CN110327080A - 金佛手精油和/或纯露的皮肤过敏性检测方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种金佛手精油和/或纯露的皮肤过敏性检测方法,其特征在于,包括:将受试物放入斑试器内作为受试组,同时设置对照组,将受试组和对照组的斑试器用无刺激胶带分别贴敷于受试者前臂曲侧,持续12‑36h,去除斑试器,待压痕消失后观察皮肤反应,并用皮肤敏感度测试仪进行检测;其中,所述的受试物为稀释或未稀释的含有金佛手精油和/或纯露的化妆品,金佛手精油溶液,以及纯露中的至少一种。本发明采用的斑贴方法,方便对受试者进行测试和检测,并能直观、迅速的观察到检测结果。
Description
技术领域
本发明属于一种检测金佛手精油和纯露是否能引起皮肤过敏或有刺激性的方法及含有金佛手精油的身体乳。
背景技术
金佛手精油具有的天然香气,清香独特、怡人自然,属于柑橘香气中的上品,同时,其还具有极强的生理活性,其在很多方面有着重大应用,比如:医疗行业、保健功能、日化产品的添加等。金佛手的成分中含有D-柠檬烯、γ-松油烯、α-蒎烯、β蒎烯、芳樟醇、乙酸芳樟酯等。这些成分的存在是金佛手具有药用作用的原因之一。金佛手精油经常被用来进行芳香治疗和日化产品的添加,原因在于金佛手精油能够很好的帮助改善情绪、应激障碍等轻度的症状,例如:焦虑、抑郁、痴呆行为障碍和慢性疼痛。对此,需判定金佛手精油和纯露的安全添加量,并评价在化妆品等日用品的安全添加量范围内,金佛手精油和纯露对皮肤的刺激性结果。
斑贴试验是一种判定某物质直接接触过敏者、确定使其致敏原的一个简单而可靠的方法,发展至今,已有一百多年历史。当患者因皮肤或粘膜接触致敏原产生过敏后,在同一致敏原、具有相同抗原性物质在接触到体表的任何部位,就是在接触部位出现皮肤炎症改变,此为接触性皮炎。斑贴试验就是利用这一原理,将致敏原配制成不同浓度梯度,放置在特制的检测点并敷贴于人体体表,经过一定的时间,根据有否阳性反应来确定该物质是否为致敏原。对此,该方法检测金佛手精油和纯露是否引起过敏,在临床和日化的应用上具有非常重要的意义和实用价值。
发明内容
本发明目的是提供一种金佛手精油和/或纯露的皮肤过敏性检测方法。
为了达到上述目的,本发明提供了一种金佛手精油和/或纯露的皮肤过敏性检测方法,其特征在于,包括:将受试物放入斑试器内作为受试组,同时设置对照组,将受试组和对照组的斑试器分别贴敷于受试者前臂曲侧,持续12-36h,去除斑试器,待压痕消失后观察皮肤反应,并用皮肤敏感度测试仪进行检测;其中,所述的受试物为稀释或未稀释的含有金佛手精油和/或纯露的化妆品,金佛手精油溶液,以及纯露中的至少一种。
优选地,所述的受试物为质量浓度分别0.1%、0.3%、0.5%、0.8%、1.0%、1.2%、1.4%、1.6%、1.8%和2.0%的金佛手精油溶液,以及纯露。
优选地,所述的金佛手精油溶液的溶剂为葡萄籽油。
优选地,所述的受试者为十名以上志愿者。
优选地,当所述的受试物为固或半固体时,用量为0.020g~0.025g,当受试物为液体时,用量为0.020mL~0.025mL(液体可滴加在斑试器所附的滤纸片上置于斑试器内)。
优选地,当所述的受试物为化妆品时,对照组为空白对照(不置任何物质),和纯溶剂对照,当受试物为稀释后的化妆品时,对照组为该化妆品的稀释剂。
本发明还提供了一种含有金佛手精油的身体乳,其特征在于,由硬脂酸1-3%、鲸蜡硬脂醇0.5-1.5%、合成角鲨烷3-5%、二甲基硅油2-4%、乙二胺四乙酸二钠0.08-1.12%、甘油3-5%、汉生胶0.1-0.3%、尿囊素0.2-0.4%、尼泊金丙酯0.3-0.1%、柠檬酸0.08%、金佛手精油1%以及余量的去离子水组成。
本发明还提供了上述的含有金佛手精油的身体乳的制备方法,其特征在于,包括:
步骤1:按比例将硬脂酸、鲸蜡硬脂醇、合成角鲨烷和二甲基硅油加入容器A中,加热到80℃,得到第一混合物;
步骤2:按比例将乙二胺四乙酸二钠、甘油、汉生胶、尿囊素和去离子水加入容器B中,加热到90℃,得到第二混合物;
步骤3:将第一混合物加入到第二混合物中,均质3分钟;
步骤4:均质后,搅拌降温冷却,待产品冷却到45℃后,加入防腐剂尼泊金丙酯、柠檬酸和金佛手精油,继续搅拌冷却,得到含有金佛手精油的身体乳。
金佛手精油物化性质稳定,具有抗菌抗氧化作用,经常被用于日化产业中,直接接触皮肤,其添加含量对皮肤有无刺激和过敏需要经斑贴试验来检测。本发明通过斑贴试验评价产品的刺激性。本发明以18-60岁中国健康人群为对象,通过人体皮肤斑贴实验的方式,与空白组和溶剂葡萄籽油对照组相比,来评价金佛手精油或纯露的刺激性结果。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
1、本发明采用的斑贴方法,方便对受试者进行测试和检测,并能直观、迅速的观察到检测结果;
2、本发明采用皮肤敏感度测试仪来解决现有技术中斑贴无法直观、快速的获得检测结果的问题。
3、本发明大幅度提高了检测的速度和精油的敏感度,基于本发明的检测,可以得到金佛手精油和纯露的安全添加量,可此为基础制作身体乳。
附图说明
图1为1#志愿者的检测结果图;
图2为2#志愿者的检测结果图;
图3为3#志愿者的检测结果图;
图4为4#志愿者的检测结果图;
图5为5#志愿者的检测结果图;
图6为6#志愿者的检测结果图;
图7为7#志愿者的检测结果图;
图8为8#志愿者的检测结果图;
图9为9#志愿者的检测结果图;
图10为10#志愿者的检测结果图;
图11为11#志愿者的检测结果图;
图12为12#志愿者的检测结果图;
图13为13#志愿者的检测结果图;
图14为1-13#志愿者0.5h检测结果图;
图15为1-13#志愿者24h检测结果图;
图16为1-13#志愿者48h检测结果图;
具体实施方式
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解,在阅读了本发明讲授的内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
以下实施例中所用到的各原料均为市售产品。
所述金佛手精油根据中国专利申请201610979286.1中方法制得,金佛手和金佛手纯露均由浙江金手宝生物科技有限公司提供。斑试器、滤纸片:均购自FINN CHAMBER。移液枪来自德国VITLAB。皮肤敏感度测试仪型号为TIVI 700来自瑞典WheelsBridge。
该皮肤敏感度测试仪利用了血管中红血细胞对绿光吸收的特性而成功地得到了皮肤组织中红血细胞的分布聚集图像,并根据对照,得出相应的数值。其次,又检测了皮肤组织的微血管网络对增加血液流动的血管扩张和降低血液流动的血管阻塞的反应能力,从而了解到皮肤对刺激物的过敏性反应、发炎过程和刺激性。该皮肤敏感度测试仪为国内外最新检测敏感度的仪器。
具体测试流程:
注:上表中●表示实施,-表示不实施
具体实例1-13:
一种金佛手精油和/或纯露的皮肤过敏性检测方法,具体步骤为:
1)选择13名18-60岁中国健康人志愿者作为受试者,13名受试者中,10名为女性,3名为男性。
将金佛手精油溶于葡萄籽油中配制质量浓度分别0.1%、0.3%、0.5%、0.8%、1.0%、1.2%、1.4%、1.6%、1.8%和2.0%的金佛手精油溶液。
2)准备斑贴试验:
所述的受试者清洗干净前臂内侧皮肤,稳定30min。
将上述的金佛手精油溶液和纯露作为受试物滴加在斑试器所附的滤纸片上置于斑试器内作为受试组,用量20uL,同时设置溶剂对照组(共两组,纯溶剂)和空白对照组(不置任何物质)。
将滴加受试物的受试组和对照组的斑试器分别贴敷于受试者的前臂曲侧,用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上,用防过敏胶带固定,并用皮肤敏感度测试仪对测试部位进行拍照,以记录样品孔位置。
斑试器贴敷持续24h后,去除受试物斑试器并稳定30min,待压痕消失后观察皮肤反应,并用皮肤敏感度测试仪对测试部位进行检测并统计数据。若结果为阴性,于斑贴试验后24小时和48小时后分别再观察一次,并用皮肤敏感度测试仪对测试部位进行检测和统计。志愿者1#-13#的检测数据分别如表1-13和图1-13所示。
表1:1#志愿者的检测数据
样品 | 样品情况 | 0.5h | 24h | 48h |
1 | 空白对照 | 100% | 100% | 100% |
2 | 葡萄籽油 | 101.78% | 100.49% | 101.11% |
3 | 0.1% | 102.91% | 106.25% | 105.52% |
4 | 0.3% | 99.64% | 104.34% | 102.41% |
5 | 0.5% | 99.48% | 100.59% | 100.13% |
6 | 0.8% | 100.33% | 100.26% | 100.66% |
7 | 1.0% | 98.64% | 100.88% | 101.21% |
8 | 1.2% | 98.44% | 103.91% | 101.56% |
9 | 1.4% | 101.48% | 102.36% | 102.76% |
10 | 1.6% | 100.33% | 101.07% | 99.96% |
11 | 1.8% | 104.17% | 103.19% | 101.92% |
12 | 2.0% | 108.72% | 106.33% | 108.69% |
13 | 纯露 | 96.94% | 101.12% | 99.57% |
表2:2#志愿者的检测数据
表3:3#志愿者的检测数据
样品 | 样品情况 | 0.5h | 24h | 48h |
1 | 空白对照 | 100% | 100% | 100% |
2 | 葡萄籽油 | 106.22% | 101.44% | 98.72% |
3 | 0.1% | 101.33% | 103.02% | 101.51% |
4 | 0.3% | 104.61% | 103.19% | 99.03% |
5 | 0.5% | 104.68% | 103.46% | 98.27% |
6 | 0.8% | 107.34% | 102.25% | 102.12% |
7 | 1.0% | 105.03% | 100.55% | 97.63% |
8 | 1.2% | 106.18% | 100.09% | 97.37% |
9 | 1.4% | 101.28% | 101.84% | 96.72% |
10 | 1.6% | 102.27% | 101.28% | 98.17% |
11 | 1.8% | 101.12% | 100.38% | 98.94% |
12 | 2.0% | 104.33% | 102.81% | 100.95% |
13 | 纯露 | 102.64% | 103.43% | 101.87% |
表4:4#志愿者的检测数据
表5:5#志愿者的检测数据
样品 | 样品情况 | 0.5h | 24h | 48h |
1 | 空白对照 | 100% | 100% | 100% |
2 | 葡萄籽油 | 90.49% | 80.57% | 83.39% |
3 | 0.1% | 92.28% | 86.37% | 89.79% |
4 | 0.3% | 86.74% | 77.05% | 79.55% |
5 | 0.5% | 89.19% | 79.84% | 83.67% |
6 | 0.8% | 84.60% | 76.70% | 79.66% |
7 | 1.0% | 86.73% | 77.08% | 80.77% |
8 | 1.2% | 87.14% | 76.79% | 80.09% |
9 | 1.4% | 94.78% | 81.40% | 84.79% |
10 | 1.6% | 90.93% | 78.47% | 83.29% |
11 | 1.8% | 86.19% | 77.28% | 81.12% |
12 | 2.0% | 94.47% | 88.23% | 91.96% |
13 | 纯露 | 86.40% | 76.07% | 78.86% |
表6:6#志愿者的检测数据
表7:7#志愿者的检测数据
样品 | 样品情况 | 0.5h | 24h | 48h |
1 | 空白对照 | 100% | 100% | 100% |
2 | 葡萄籽油 | 98.04% | 97.31% | 98.90% |
3 | 0.1% | 101.72% | 98.78% | 100.35% |
4 | 0.3% | 101.62% | 98.54% | 98.98% |
5 | 0.5% | 99.64% | 97.35% | 99.46% |
6 | 0.8% | 100.07% | 102.32% | 103.79% |
7 | 1.0% | 102.66% | 101.84% | 103.74% |
8 | 1.2% | 103.90% | 99.23% | 101.81% |
9 | 1.4% | 101.85% | 97.96% | 99.60% |
10 | 1.6% | 102.23% | 99.59% | 101.24% |
11 | 1.8% | 101.06% | 98.77% | 98.87% |
12 | 2.0% | 98.05% | 95.93% | 98.55% |
13 | 纯露 | 102.33% | 100.34% | 100.32% |
表8:8#志愿者的检测数据
表9:9#志愿者的检测数据
样品 | 样品情况 | 0.5h | 24h | 48h |
1 | 空白对照 | 100% | 100% | 100% |
2 | 葡萄籽油 | 95.72% | 96.46% | 98.62% |
3 | 0.1% | 95.76% | 97.10% | 99.64% |
4 | 0.3% | 95.01% | 96.03% | 96.76% |
5 | 0.5% | 94.27% | 96.03% | 97.43% |
6 | 0.8% | 96.69% | 96.93% | 98.81% |
7 | 1.0% | 95.74% | 98.53% | 100.19% |
8 | 1.2% | 98.23% | 97.38% | 99.99% |
9 | 1.4% | 97.02% | 97.32% | 99.47% |
10 | 1.6% | 101.65% | 100.74% | 102.61% |
11 | 1.8% | 96.52% | 97.41% | 99.57% |
12 | 2.0% | 98.02% | 97.00% | 101.98% |
13 | 纯露 | 108.74% | 98.38% | 100.37% |
表10:10#志愿者的检测数据
表11:11#志愿者的检测数据
样品 | 样品情况 | 0.5h | 24h | 48h |
1 | 空白对照 | 100% | 100% | 100% |
2 | 葡萄籽油 | 97.91% | 100.85% | 102.96% |
3 | 0.1% | 104.00% | 105.10% | 106.38% |
4 | 0.3% | 92.59% | 101.67% | 103.68% |
5 | 0.5% | 104.09% | 99.39% | 98.40% |
6 | 0.8% | 109.85% | 100.83% | 100.63% |
7 | 1.0% | 97.16% | 102.30% | 99.06% |
8 | 1.2% | 92.19% | 100.81% | 101.20% |
9 | 1.4% | 101.05% | 100.89% | 100.74% |
10 | 1.6% | 106.28% | 99.56% | 101.61% |
11 | 1.8% | 92.76% | 101.11% | 103.58% |
12 | 2.0% | 101.69% | 101.18% | 106.73% |
13 | 纯露 | 103.47% | 105.32% | 106.04% |
表12:12#志愿者的检测数据
表13:13#志愿者的检测数据
样品 | 样品情况 | 0.5h | 24h | 48h |
1 | 空白对照 | 100% | 100% | 100% |
2 | 葡萄籽油 | 98.82% | 100.22% | 102.69% |
3 | 0.1% | 102.93% | 100.15% | 102.99% |
4 | 0.3% | 103.20% | 98.71% | 99.17% |
5 | 0.5% | 99.75% | 99.06% | 101.60% |
6 | 0.8% | 99.10% | 98.63% | 99.69% |
7 | 1.0% | 102.50% | 98.80% | 99.97% |
8 | 1.2% | 99.07% | 96.88% | 98.61% |
9 | 1.4% | 102.46% | 98.32% | 100.00% |
10 | 1.6% | 97.55% | 98.96% | 100.87% |
11 | 1.8% | 99.82% | 96.91% | 97.99% |
12 | 2.0% | 98.92% | 99.05% | 101.75% |
13 | 纯露 | 113.77% | 103.11% | 104.78% |
实验数据分析:与空白对照组和溶剂对照组相比,(1)在去除斑试器0.5h后:除纯露表现出微弱的刺激性外,其他的样品与空白项的刺激性相差不大,基本处于不表现刺激性的范围;(2)在去除斑试器24h后:纯露的刺激性出现了明显的减弱,整体的样品的刺激性与去除斑试器0.5h后的状态呈现降低的趋势,但表现出来的刺激性基本平均,与空白项相似基本不表现出刺激性;(3)在去除斑试器48h后:各个样品的刺激性与去除斑试器24h后的状态有些许的回升,但整体上的刺激性还是与空白项的近似,所以表明,该样品对皮肤无刺激。从13号志愿者整体的实验结果来看,主要在去除斑试器0.5h后纯露有表现出较明显的刺激性,此后各个刺激性变化趋于平稳状态与空白相近且无刺激性。所以,综合看来,测试结果表明在斑试器揭除后0.5h、24h和48h时,浓度为0、0.1%、0.3%、0.5%、0.8%、1.0%、1.2%、1.4%、1.6%、1.8%、2.0%精油及纯露与溶剂组的相对平均TiVi值之间无统计学显著性差异,故对人体皮肤均无明显刺激性。
具体实例14:
通过分析不同浓度分别为0、0.1%、0.3%、0.5%、0.8%、1.0%、1.2%、1.4%、1.6%、1.8%、2.0%和纯露的13组平均数据,结果如图14-16:
具体实例15:
一种添加安全含量的金佛手精油作为天然香精的身体乳,其配方如表14所示,其制备方法为:
步骤1:按比例将硬脂酸、鲸蜡硬脂醇、合成角鲨烷和二甲基硅油加入容器A中,加热到80℃,得到第一混合物;
步骤2:按比例将乙二胺四乙酸二钠、甘油、汉生胶(汉生胶用甘油预先分散)、尿囊素和去离子水加入容器B中,加热到90℃,得到第二混合物;
步骤3:将第一混合物加入到第二混合物中,均质3分钟;
步骤4:均质后,搅拌降温冷却,待产品冷却到45℃后,加入防腐剂尼泊金丙酯、柠檬酸和金佛手精油,继续搅拌冷却,降到室温即可,得到含有金佛手精油的身体乳。
(本次制备所用的加热仪器为上海予英仪器有限公司制造的DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器;搅拌仪器为上海索映仪器设备有限公司生产的JB200-S数字显示转速电动搅拌机)
表14:
通过对受试的精油和纯露样品的人体皮肤刺激性检测结果表明:本项目中接受检测的精油及纯露样品对人体皮肤均无明显刺激性,并将其用作身体乳中的精油添加,起到一定的清香作用和生物活性。
对于本领域的普通技术人员而言,在不脱离本发明的精神和实质的情况下,可以做出各种变型和改进,均视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种金佛手精油和/或纯露的皮肤过敏性检测方法,其特征在于,包括:将受试物放入斑试器内作为受试组,同时设置对照组,将受试组和对照组的斑试器用无刺激胶带分别贴敷于受试者前臂曲侧,持续12-36h,去除斑试器,待压痕消失后观察皮肤反应,并用皮肤敏感度测试仪进行检测;其中,所述的受试物为稀释或未稀释的含有金佛手精油和/或纯露的化妆品,金佛手精油溶液,以及纯露中的至少一种。
2.如权利要求1所述的金佛手精油和/或纯露的皮肤过敏性检测方法,其特征在于,所述的受试物为质量浓度分别0.1%、0.3%、0.5%、0.8%、1.0%、1.2%、1.4%、1.6%、1.8%和2.0%的金佛手精油溶液,以及纯露。
3.如权利要求1所述的金佛手精油和/或纯露的皮肤过敏性检测方法,其特征在于,所述的金佛手精油溶液的溶剂为葡萄籽油。
4.如权利要求1所述的金佛手精油和/或纯露的皮肤过敏性检测方法,其特征在于,所述的受试者为十名以上志愿者。
5.如权利要求1所述的金佛手精油和/或纯露的皮肤过敏性检测方法,其特征在于,当所述的受试物为固或半固体时,用量为0.020g~0.025g,当受试物为液体时,用量为0.020mL~0.025mL。
6.如权利要求1所述的金佛手精油和/或纯露的皮肤过敏性检测方法,其特征在于,当所述的受试物为化妆品时,对照组为空白对照,和纯溶剂对照,当受试物为稀释后的化妆品时,对照组为该化妆品的稀释剂。
7.一种含有金佛手精油的身体乳,其特征在于,由硬脂酸1-3%、鲸蜡硬脂醇0.5-1.5%、合成角鲨烷3-5%、二甲基硅油2-4%、乙二胺四乙酸二钠0.08-1.12%、甘油3-5%、汉生胶0.1-0.3%、尿囊素0.2-0.4%、尼泊金丙酯0.3-0.1%、柠檬酸0.08%、金佛手精油1%以及余量的去离子水组成。
8.权利要求7所述的含有金佛手精油的身体乳的制备方法,其特征在于,包括:
步骤1:按比例将硬脂酸、鲸蜡硬脂醇、合成角鲨烷和二甲基硅油加入容器A中,加热到80℃,得到第一混合物;
步骤2:按比例将乙二胺四乙酸二钠、甘油、汉生胶、尿囊素和去离子水加入容器B中,加热到90℃,得到第二混合物;
步骤3:将第一混合物加入到第二混合物中,均质3分钟;
步骤4:均质后,搅拌降温冷却,待产品冷却到45℃后,加入防腐剂尼泊金丙酯、柠檬酸和金佛手精油,继续搅拌冷却,得到含有金佛手精油的身体乳。
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