶电泳检测，切胶回收PCR产物，Tris_HCl洗脱；2％琼脂糖电泳检测。将PCR产物用QuantiFluor^TM-ST蓝色荧光定量系统(Promega公司)进行检测定量，之后进行相应比例的混合。混合后的产物用Illumina公司的Miseq 2×300平台测序。微生物菌剂JF对盐碱地玉米农田土壤细菌群落结构的影响见图5。

真菌扩增引物为ITS1F：5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGC-3'，ITS2R 5′-CTCGGACGAGGATCCTCGCC-3′，ITS1-ITS2区进行PCR扩增。ITS扩增的聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction，PCR)体系(25μL)：ddH2O 17.25μL，Bufferl 2.5μL，dNTPs 2μL，引物ITS1F 1μL，引物ITS2R 1μL，HiFi酶0.25μL，模板DNA 1μL。PCR反应条件：93℃预变性3min，93℃变性45s，57℃复性45s，72℃延伸90s，35个循环。扩增产物回收后，由上海美吉生物医药科技有限公司完成测序。微生物菌剂JF对盐碱地玉米农田土壤微生物真菌群落结构的影响见图6。

(7)微生物菌剂JF对盐碱地玉米农田土壤微生物群落多样性的影响：

高通量测序得到的原始数据进行质量控制和软件拼接，过滤掉低质量的序列。将有效序列相似性在≥97％序列聚类成为分类单元(Operational Taxonomic Units)。再用QIIME软件进行单样品组成分析，计算样品的Coverage、Chao、Shannon指数等。Shannoneven值数值越大，说明群落均匀度越低。Shannon值越大，说明群落多样性越高。Coverage是覆盖度指数，表征微生物样本序列的检测概率，数值越高表明检测出的序列概率越高，能够反映样本中微生物的真实情况。Sobs指丰富度指数，数值越大丰富度越高。微生物菌剂JF对盐碱地玉米农田土壤细菌群落多样性的影响见表7和图7。微生物菌剂JF对盐碱地玉米农田土壤微生物真菌群落多样性的影响见表8和图8。

表7微生物菌剂JF对盐碱地玉米农田土壤微生物细菌群落多样性的影响

表8微生物菌剂JF对盐碱地玉米农田土壤微生物真菌群落多样性的影响

需要说明的是：在本文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包含一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个…”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制。尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims

1.一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂JF的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1S微生物菌剂粉的制备：将活化的索诺拉沙漠芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)B-2、副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)B-26、索诺拉沙漠芽孢杆菌(Bacillussonorensis)N-16、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)N-17单菌落分别进行种子培养和发酵培养，将经过培养的四种菌液用吸附剂吸附，制得微生物菌剂粉；四种微生物菌剂粉按照质量比1:1:1:1混合，得到混合粉剂；

其中，所述四种菌株均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2020年3月5日；所述索诺拉沙漠芽孢杆菌B-2的保藏编号为CGMCCNO.19454，所述副地衣芽孢杆菌B-26的保藏编号为CGMCC NO.19449，索诺拉沙漠芽孢杆菌N-16的保藏编号为CGMCC NO.19448，短小芽孢杆菌N-17的保藏编号为CGMCC NO.19450；

2S微生物菌剂JF的制备：将步骤1S中制得的混合粉剂与辅料混合，制得微生物菌剂JF。

2.如权利要求1所述的微生物菌剂JF的制备方法，其特征在于，在步骤1S中，所述种子培养：体积接种量为0.5～1％，培养温度为30～32℃，搅拌转速180～200rpm/min，培养时间12～15h；种子培养的培养基为肉汁胨液体培养基；

其中，肉汁胨液体培养基：牛肉膏0.3％，蛋白胨0.7％，NaCl 0.3％，pH7.2。

3.如权利要求1所述的微生物菌剂JF的制备方法，其特征在于，在步骤1S中，所述发酵培养：培养温度为30～32℃，搅拌转速180～200rpm/min，培养时间48～56h，芽孢转化率为95％以上；发酵培养的培养基为肉汁胨液体培养基；

4.如权利要求1所述的微生物菌剂JF的制备方法，其特征在于，在步骤1S之前，还包括所述索诺拉沙漠芽孢杆菌B-2、所述副地衣芽孢杆菌B-26、所述索诺拉沙漠芽孢杆菌N-16和所述短小芽孢杆菌N-17的活化步骤，四种菌的活化时间均为24～48h，菌株B-2和B-26培养基选用Horikoshi I培养基，菌株N-16和N-17的培养基选自改良LB－I培养基和改良LB－II培养基中的一种；

其中，每L所述Horikoshi I培养基包括：葡萄糖10.0g，蛋白胨5.0g，酵母浸出物5.0g，K₂HPO₄ 1.0g，MgSO₄ 0.2g，单独灭菌的Na₂CO₃ 10.0g，琼脂15～20g，pH 9.0，121℃灭菌20min；

每L所述改良LB－I培养基包括：胰蛋白胨10.0g，酵母浸出物5.0g，NaCl 75.0g，琼脂15～20g，水1 000mL，pH值为9.0，121℃灭菌20min；

每L所述改良LB－II培养基包括:胰蛋白胨10.0g，酵母浸出物5.0g，NaCl 150.0g，琼脂15～20g，水1 000mL，pH值为9.0，121℃灭菌20min。

5.如权利要求1所述的微生物菌剂JF的制备方法，其特征在于，在步骤1S中，所述吸附剂选自麦麸、草炭和菌糠中的一种。

6.如权利要求1所述的微生物菌剂JF的制备方法，其特征在于，在步骤2S中，所述辅料为：载体、腐殖酸、调节剂和微量元素。

7.如权利要求6所述的微生物菌剂JF的制备方法，其特征在于，在步骤2S中，所述载体为鸡粪有机肥；所述调节剂为硫酸钙；所述微量元素为硫酸锌、硫酸亚铁和硫酸钾。

8.如权利要求7所述的微生物菌剂JF的制备方法，其特征在于，在步骤2S中，所述鸡粪有机肥包含氮、五氧化二磷以及氧化钾。

9.如权利要求1所述的微生物菌剂JF的制备方法，其特征在于，在步骤2S中，所述微生物菌剂JF中芽孢杆菌的活菌数＞10亿CFU/g。

10.一种如权利要求1～9任一项所述制备方法制得的防治玉米茎基腐病的微生物菌剂JF。