CN110330560A - 醋酸兰瑞肽的合成方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种醋酸兰瑞肽的合成方法。该方法包括：S1，以Fmoc保护的氨基树脂为固相合成的载体，将其按照氨基酸顺序依次与相应的Fmoc保护的氨基酸进行缩合反应，得到Fmoc保护多肽树脂；S2，切割Fmoc保护多肽树脂中的树脂，得到线性肽链；S3，将线性肽链溶解在第一溶剂中，形成肽链溶解液；将肽链溶解液以分批次或者滴加的方式加入至氧化剂体系中，以进行合环反应，形成合环产物；S4，脱除合环产物的侧链Fmoc保护基，得到兰瑞肽；S5，对兰瑞肽进行醋酸胺转盐，得到醋酸兰瑞肽。本发明有效解决了现有技术中制备醋酸兰瑞肽废液量大、纯度低或者工序复杂的问题。

Description

醋酸兰瑞肽的合成方法
技术领域
本发明涉及有机合成技术领域，具体而言，涉及一种醋酸兰瑞肽的合成方法。
背景技术
兰瑞肽(Lanreotide)，商品名称为索马杜林，最早由法国益普生制药集团研制，1994年首先在法国上市，2002年进入中国市场，2007年美国FDA又批准以长效缓释剂上市。兰瑞肽常以醋酸盐形式入药，结构式如下：
醋酸兰瑞肽是一种长效、缓释的生长抑素八肽类似物，对生长激素、促甲状腺激素、胰岛素以及胰高血糖素分泌产生抑制作用。醋酸兰瑞肽早期主要用于对手术或放疗无效的肢端肥大症和生长激素型垂体瘤患者的治疗，随后被FDA批准用于无法切除、中高度分化或转移性胃肠胰神经内分泌肿瘤的治疗。
醋酸兰瑞肽的合成方法通常有液相合成法和固相合成法，举例如下：
专利CN104497130A公开了一种采用2+6片段固相合成技术合成兰瑞肽的方法：首先采用液相合成方法合成兰瑞肽N端的二肽片段、采用固相合成方法合成兰瑞肽C端6个氨基酸的肽树脂，随后将二肽片段与肽树脂缩合得到兰瑞肽线性肽树脂，最后将线性肽树脂裂解得到粗肽，并在液相完成二硫键的氧化，得到兰瑞肽。然而，该方法操作步骤繁琐，N端二肽片段的液相合成方法反应步骤多、反应时间长。在液相中进行二硫键的氧化，为了防止分子间发生反应，需要将粗肽溶液配置成浓度极低的(2～3mg/ml)溶液，这就需要使用大量溶剂，导致后续分离纯化的难度增加，同时产生大量废液。
专利CN108059667公布了一种兰瑞肽合成方法：以Fmoc-氨基树脂为固相合成的载体，依次缩合8个保护氨基酸，得到兰瑞肽的前体线性肽树脂，然后直接以线性肽树脂的形式采用固相氧化法进行二硫键环化反应，得到兰瑞肽肽树脂，最后将肽树脂裂解、脱去侧链保护基，得兰瑞肽。然而，该方法的固相氧化合环过程中，无法监控反应进程。同时，固相氧化反应时间过久，肽链的其他敏感位点也易被氧化从而产生杂质，且分离困难，也造成不必要的收率损失。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种醋酸兰瑞肽的合成方法，以解决现有技术中制备醋酸兰瑞肽存在的废液量大、纯度低或者工序复杂等问题。
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种醋酸兰瑞肽的合成方法，其包括：S1，以Fmoc保护的氨基树脂为固相合成的载体，将其按照氨基酸顺序依次与以下Fmoc保护的氨基酸Fmoc-Thr(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH及Fmoc-D-2-Nal-OH进行缩合反应，得到Fmoc保护多肽树脂；S2，切割Fmoc保护多肽树脂中的树脂，得到线性肽链；S3，将线性肽链溶解在第一溶剂中，形成肽链溶解液；将肽链溶解液以分批次或者滴加的方式加入至氧化剂体系中，以进行合环反应，形成合环产物；S4，脱除合环产物的侧链Fmoc保护基，得到兰瑞肽；S5，对兰瑞肽进行醋酸胺转盐，得到醋酸兰瑞肽。
进一步地，步骤S1包括：溶胀步骤：对Fmoc保护的氨基树脂进行溶胀，得到溶胀树脂；
脱保护步骤：对溶胀树脂进行Fmoc脱保护，得到活性树脂；氨基酸活化步骤：将Fmoc-Thr(OtBu)-OH在缩合体系中活化，得到活化氨基酸；缩合步骤：将活化树脂与活化氨基酸进行缩合反应，荫三酮监控反应终点，得到第一缩合产物；氨基酸依次连接：对第一缩合产物分别循环执行脱保护步骤、氨基酸活化步骤及缩合步骤，以依次将Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH及Fmoc-D-2-Nal-OH缩合连接至第一缩合产物上，得到Fmoc保护多肽树脂。
进一步地，针对不同的Fmoc保护的氨基酸，各氨基酸活化步骤中采用的缩合体系分别独立地选自以下A/B体系中的一种：HOBT/DIC、HOAT/DIC、Oxymapure/DIC、HATU/DIPEA、HBTU/DIPEA、TBTU/DIPEA或PyBOP/DIPEA；优选地，各缩合体系均为Oxymapure/DIC；优选地，各A/B体系中A与B的摩尔比为1:1～1.5。
进一步地，氨基酸活化步骤中，先将待反应的Fmoc保护的氨基酸与缩合剂、第二溶剂混合并溶解，得到混合溶液；然后将混合溶液降温至0～5℃，再向其中加入活化剂，活化5～10min后，得到活化氨基酸。
进一步地，针对各Fmoc保护的氨基酸的缩合反应过程中，Fmoc保护的氨基酸、缩合体系及反应对应的Fmoc树脂之间的摩尔比为2～5:2～5:1，且Fmoc树脂的摩尔数以其携带的Fmoc保护氨基的摩尔数计。
进一步地，各缩合反应过程中，反应温度为10～35℃，反应时间为0.5～4h。
进一步地，步骤S3中，氧化剂体系为以下体系中的任一种：碘的DCM溶液、铁氰化钾的水溶液、H2O2的水溶液、通有空气或氧气的DMSO；优选地，步骤S3中，肽链溶解液的浓度为50～300mg/ml，采用滴加的方式将肽链溶解液加入至氧化剂体系中，氧化体系与肽链溶解液的体积比为4～100:1，肽链溶解液的滴加速度为1～60ml/min，且采用HPLC监控反应进程。
进一步地，步骤S2包括：将多肽树脂降温至0～5℃，然后加入至切割液中，在20～25℃下反应3～4h，得到反应产物；过滤反应产物，洗涤滤饼，得到线性肽链；其中，切割液为0.2～5.0vol％TFA的DCM溶液。
进一步地，步骤S1中的各脱保护步骤及步骤S4中的脱除侧链Fmoc保护基的过程中，采用的Fmoc脱保护试剂为5～30vol％哌啶的DMF溶液。
进一步地，步骤S4中，在脱除侧链Fmoc保护基后得到了兰瑞肽的粗产物，合成方法还包括对粗产物进行提纯的步骤；优选地，提纯的步骤包括：采用反向液相色谱法，以C4-HG填料对粗产物进行纯化，其中流动相A相采用0.05vol％TFA水溶液，流动相B相采用乙腈。
进一步地，Fmoc保护的氨基树脂为Rink Amide AM树脂、Rink Amide树脂、RinkAmide MBHA树脂或Sieber树脂；优选Fmoc保护的氨基树脂的取代度为0.2～1.6mmol/g。
本发明提供的醋酸兰瑞肽的合成方法中，首先以Fmoc保护的氨基树脂为固相合成的载体，通过固相合成法在树脂上依次缩合连接了兰瑞肽前体的八个氨基酸，形成了Fmoc保护多肽树脂。其次，通过切割Fmoc保护多肽树脂，得到了线性肽链。然后，本发明以液相氧化方式进行了线性肽链的二硫键合环反应，最后通过保护基脱除、转盐，得到了醋酸兰瑞肽。
在以液相氧化方式进行线性肽链的二硫键合环反应过程中，本发明采用了将肽链溶解液反向滴加或分批加入氧化剂体系的形式进行，这样可以每次将少量的肽链溶解液投入过量的氧化环境中，少量的肽链溶解液在进入过量的氧化体系后即可分散开来，使肽链在较为分散的状态下进行二硫键合环反应。因此，本发明中的二硫键合环反应过程中的肽链溶解液无需过低的浓度，明显降低了溶剂的使用量，也有利于后期产品的分离，提高了产品纯度。同时，采用液相氧化形式也有利于跟踪反应进程，避免了过长反应时间导致的副反应发生，同样有利于提高产品纯度。除此以外，本发明缩合氨基酸时采用了固相合成法，也有利于简化工序。
总之，本发明的合成方法有效解决了现有技术中制备醋酸兰瑞肽存在的废液量大、纯度低或者工序复杂的问题，非常适合工业化大规模应用。
附图说明
构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1示出了根据本发明实施例1制备的醋酸兰瑞肽的HPLC纯度检测结果；以及
图2示出了根据本发明实施例1制备的醋酸兰瑞肽的质谱检测结果。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本发明。
正如背景技术部分所描述的，现有技术中制备醋酸兰瑞肽存在废液量大、纯度低或者工序复杂等问题。
为了解决上述问题，本发明提供了一种醋酸兰瑞肽的合成方法，其包括：S1，以Fmoc保护的氨基树脂为固相合成的载体，将其按照氨基酸顺序依次与以下Fmoc保护的氨基酸Fmoc-Thr(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH及Fmoc-D-2-Nal-OH进行缩合反应，得到Fmoc保护多肽树脂；S2，切割Fmoc保护多肽树脂中的树脂，得到线性肽链；S3，将线性肽链溶解在第一溶剂中，形成肽链溶解液；将肽链溶解液以分批次或者滴加的方式加入至氧化剂体系中，以进行合环反应，形成合环产物；S4，脱除合环产物的侧链Fmoc保护基，得到兰瑞肽；S5，对兰瑞肽进行醋酸转盐，得到醋酸兰瑞肽。
本发明提供的醋酸兰瑞肽的合成方法中，首先以Fmoc保护的氨基树脂为固相合成的载体，通过固相合成法在树脂上依次缩合连接了兰瑞肽前体的八个氨基酸，形成了Fmoc保护多肽树脂。其次，通过切割Fmoc保护多肽树脂，得到了线性肽链。然后，本发明以液相氧化方式进行了线性肽链的二硫键合环反应，最后通过保护基脱除、转盐，得到了醋酸兰瑞肽。
在以液相氧化方式进行线性肽链的二硫键合环反应过程中，本发明采用了将肽链溶解液反向滴加或分批加入氧化剂体系的形式进行，这样可以每次将少量的肽链溶解液投入过量的氧化环境中，少量的肽链溶解液在进入过量的氧化体系后即可分散开来，使肽链在较为分散的状态下进行二硫键合环反应。因此，本发明中的二硫键合环反应过程中的肽链溶解液无需过低的浓度，明显降低了溶剂的使用量，也有利于后期产品的分离，提高了产品纯度。同时，采用液相氧化形式也有利于跟踪反应进程，避免了过长反应时间导致的副反应发生，同样有利于提高产品纯度。除此以外，本发明缩合氨基酸时采用了固相合成法，也有利于简化工序。
总之，本发明的合成方法有效解决了现有技术中制备醋酸兰瑞肽存在的废液量大、纯度低或者工序复杂的问题，非常适合工业化大规模应用。
在一种优选的实施方式中，上述步骤S1包括：溶胀步骤：对Fmoc保护的氨基树脂进行溶胀，得到溶胀树脂；脱保护步骤：对溶胀树脂进行Fmoc脱保护，得到活性树脂；氨基酸活化步骤：将Fmoc-Thr(OtBu)-OH在缩合体系中活化，得到活化氨基酸；缩合步骤：将活化树脂与活化氨基酸进行缩合反应，荫三酮监控反应终点，得到第一缩合产物；氨基酸依次连接：对第一缩合产物分别循环执行脱保护步骤、氨基酸活化步骤及缩合步骤，以依次将Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH及Fmoc-D-2-Nal-OH缩合连接至第一缩合产物上，得到Fmoc保护多肽树脂。这样，通过反复的脱保护、缩合，即可将八个氨基酸依次连接至氨基树脂上。相比于液相反应，利用该固相反应，工序简单，收率纯度均较高。
为了进一步提高各缩合反应的效率，在一种优选的实施方式中，针对不同的Fmoc保护的氨基酸，各氨基酸活化步骤中采用的缩合体系分别独立地选自以下A/B体系中的一种：HOBT/DIC、HOAT/DIC、Oxymapure/DIC、HATU/DIPEA、HBTU/DIPEA、TBTU/DIPEA或PyBOP/DIPEA；优选地，各缩合体系均为Oxymapure/DIC；优选地，各A/B体系中A与B的摩尔比为1:1。更优选地，上述缩合体系为Oxymapure/DIC，Oxymapure具有更好的消旋抑制效果，能进一步降低副反应发生。同时，Oxymapure成本相对较低，也有利于降低生产成本。
在一种优选的实施方式中，上述氨基酸活化步骤中，先将待反应的Fmoc保护的氨基酸与缩合剂、第二溶剂混合并溶解，得到混合溶液；然后将混合溶液降温至0～5℃，再向其中加入活化剂，活化5～10min后，得到活化氨基酸。采用该工艺活化氨基酸，安全稳定且氨基酸的活化更为充分。
在一种优选的实施方式中，针对各Fmoc保护的氨基酸的缩合反应过程中，Fmoc保护的氨基酸、缩合体系及反应对应的Fmoc树脂之间的摩尔比为2～5:2～5:1，且Fmoc树脂的摩尔数以其携带的Fmoc保护氨基的摩尔数计。这里的Fmoc保护的氨基酸指的是每次氨基酸缩合反应过程中的Fmoc保护氨基酸，比如第一次缩合步骤中的Fmoc-Thr(OtBu)-OH，第二次缩合步骤中的Fmoc-Cys(Trt)-OH。Fmoc树脂指的是各缩合反应过程中的树脂一方，比如第一次缩合步骤中的Fmoc保护的氨基树脂，第二次缩合步骤中的第一缩合产物，且Fmoc树脂的摩尔数以所含Fmoc保护氨基的摩尔数计，相当于按照能够进行反应的位点数目计。将Fmoc保护的氨基酸、缩合体系及Fmoc树脂之间的摩尔比控制在上述范围，既有利于提高反应效率、转化率，也能够减少原料浪费。
为了进一步提高反应效率，在一种优选的实施方式中，各缩合反应过程中，反应温度为10～35℃，反应时间为0.5～4h。更优选地，上述步骤S3中，氧化剂体系为以下体系中的任一种：碘的DCM溶液、铁氰化钾的水溶液、H2O2的水溶液、通有空气或氧气的DMSO。优选地，步骤S3中，肽链溶解液的浓度为50～300mg/ml，采用滴加的方式将肽链溶解液加入至氧化剂体系中，氧化体系与肽链溶解液的体积比为4～100:1，肽链溶解液的滴加速度为1～60ml/min，且采用HPLC监控反应进程。这样，二硫键合环反应的效率更高，且分子间副反应更少，第一溶剂的使用量少，反应进程得以有效监控，副反应进一步减少。更优选地，步骤S3中，肽链溶解液的浓度为200～300mg/ml，采用滴加的方式将肽链溶解液加入至氧化剂体系中，氧化体系与肽链溶解液的体积比为4～10:1，肽链溶解液的滴加速度为2～3ml/min，氧化体系为碘的DCM溶液，且碘和全保护的线性肽链的摩尔比为1～1.5:1，反应时间为3～8h。
在一种优选的实施方式中，上述步骤S2包括：将多肽树脂降温至0～5℃，然后加入至切割液中，在20～25℃下反应3～4h，得到反应产物；过滤反应产物，洗涤滤饼，得到线性肽链；其中，切割液为0.2～5.0vol％TFA的DCM溶液。这样，多肽树脂上的线性肽链能够更充分的裂解。更优选地，上述步骤S1中的各脱保护步骤及步骤S4中的脱除侧链Fmoc保护基的过程中，采用的Fmoc脱保护试剂为5～30vol％哌啶的DMF溶液。脱保护过程的反应时间优选30min，除此以外，也可以反应10min后抽干溶液，再加一次20vol％哌啶的哌啶/DMF溶液，再次反应10min。
为了进一步提高提纯效果，优选地，上述步骤S4中，在脱除侧链Fmoc保护基后得到了兰瑞肽的粗产物，合成方法还包括对粗产物进行提纯的步骤；优选地，提纯的步骤包括：采用反向液相色谱法，以C4-HG填料对粗产物进行纯化，其中流动相A相采用0.05vol％TFA水溶液，流动相B相采用乙腈。
上述转盐步骤可以采用本领域的常用方法，在一种优选的实施方式中，上述步骤S5包括：反相制备提纯后，向C4-HG填料中继续通入醋酸铵的水溶液和乙腈，用3～5wt％的醋酸水溶液冲洗进行转盐、水与乙腈洗脱、冻干，得到醋酸兰瑞肽。
上述第一溶剂和第二溶剂优选分别为DMF、DCM、NMP中的一种或多种。更优选地，Fmoc保护的氨基树脂为Rink Amide AM树脂、Rink Amide树脂、Rink Amide MBHA树脂或Sieber树脂。为了进一步促进缩合反应的进行，提高反应效率和各缩合反应过程中的产物收率，在一种优选的实施方式中，Fmoc保护的氨基树脂的取代度为0.2～1.6mmol/g。
上述缩写代表的试剂如下：
以下结合具体实施例对本申请作进一步详细描述，这些实施例不能理解为限制本申请所要求保护的范围。
实施例1
该实施例中合成了醋酸兰瑞肽，路线如下：
具体工艺如下：
Fmoc保护多肽树脂的制备：
氨基树脂溶胀：取30.0克取代度为0.60mmol/g的Sieber树脂，加入240mL溶剂DMF，将树脂溶胀30min，抽干溶剂，再用DMF洗涤两次。
Fmoc保护基的脱除：向溶胀后的树脂中加入240mL体积比为20％的哌啶/DMF溶液，在20～25℃的条件下，反应30min。抽干溶剂，并用DMF洗涤六次。
氨基酸的活化：取54mmol Fmoc保护的氨基酸(Fmoc-Thr(OtBu)-OH)和54mmolOxymapure用DMF(240mL)溶解，降温至0～5度，54mmol DIC滴加至反映液中，活化5～10min。
氨基酸的缩合反应：将活化后的氨基酸加至脱除Fmoc保护基的氨基树脂中，控温25～30度的条件下进行氨基酸缩合反应2-3h，荫三酮监控反应终点。
荫三酮检测法：取少量树脂置于试管中，用DMF洗涤3～4次，滤干溶剂。试管中加入85％的苯酚乙醇、吡啶、5％的荫三酮乙醇溶液各三滴，然后加热110度反应3min，观察树脂颜色直至无色。
依次循环操作链接氨基酸，分别通过上述Fmoc保护基的脱除、氨基酸活化、缩合反应将其与七个氨基酸Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH及Fmoc-D-2-Nal-OH依次缩合连接至树脂上，完成合成Fmoc保护多肽树脂：
NH2-D-Nal-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Val-Cys(Trt)-Thr(OtBu)-Sieber
最终得到Fmoc保护多肽树脂63.71g，树脂增重收率98.80％。
线性肽链的制备：
将Fmoc保护多肽树脂在0～5度下加入至637mL的1vol％的TFA/DCM溶液中，控温20～25度反应3小时，HPLC监控反应过程。反应结束后，过滤，滤饼用DCM淋洗。滤液浓缩后用纯化水打浆，再次过滤，滤饼干燥后得到全保护的线性肽链。
合环反应：
将碘(3.8g,15mmoL；1.5eq)溶解在DCM中，得到氧化体系。将全保护的线性肽链(18.95g,10mmoL；1eq)溶解在DCM(95mL)中，形成浓度为200mg/ml的线性肽链溶解液，且氧化体系和线性肽链溶解液之间的体积比为5:1。采用反滴法，将线性肽链溶解液以3～5ml/min的速度缓慢滴加入氧化体系中，控温15～25度，反应3小时，HPLC监控反应进程。反应结束后，加入抗坏血酸的水溶液淬灭，分液。有机相干燥，浓缩得到合环产物，即全保护的兰瑞肽。其中，合环产物全保护的兰瑞肽的纯度为94％，自反应副产物二聚体的含量为0.50％。
侧链Fmoc保护基的脱除：
用TFA/H2O＝95/5的切割液(10Vol)，控温0～5度下向切割液中加入合环产物，然后恢复至20～25度反应2～3小时，HPLC监控反应进程。反应结束后，反应液浓缩至5Vol，然后将其慢慢滴加至0～5度的MTBE(50Vol)中，搅拌析晶2小时，过滤，滤饼干燥得到兰瑞肽的粗肽。粗肽纯度94％，总收率81％。
粗肽提纯、转盐：
采用反向液相色谱法，以C4-HG填料对所述粗产物进行纯化，其中流动相A相采用0.05vol％TFA水溶液，流动相B相采用乙腈。转盐使用3.2wt％醋酸铵的水溶液和乙腈作为流动相冲洗，然后用0.3％的AcOH水溶液和乙腈梯度洗脱后冻干，得到最终产品醋酸兰瑞肽。HPLC测纯度，见图1，纯度为99.82％，最大单杂含量＜0.1％。具体见下表：
保留时间(min) 相对峰面积占比(％)
16.360 0.01
16.895 0.01
17.365 0.02
18.253 0.03
18.680 0.02
18.813 0.01
19.002 0.04
19.602 0.02
19.762 99.82
20.460 0.01
质谱测量结果见图2，换算为醋酸兰瑞肽的总收率为74.5％。
实施例2至6
其他步骤操作一致，仅改变合环反应条件，改变的参数及最终合环产物全保护的兰瑞肽的纯度和自反应副产物二聚体的纯度见下表：
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (11)

1.一种醋酸兰瑞肽的合成方法，其特征在于，包括：
S1，以Fmoc保护的氨基树脂为固相合成的载体，将其按照氨基酸顺序依次与以下Fmoc保护的氨基酸Fmoc-Thr(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH及Fmoc-D-2-Nal-OH进行缩合反应，得到Fmoc保护多肽树脂；
S2，切割所述Fmoc保护多肽树脂中的树脂，得到线性肽链；
S3，将所述线性肽链溶解在第一溶剂中，形成肽链溶解液；将所述肽链溶解液以分批次或者滴加的方式加入至氧化剂体系中，以进行合环反应，形成合环产物；
S4，脱除所述合环产物的侧链Fmoc保护基，得到兰瑞肽；
S5，对所述兰瑞肽进行醋酸胺转盐，得到所述醋酸兰瑞肽。
2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述步骤S1包括：
溶胀步骤：对所述Fmoc保护的氨基树脂进行溶胀，得到溶胀树脂；
脱保护步骤：对所述溶胀树脂进行Fmoc脱保护，得到活性树脂；
氨基酸活化步骤：将所述Fmoc-Thr(OtBu)-OH在缩合体系中活化，得到活化氨基酸；
缩合步骤：将所述活化树脂与所述活化氨基酸进行缩合反应，荫三酮监控反应终点，得到第一缩合产物；
氨基酸依次连接：对所述第一缩合产物分别循环执行所述脱保护步骤、所述氨基酸活化步骤及所述缩合步骤，以依次将所述Fmoc-Cys(Trt)-OH、所述Fmoc-Val-OH、所述Fmoc-Lys(Boc)-OH、所述Fmoc-D-Trp(Boc)-OH、所述Fmoc-Tyr(tBu)-OH、所述Fmoc-Cys(Trt)-OH及所述Fmoc-D-2-Nal-OH缩合连接至所述第一缩合产物上，得到所述Fmoc保护多肽树脂。
3.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，针对不同的所述Fmoc保护的氨基酸，各所述氨基酸活化步骤中采用的所述缩合体系分别独立地选自以下A/B体系中的一种：HOBT/DIC、HOAT/DIC、Oxymapure/DIC、HATU/DIPEA、HBTU/DIPEA、TBTU/DIPEA或PyBOP/DIPEA；优选地，各所述缩合体系均为Oxymapure/DIC；优选地，各A/B体系中A与B的摩尔比为1:1～1.5。
4.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，所述氨基酸活化步骤中，先将待反应的所述Fmoc保护的氨基酸与所述缩合剂、第二溶剂混合并溶解，得到混合溶液；然后将所述混合溶液降温至0～5℃，再向其中加入所述活化剂，活化5～10min后，得到所述活化氨基酸。
5.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，针对各所述Fmoc保护的氨基酸的缩合反应过程中，所述Fmoc保护的氨基酸、所述缩合体系及反应对应的Fmoc树脂之间的摩尔比为2～5:2～5:1，且所述Fmoc树脂的摩尔数以其携带的Fmoc保护氨基的摩尔数计。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的合成方法，其特征在于，各缩合反应过程中，反应温度为10～35℃，反应时间为0.5～4h。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的合成方法，其特征在于，所述步骤S3中，所述氧化剂体系为以下体系中的任一种：碘的DCM溶液、铁氰化钾的水溶液、H2O2的水溶液、通有空气或氧气的DMSO；
优选地，所述步骤S3中，所述肽链溶解液的浓度为50～300mg/ml，采用滴加的方式将所述肽链溶解液加入至所述氧化剂体系中，所述氧化体系与所述肽链溶解液的体积比为4～100:1，所述肽链溶解液的滴加速度为1～60ml/min，且采用HPLC监控反应进程。
8.根据权利要求1至5中任一项所述的合成方法，其特征在于，所述步骤S2包括：
将所述多肽树脂降温至0～5℃，然后加入至切割液中，在20～25℃下反应3～4h，得到反应产物；
过滤所述反应产物，洗涤滤饼，得到所述线性肽链；
其中，所述切割液为0.2～5.0vol％TFA的DCM溶液。
9.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，所述步骤S1中的各脱保护步骤及所述步骤S4中的脱除所述侧链Fmoc保护基的过程中，采用的Fmoc脱保护试剂为5～30vol％哌啶的DMF溶液。
10.根据权利要求1至5中任一项所述的合成方法，其特征在于，所述步骤S4中，在脱除所述侧链Fmoc保护基后得到了所述兰瑞肽的粗产物，所述合成方法还包括对所述粗产物进行提纯的步骤；
优选地，所述提纯的步骤包括：采用反向液相色谱法，以C4-HG填料对所述粗产物进行纯化，其中流动相A相采用0.05vol％TFA水溶液，流动相B相采用乙腈。
11.根据权利要求1至5中任一项所述的合成方法，其特征在于，所述Fmoc保护的氨基树脂为Rink Amide AM树脂、Rink Amide树脂、Rink Amide MBHA树脂或Sieber树脂；优选所述Fmoc保护的氨基树脂的取代度为0.2～1.6mmol/g。
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