CN110332917B - 一种基于酶标仪分析方法快速测量微丸包衣膜厚度的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种基于酶标仪分析方法快速测量微丸包衣厚度的方法，包括如下步骤：确定指示剂，所述指示剂为具有紫外吸收的物质；将指示剂按设定质量比加入微丸的包衣混合物中；将含有指示剂的包衣混合物进行包衣；配制指示剂的标准溶液，并配制各个浓度的指示剂溶液，将酶标仪调到指示剂对应的吸收波长处，测量各个浓度的指示剂溶液的吸光度，建立吸光度‑浓度标准曲线；取包衣后的微丸，将其溶解于设定体积的液体中后，过滤，利用酶标仪在相应的吸收波长处测量溶液的吸光度，以确定溶液中指示剂的浓度，以计算包衣膜的厚度。该方法能够有效精确快速的测定微丸包衣厚度。

Description

一种基于酶标仪分析方法快速测量微丸包衣膜厚度的方法
技术领域
本发明属于药品检测技术领域，具体涉及一种基于酶标仪分析技术快速测量微丸包衣膜厚度的方法。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
药物微丸是一种常用的剂型，而将活性药物成分溶液/悬浮液分层置于非活性球形丸芯上是一种常用的药物微丸快速成型技术，一般是将包衣液(聚合物溶液或混悬液)通过喷头雾化后与悬浮的颗粒接触碰撞，在颗粒表面形成薄膜层。膜涂层工艺用于各种目的，如检测外观变化、掩盖味道、改善药物稳定性或达到药物缓控释的目的。而最终产品的涂覆性能在很大程度上取决于涂膜厚度、均匀性及外貌。太薄的涂层不能满足预期的缓释行为，而太厚的涂层可能导致延迟溶解，以及在涂层时间和材料消耗方面效率低下。因此，必须精确检测涂层厚度，以保证固体剂型产品的质量。
目前测量包衣厚度的有荧光显微镜法、图像分析法、太赫兹脉冲成像(TPI)、扫描电镜法(SEM)、近红外化学成像法、马尔文激光粒度仪法、千分尺测量法，称重法等，发明人发现，扫描电镜法、太赫兹脉冲成像(TPI)、扫描电镜法(SEM)等方法价格昂贵，千分尺测量法则消耗大量时间。生产中普遍采用的测量方法为称重法，即先测出包衣前素芯的整体质量，然后再测量出包衣后药品的总质量，最后根据包衣质量和所有药片的表面积计算包衣厚度，这种方法较为简单，但是测量误差较大。
发明内容
针对上述现有技术中存在的技术问题，本发明的目的是提供一种基于酶标仪分析方法快速测量微丸包衣厚度的方法。
为了解决以上技术问题，本发明的技术方案为：
一种基于酶标仪分析方法快速测量微丸包衣厚度的方法，包括如下步骤：
确定指示剂，所述指示剂为具有紫外吸收的物质；
将指示剂按设定质量比加入微丸的包衣混合物中；
将含有指示剂的包衣混合物进行包衣；
配制指示剂的标准溶液，并配制各个浓度的指示剂溶液，将酶标仪调到指示剂对应的吸收波长处，测量各个浓度的指示剂溶液的吸光度，建立吸光度-浓度标准曲线；
取包衣后的微丸，将其溶解于设定体积的液体中后，过滤，利用酶标仪在相应的吸收波长处测量溶液的吸光度，以确定溶液中指示剂的浓度，以计算包衣膜的厚度。
该种方法能够精确快速地测定微丸包衣的厚度。
在一些实施例中，所述指示剂为偶氮染料。
胭脂红通常作为食用药用染色剂，通常指示剂的选择是基于是否能够有明显区分于包衣其他材料的紫外吸收峰，如常用的胭脂红、等偶氮染料，或其他具有紫外吸收的染料，若包衣材料本身存在对紫外有强吸收的物质也可以自身作为指示剂。
进一步的，所述指示剂与包衣膜总质量之比为1：90-100。
在一些实施例中，包衣膜厚度的计算公式为：
Figure BDA0002122307370000021
Ns:样品批数；Np：每批微丸的个数；C j:每批微丸(Np个)的浓度；Ci：每个微丸包衣中指示剂的浓度；
Figure BDA0002122307370000022
n:指示剂与微丸包衣总质量比的比值；ρ：微丸包衣粉末密度；D:微丸初始平均粒径；V：溶解微丸的溶液体积。
采用公式(1)和公式(2)，可以快速计算出微丸中包衣的厚度。
在一些实施例中，将微丸溶解于水或其他能够溶解指示剂的有机溶剂中。根据指示剂在溶剂中的溶解度确定溶剂所需的体积。
进一步的，微丸在液体中的溶解时间为1-3h，此时间根据溶解情况而定，若无可见的溶质颗粒或液滴时，即视为完全溶解，此溶解时间即为微丸的溶解时间，务必保证微丸包衣材料中指示剂完全溶解。
在一些实施例中，所述吸光度-标准曲线的线性范围为：0.002-0.02mg/ml。
在一些实施例中，采用0.46μm滤膜对溶解有微丸的液体进行过滤。以提高检测的准确性。
本发明的有益效果为：
该方法能够有效精确快速的测定微丸包衣厚度，为近红外光谱技术、拉曼光谱技术等PAT提供了准确的一级数据，使得在线监测包衣过程厚度的变化成为可能，能够准确的确定包衣终点，极大地提高了生产效率。
附图说明
构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。
图1为本发明微丸包衣的示意图；
图2为本发明实施例的胭脂红标准曲线图；
图3为本发明实施例的微丸包衣膜时间-吸光度图；
图4为本发明实施例的包衣180分钟扫描电镜图；
图5为本发明实施例的包衣360分钟扫描电镜图；
图6为本发明实施例的包衣360分钟扫描电镜图。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
实施例1
胭脂红作为指示剂进行包衣微丸薄膜厚度的测量：
1.包衣材料粉末密度测量
包衣材料：HPMC(112g)，胭脂红(16.0096g)，水(1600ml)，蔗糖丸芯(1600g，960-1150μm)将HPMC与胭脂红按包衣材料质量比混合，待粉末混合均匀时用氦比重仪测得其密度为密度1.2848g/cm3。
2.包衣微丸的获取
采用底喷式流化床，取不同时间点不同厚度的包衣微丸，用烘箱烘24h，用于包衣膜厚度的测定。
3.包衣微丸薄膜厚度的测量
微丸包衣膜的测量方法，具体包括如下步骤：
(1)将配置好的具有确切质量比的包衣固体粉末(含具有紫外吸收的指示剂粉末质量与总固体粉末质量比为1：n)，用氦比重仪测出混合粉末密度ρ后用适当液体溶解均匀。
(2)择取包衣后的微丸，微丸是已知粒径范围的均匀球体，其初始平均粒径为D。
(3)称取干燥后一定质量的包衣微丸，取出Ns份Np个颗粒装的微丸，分别用V ml的相应液体溶解，过滤膜以待测用。
(4)将配置好的溶液加到96孔板，将酶标仪调到指示剂对应吸收波长，测量其吸光度，选取五个浓度点，建立吸光度-浓度标准曲线。
(5)将配置好的溶液加到96孔板，将酶标仪调到指示剂对应吸收波长，测量其吸光度，代入标准曲线求出每批微丸的对应浓度Cj。
(6)根据下列公式(1)求出每个微丸包衣膜胭脂红浓度，根据公式(2)求出包衣膜厚度。
Figure BDA0002122307370000041
Ns:样品批数，Np：每批微丸的个数，C j:每批微丸(Np个)的浓度，Ci：每个微丸包衣染料的浓度；
Figure BDA0002122307370000042
n:指示剂粉末与总固体粉末质量比，ρ：混合粉末密度，D:微丸初始平均粒径，V：溶解微丸的溶液体积。
标准曲线溶液的制备:
精密称胭脂红标准品0.1034g置100mL容量瓶中，加双蒸水稀释至刻度，摇匀，得1.034mg/ml标准液，为备用溶液。精密量取备用溶液20μL，60μL，100μL，140μL，180μL分别置于10m L容量瓶中加双蒸水溶液稀释至刻度，摇匀，即得浓度分别为0.002068mg/ml，0.006204mg/ml，0.01034mg/ml，0.014476mg/ml，0.018612mg/ml的溶液，分别取上述5个不同浓度的贮备液200μL于96孔板，在波长为508nm处测得各浓度的吸光度(A)扣除空白溶剂所测得吸光度值，结果见表1，以(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线,得回归方程Y＝18.381X+0.005,R2＝0.9988。标准曲线见图2，结果胭脂红在浓度0.002～0.02mg/ml范围，存在良好的线性关系。
表1胭脂红标准品浓度-吸光度值
Figure BDA0002122307370000043
Figure BDA0002122307370000051
包衣微丸样品制备：
称取包衣时间分别为18min，90min，180min，270min，360min，379min的样品2g，分别从中随机挑选10批10个微丸用6ml双蒸水溶解，溶解时间2h，使得染料完全溶解，过0.46μm滤膜，得贮备液，从中取200μL于96孔板，测得吸光度值，结果见表2。
表2包衣微丸吸光度
Figure BDA0002122307370000052
将测得的吸光度值代入胭脂红标准曲线回归方程可得胭脂红浓度，将求得的浓度代入方程(1)可得每个微丸包衣中胭脂红浓度，将浓度值代入方程(2)可得包衣膜厚度。结果如表3所示。
表3微丸包衣膜厚度
Figure BDA0002122307370000053
Figure BDA0002122307370000061
4.分析方法学的验证
(1)准确度
准确度系指采用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，本发明用扫描电镜(SEM)方法进行外部验证，若粒径测量值与酶标仪测量法所得粒径值无统计学差异，则说明酶标仪测量粒径具有良好得准确性。具体操作如下：称取三个不同包衣时间微丸2g，分别从中随机挑选出微丸，平行测量三次取平均值，与酶标仪测得方法值作对比，若无明显差异，则证明本发明方法具有良好的准确性。
用扫描电镜方法测得包衣时间为180min，360min，379min的包衣薄膜厚度见表4，与酶标仪测得的包衣厚度值对比见表5，扫描电镜图见图4，图5，图6，其结果证明本发明方法准确性良好。
表4扫描电镜包衣膜厚度测量值
Figure BDA0002122307370000062
表5酶标仪法和扫描电镜法对比值
Figure BDA0002122307370000063
Figure BDA0002122307370000071
(2)精密度
精密度是指在规定条件下，同一均匀样品经多次取样进行一系列检测所得结果之间的接近程度。精密度一般用相对标准偏差(RSD)表示，取样检测次数应至少6次。精密度可以从三个层次考察：重复性、中间精密度、重现性。
重复性：是在相同的操作条件下、较短时间间隔内，由同一分析人员测定所得结果的精密度。一般是用100％浓度水平的样品测定6次的结果进行评价。
称取包衣终点微丸2g，从中取10个微丸，用6ml双蒸水溶解，从中吸取200μL液体平行测定6次，计算RSD值应该小于2％。如表6所示：
表6重复性实验结果
Figure BDA0002122307370000072
中间精密度：同一实验室，在日期、分析人员、仪器等内部条件改变时，测定结果的精密度。具体操作同重复性操作，改变日期、分析人员、仪器，所得结果RSD值应该小于2％。
由不同操作人员，在不同日期称取包衣终点微丸2g，从中取10个微丸，用6ml双蒸水溶解，从中吸取200μL液体用不同仪器平行测定6次，总RSD值应该小于2％。结果如表7所示。
表7中间精密度实验结果
Figure BDA0002122307370000073
(3)检测限与定量限
检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。药品的鉴别试验和杂质检查方法，均应通过测试确定方法的检测限。检测限仅作为限度试验指标和定性鉴别的依据，没有定量意义。定量限系指试样中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应符合准确度和精密度要求。对微量或痕量药物分析、定量测定药物杂质和降解产物时，应确定方法的定量限。
常用的方法如下：采用基于响应值标准偏差和标准曲线斜率法，按照检测限LOD＝3.3δ/S公式计算，按照定量限LOQ＝10δ/S公式计算，δ：响应值的偏差；S：标准曲线的斜率。
根据上述建立得胭脂红标准曲线曲线，可根据以下公式求出检测限和定量限：其中δ为测量20次双蒸水对应的标准偏差值为0.001076，S为胭脂红标准曲线线性回归方程的斜率18.391。
检测限按照LOD＝3.3δ/S公式计算，可得0.000193mg/ml。
定量限按照LOQ＝10δ/S公式计算，可得0.000585mg/ml。
(4)线性：线性系指在设计的范围内，测定响应值与试样中被测物浓度呈比例关系的程度。
取五个不同时间点的包衣微丸，称取2g包衣微丸，称取包衣终点微丸2g，从中取10个微丸，用6ml双蒸水溶解，从中吸取200μL液体于96孔板，在酶标仪波长508nm处测得吸光度值。结果如图3所示，以吸光度(A)为纵坐标，包衣时间(T)为横坐标，绘制线性图，并求出相关系数。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种基于酶标仪分析方法快速测量微丸包衣厚度的方法，其特征在于：包括如下步骤：
确定指示剂，所述指示剂为具有紫外吸收的物质；
将指示剂按设定质量比加入微丸的包衣混合物中；
将含有指示剂的包衣混合物进行包衣；
配制指示剂的标准溶液，并配制各个浓度的指示剂溶液，将酶标仪调到指示剂对应的吸收波长处，测量各个浓度的指示剂溶液的吸光度，建立吸光度-浓度标准曲线；
取包衣后的微丸，将其溶解于设定体积的液体中后，过滤，利用酶标仪在相应的吸收波长处测量溶液的吸光度，以确定溶液中指示剂的浓度，以计算包衣膜的厚度。
2.根据权利要求1所述的基于酶标仪分析方法快速测量微丸包衣厚度的方法，其特征在于：所述指示剂为偶氮染料。
3.根据权利要求1所述的基于酶标仪分析方法快速测量微丸包衣厚度的方法，其特征在于：所述指示剂与包衣膜总质量之比为1：90-100。
4.根据权利要求1所述的基于酶标仪分析方法快速测量微丸包衣厚度的方法，其特征在于：包衣膜厚度的计算公式为：
Figure FDA0002402766380000011
Ns:样品批数；Np：每批微丸的个数；C j:每批微丸(Np个)的浓度；Ci：每个微丸包衣中指示剂的浓度；
Figure FDA0002402766380000012
n:指示剂与微丸包衣总质量比的比值；ρ：微丸包衣粉末密度；D:微丸初始平均粒径；V：溶解微丸的溶液体积；δ：微丸包衣膜厚度。
5.根据权利要求1所述的基于酶标仪分析方法快速测量微丸包衣厚度的方法，其特征在于：将微丸溶解于水或其他能够溶解指示剂的有机溶剂液体中。
6.根据权利要求1所述的基于酶标仪分析方法快速测量微丸包衣厚度的方法，其特征在于：微丸在液体中的溶解时间为1-3h，此时间根据溶解情况而定，若无可见的溶质颗粒或液滴时，即视为完全溶解此溶解时间即为微丸的溶解时间，务必保证微丸包衣材料中指示剂完全溶解。
7.根据权利要求1所述的基于酶标仪分析方法快速测量微丸包衣厚度的方法，其特征在于：所述吸光度-标准曲线的线性范围为：0.002-0.02mg/ml。
8.根据权利要求1所述的基于酶标仪分析方法快速测量微丸包衣厚度的方法，其特征在于：采用0.46μm滤膜对溶解有微丸的液体进行过滤。
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